裂褶菌胞内多糖的分离纯化鉴定及其性质

裂褶菌菌丝体用热水提取,乙醇沉淀,Sevag法脱蛋白,逆向流水透析,得胞内多糖粗品,经Sephadex A-50、Sephadex G-200柱层析纯化,得胞内多糖纯品,称SPG。纯度经纸层析、Sephadex G-200柱层析、高效液相色谱分析、聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,结果表明SPG为单一均匀组分。 SPG水解物经纸层析、薄层层析分析证实它是由葡萄糖组成的一种葡聚糖结构,SPG的部分水解、酶解、红外光谱、核磁共振氢谱分析表明具有β(1→3),β(1→6)糖苷键。凝胶过滤法测定SPG的分子量约为10万。     

裂褶菌及裂褶菌多糖研究进展

裂褶菌是一种十分重要的食药兼用真菌,含有丰富的生理活性物质,裂褶菌多糖作为一种极有开发前景的生物活性物质已得到国内外的普遍重视。综述了裂褶菌的生物学特性、营养成分、药用价值、栽培现状以及裂褶菌多糖的化学分析和药理作用的研究进展,并讨论了裂褶菌和裂褶菌多糖的研究前景。     

裂褶菌深层培养及多糖测定

为了深层培养裂褶菌Schizophyllum commune Fr.产生多糖,对产多糖的适宜培养基,最佳时间,高产菌株进行了研究。从南京灵谷寺及南京大学校园生长的裂褶菌子实体分离到3株产多糖的裂褶菌菌株,编号南大835,南大843,南大853。对南大843用6种不同培养基进行深层培养,测定和比较了多糖和菌丝产量,其结果表明黄豆粉葡萄糖液体培养基是适于裂褶菌合成多糖的培养基,能培养出密集、白色、均匀的菌球和丰富的多糖。其组成为(g/L):葡萄糖30,黄豆粉5,酵母膏2,KH_2PO_4 1,MgSO_4·7H_2O0.5。pH5.5。最适发酵条件:pH5—5.5,温度26—28℃,振速:100—110次/分,当pH降至4.9—4.7,残糖量在1%以下,5—6天可终止发酵。在培养6天的浓缩滤液中加入等体积的95%乙醇后大量白色粘稠、纤维状的多糖被沉淀下来。在上述发酵条件下,3个菌株比较结果,南大853能明显提高多糖产量,6天的培养液中多糖量可达5.5—6g/L,南大843和南大835分别是5g/L和2.8g/L。     

凝胶过滤法纯化裂褶多糖检测方法的改进

凝胶过滤洗脱液中多糖含量一般采用硫酸-苯酚等化学显色法测定,然后根据洗脱曲线得到纯化的组分,但化学方法费时且消耗试剂.本研究采用350 nm非特征性吸收波长对2种不同纯度裂褶多糖样品PSG1和PSG2的洗脱液直接测定吸光度,与硫酸-苯酚法490 nm测定得到的洗脱曲线基本一致,即分别可得到4个和2个组分,同时采用HPLC对分离效果进行了检测.研究表明,采用350 nm波长直接检测可实现不同纯度裂褶多糖的分离.利用本法检测其他多糖的效果有待进一步研究.     

裂褶菌多糖的构象研究

从裂褶菌中提取一水溶性多糖Sci.气相色谱,高碘酸盐氧比,甲基化分析等确定它为葡聚糖.1-3糖苷键构成其主链,平均三分之一的主链残基在6位带有分枝,红外光谱和三氧化铬氧化表明Scl全部残基为β构型,在不同的温度和不同的酸碱浓度状态下,检查糖链与刚果红形成络合物的能力以及Scl水溶液的粘度和旋光值.推测低温近中性Scl主要呈单股螺旋构象.升温或提高酸碱浓度导致有规则的螺旋构象转变成无规则的线团.高碘酸盐氧化去掉分枝则多股螺旋比例在构象中增加.     

红栓菌多糖的分离纯化与分析

液体发酵得到的红栓菌菌丝经沸水抽提，胰匀浆处理和Ｓｅｖａｇｅ法除蛋白，ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５与Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１５０柱层析，乙醇沉淀得到二种多糖组分。     

正交设计优化裂褶菌发酵全液多糖提取工艺

采用正交设计试验方法进行了裂褶菌发酵全液中裂褶菌多糖的提取工艺优化的研究。结果表明:影响多糖提取的因素依次是料水比>浸提温度>浸提时间,三个因素的最佳组合是A4B2C3,即料水比为1∶3,浸提温度为80℃,浸提时间为4 h。在此条件下,发酵全液中多糖的最大得率达到3.65 g/L。     

深层培养裂褶菌胞外多糖的提取及结构研究

对深层培养裂褶菌 (Schizophyllumcommune)胞外多糖的提取工艺及多糖结构进行了初步研究。将等电点法与Sevag法相结合可高效的去除多糖中的蛋白 ,其方法简单有效。纯多糖经凝胶柱层析 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,高效液相色谱分析为均一组分 ,分子量 4×1 0 4D。通过完全水解 ,纸层析 ,气相色谱分析单糖组分 ,红外光谱 ,酶解反应 ,高碘酸氧化分析结构 ,证明了裂褶菌多糖是以葡萄糖为单一组分 ,β (1 3)和β (1 6)糖苷键组成的β D葡聚糖。     

高相对分子质量裂褶多糖的制备与结构鉴定

以裂褶菌（Schizophyllum commune）发酵生产的培养物为研究对象,经过活性炭脱色、Sevag法脱杂蛋白、乙醇沉淀得粗多糖,再经Sephadex G-200柱层析分离纯化得裂褶多糖纯品.通过Sephadex G-200凝胶层析法测得其平均分子质量为436kDa;由气相色谱、红外光谱、高碘酸氧化、Smith降解、^13C核磁共振等方法表征其化学结构,推测其结构为具有（1→6）分支的β-〔1-3）-D-葡聚糖：其组成重复单元应该含有3个主链糖基和一个单糖分支,主链的取代发生在C-1和C-3之间,即为1→3糖苷键;分支发生在C-1和C-6之间,即为1→6糖苷键,其中分支点在主链糖基的C-6上.     

裂褶菌多糖的固体发酵与纯化

[目的]为探讨裂褶菌多糖的两种固体发酵方法及其大孔树脂纯化。[方法]设计了以玉米、大米为基料的两种固体发酵培养基培养裂褶菌,通过热水提取法(料液比1∶30,80℃,12 h)提取裂褶菌多糖,并采用动态吸附实验筛选盐类、核酸、蛋白质、色素吸附率最高的大孔树脂。[结果]28℃培养35 d,裂褶菌在米饭固体培养基(RSM)生长深度近20%,在玉米固体培养基(CSM)的生长深度达到100%;玉米发酵物、米饭发酵物的裂褶菌多糖提取率分别为4.8%、5.9%(以发酵物湿重计);在上样流速3 BV/h(1 BV=2 L)、上样体积10 L条件下,6种型号的大孔树脂中,树脂SA-210纯化效果最佳,盐类、核酸、蛋白质等杂质的吸附率分别为84.18%、98.02%、96.81%。[结论]裂褶菌在CSM生长深度是在RSM上的5倍,玉米固体培养基比米饭固体培养基更适合裂褶菌的生长;树脂SA-210对盐类、核酸、蛋白质等杂质具有较强吸附能力,吸附率均高于80%,且吸附效果稳定,适用于裂褶菌多糖的纯化。     

超滤法提取裂褶菌胞外多糖几个主要参数的研究

对超滤法提取裂褶菌胞外多糖进行了研究,采用“二次回归旋转正交组合设计”得出超滤法提取裂褶菌胞外多糖的最优条件为:压力0.11MPa,温度55.20℃,pH4.01。在上述条件下超滤速度达31.92ml/min,制得的裂褶菌胞外多糖是以D-葡聚糖为主的混合多糖,其纯度为75.13%,收率可达82.06%。     

响应面优化裂褶菌多糖酶解工艺及抑菌研究

探索了裂褶菌多糖酶解法提取工艺及酶解产物抑菌的作用。分别从p H、酶解时间、酶解温度和加酶量4个因素考察了对裂褶菌多糖提取率的影响,通过响应面分析进行裂褶菌多糖提取工艺条件的优化。结果表明,在液体果胶酶p H为5.5、酶解时间1.2h、酶解温度50℃、加酶量1%时裂褶菌多糖提取率达54.76%;以大肠杆菌、假单胞菌为供试菌株,通过抑制率来反映其抑菌效果,结果表明裂褶菌多糖对大肠杆菌、假单胞菌有一定的抑制作用。     

裂褶菌化学成分研究

经硅胶反复柱层析,从裂褶菌子实体的醇提物中首次分离得到8个化合物,利用波谱方法及理化性质鉴定为5,α8α-过氧麦角甾-6,22E-二烯-3β-醇(1)、麦角甾-7,22-二烯-3β醇(2)、(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇(3)、烟酸(4)、苯甲酸(5)、D-阿拉伯糖醇(6)、甘露醇(7)、海藻糖(8)。     

裂褶菌培养、鉴定及氨基酸组成分析

目的:获得裂褶菌的纯培养物,鉴定培养菌丝,并分析子实体及菌丝氨基酸含量.方法:利用孢子分离法、组织分离法培养菌丝,扫描电镜观测其菌丝特征,结合ITS区序列分析,并利用出菇试验分析其菌丝体,全自动氨基酸分析仪分别测定裂褶菌子实体、菌丝体氨基酸组成.结果: 菌丝体ITS区序列与子实体完全一致,出菇试验亦表明裂褶菌菌丝体培养成功,子实体及菌丝体均含有丰富的氨基酸成分,两者氨基酸种类及含量相当,菌丝体总氨基酸含量14.01%,子实体总氨基酸含量15.59%,其中菌丝体必需氨基酸的含量(38.60%)比子实体稍高(37.95%).结论:裂褶菌菌丝亦具有丰富的营养价值,可作为重要的氨基酸来源及功能性食品.     

裂褶多糖的羧甲基化

采用氢氧化钠-氯乙酸反应体系,以异丙醇为溶剂,利用L9(34)正交试验合成mg级的不同取代度(DS)的羧甲基化裂褶多糖。研究表明试验条件下各因素对DS值影响由大到小的顺序为:氯乙酸/裂褶多糖(g/g)>氢氧化钠/裂褶多糖(g/g)>反应时间>反应温度。其红外光谱在1600 cm-1出现-COO-特征吸收;其紫外光谱在200~300 nm没有明显的吸收峰。对其13C NMR化学位移进行了归属。     

桦褶孔菌多糖的分离纯化及清除自由基活性

利用水提醇沉法对桦褶孔菌Lenzites betulina粗多糖HZKJc进行提取,随后经Sevage法和酶法联合脱蛋白,再经DEAE‐Sephadex A‐25,G‐100柱层析纯化后得到多糖纯品HZKJv。通过高效液相色谱(HPLC)测定上述纯化多糖的纯度和相对分子量分布;经纸层析(PC)、气相色谱(GC)、红外光谱(IR)进行单糖组成分析;并研究其清除自由基活性。分离纯化后得到的HZKJv为纯多糖,相对分子质量约为11 687。当HZKJv溶液浓度为3.0mg/m L时,其DPPH自由基清除率可达82%;浓度为2.0mg/m L时,对?OH自由基的清除率可达85%。表明HZKJv对?OH与DPPH自由基存在很好的清除作用。     

裂褶多糖的吸湿和保湿性能初步研究

通过干燥器控制湿度的方法对经冷冻干燥的裂褶多糖（PSG）试样进行吸湿和保湿性能测试,其48h吸湿率和保湿率分别为44．75％、63．06％;168h吸湿率和保湿率分别为112．28％、4．06％。和常用的化妆品保湿剂甘油、透明质酸钠、壳聚糖、聚乙二醇（PEG）进行比较,试验条件下0-168h各试样吸湿能力大小为：PSG〉甘油〉透明质酸钠〉壳聚糖〉PEG10000;48h综合保湿能力大小为：PSG〉甘油〉透明质酸钠〉壳聚糖〉PEG10000;168h综合保湿能力大小为：甘油〉PSG〉壳聚糖〉透明质酸钠〉PEG10000。采用差示扫描量热法（DSC）对裂褶多糖的热力学参数进行了测定,其相变起始温度为53．12℃,高峰温度为97．71℃,终了温度为148．30℃,焓变△H为126．743 J/g。裂褶多糖表现出良好的吸湿和保湿性能,因而是一种很有开发潜力的天然保湿剂。     

裂褶菌营养菌丝蛋白质成分的分析

对裂褶菌菌丝中蛋白质的氨基酸组成及含量进行了测定。结果表明 ,裂褶菌中所含粗蛋白的质量分数为 2 8.76 % ,所测定的 17种氨基酸总质量分数为 12 0 .13g·kg- 1 。其中 7种必需氨基酸的质量分数为 4 5 .36g·kg- 1 ,占氨基酸总量的 37.76 % ;10种非必需氨基酸的质量分数为 79.5 0g·kg- 1 ,占氨基酸总量的 6 2 .2 4 %。     

普通裂褶菌真菌学及实验室研究进展

普通裂褶菌是一种条件致病菌,可侵犯人体多个器官多种组织,导致各种表现形式的疾病,如脑脓肿、脑膜炎、鼻窦炎、肺部真菌球、蜂窝肺、肺结节、甲真菌病等.由于普通裂褶菌感染引起的真菌病病例少见报道,临床医生对其认识不足,再加上某些实验室不具备鉴定条件,所以感染该菌的病例常被漏诊、误诊.现将近年来临床分离的普通裂褶菌株真菌学及实...