马铃薯种薯生产的研究II．几种血清学方法对马铃薯病毒X诊断效果的比较

用提纯病毒比较了放射状免疫扩散(RID)、皂土凝聚反应(BFT)、微量沉淀反应(MPT)和试管沉淀反应(TPT)测定马铃薯病毒X(PVX)的灵敏度。RID和BFT测定PVX的最低浓度为1微克／毫升(每个测定分别需0.01徽克和0.1微克)。MPT和TPT的灵敏度为100微克／毫升(每个测定分别需0．1微克和25微克)。用马铃薯叶片榨取液测定时,RID、BFI和微量凝集反应(MAT)的诊断效率分别为93％、71％和82％。用幼芽榨取液时,BFT和MAT的诊断效率为96％和80％。     

苏芸金杆菌以色列变种对尖音库蚊的毒杀作用

苏芸金杆菌以色列变种(Bacillus thuringtensis var.tsraelensis de Barjac)对尖音库蚊(Culex pipiensvar. pallens Coq uillett)三龄幼虫具有极高的毒性,在浓度为1.5×10⁴芽孢/毫升时,死亡率达100%。其他几个变种B. T. var. thuringiensis(E—009)var. kurstaki(HD—1)、var.kenyae(7404)、var. ostriniae(006)浓度达4×10⁵芽孢/毫升时仍未见毒效。 用液体双相与等密度离心法将以色列变种的晶体与芽孢分离,分别研究晶体(纯度达99.5%以上)、芽孢(纯度达99.5%以上)对尖音库蚊幼虫的毒性。发现使蚊幼虫致死主要是晶体LC₅₀为0.023微克/毫升,芽孢也具有毒性LC₅₀为0.86微克/毫升,晶体与芽孢混用制剂的LC₅₀为(0.014微克晶体+0.014微克芽孢)/毫升。 晶体制剂在30℃和21℃的温度条件下毒力没有变化,但芽孢制剂在21℃毒力显著下降;芽孢制剂致死幼虫,立即用相差显微镜镜检,发现肠道内有大量正在萌发的芽孢,对芽孢致死的原因进行了初步分析。     

酪氨酸对未成年大鼠卵巢Δ~5-3β-羟类固醇脱氢酶活性的影响

利用PMSG(妊娠母马血清促性腺激素)及HCG(人羢膜促性腺激素)处理的未成年大鼠卵巢匀浆,通过测定Δ~5-3β-羟类固醇脱氢酶(HSD)活性,研究了酪氨酸影响孕酮的代谢机理。结果表明,同一浓度的酪氨酸(60微克/毫升)加到排卵后不同时间(12—72小时)的卵巢匀浆中,Δ~5-3β-HSD活性增加,并随着时间延长有逐渐增加的趋势。酪氨酸组同对照组间差异非常显著(P<0.001),不同浓度的酪氨酸(30—160微克/毫升)加到排卵后同一时间(24小时)的卵巢匀浆,也能提高Δ~5-3β-HSD活性,酪氨酸组与对照组间差异非常显著(P<0.001)。     

提取及验证血液中纤维蛋白原的简易方法

取新鲜的动物血液(如猪的血液)200毫升,分别置入100毫升烧杯A和B中(A为对照),立即用筷子按顺时针或逆时针方向(不要改变方向)搅拌B杯中血液.几分钟后,筷子上便缠绕一团丝状物,将其拭入培养皿中.重复以上操作,直至不再有丝状物时为止.用吸管分别吸取A、B烧杯中的血液,置于洁净的载玻     

纸层析法测定庆丰霉素

我们通过试验,找到了一种测定庆丰霉素的纸层析法,此法简易、快速、较准确。现介绍如下。一、试剂层析溶剂:正丁醇:冰乙酸:蒸馏水=2.8:1:1。显色剂:0.3克茚三酮,5毫升吡啶用95%的乙醇定容为100毫升配成。春雷霉素溶液(作定量标准用):贮备液为2毫克/毫升,用时以蒸馏水稀释为500微克/毫升。贮备液可在冰箱中保存三个月。     

柞蚕蛹抗菌肽D对大肠杆菌K_(12)D_(31)的作用

本文报道了不同浓度的柞蚕蛹抗菌肽D,对大肠杆菌K_(12)D_(31)的杀灭作用动力学。在LEG培养液中,抗菌从D的浓度在5微克/毫升时显效。浓度在10微克/毫升以上时,其杀菌速度大于细菌的增殖速度。固定抗菌肽浓度为10微克/毫升,细菌浓度在3×10~7个细菌/毫升,培养在磷酸钾盐缓冲液中,4小时后能全部杀灭。同样浓度细菌在LEG培养液中,4小时后细菌数下降到约为10~2个细菌/毫升,但不能全部杀灭。同时还提供了柞蚕蛹抗菌肽D和B对大肠杆菌K_(12)D_(31)作用不同时间的电镜照片。     

实验12 cDNA文库的简易构建法

一、合成cDNA单链 1.按照实验3的操作程序,从哺乳类细胞中抽提poly(A)~+mRNA。 2.建立合成cDNA单链的反应系统:50mM Tris·HCI pH8.3(42℃时测定pH值);10mM MgCl_2;10mM DTT;4mM焦磷酸钠;1.25mM dGTP;1.25mM dATP;1.25mM TTP;0.5mM dCTP;15—20μCi α-~32P-dCTP(3000 Ci/mmol);100微克/毫升oligo(dT_12-18);150微克/毫升 Poly(A)~+mRNA;3000单位/毫升反转录酶,用水调节至最终体积为20或40微升。43℃保温30分钟。     

大白鼠早孕子宫细胞核雌二醇、孕酮受体水平的变化

本工作应用氚标记配基交换法测定了早孕大鼠子宫细胞核雌二醇与孕酮-受体复合物水平,同时也观察了外周血浆这两种甾体激素浓度的变化。实验结果表明,早孕期间子宫细胞核中雌二醇和孕酮受体水平发生了显著的改变,分别在受孕第3天和第4天出现雌二醇和孕酮受体高峰(均为～20,000结合位点/细胞);同时也分别在这两天观测到血浆雌二醇和孕酮浓度高峰(0.08毫微克/毫升和29毫微克/毫升)。我们得出的结论与其他研究工作者报道的一致,即血循环中卵巢甾体激素水平的升高导致子宫细胞核大量集聚激素-受体复合物,从而加速基因表达,刺激子宫的生长和细胞分化,为胚泡的着床造成适当的子宫环境。     

实验8 质粒DNA的提取

一、氯化铯超速离心提取法 1.在LB培养基(10克蛋白胨,5克酵母膏,10克氯化钠,15克琼脂粉,溶解于水后,用1N NaOH调节pH至中性,加水至1,000毫升,高压蒸汽灭菌)上划线接种含有待抽提的质粒的细菌。37℃培养过夜。如果质粒上带有抗性基因,则在培养基内加入相应的抗菌素,例如20微克氨苄青霉素/毫升,12.5—15微克四环素/毫升。 2.挑出单菌落接种在10毫升LB培养液(除不加琼脂粉外,成份与LB培养液相同)中,37℃培养过夜。     

逆境条件下植物脯氨酸的累积及其可能的意义

早在本世纪初就发现脯氨酸是植物蛋白质的组分之一,并以游离状态广泛地存在于植物体中。一般来讲,植物体中游离脯氨酸含量并不多,约在200～690微克/克干重范围内,占总游离氨基酸的百分之几。但也有例外,如柑桔属的 Citrus acida,C.medica,C.decumana的叶子中脯氨酸是主要的游离氨基酸,在 C.lemonum的苗茎中它可占总游离氨基酸的70％。近年来,脯氨酸研究引人注目,其原因有二:(1)它可参与肽键,从而作为肽结合的羟脯氨酸(peptidyl—bound     

TPA促进C_3H/10T1/2细胞转化及有关作用的研究

甲基胆蒽(0.1微克/毫升)不能使C_3H/10T2/1细胞发生转化,但经甲基胆蒽(0.1微克/毫升)启动的细胞,以后用TPA(0.1微克/毫升)连续作用则可以转化。说明TPA具有明显的促进细胞转化作用。TPA不能使经甲基胆蒽启动的细胞的姊妹染色单体交换进一步增加。TPA对C_3H/10T2/1细胞的DNA合成,不论是否先经甲基胆蒽启动,都表现为暂时抑制和以后明显的增强。本文对TPA的促进转化作用及其它有关的生物学作用进行了初步讨论。     

中药大黄的综合研究——Ⅷ.蒽醌衍生物抗菌作用的机制(2)对金黄色葡萄球菌含氮化合物代谢的影响

本实驗初步观察了大黃酸和大黃素对金黄色葡萄球菌核酸与蛋白质的合成,氨氮的同化利用,氨基酸的氧化脫氨和轉氨作用的影响。(1)大黄酸和大黄素对金黃色葡萄球菌在葡萄糖-肉湯培养基中RNA、DNA和蛋白质的合成具有很强的抑制作用。1抑菌单位濃度的大黄酸(15微克/毫升),其抑制百分率分別为90、84和72;大黄素(10微克/毫升)分別为100、100和93。(2)叶酸对大黄素抑制金黄色葡萄球菌核酸的合成有拮抗作用,大黃素在最低抑菌濃度(3.6×10~(-5)M),叶酸濃度为5.6×10~(-4)M时,可使RNA和DNA的合成分別恢复47&和40%。(3)大黄素对金黄色葡萄球菌在含葡萄糖和硫酸銨培养基中氨氮的同化也有抑制作用,在最低抑菌濃度抑制率为92%。(4)大黄素即使高至200微克/毫升的濃度,对金黃色葡萄球菌谷氨酸-丙氨酸轉氨作用的影响不明显。(5)大黄素对金黄色葡萄球菌氨基酸的氧化脫氨具有抑制作用,对谷氨酸和精氨酸的抑制最强,甘氨酸和丙氨酸次之,門冬氨酸和絲氨酸最弱。对耗氧和脫氨的抑制有平行的关系。     

琼脂糖平板制备聚焦电泳法进一步提纯胸腺素组分五

用琼脂糖平板等电聚焦电泳法,由胸腺素组分五中分离出三种在聚焦电泳谱上是单一谱线的多肽成份——CP1、CP2和CP3,等电点分别为4.3、4.9和5.6。测定了这些多肽对脐带血中淋巴细胞形成羊红细胞玫瑰花的影响。与对照相比,CP1(2微克/0.6毫升),和CP3(0.2-2微克/毫升)分别在统计学上呈显著和非常显著差异。在相同测定条件下,这三种多肽成份的活性均高于化学合成的胸腺多肽——胸腺素α_1。     

鲤鱼(Cyprinus carpio L.)血清促性腺激素的放射免疫测定

本文报道用鲤、鲢等鲤科鱼混合垂体经乙醇抽提、DEAE-纤维素层析及葡聚糖凝胶过滤来纯化促性腺激素(GTH)的方法。所得GTH初步纯化品(SG-Ⅱ-1)的产卵有效剂量为1微克/1克泥鳅体重。其最终纯化品(SG-Ⅱ-2)在聚丙烯酰胺电泳谱中呈示为一条带,可供作放射免疫测定系统中的标记抗原。GTH放射免疫测定法的检测范围为0.1～16毫微克。在鲤鱼产卵季节,用放射免疫测定血清中GTH含量的变化,表明雌雄鱼在配组后血清中GTH含量逐渐上升,特别是雌鱼,在发情产卵时出现显著的高峰,随产卵活动的停止而下降,呈现出明显的产卵前后血清中GTH含量变化规律。这为研究鱼类生殖生理提供一些新的资料。     

鲤鱼(Cyprinus carpio L.)血清促性腺激素的放射免疫测定

本文报道用鲤、鲢等鲤科鱼混合垂体经乙醇抽提、DEAE-纤维素层析及葡聚糖凝胶过滤来纯化促性腺激素(GTH)的方法。所得GTH初步纯化品(SG-II-1)的产卵有效剂量为1微克/1克泥鳅体重。其最终纯化品(SG-II-2)在聚丙烯酰胺电泳谱中呈示为一条带,可供作放射免疫测定系统中的标记抗原。GTH放射免疫测定法的检测范围为0.1～16毫微克。在鲤鱼产卵季节,用放射免疫测定血清中GTH含量的变化,表明雌雄鱼在配组后血清中GTH含量逐渐上升,特别是雌鱼,在发情产卵时出现显著的高峰,随产卵活动的停止而下降,呈现出明显的产卵前后血清中GTH含量变化规律。这为研究鱼类生殖生理提供一些新的资料。     

紫貂(Martes zibellina)妊娠期血清孕酮水平的变化

用放射免疫法测定受配雌紫貂妊娠期间(9月至翌年2月)的血清孕酮水平。结果表明:其中产仔雌貂在9月至翌年1 月的血清孕酮呈现相对稳定的较高水平(平均1.45±0.23毫微克/毫升),2月下旬急剧升高至本试验的最高值(平均3.72±1.67毫微克/毫升,P<0.01),空怀雌貂在妊娠前期内的血清孕酮水平均为0.70±0.14毫微克/毫升的低水平,与产仔组相比,差异显著或极显著。作者认为血清孕酮水平的变化与日照和胚泡活动密切相关。     

IB-RS-2细胞的微细胞的形成过程及其超微结构的研究

IB-RS-2细胞经秋水仙素(2微克/毫升)处理24—48小时,约75％的细胞形成微核,同时在细胞表面形成许多大小不一的原生质突起。微核化的细胞进一步用松胞素B(10微克/毫升)处理,在Ficoll不连续梯度(12.5％、16％、25％)中进行离心去核、形成许多微细胞。扫描电镜观察表明,微细胞是微核化细胞的原生质突起脱落而形成的。微细胞是一个不均一的群体,无论在大小与表面形态,还是在微细胞内部的成分与结构上都存在很大差异。     

中华眼镜蛇膜毒素的体外溶吉田肉瘤细胞作用

本文介绍了中华眼镜蛇膜毒素(CT)在试管中破坏吉田肉瘤腹水细胞(YSC)的行为特征:(1)在缺钙溶液中固定细胞浓度为4～5×10~6个/毫升时,癌细胞会迅速破坏;(2)在2微克/毫升毒素蛋白浓度以下YSC 破坏速度及破坏程度都与CT 浓度成正比,倘以3～6分钟的破坏程度计量,每毫克毒蛋白每分钟可破坏癌细胞0.7×10~9个,T_(50)≈1微克/毫升;(3)由YSC 浓度增大能对抗溶胞的实验可推算出在此过程中与每个癌细胞作用的毒蛋白量为2.8×10~6～25×10~6个分子:(4)虽然镁离子对此反应是部分必需的,但钙离子却有强烈的抑制作用,这些作用都可被金属螫台剂所去除。作者对CT 不能在体内抗癌作了解释,并对毒蛋白一级结构中第25位酪氨酸对细胞毒力的重要性作了讨论。     

茶叶中咖啡碱的快速测定法

咖啡碱是茶叶中主要成分之一,测定方法较多,但各有不足之处。我们通过反复比较、试验,提出一种简便快速的氧化镁浸提-紫外分光光度法,现将测定方法介绍如下: (1)咖啡碱标准液:无水咖啡碱(卫生部药检所),熔点237℃,配制成20微克/毫升水液,在岛津LLV-200型双光束分光光度计上测定273nm处吸收值—A_0。 (2)茶叶中咖啡碱测定:茶叶0.5000克(过20目)加入氧化镁(分析纯)5克,蒸馏水40毫升,搅匀;     

中华眼镜蛇膜毒素的体外溶吉田肉瘤细胞作用

本文介绍了中华眼镜蛇膜毒素(CT)在试管中破坏吉田肉瘤腹水细胞(YSC)的行为特征:(1)在缺钙溶液中固定细胞浓度为4～5×10~6个/毫升时,癌细胞会迅速破坏;(2)在2微克/毫升毒素蛋白浓度以下YSC破坏速度及破坏程度都与CT浓度成正比,倘以3～6分钟的破坏程度计量,每毫克毒蛋白每分钟可破坏癌细胞O.7×10~9个,Y_(50)≈1微克/毫升;(3)由YSC浓度增大能对抗溶胞的实验可推算出在此过程中与每个癌细胞作用的毒蛋白量为2.8×10~6～25×10~6个分子;(4)虽然镁离子对此反应是部分必需的,但钙离子却有强烈的抑制作用,这些作用都可被金属螯合剂所去除。作者对CT不能在体内抗癌作了解释,并对毒蛋白一级结构中第25位酪氨酸对细胞毒力的重要性作了讨论。