miR-30a-5p对人肝癌干细胞增殖和凋亡的影响

目的采用mi R-30a-5p模拟物转染CD133~+MHCC97L肝癌干细胞,观察增殖和凋亡能力的变化,明确mi R-30a-5p对肝癌干细胞的基因治疗效果。方法采用免疫磁珠分选法分选CD133~+MHCC97L肝癌干细胞并采用流式细胞术检测分选效果。分别采用mi R-30a-5p模拟物或抑制物转染肝癌干细胞设为30 a M组或30 a I组,并设立空白对照NC组。采用RT-PCR法检测细胞mi R-30a-5p表达水平。采用CCK-8法检测细胞增殖能力。采用琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。采用流式细胞术检测细胞凋亡率。肝癌干细胞分选效率、mi R-30a-5p表达水平、CCK-8实验测得A值、克隆形成数量和细胞凋亡率实验数据的比较采用单因素方差分析和t检验。结果未进行磁珠分选的MHCC97L肝癌细胞CD133阳性率为(1.42±0.26)﹪,低于分选后的MHCC97L细胞中CD133的阳性率(94.48±2.32)﹪,差异具有统计学意义(t=-6.78,P=0.04)。RT-PCR实验结果显示,30a M组CD133~+MHCC97L肝癌干细胞中mi R-30a-5p的相对表达水平(20.21±1.92)较NC组(1.03±0.02)明显上调;30 a I组的相对表达水平(0.13±0.01)较NC组明显下调,差异均具有统计学意义(t=20.96,-6.22;P=0.01,0.03)。CCK-8实验结果显示,30 a M组细胞于24 h、48 h和72 h测得的A值分别为(0.40±0.00,0.68±0.03,0.75±0.02),明显低于NC组的(0.83±0.01,1.34±0.03,2.47±0.12),差异具有统计学意义(t=-12.15,-15.66,-6.42;P=0.01,0.02,0.01);30a I组细胞测得的A值分别为(0.95±0.05,1.64±0.03,3.28±0.07),明显高于NC组,差异具有统计学意义(t=9.45,18.97,7.58;P=0.00,0.01,0.03)。软琼脂克隆形成实验结果显示,30 a M组细胞的克隆形成数量为(61.81±1.76)个/孔,低于NC组的(131.96±8.15)个/孔,差异具有统计学意义(t=-8.31,P=0.00);30 a I组的克隆形成数量为(195.75±6.16)个/孔,高于与NC组,差异具有统计学意义(t=15.61,P=0.01)。流式细胞术结果显示,30 a M组的细胞凋亡率为(19.67±0.06)﹪,高于NC组的(10.65±0.12)﹪,差异具有统计学意义(t=15.90,P=0.02);30 a I组的细胞凋亡率为(4.85±0.03)﹪,低于NC组,差异具有统计学意义(t=-6.96,P=0.00)。结论 mi R-30a-5p对CD133~+MHCC97L肝癌干细胞的增殖具有明显的抑制效果,有望成为针对肝癌的有效靶向性治疗手段。     

携带缺氧诱导因子-1α-siRNA的叶酸靶向化的磁性纳米复合物抑制肝癌干细胞增殖的实验研究

目的本研究采用叶酸靶向化的聚乙烯亚胺包被的磁性纳米复合物(Fa-PEISPIO)携带HIF-1α-si RNA真核表达质粒转染CDl33+Hep3B肝癌干细胞,观察其对肝癌干细胞增殖能力的抑制效果并探讨其起效机制。方法采用CD133-PE荧光抗体流式分选Hep3B细胞中的CD133阳性细胞。采用流式细胞术检测分选前后细胞CDl33表达量。将Fa-PEI-SPIO纳米复合物与含HIF-1α小干扰RNA(HIF-1α-si RNA)、阴性对照(NC)-si RNA的真核表达质粒复合,分别形成Fa-PEI-SPIO/HIF-1α-si RNA和Fa-PEI-SPIO/NCsi RNA两种靶向化纳米复合物。分别应用两种纳米复合物转染CDl33~+Hep3B肝癌干细胞,建立Fa-PEI-SPIO/HIF-1α-si RNA(FH)组和Fa-PEI-SPIO/NC-si RNA(FN)组,另设立未转染对照(CT)组。Western-blot法检测各组细胞的HIF-1α和Cyclin D1蛋白表达。平板克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成能力。流式细胞术检测各组细胞的细胞周期。CD133阳性细胞比例、蛋白平均相对表达量、有效克隆形成数量和细胞周期等实验数据以x±s表示,3组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果分选前Hep3B肝癌细胞检测CD133阳性率为(2.95±0.04)﹪,分选后CDl33阳性率增加到(92.59±0.05)﹪,差异有统计学意义(t=34.88,P=0.00)。FH组CDl33~+Hep3B肝癌干细胞HIF-1α、cyclin D1蛋白平均相对表达量分别为0.11±0.02、0.38±0.03,CT组分别为0.38±0.07、0.59±0.05,差异具有统计学意义(LSD-t=15.88,23.75;P=0.01,0.00)。FH组和CT组CDl33+Hep3B肝癌干细胞的有效克隆数量为分别为(25.92±5.22)个/孔和(364.00±13.93)个/孔,FH组的有效克隆数量明显低于CT组(LSD-t=-37.67,P=0.00)。与CT组相比,FH组细胞G0/G1期的细胞数量明显增大,出现了明显的G0/G1期阻滞,S期和G2/M期细胞数量明显降低,分裂活跃性较CT组降低。结论纳米复合物Fa-PEI-SPIO可高效负载HIF-1α-si RNA真核表达质粒抑制细胞内HIF-1α表达,进而通过降低cyclin D1表达水平影响细胞周期,并抑制CDI33~+Hep3B人肝癌干细胞的增殖。     

孕激素诱导的microRNA-1a抑制子宫内膜上皮细胞增殖

本文旨在研究孕激素诱导micro RNA-1a(mi R-1a)在子宫内膜上皮细胞(endometrial epithelial cells,EECs)的表达及其对EECs增殖的作用。用雌激素(E2组)或雌、孕激素联合(E2P4组)处理去卵巢小鼠,q PCR检测mi R-1a的成熟体mi R-1a-3p的表达;将mi R-1a-3p拟似剂或抑制剂注入各组小鼠的一侧子宫角,另一侧注入拟似剂或抑制剂对照,流式细胞术检测mi R-1a-3p对EECs细胞周期的影响;免疫组化检测mi R-1a-3p对细胞周期蛋白cyclin D2、cyclin E1和cyclin E2表达的影响。在体外实验,将分离培养的原代小鼠EECs分为两组,分别给予雌激素处理(E2组)和雌、孕激素联合处理(E2P4组),q PCR检测mi R-1a-3p的表达;再用mi R-1a-3p拟似剂作用于雌激素预处理细胞,对照组给予非特异性拟似剂,Ed U掺入实验检测细胞增殖活性。体内q PCR结果显示,E2P4组小鼠EECs mi R-1a-3p的表达量相比E2组明显增加(P0.05)。流式细胞术结果显示mi R-1a-3p拟似剂能够将E2处理细胞的细胞周期进程阻滞在G1/S期(P0.05);mi R-1a-3p抑制剂能够部分逆转P4对细胞周期进程的G1/S期阻滞(P0.05)。小鼠子宫组织免疫组化结果显示mi R-1a-3p拟似剂能较明显地抑制cyclin E1和cyclin E2蛋白的表达(P0.05),而对cyclin D2蛋白表达无影响(P0.05)。体外q PCR结果显示E2处理组和E2P4联合处理组细胞中都未检测到mi R-1a-3p表达,体外Ed U掺入实验表明外源性mi R-1a-3p拟似剂能够一定程度抑制雌激素促细胞增殖作用(P0.05)。以上结果表明,孕激素可通过诱导mi R-1a-3p表达引起细胞周期G1/S期阻滞,从而抑制EECs细胞增殖,这种抑制增殖作用与其抑制cyclin E1和cyclin E2蛋白表达有关。     

抑制NANOG表达对人食管鳞癌Eca-109干细胞增殖的影响

目的采用NANOG短发夹RNA(shRNA)转染CD133+Eca-109食管鳞癌肿瘤干细胞,观察细胞增殖能力的变化,及NANOG对食管鳞癌干细胞的基因治疗效果。方法采用无血清培养基悬浮培养法分离食管鳞癌干细胞并通过RT-PCR和Western-Blot法检测分选效果。采用针对NANOG不同m RNA序列的两个shRNA分别转染食管鳞癌干细胞设为sh-N1组和sh-N2组,同时将转染不针对任何m RNA序列的质粒设为对照NC组。采用RTPCR和Western-Blot法检测细胞NANOG表达水平。采用CCK-8法检测细胞增殖能力。采用活死细胞染色检测细胞存活情况。采用无血清培养基悬浮培养并通过计数检测细胞成球能力。NANOG表达水平、CCK-8实验测得数据的比较采用单因素方差分析。结果 RT-PCR结果显示,正常培养的Eca-109食管鳞癌细胞CD133、CD44的表达水平1.03±0.02,1.02±0.02明显低于悬浮培养分离后肿瘤干细胞球中的表达10.12±0.19,9.21±0.26,(t=-79.952,-57.919;P均<0.01)。Western-Blot方法检测所得CD133、CD44表达结果与RT-PCR一致。shRNA转染食管鳞癌干细胞后,CCK-8实验结果显示,sh-N1组和sh-N2组细胞于24、48、96 h测得的A值分别为(0.33±0.02,0.52±0.04,0.61±0.04,0.81±0.03),(0.33±0.02,0.45±0.04,0.53±0.04,0.72±0.07),较对照NC组(0.9±0.01,1.41±0.01,2.31±0.02,3.12±0.07)下调(F=1121.33,525.73,1022.16,1198.29;P均<0.01),但并未出现细胞凋亡;在无血清培养条件下,细胞球计数结果显示,sh-N1组和sh-N2组(12±1,16±2)细胞形成肿瘤干细胞球的能力较NC组(80±3)降低(P<0.01)。结论 NANOG敲低对食管鳞癌干细胞的增殖具有明显的抑制效果,有望成为针对食管鳞癌的有效靶向性治疗手段。     

miR-181a通过调控上皮间质转化过程影响卵巢癌细胞的迁移和侵袭

目的:探讨mi R-181a在卵巢癌细胞中的表达及对卵巢癌细胞的迁移和侵袭的影响和可能机制。方法:采用细胞免疫荧光检测卵巢癌细胞中抗波形蛋白和E-钙粘蛋白的表达,Western blotting检测mi R-181a对抗波形蛋白和E-钙粘蛋白的表达情况的调控;划痕愈合实验检测mi R-181a对卵巢癌细胞迁移能力的影响;Transwell侵袭实验检测mi R-181a对卵巢癌细胞侵袭能力的影响。结果:增加mi R-181a的表达后,EMT过程中的相关蛋白激活水平下调,mi R-181a一定程度上可以抑制卵巢癌细胞的EMT过程;过表达mi R-181a后可以明显影响Vimentin[D1(4.58±0.85)vs(0.29±0.02),P0.05;D5(4.16±0.79)vs(0.29±0.02),P0.05]和E-Cadherin[D1(4.75±0.41) vs.(4.56±0.38),P0.05;D5(2.19±0.18) vs.(4.56±0.38),P0.05]蛋白的表达;COC1细胞的迁移能力随mi R-181a的表达的增高而降低[(19.24±4.31)%vs.(25.95±6.02)%,P0.05;(51.25±8.75)%vs.(73.49±12.54)%,P0.05];过表达mi R-181a后可以一定程度上减弱卵巢癌COC1细胞的侵袭能力[(74.64±8.21)vs(231.98±21.72),P0.05]。结论:mi R-181a通过调控上皮间质转化过程影响卵巢癌细胞的迁移和侵袭行为。     

外周血miR-17-92基因簇对于早期胃癌的诊断及预测价值

目的:探讨外周血mi R-17-92簇对早期胃癌的诊断价值,为胃癌的早期诊断及治疗提供参考依据。方法:收集胃癌125例(Ⅰ期35例,Ⅱ期28例,Ⅲ期39例,Ⅳ期23例)和癌前病变24例(包括肠化生及上皮内瘤变),同时选择65例慢性胃炎作为对照组。采用实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测患者血清中的mi R-17-92基因簇的表达水平。通过受试者工作曲线(Receiver Operating Curve, ROC)及曲线下的面积(Area Under the Curve,AUC)评估mi R-17-92基因簇表达水平诊断早期胃癌的敏感性和特异性。结果:(1)慢性胃炎与癌前病变mi R-17-92基因簇表达比较无显著差异(P0.05);(2)早期胃癌及进展期胃癌mi R-17-5p表达明显高于慢性胃炎(P0.05),mi R-19a-3p、mi R-19b-3p、mi R-20a-5p和mi R-92a-3p表达则显著低于慢性胃炎及进展期胃癌(P0.05);(3)miR-17-5p诊断早期胃癌的曲线下面积较mi R-19a-3p、mi R-19b-3p、mi R-20a-5p、mi R-92a-3p及CEA更高;(4)miR-19a-3p、mi R-19b-3p、mi R-20a-5p、mi R-92a-3p高低表达组与在胃癌的浸润深度间有显著性差异(P0.05),mi R-19b-3p高低表达组在胃癌的临床分期间有显著性差异(P0.05);(5)miR-17-5p、mi R-19a-3p、mi R-19b-p、mi R-20a-5p、mi R-92a-3p诊断早期胃癌的阳性率较CEA、CA199高。结论:外周血mi R-17-92基因簇对于早期胃癌的诊断价值明显优于CEA和CA199,这可能为胃癌的早诊早治提供新的策略。     

miR-223在结肠癌组织中的表达及促进结肠癌细胞迁移侵袭的机制研究

目的:探讨微小RNA-223 (mi R-223)在结肠癌组织中的表达及对结肠癌HT-29细胞侵袭、迁移能力的影响及机制。方法:检测mi R-223在结肠癌组织与癌旁组织中的表达。通过脂质体转染法将mi R-223模拟物(mi R-223 mimics,mi R-223 mimics组)及microRNA无关序列(mi R-223 NC,NC组)转染入结肠癌HT-29细胞。采用Real-time PCR检测转染后细胞中mi R-223和TWIST的表达,Western blot检测TWIST的蛋白表达,Tranwell检测细胞的迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告基因检测mi R-223对TWIST基因启动子活性的影响。采用Transwell迁移与侵袭实验检测mi R-223 mimic及Twist si RNA共转染后人结肠癌细胞系HT-29迁移与侵袭能力的变化。结果:与癌旁结肠组织比较,mi R-223在结肠癌组织中呈现明显高表达(P0.05);与空白对照组和mi R-223 NC组比较,转染mi R-223 mimics后的HT-29细胞中的mi R-223表达显著增加(P0.05)。与阴性对照组和空载转染组相比较,mi R-223 mimics转染组穿透的细胞数目明显增加(P0.05),且mi R-223 mimics转染组的细胞侵袭能力显著增强(P0.05)。与mi R-223 NC组和空白对照组比较,转染mi R-223 mimics的HT-29细胞的TWIST基因m RNA和蛋白表达均显著增加(P0.05)。双荧光素酶检验结果显示TWIST为mi R-223的下游靶基因。共转染TWIST si RNA和mi R-223 mimics的结肠癌HT-29细胞的迁移与侵袭能力较单独转染mi R-223 mimics的HT-29细胞显著减弱(P0.05)。结论:mi R-223可能通过上调下游靶基因TWIST水平促进结肠癌HT-29细胞的迁移与侵袭。     

血清LncRNA XIST与miR-33a在膀胱癌中的表达及临床意义

目的:探究血清长链非编码RNA X染色体失活特异转录本(Lnc RNA XIST)与微小RNA-33a(mi R-33a)在膀胱癌中的表达及临床意义。方法:选择2017年4月至2019年8月青岛大学附属医院诊治的95例膀胱癌患者作为膀胱癌组,选择同期体检的95例健康者作为健康组。采用荧光定量PCR检测两组的血清LncRNA XIST与mi R-33a表达水平,分析患者的临床病理参数与血清LncRNA XIST、mi R-33a表达水平的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清LncRNA XIST与mi R-33a对膀胱癌的预测价值。结果:与健康组相比,膀胱癌组的血清LncRNA XIST表达水平明显升高(P0.05),而血清mi R-33a表达水平明显下降(P0.05)。血清LncRNA XIST与mi R-33a表达均与膀胱癌患者的TNM分期和淋巴结转移情况相关(P0.05)。血清LncRNA XIST联合mi R-33a(AUC=0.830,敏感性=90.47%,特异性=89.85%)预测膀胱癌的临床价值明显高于血清LncRNA XIST(AUC=0.716,敏感性=81.36%,特异性=80.74%)及血清mi R-33a(AUC=0.736,敏感性=82.19%,特异性=81.09%)单独检测。结论:血清LncRNA XIST表达异常升高、血清mi R-33a表达降低与膀胱癌发生密切相关,联合检测有助于预测膀胱癌发生的风险,从而为临床制定针对性干预和治疗方案提供参考。     

miR-199a-3p负调控CBX7影响肺癌细胞NCI-H460的生物学行为研究

目的:探讨mi R-199a-3p负调控CBX7影响肺癌细胞NCI-H460的生物学行为。方法:qRT-PCR法检测并比较肺癌组织、癌旁正常组织、肺癌细胞、正常肺上皮细胞中的mi R-199a-3p m RNA相对表达量。比较远处转移肺癌组织、未转移肺癌组织中mi R-199a-3p m RNA相对表达量。qRT-PCR法、Western Blot法检测并比较肺癌组织、癌旁正常组织中的CBX7 m RNA及蛋白的表达水平。荧光素酶活性法检测mi R-199a-3p与靶基因CBX7的结合。比较mi R-199a-3p模拟物转染组与阴性对照组的肺癌细胞中的CBX7 m RNA相对表达量及CBX7蛋白表达水平。CCK8实验检测mi R-199a-3p对肺癌细胞增殖的促进作用。Tranwell实验检测mi R-199a-3p对肺癌细胞侵袭与迁移能力的影响。结果:肺癌组织中mi R-199a-3p明显高于癌旁正常组织,发生远处转移的肺癌组织中mi R-199a-3p m RNA的表达量明显高于未发生转移的肺癌组织,差异有统计学意义(P<0.001)。肺癌组织中CBX7m RNA、CBX7蛋白表达水平均明显低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.001)。荧光素酶活性法证实mi R-199a-3p可与靶基因CBX7结合抑制CBX7的表达。肺癌细胞中mi R-199a-3p m RNA的相对表达量明显高于正常肺上皮细胞,CBX7 m RNA相对表达量明显低于正常肺上皮细胞(P<0.05)。对于肺癌细胞,mi R-199a-3p模拟物转染组的CBX7 m RNA相对表达量及CBX7蛋白表达水平均明显低于阴性对照组(P<0.001)。CCK8实验证实mi R-199a-3p能够促进肺癌细胞的增殖,Tranwell实验证实mi R-199a-3p对肺癌细胞侵袭与迁移具有积极的促进作用。结论:mi R-199a-3p在肺癌的发生发展过程中发挥重要作用,能够通过抑制CBX7基因的表达,促进肺癌细胞的增殖、侵袭和转移。     

miR-155对人肝癌细胞系SK-HEP-1及MHCC-97H增殖与浸润能力的影响

目的:在肝癌细胞系SK-HEP-1及MHCC-97H中过表达mi R-155,研究其对肝癌细胞增殖能力的影响。方法:将pc DNA3.0-mi R-155表达载体瞬时转染SK-HEP-1及MHCC-97H肝癌细胞系,通过实时定量PCR技术检测mi R-155在转录水平的表达;采用CCK8法及克隆形成实验检测mi R-155过表达后对SK-HEP-1及MHCC-97H肝癌细胞系增殖的影响;采用Transwell实验探讨mi R-155过表达后对肿瘤细胞浸润能力的影响。结果:实时定量PCR检测结果显示,转染SK-HEP-1及MHCC-97H细胞后72 h,成熟mi R-155表达分别上调约424±48.5倍及63.69±7.8倍,表明mi R-155在肿瘤细胞内得到高表达;CCK8法及克隆形成实验结果显示,mi R-155能够明显促进肝癌细胞增殖(P0.01);Transwell实验证明mi R-155明显促进MHCC-97H肿瘤细胞的浸润能力。结论:mi R-155在肝癌细胞中的高表达能够明显促进肝癌细胞增殖与浸润,提示其有可能在肝癌的发生发展中发挥重要作用。     

miR-200家族作为卵巢癌预后标志物的meta分析

目的:系统评价mi R-200家族(mi R-200a、mi R-200b、mi R-200c、mi R-141、mi R-429)的表达与卵巢癌预后之间的关系。方法:仔细检索搜索美国国立图书馆(Pub Med),荷兰医学文摘(EMBASE)以及ISI Web of Science、CNKI、万方等数据库,与mi R-200家族相关的卵巢癌预后的文献。检索日期为数据库的建库时间至2013年9月20日。提取与mi R-200家族相关卵巢癌预后的相应数据,应用Stata11.0软件进行Meta分析。结果:共有7篇研究符合入选标准,累积肿瘤组织577例。Meta分析显示,mi R-200家族低表达组的合并优势比是高表达组的1.347倍(95%CI:1.052,1.725)。mi R-200a、mi R-200c、mi R-141的亚组分析结果分别为1.091(95%CI:0.718,1.659)、1.285(95%CI:0.765,2.161),1.122(95%CI:1.043-1.208)。mi R-200家族、mi R-141与卵巢癌的预后之间的关系有统计学意义(P=0.018,P=0.002)。结论:mi R-200家族在卵巢癌的预后判断中可能起到预后标记物的作用。     

非小细胞肺癌患者血清miR-146a、miR-141的表达及临床意义

目的:研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清微小RNA-146a(mi R-146a)、mi R-141的表达及临床意义。方法:选取2015年1月至2018年1月我院收治的106例NSCLC患者记为NSCLC组,另选取同期于我院进行体检的40例健康体检者记为健康对照组。采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测两组血清mi R-146a、mi R-141的表达水平,分析NSCLC患者血清mi R-146a、mi R-141表达水平与临床病理参数的关系,比较血清mi R-146a、mi R-141单一诊断及联合诊断NSCLC的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度。结果:NSCLC组患者的血清mi R-146a、mi R-141表达水平高于健康对照组(P0.05)。NSCLC患者血清mi R-146a表达水平与病理分期有关(P0.05),与年龄、性别、吸烟史、病理类型、病理分级、肿瘤直径及是否伴有淋巴结转移无关(P0.05)。NSCLC患者血清mi R-141表达水平与病理分期、病理分级及是否伴有淋巴结转移有关(P0.05),与年龄、性别、吸烟史、病理类型、肿瘤直径无关(P0.05)。血清mi R-146a、mi R-141单一诊断及两者联合诊断NSCLC的AUC分别为0.841、0.772、0.921,敏感度分别为85.1%、80.5%、93.5%,特异度分别为84.2%、75.3%、89.8%。结论:NSCLC患者血清mi R-146a、mi R-141表达水平升高,且与部分临床病理参数有关,两者联合检测对NSCLC诊断具有较高的诊断价值。     

Hsa-miR-5195-3p对人宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移与侵袭的影响

目的:探讨mi R-5195-3p对人宫颈癌细胞系Si Ha增殖、迁移与侵袭的影响。方法:采用qRT-PCR检测人宫颈癌细胞SiHa和正常上皮细胞HaCaT中mi R-5195-3p的表达水平。将mi R-5195-3p mimic转染至Si Ha细胞中构建外源性过表达细胞株,阴性对照组中则转染NC mimic,并用q RT-PCR验证转染效率;通过MTT和集落形成实验检测细胞增殖能力;划痕愈合实验检测细胞横向迁移能力; Transwell小室实验检测细胞纵向迁移能力和侵袭能力;采用qRT-PCR和Western blot检测E-cadherin、Vimentin与snail m RNA转录水平及蛋白表达水平。结果:宫颈癌细胞Si Ha中的mi R-5195-3p表达水平较HaCaT偏低(P 0. 05)。与阴性对照组相比,转染mi R-5195-3p mimic的SiHa细胞中mi R-5195-3p水平显著增高(P 0. 01);并且其体外增殖(P 0. 001),迁移(P 0. 001)与侵袭能力(P 0. 001)明显减弱;同时E-cadherin表达水平上调而Vimentin、snail表达水平下调。结论:过表达mi R-5195-3p可能通过阻碍EMT通路抑制宫颈癌细胞Si Ha的增殖,迁移与侵袭。     

miR-483-3p靶向CD44抑制EGFR突变肺癌的作用研究

目的:探讨mi R-483-3p对CD44表达的调控作用及采用脂质体载药系统递送mi R-483-3p治疗表皮生长因子(epidermalgrowth factor receptor,EGFR)突变的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的作用。方法:通过mi R-483-3p靶基因的数据库发现CD44可能是mi R-483-3p的靶基因之一,从结构上及功能上进行验证。在EGFR酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor, EGFR-TKI)耐药的NSCLC模型中,分别从基因及蛋白水平检测耐药模型及敏感模型中CD44的表达。在HCC827GR移植瘤模型中,采用脂质体-鱼精蛋白-DNA (liposome-polycation-DNA, LPD)载药系统递送mi R-483-3p进行治疗,观察肿瘤的生长情况。结果:双荧光素酶报告基因实验及Western blot实验结果显示CD44是mi R-483-3p的靶基因之一,且CD44在EGFR-TKI耐药模型中异常高表达(P0.05)。脂质体载药系统LPD-mi RNA-DSPE-PEG符合静脉给药要求,Size为66.93±21 nm,Zeta potential为8.7±2 m V,PDI (Polydispersity Index)为0.1,递送mi R-483-3p后能够抑制HCC827GR移植瘤的生长(P0.05)。结论:CD44为mi R-483-3p的靶基因之一,在耐药模型中高表达,脂质体载药系统给予mi R-483-3p能够抑制EGFR-TKI耐药肿瘤的生长。     

小鼠精子发生早期microRNA的表达谱和调控模式——miRNA在小鼠精子发生中的作用

精子发生是一个依赖于精原干细胞自我更新和精原细胞分化的精确而又复杂的调控过程,目前对这一过程知之甚少.mi RNA作为转录和转录后基因沉默的关键调节子,参与很多生物的多种发育过程.本研究采用高通量小RNA测序系统研究了mi RNA在小鼠B型精原细胞(BSc)和初级精母细胞(PSc)中的表达谱.结果显示,在这2种细胞类型中let-7mi RNA家族的表达水平都相当高.并且在BSc向PSc的转化过程中,mi R-21,mi R-140-3p,mi R-103,mi R-30a,mi R-101b和mi R-99b的表达水平明显降低.这些mi RNA参与调控与细胞凋亡、细胞增殖和分化、连接组装和细胞周期调控相关的诸多基因的表达.上述结果表明,mi RNAs在精子发生过程中发挥着不可替代的作用.     

microRNA在胚胎干细胞分化的心肌细胞中的表达变化

胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)具有自我更新和多向分化的特性。近年研究显示转录后调控包括micro RNAs(mi RNAs)的调控在ESC心肌细胞分化(ESC-derived cardiomyocytes,ESCM)命运决定中起着重要作用。然而对决定ESC分化命运的mi RNAs的了解还非常有限。为了进一步认识mi RNAs对心肌细胞分化的调控作用,本研究采用经典的悬滴法诱导小鼠ESC(m ESC)分化成心肌细胞,采用安捷伦8×15k小鼠mi RNAs芯片(mi Rbase V16.0)比较了富含跳动心肌细胞区域与非跳动区域mi RNAs表达谱的异同,发现与非跳动区域相比,跳动区域中有19个mi RNAs发生了5倍以上的表达变化(n=3,P0.05),其中5个mi RNAs表达上调、14个mi RNAs表达下调。采用定量RT-PCR进一步分析了mi RNAs芯片中差异倍数大于10的mi RNAs,证明mi R-196a,mi R-196b和mi R-467e在心肌细胞跳动区域的表达丰度明显低于非跳动区域(n=3,P0.05)。用Target Scan数据库对mi R-196a和mi R-196b进行靶基因预测,发现其可能与心肌细胞分化呈负相关,提示其在ESC分化命运决定中可能具有一定的调控作用。这些结果为进一步明确mi RNAs在ESC分化的心肌细胞中的作用提供了新线索。     

抑郁症患者血清miR-135a、miR-221表达水平与认知功能、事件相关电位P300和炎症细胞因子的相关性分析

目的:探讨抑郁症患者血清微小核糖核酸(mi R)-135a、mi R-221表达水平与认知功能、事件相关电位P300和炎症细胞因子的相关性。方法:选择2019年1月至2021年1月我院收治的216例抑郁症患者(抑郁症组)和同期于我院体检的200例健康志愿者(对照组)。检测血清mi R-135a、mi R-221表达水平及白细胞介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、简易精神状态检查量表(MMSE)评估认知功能。采用全功能肌电诱发电位仪检测P3潜伏期和P3波幅。Pearson相关性分析mi R-135a、mi R-221表达水平与MoCA评分、MMSE评分、IL-6,hs-CRP,TNF-α、P3潜伏期和P3波幅的相关性。结果:抑郁症组血清mi R-221表达水平、P3潜伏期,血清IL-6、hs-CRP、TNF-α水平高于对照组(P<0.05),mi R-135a表达水平、MMSE评分、MoCA评分、P3波幅低于对照组(P<0.05)。mi R-221表达水平与P3潜伏期,血清IL-6、hs-CRP、TNF-α水平呈正相关(P<0.05),与MMSE评分、MoCA评分、P3波幅呈负相关(P<0.05);mi R-135a表达水平与P3潜伏期,血清IL-6、hs-CRP、TNF-α水平呈负相关(P<0.05),与MMSE评分、MoCA评分、P3波幅呈正相关(P<0.05)。结论:抑郁症患者血清mi R-135a表达水平降低,mi R-221表达水平增高,mi R-135a低表达和mi R-221高表达与抑郁症患者认知功能降低、机体炎症反应有关。     

miR-181a调控骨髓间充质干细胞中OPG水平及对破骨细胞活性的影响

该研究预测并验证骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)中mi R-181a对靶分子骨保护素(osteoprotegerin,OPG)m RNA水平的调控作用,探讨其在骨质疏松发病过程中对破骨细胞活性的影响。通过生物信息学预测mi R-181a可能调控的靶基因OPG,构建含mi R-181a结合位点的OPG m RNA 3′UTR(3′untranslated regions)荧光素酶报告载体。通过双荧光素酶载体系统检测mi R-181a与OPG m RNA 3′UTR相互作用对荧光素酶活性的影响;转染mi R-181a进入BMMSCs并与破骨细胞共培养,TRAP(tartrate resistant acid phosphatase)染色检测共培养体系中破骨细胞数目的改变。结果表明,双荧光素酶报告提示,mi R-181a的靶分子为OPG m RNA,上调mi R-181a(mimics组)水平后,破骨细胞数目较对照组显著增多(P0.05);下调mi R-181a(inhibitor组)水平后,破骨细胞数目较对照组显著降低(P0.05)。研究结果显示,mi R-181a可以负调控OPG的蛋白水平,进而影响破骨细胞活性。     

骨碎补对骨性关节炎患者骨关节滑膜组织中miR-27a、miR-146a表达的影响

目的:探讨骨碎补对骨性关节炎患者骨关节滑膜组织中mi R-27a、mi R-146a表达的影响。方法:选取我院收治的骨性关节炎患者46例,随机分为两组,每组各23例。对照组予抗骨增生治疗,实验组在对照组基础上加以骨碎补治疗。观察和比较两组患者的临床疗效、炎性因子水平的变化以及骨关节滑膜组织中mi R-27a、mi R-146a的表达情况。结果:1治疗后,两组患者的临床症状均有所改善,且实验组疗效高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。2治疗后,两组患者的IL-1β、PGE2水平均较治疗前显著降低,且实验组降低较对照组更明显,差异均有统计学意义(P0.05)。3治疗后,两组患者的骨关节滑膜组织中的mi R-27a、mi R-146a表达均降低,且与对照组比较,实验组较低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:骨碎补能够降低骨性关节炎患者骨关节滑膜组织中mi R-27a、mi R-146a的表达,降低IL-1β、PGE2的水平,提高临床疗效。