丁型肝炎病毒的分子生物学研究进展

丁型肝炎病毒(Hepatitis delta virus,HDV)是一种缺陷病毒,必须在嗜肝DNA病毒的辅助下才能复制并组装成有感染性的病毒颗粒。其毒粒为直径35～37nm,大小介于HBV的Dane颗粒和HBsAg颗粒之间的球形颗粒。病毒颗粒外层由脂双层和HBsAg组成,内包含由HDAg和HDV RNA基因组结合组成的核蛋白体。HDV是目前所知唯一具有     

乙型肝炎病毒与乙型肝炎疫苗

乙型肝炎已成为严重威胁人类健康的世界性疾病之一,我国也是高流行区。现在对本病的认识与研究逐渐深入,已取得了很多研究成果。本文仅就乙型肝炎的病原(乙型肝炎病毒)和与疫苗有关的两个问题简述如下: (一)乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒(HBV)属DNA病毒,该病毒与其相关抗原颗粒在电镜下分三种不同形态:直径为22nm小球型颗粒、直径为22nm长为200nm的管状颗粒和直径为42nm的大球型颗粒(又称Dane颗粒)。一般认为Dane颗粒是完整的病毒。这三种形态病毒颗粒的衣膜均由表面抗原(HBsAg)组成,不含核酸。Dane颗粒衣膜内为27nm的核心,核心部分包括核心抗原(HBcAg)和e抗原(HBeAg)、内源性DNA模板及相应的DNA聚合酶。据研究HBV进入肝细胞浆脱去衣膜,其环形     

分子杂交法检测血清中的HBV—DNA:一个更敏感的检测完整HBV颗粒的方法

<正>关于乙肝病毒感染的问题,人们发现HBsAg主要以无感染性的22nm小颗粒形式存在,但也被认为是完整病毒颗粒的42nm颗粒的一部分。42nm颗粒有一个HBsAg外膜和一个内核,内核含有HBcAg,一个     

乙型肝炎病毒DNA的结构

乙型肝炎病毒(Dane颗粒)的直径为42nm,由三部分组成。 一、外壳:厚7nm,由奴层脂质组成,嵌入50～60个亚简位,有些含有HBsAg,有些同时含有前基因产物。 二、核心:为二十面体的对称结构,直径为27nm。 三、HBV DNA(乙型肝炎脱氧核糖核酸)含有小的环状DNA分子。在感染的肝细胞内能够检出游离的或整合的病毒DNA。 HBV的外壳和核心分别在感染细胞核内和胞浆内合成,然后在胞浆内装配成Dane颗粒。     

西伯利亚旱獭中类人乙肝病毒的研究

对111份西伯利亚旱獭血清标本进行血清学,形态和组织病理学检测,HBsAg阳性22份,阳性率19.8％;抗-HBs1份,阳性率0.9％;HBV-DNA核酸杂交,阳性斑点16份,阳性率14.4％。IEM观察在3份标本中发现以22—24nm球形颗粒为主,其中有42—45mm的Dane样颗粒。20.7％的肝脏标本有组织病理改变,其中19份为急性肝类,4份为慢性肝炎。超薄切片肝细胞核内有20nm左右的HBeAg颗粒,结果进一步证实我国西伯利亚旱獭中有嗜肝病毒感染。     

抗白蛋白抗体(AAA)

1974年Lenkel发现肝病病人血清能凝集聚合人血清白蛋白(PHSA)包被的红细胞。这现象已由许多学者所证实。产生这一现象的原因有二。1,与PHSA结合的是HBsAg(包括Dane颗粒、小球形和管形颗粒)颗粒上存在PHSA受体,2,乙肝病人血清中存在抗自身变性白蛋白的抗体(AAA),介导了HBV感染的病人的HB_sAg和Dane颗粒与PHSA包被的红细胞起反应。     

乙型肝炎病毒表面抗原的微团化及其免疫刺激复合物抗原的理化特性和免疫原性

本文用哺乳动物细胞系表达的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg),制备了HBsAg的微团化(Micelle)和免疫剂激复合物(Immune-stimulating Complexes,简称ISCOMS)两种形式的抗原。在电镜下观察,微团化抗原是由球形亚单位颗粒组成直径100～150nm的较原颗粒大得多的大颗粒,在蔗糖中的浮力密度为1.24g/ml;而ISCOMS在电镜下为直径30～40nm左右稍大于原颗粒的多面体形态颗粒。SDS-PAGE分析表明,这两种形式的颗粒都是由HBsAg的P23和GP27蛋白所组成。 小鼠免疫接种结果显示,ISCOMS的免疫原性优于微团化抗原,后者又优于原22nm HBsAg颗粒。在抗体产生的速度和强度上,ISCOMS组显著优于微团化抗原组,而微团化抗原组略优于22nm HBsAg组。 ISCOMS的免疫性强,抗体产生早,强度高,又易于制备,而且不需要使用氢氧化铝胶佐剂,有可能发展成为一种新一代的乙型肝炎疫苗。     

乙型肝炎表面抗原基因在酵母中的表达

本文报道用酵母磷酸甘油酸激酶相似文献   

乙型肝炎病毒与乙肝疫苗的基因工程

乙型肝炎病毒(HBV)能引起人患乙型肝炎。乙型肝炎(简称乙肝)是一种流行很广的传染病,而且传染性也比较强,大约4×10~(-5)ml含乙型肝炎病毒的血液能够足使人发生感染。输血或注射是重要的传染途径;外科和牙科手术、针刺、使用公用剃刀,牙刷等物品,皮肤微小损伤沾染少量含乙型肝炎病毒,均可成为传染源,吸血昆虫也可能传播乙肝。据统计,全世界乙肝携带者约有2亿人。乙肝病毒除了能引起人患乙肝外,部分还可能诱发肝癌。乙型肝炎病毒的结构与乙肝病毒相关的颗粒有三种不同的形态: 1.大球形颗粒:是一种具有双层外壳的病毒样颗粒,直径约42nm(纳米,1nm=10~(-9)m),外壳厚度7nm,含有乙肝表面抗原(HBsAg),最能代表HBsAg抗原性的是由亚基PⅠ和PⅡ所构成的二聚体。PⅠ是一个分子量     

密度梯度区带离心大量提纯乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的研究

文献上通常用于大量制备纯HBsAg的方法为两次氯化铯等比重分带和一次蔗糖速率区带沉降法。但在我们实验中,此法似乎不太理想,因为所得的HBsAg通常含有极微量的正常人血清蛋白。我们采用了一种复合的纯化方法,它包括胃蛋白酶消化、DEAE纤维素层析,氯化铯浮升区带离心及蔗糖速率区带离心。此法可以制出纯HBsAg,其浮密度在氯化铯梯度中为1．1 9—1．23克／厘米’,在蔗糖梯度中为1．15—1．16克／厘米’。在纯化的HEsAg 中未测出正常人血清蛋白,给豚鼠及马匹免疫3—4次可产生单特异抗一lIBs血清,不舍抗正常人抗体,因此纯度较高。电子显微镜观察,可见均匀的小球形颗粒,未见Dane颗粒及杆状颗粒。     

血源性Dane颗粒的多肽分析

采用PAGE-Western Blot技术对血源性Dane颗粒的多肽组份进行了分析。并结合HBV感染的其它血清学指标,初步探讨了HBV感染者对这些多肽的抗体应答情况及意义。结果显示:Dane颗粒在PAGE图谱上有12条多肽表型;Western Blot证实除S区的6条多肽和来自C区的具有cAg和eAg两种抗原位点的同一多肽P21外,还有与抗Pol结合的P24-25多肽以及与抗人免疫球蛋白结合的多肽(P45-IgC,P76-IgM),推测血源性Dane颗粒上可能存在有Pol基因表达的产物和结合在表面的人免疫球蛋白或相似的抗原决定簇。调查29例隐性HBV感染自限后人群和185例HBV现症感染者对这些多肽的应答情况发现:P24、P27、P39、P42是引起免疫应答的多肽,两组对它们时应答存在着差异(P<0.01)。表明对它们的有效应答可能有利于HBV感染的清除。     

多聚亚基蛋白质在固-液界面团聚的测量与表征

以血红蛋白和乙肝表面抗原(HBsAg)为模型,联用双偏振光干涉分析仪(DPI)和原子力显微镜(AFM)研究在固-液界面上的吸附行为.结果发现:当溶液环境中血红蛋白的质量浓度为1.08 mg/mL时,测得在硅羟基表面吸附的平均厚度为3.54 nm,蛋白颗粒直径达60～ 150 nm,远高于血红蛋白的分子尺寸,说明血红蛋白在固-液界面上发生团聚.当HBsAg质量浓度为0.67 mg/mL时,测得在硅羟基表面及DEAE琼脂糖表面吸附的平均厚度分别为1.06和23.69 nm,表面吸附的蛋白颗粒直径分别为288～401和520 ～ 971 nm,是单分子HBsAg尺寸的13.1～44.1倍,表明在模型蛋白表面都形成了大的团聚体.     

HBsAg基因在酵母细胞中的表达

先前从酵母染色体[DNA中得一个作用较强的启动基因片段,使HBsAg基因在其控制下,构建了大肠杆菌一酵母细胞穿梭质粒。这种质粒转化的酵母细胞能生产和装配HBsAg颗粒。经放射免疫分析,超离心沉降研究和电子显微镜观察,酵母产生的HBsAg颗粒与人血清中的HBsAg颗粒十分相似。     

乙型肝炎病毒表面抗原基因在昆虫体系中的表达

利用组建的苜蓿尺蠖核型多角体病毒(AcNPV)非融台蛋白基因转移载体将乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因成功地插入粉纹夜蛾(Tn)NPV中,HBsAg基因在感染了重组病毒的草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)离体细胞以及粉纹夜蛾和蓖麻蚕等虫体中获得了表达,免疫电镜下观察到典型的乙型肝炎病毒表面抗原22nm颗粒。感染重组病毒的蓖麻蚕预蛹每克蛹重可产HBsAg蛋白1．6μg。表达产物经DEAE－纤维素层析得到的HBsAg粗提物可作临床检测用,再经抗体亲和柱层析可得到纯的HBsAg。     

人乙型肝炎adr亚型病毒(HBVadr)表面抗原与核心抗原基因定位

人乙型肝炎病毒是球状颗粒,它有个含磷脂的蛋白外壳和一个内含DNA的病毒核心。由于外壳上的表面抗原(HBsAg)可作为疫苗,用于乙型肝炎的防治;病毒核心的核衣壳上的核心抗原(HBcAg)对乙型肝炎的诊断非常有用,因而人们对HBsAg和HBcAg     

人乙型肝炎adr亚型病毒(HBVadr)表面抗原与核心抗原基因定位

人乙型肝炎病毒是球状颗粒,它有个含磷脂的蛋白外壳和一个内含DNA的病毒核心。由于外壳上的表面抗原(HBsAg)可作为疫苗,用于乙型肝炎的防治;病毒核心的核衣壳上的核心抗原(HBcAg)对乙型肝炎的诊断非常有用,因而人们对HBsAg和HBcAg     

一条新的柱层析纯化路径对HBsAg免疫原性的影响

摘要目的：建立一条新的毕赤酵母表达乙肝表面抗原（HepatitisBantigen,HBsAg）柱层析纯化方法,保持HBsAg结构完整性和提高免疫原性。方法：毕赤酵母发酵料液经过菌体破碎、聚乙二醇沉淀、疏水层析、超滤和凝胶分子筛精纯,收集HBsAg合格样品液适当稀释后加入铝佐荆吸附,制成乙肝疫苗半成品免疫BALB／c小鼠。结果：纯化产物经SDS-PAGE银染鉴定得单一条带,分子量在23kD左右,凝胶成像软件分析纯度超过95％;该纯化方法得到的HBsAg颗粒电镜观察得平均直径为22nm病毒样颗粒,结构较均一完整;自制疫苗免疫小鼠后,其血清抗体水平高于葛兰素史克生产的Engerix—B（安在时）,存在显著性差异（P〈0．05）。结论：通过该方法纯化的HBsAg结构完整性良好,疫苗免疫效果优于酵母表达的Engerix—B,纯化路径简单高效,易于放大用于工业化生产。     

HBV-DNA检测的临床应用

<正>包裹乙型肝炎病毒(HBV)的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)蛋白质,是包被病毒体的剩余产物,它以非感染颗粒的形式存在于人体血清中。因此HBsAg的检出,并不是感染病毒存在的明确标志。在急性和慢性感染的早期,患者血清中可含有大量的病毒颗粒,并有乙型肝炎e抗原(HBeAg)。由于HBV复制的降低,血清中HBsAg消失     

哺乳动物细胞分泌的乙型肝炎病毒表面抗原的理化和生物学性状

研究了哺乳动物细胞分泌的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)纯品的理化及生物学性状。结果表明:此种HBsAg在CsCl中的浮力密度是1.21g/cm~3;快速液相层析的SuperoseHR6层析柱上呈现3个峰,中间是一个主峰,两侧各一小峰;经Mono Q柱层析呈现一个对称峰,证明了HBsAg颗粒所带电荷的均一性;以SDS-PAGE和凝胶扫描方法分析HBsAg的多肽,P23、gp27和gp30各占65％、20％和10％,另有5％的二聚体存在;N-末端的氨基酸序列与转入细胞的目的基因所编码的序列相同;HBsAg在4℃和-20℃储存较稳定,室温条件保存时间不宜过长。动物实验证明:用与血源HBsAg疫苗同等剂量的基因工程HBsAg疫苗接种Balb/C小鼠,可获得比血源疫苗高2.64倍的免疫效果。此外,经过福尔马林处理的疫苗较未处理的疫苗有较强的免疫原性。     

肠道传播非甲非乙肝炎在恒河猴中的传代研究

用ET-NANBH感染的两只猴(R5和R6)含病毒颗粒的粪便悬液和肝组织悬液分别接种7只和4只恒河猴,分别有5只猴和4只猴在攻毒后20—49天内ALT开始升高,持续时间为7—10天,肝组织学的特征性改变为肝细胞的嗜酸性变和嗜酸小体的形成。在猴ALT升高前2—3天和升高后一周内均检查到大量的27—34nm的病毒样颗粒,这些颗粒只与ET-NANBH病人血清、黑猩猩和猴感染后急性期和恢复期血清发生特异性聚集。在猴感染后血清中未检出抗-HAV、抗-HAV-IgM、HBsAg和抗-HBe-IgM。结果提示:恒河猴是研究ET-NANBH较适宜的动物模型;病人和猴粪便中的27—34nm的病毒样颗粒是ET-NANBH的病原因子。