提取航天诱变向日葵种子总RNA的一种有效方法

目的:从航天诱变向日葵种子中提取高质量的总RNA.方法:采用改进的SDS法,提取缓冲液与氯仿同时作用液氮研磨材料后,用酸酚-氯仿抽提一次,经LiCl过夜沉淀、DNase I处理、1/2体积的无水乙醇沉淀多糖,最后加入1/10体积的醋酸钠和2倍体积的无水乙醇沉淀总RNA,用琼脂糖凝胶电泳与紫外分光光度法测定产量与纯度,用...     

仿刺参体壁总RNA提取方法的建立

目的:通过对TRIzol一步法进行改进,建立一种从富含胶原蛋白、多糖及色素的仿刺参体壁提取总RNA的有效方法。方法:样品在液氮中研磨并用TRIzol匀浆后再进行抽提;对TRIzol一步法提取的总RNA进行DNaseⅠ消化和酚氯仿抽提,用2.5mol/L的醋酸钾沉淀,并加入适量糖原(10mg/mL)与RNA共沉淀。结果:琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法以及RT-PCR检测结果表明,改进的方法能够有效去除基因组DNA、蛋白、多糖及色素的污染,RNA的产率提高。结论:制备的总RNA纯度高,完整性好,能够满足mRNA差异显示RT-PCR等分子生物学研究的要求,是一种提取仿刺参体壁及其他富含黏多糖、胶原蛋白和色素的动物组织总RNA的有效方法。     

荧光Real-time PCR鉴定鸡胸骨总RNA质量

为了更准确地鉴定提取鸡骨总RNA的质量,试验分别用核酸蛋白检测仪、1%琼脂糖凝胶电泳和荧光Real-time PCR检测评价3种不同的方法提取成年鸡胸骨总RNA的质量。结果显示,荧光Real-time PCR可更好地鉴定提取的骨总RNA的质量。用核酸蛋白检测仪、1%琼脂糖凝胶电泳能粗略检测RNA的纯度和完整性,但不能反映提取过程中是否引起基因不均一的减少,所检测的纯度也不能精确反映RNA的反转录效率。     

一种提取小鼠表皮总RNA的新方法

目的:建立一种从小鼠表皮组织提取高质量RNA的方法。方法:用热击法分离小鼠表皮,用TRIzol法提取RNA,用紫外分光光度计测定RNA的产率和纯度,用琼脂糖电泳和RT-PCR检测RNA的质量和完整性。结果:采用新方法提取的小鼠表皮总RNA,其D260nm/D280nm值为1.8～2.0,大于1.5,且RNA产率高于100μg/g;琼脂糖电泳出现5S、18S和28S等3条清晰的rRNA条带,而且28SrRNA条带的亮度约为18S的2倍;用新方法制备的总RNA可成功地用于RT-PCR实验。结论:采用热击法分离表皮并结合TRIzol法可提取到高质量、完整性好的小鼠表皮总RNA,并能用于相关的分子生物学实验。     

RNA促进小鼠重组染色质白蛋白基因DNaseⅠ消化敏感性

同样的基因在不同的分化细胞中表达不同,基因的选择性表达问题涉及分化和衰老的本质。转录基因对DNaseⅠ(DNA酶Ⅰ)消化敏感,本文研究了RNA对小鼠重组染色质白蛋白基因DNaseⅠ消化敏感性的影响。分离BALB/c小鼠脑细胞核,加入终浓度为2mol/L的NaCl破坏核小体结构,加入不同量、不同来源的RNA,装透析袋,逐渐降低离子强度进行染色质重组。重组染色质中加入DNaseⅠ消化DNA,PCR扩增白蛋白基因的外显子1到外显子2约1200bp区段,PAGE电泳后,用银染色观察不同来源RNA促进DNaseⅠ对白蛋白基因的消化作用。不同组织来源（肝、肺、肾、脑）RNA对小鼠重组染色质中白蛋白基因DNaseⅠ消化敏感性均有促进作用,其中肝和肺RNA促进消化作用较强;酵母tRNA无显著促进消化作用;消化促进作用与RNA剂量有关。RNA能增加DNaseⅠ对白蛋白基因的消化敏感性且有组织（细胞）来源特异性。又委托丹麦Chemical R D 实验室合成2条与白蛋白基因互补的各23核苷酸的RNA,用其进行重组试验。结果表明,重组混合物中含有低至0.2μg/mL的RNA,即可以发挥显著的DNase I消化促进作用。     

淡水育珠蚌外套膜提取总RNA的改良方法

通过对Trizol法加以改进,提取淡水珍珠蚌外套膜组织中的总RNA。经预处理后,在异丙醇沉淀RNA时加入高浓度的盐溶液,用75%的酒精2次洗涤RNA。用紫外分光光度法和1%琼脂糖凝胶电泳鉴定所提取的RNA。结果表明,改良法获得的总RNA完整、纯度高,改良Trizol法是一种从淡水育珠蚌外套膜组织中提取总RNA的高效、便捷、可靠的方法。     

外源RNA对小鼠白蛋白基因表达及DNaseⅠ敏感性的影响

兔肝RNA诱导培养的小鼠成纤维细胞 ,大鼠肝RNA注射入小鼠前列腺 ,用免疫组织化学染色检测外源RNA对小鼠白蛋白基因表达的影响 ;不同RNA诱导培养的小鼠成纤维细胞 ,提取细胞核 ,DNaseⅠ消化 ,PCR法扩增小鼠白蛋白基因 ,检测白蛋白基因消化情况。发现外源RNA可促进小鼠白蛋白基因表达并增加该基因DNaseⅠ敏感性     

荒漠生物结皮中齿肋赤藓总RNA最佳提取方法的确立

目的：根据不同提取方法对提取荒漠齿肋赤藓总RNA质量的影响,寻找一种快速高效提取齿肋赤藓总RNA的方法。方法：采用改良RNAiso Reagent试剂法、RNAprep pure植物总RNA提取试剂盒法（TIANGEN）、皂土法分别提取采自新疆古尔班通古特沙漠生物结皮中齿肋赤藓的总RNA,用紫外分光光度计测定其浓度、纯度和产量,并通过RT-PCR进一步检测其质量。结果：三种方法均能提取出RNA,但质量差异较大。其中改良的RNAiso Reagent试剂法提取的RNA产量可达1298～1318μg/g,完整性好且纯度高,OD260/OD280值为1.86～1.92,且经济、操作简便,能有效抑制多酚物质氧化和次生代谢物质的影响,,适合用于进一步的RT-PCR反应。结论：改良的RNAisoReagent法经济且操作简便,提取的荒漠齿肋赤藓RNA完整性和纯度较高,可用于RT-PCR反应。     

动物线粒体DNA提取简易流程及其优化

目的:研究动物线粒体DNA(mtDNA)提取的简易流程,以提取到纯度高、结构完整的动物mtDNA。方法:采用SDS碱变性法,从动物的肝脏和性腺等组织中提取mtDNA,并增加了DNaseⅠ、RNase消化步骤,以除去核DNA及RNA的污染;用紫外分光光度计分析mtDNA的纯度和得率。结果:mtDNA的得率为0.5～0.8μg/g,D260nm/D280nm值为1.77～1.82,能满足对mtDNA进行RFLP分析、RAPD分析、测序分析等的要求。结论:改进的动物mtDNA提取方法简便可行,值得推广。     

一种高效提取猕猴桃DNA和RNA的方法

在总核酸提取方法(PS法)的基础上,经多次实践改进,得出一种以高盐低pH的HAc-NaAc缓冲体系提取总核酸的简便方法,可以从富含多糖、多酚时猕猴桃叶片和花蕾中提取同时含有DNA和RNA的总核酸.所得的总核酸在LiCl溶液中选择性沉淀RNA,从而有效地分离出DNA和RNA样品.紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳分析表明,所提取的DNA和RNA具有较高的纯度和完整性.通过样品DNA的PCR和样品RNA的RT-PCR,认为所提取的DNA样品和RNA样品能够满足分子生物学试验的基本要求.     

一种高质量麦冬总RNA的提取方法

本方法采用CTAB作为去污剂,分别用氯仿/异戊醇反复抽提、LiCl沉淀,以去除蛋白质、碳水化合物和次生代谢物等杂质,用DNase处理去除DNA污染,最后用无水乙醇沉淀获得总RNA。该方法不仅能获得完整性好、纯度高的总RNA,而且操作简单、成本低廉、RNA产率高,对富含次生物质的中草药材植物组织总RNA的提取具有借鉴意义。     

紫草素的分离制备方法研究

采取CO2超临界萃取的方法从辽宁硬紫草中提取总紫草色素,用紫外分光光度法测定其含量。分别采用有机溶剂溶解碱液萃取法,直接碱水解法,以及Cu^2 络合法制备紫草素。通过三种紫草素制备方法的比较,确定先经Cu^2 络合纯化处理后再经水解法制备紫草素,收率较高,是实验室中简单、快速、高收率的由天然紫草分离制备紫草素的有效方法。     

五种不同组织结构特点昆虫的总RNA提取效率比较

【目的】比较RNAeasy抽提试剂盒法和Trizol提取法对不同种昆虫总RNA提取的效率,为不同种昆虫总RNA提取方法选择提供参考。【方法】采用RNAeasy抽提试剂盒法和Trizol提取法分别对九香虫Aspongopus chinensis Dallas、白背飞虱Sogatella furcifera Horváth、中华蜜蜂Apis cerana cerana、黄蜻Pantala flavescens和蒿金叶甲Chrysolina aurichalcea进行总RNA提取,通过紫外分光光度计测定总RNA吸光度(OD)值,利用琼脂糖凝胶电泳检测等方式对RNA质量进行评估。【结果】2种提取方法提取不同昆虫总RNA中,Trizol法提取白背飞虱(同翅目)、蒿金叶甲(鞘翅目)和九香虫(半翅目)的总RNA浓度较高,但纯度较低。电泳结果显示总RNA有降解,完整性较差,RNAeasy抽提试剂盒法提取黄蜻(蜻蜓目)和中华蜜蜂(膜翅目)的浓度较低,纯度较高,电泳结果显示完整性较好。【结论】Trizol法更适合提取小型或几丁质含量高的昆虫,RNA抽提试剂盒法更适合几丁质含量较少、腹软且有大量体液的昆虫总RNA提取。     

从矿化的骨组织中提取骨细胞的总RNA

描述了两个从以含大量羟基磷灰石（钙）和细胞密度、数量甚低为特点的矿化的成年骨组织（成年大鼠颅骨）提取总RNA的改进方法.紫外分光光度法（A260、A280和A230）和1%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳予以鉴定.进而以其逆转录的cDNA为模板扩增出β-actin和BMP-2基因,均表明所得总RNA完整和模板活性俱佳.总RNA产量平均为560μg/g骨组织.     

小麦线粒体DNA的高效提取方法

以小麦黄化苗为材料, 通过简单差速离心、DNaseⅠ处理得到无核DNA杂质的线粒体, 用SDS和蛋白酶K裂解线粒体, 经酚/氯仿抽提除去蛋白, 并用RNase A消化而得到单纯线粒体DNA(mtDNA)。对所提取的mtDNA进行紫外吸收光度分析, A₂₆₀/A₂₈₀ 平均为1.92, A260/A230 平均为2.09, 平均每克黄化苗可提取mtDNA 26.85 mg; 并对mtDNA进行琼脂糖凝胶电泳和RAPD扩增, 均得到清晰的电泳图谱。结果表明: 此提取方法得到的mtDNA, 不但产率高、结构完整, 而且能有效去除核DNA、RNA和蛋白质等杂质, 获得高质量的mtDNA用于PCR反应和各种遗传学分析。研究还发现, 通过调整线粒体裂解温度(先50℃裂解1 h, 再37℃裂解1 h), 亦可大幅度提高mtDNA的产率。     

从富含淀粉的水稻胚乳组织中提取功能总RNA 和克隆wee1基因片段的方法研究

水稻胚乳中含有大量的淀粉等物质,用传统的方法提取总RNA难度很大．改良了一种SDS／苯酚法．可以从水稻胚乳中提取高质量的总RNA,解决了RNA易降解、易被污染以及由于总RNA与淀粉等物质共沉淀所造成的低产量等问题．通过分光光度计测量OD值以及变性胶电泳,可以检测出所提取的总RNA质量较高,从1.5g水稻胚乳中可提取到800μg左右的总RNA．提取的总RNA已成功用于RT-PCR克隆目的基因．     

风沙土微生物总DNA不同提取和纯化方法比较

为筛选和建立风沙土中总DNA的提取和纯化方法,选取了5种直接提取法、1种间接提取法和2种纯化法分别对风沙土中总DNA进行了提取和纯化,并对其质量和产量进行了比较.结果表明：6种方法均可从风沙土中提取到大小为23 kb左右的总DNA,其中改进后的高盐提取法（用40%聚乙二醇8000和4 mol·L^-1 NaCl沉淀DNA）效果最好,纯化后总DNA的纯度最高,可进行16S rDNA的PCR扩增,且产量仅稍低于试剂盒提取法;电泳加柱回收纯化法的纯化效果较好,经该方法纯化后的总DNA大部分可进行PCR扩增,可满足后续分子操作对DNA纯度的要求.     

检测柯萨奇B病毒RNA的原位RT-PCR技术

建立I检测柯萨奇B病毒（CBV）RNA的原位RT—PCR技术（直接法）,并对CBV（1～6型）感染Hds细胞中的病毒RNA进行检测,同时对照检测了经核酸酶（DNase和RNase）处理后的病毒感染Hthe细胞和非感染的Hds细胞。实验结果表明,经原位RT－PCR扩增后,CBV感染的Hem细胞呈蓝黑着色,阳性信号充满细胞;而非病毒感染的Hem细胞不着色;核酸酶消化实验证实,经RNase作用后CBV感染Hem细胞的原位RT－PCR阳性信号消失,DNase和RN＿共同作用时,阳性信号也消失,但DNase作用个影响阳性信号。说明原位RT～PCR的阳性信号是CBV特异性…     

不同来源的脱氧核糖核酸酶在基因表达量分析中应用效果的比较研究

目的：比较在基因表达量分析中使用不同来源的脱氧核糖核酸酶（DNase）去除样本中残留DNA的应用效果差异,为研究者根据自己的实验需求选择合适的DNase提供依据。方法：选择国内外广泛使用的3种DNase,分别为Invitrogen DNase,T擞aRaDNase和TiandzDNase。按照各种DNase的说明书对Trizol法提取的胎盘总RNA中残留DNA进行降解,定量方法采用实时荧光PCR测定反转录后的cDNA量。比较各种DNase对不同浓度RNA样本中残留DNA的处理效率、RNA损失量、操作时间及成本等。结果：三种DNase酶均能够完全降解不同残留量的DNA（10ng、100ng及1恤g）,实时荧光定量PCR均未检测到残留DNA。InvitrogenDNase对DNA的处理过程耗时最短,操作过程造成各种浓度RNA模板的损失量均最低,但成本最高;TaKaRaDNase处理的耗时居中,成本居中,RNA损失量最高,尤其对低浓度（〈100ng／μL）RNA样本;TiandzDNase处理的耗时最长,成本最低,RNA损失量居中,当模板浓度较高（〉500ng/μL）时,损失量相对减少。结论：不同来源的DNase在基因表达量分析中对样本处理的应用效果各不相同,在不同样本分析中可参考以下原则正确使用合适的DNase,以保证分析的顺利和结果的准确：对于RNA提取量较多的样本,三种DNase均可选择,但如考虑成本,首选TiandzDNase,如考虑耗时或RNA损失量,首选InvitrogenDNase,如既考虑耗时又考虑成本,可选TaKaRaDNase;对RNA提取量较少的血液或少量细胞（如单细胞）样本,应选择Invitrog—enDNase。     

酿酒酵母菌核糖体RNA沉降系数的初步研究

为研究酿酒酵母菌核糖体RNA(rRNA)的沉降系数,用酶解法和液氮研磨法裂解酿酒酵母菌的细胞壁,Trizol Reagent提取其总RNA,同时提取小白鼠和斑马鱼的总RNA进行比较.经紫外分光光度计检测和甲醛琼脂糖变性胶电泳后,RNA纯度好,条带清晰,无弥散或降解现象.试验发现,与酶解法相比,用液氮研磨法破碎酿酒酵母菌细胞壁提取总RNA所用的成本低,时间少,产率和纯度高,适用于少量样品RNA的提取.同时,酿酒酵母菌与斑马鱼和小白鼠总RNA电泳图谱表明,三者的"18S rRNA"在条带大小方面差异较小,而"28S rRNA"差异较大.利用分析型离心机测得的酿酒酵母菌两个较大rRNA的沉降系数分别为24.7S和18.1S.研究结果表明了真核生物rRNA种类的多样性.