免疫球蛋白基因的研究进展

本文介绍了近年来免疫球蛋白(Ig)基因的分子生物学研宄概况。其中包括抗体的多样性产生机制与Ig基因家族成员重排、拼接和体细胞突变的关系,Ig重链类别转换与其恒定区基因上游的S序列间重组的关系,还有Ig启动子和增强子对Ig基因在B细胞中特异性转录的调控作用。最后简要概述了Ig超基因家族和其分子进化研究以及Ig的基因和发育工程研究状况。     

免疫球蛋白基因的转录调控

免疫球蛋白(Ig)的表达是B细胞特异性和发育阶段特异性的事件.Oct2、NF-kB和HLH蛋白与Ig基因细胞特异转录有关.Oct2含有POU结构域,属POU转录调控因子家族;NF-kB有rel-like结构域,属rel-like转录调控因子家族;HLH蛋白特征性结构为螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix,HLH)结构域,已报道的HLH蛋白都与转录调节有关.     

BSAP／Pax—5在B淋巴细胞发育、增殖、分化中的作用

BSAP,一个B细胞特异性激活蛋白,由Pax-5转录的核蛋白。作为核转录因子,其在B细胞的发育、增殖和分化中起重要作用。同时也影响B细胞分化晚期的Ig的分泌。     

NF-κB在慢性阻塞性肺疾病中的作用

<正>NF-κB是普遍存在于生物体内各种类型细胞中的一种转录因子。它是一种可与免疫球蛋白K轻链基因增强子κB序列发生特异性结合的核蛋白因子,被Sen等于1986年在哺乳动物的成熟B淋巴细胞核的提取物中发现。目前已有研究表明,其广泛存在于细胞中,能与多种基因启动子或增强子发生特异性结合,在细胞凋亡、增生、分化、炎症反应及免疫应答等病理生理中起到了至关重要的作用[1]。现就     

封面说明

正转录因子是一类能够与基因特异性序列进行结合,从而调控基因转录与表达的蛋白质,对细胞的生物学活性具有重要的调节作用。RHR转录因子家族属于IF转录因子超家族最主要的成员,其成员含有保守的Rel结构域和IPT结构域。作为古老的转录因子家族,RHR家族成员随着物种演化,通过基因的复制、突变和沉默,不断分化出新型同源基因的同时也伴随着基因的丢失。     

癌基因MDM2对雌激素受体转录活性的调节作用

目的:检测MDM2基因对雌激素受体α和β(ERα和ERβ)是否具有转录活性调节作用。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增MDM2序列,并将其以正确相位与pcDNA3-FLAG载体中的FLAG序列融合,构建成重组质粒pcDNA3-FLAG-MDM2;以含雌激素反应元件的荧光素酶(ERE-LUC)为报告基因,通过检测荧光素酶活性来确定MDM2是否对ER有转录调节因子的作用。结果:克隆和表达了MDM2基因;MDM2只对ERα具有转录活性调节作用。结论:MDM2对ER转录活性的调节具有亚型特异性。     

核因子-κB的激活及其在急性肺损伤中的作用

核转录因子NF κB是一类具有多向性转录调节作用的蛋白质因子 ,它能与多种细胞因子、粘附分子基因启动子部位的κB位点发生结合 ,增强这些基因的转录和表达。已有报道NF κB的激活将导致TNF、IL 1、IL 6、IL 8、ICAM 1、P selectin等基因的过度表达 ,而后者在急性肺损伤发病中起着极其重要的作用。本文着重综述核因子 κB蛋白家族成员的情况及其相互作用 ,NF κB可能的激活途径及其在急性肺损伤发病中的作用、致病因素和机制 ,并简单介绍了几种影响NF κB活性的药物。这些发现将为急性肺损伤及一切NF κB在其中发挥作用的疾病的治疗提供一条新的思路和重要的治疗手段。     

用Ig—SPA花环法检测人末稍血淋巴细胞的初步探讨

目前国内外多采用荧光抗体法检测 B淋巴细胞。即用 FITC 标记抗人免疫球蛋白(Ig),然后和人淋巴细胞作用,因 B细胞上有特异的膜表面免疫球蛋白(SmIg)可与抗人 Ig 结合,从而使 B 细胞显示荧光,借助荧光显微镜计算阳性细胞的百分率。此法由于标记荧光的抗人     

基于深度最大输出网络的抗体种型特异性B细胞表位预测（英文）

B细胞表位研究有助于肽段疫苗研制,抗体研制以及疾病诊断和治疗研究。不同的B细胞表位诱导免疫系统产生不同的抗体种型,探索研究能够诱导特异性抗体产生的B细胞表位具有重要意义。基于二肽组成特征,利用深度最大输出网络算法训练构建三个二类分类器,分别对应诱导三种不同特异性抗体的B细胞表位,即Ig A表位,Ig E表位以及Ig G表位。通过五折交叉验证训练和测试这三个分类器,获得AUC的值分别为0.78,0.93以及0.78。Ig A表位和Ig E表位分类器的预测能力优于其它Ig A表位和Ig E表位分类器,Ig G表位分类器和其它Ig G表位分类器的预测能力相当。     

T、B淋巴细胞联合免疫缺陷615-SCID导入近交系小鼠的培育及其一般生物学特性的研究

目的　建立T、B淋巴细胞联合免疫缺陷同源导入近交系 6 15 SCID小鼠。方法　利用经典遗传学的杂交 互交方法 ,将SCID小鼠携带的T、B淋巴细胞联合免疫缺陷基因 (scid基因 ) ,导入我国自己培育的 6 15近交系小鼠中。育种过程中采用白细胞计数分类及ELISA检测Ig含量方法 ,筛选每个M循环中的纯合子 ;再用蛋白质和同工酶电泳方法 ,分析纯合子位于 11个染色体上的 2 5个生化标记基因位点。结果　第 7个M循环中 ,所得纯合子与 6 15小鼠的 2 5个生化标记基因位点完全一致 ,表明M7循环的纯合子具有 6 15小鼠的全部标记基因。结论　M6、M7循环的纯合子小鼠表达scid基因 ,具有放射敏感性和T、B淋巴细胞联合缺陷的特征 ,且T细胞比例显著低于亲代SCID小鼠     

CTLA4Ig-IRES-OX40Ig重组腺病毒的构建及其生物学特性

利用基因重组技术,拼接目的基因CTLA4Ig-IRES-OX40Ig,并亚克隆入腺病毒载体pTrack-CMV中,构建pT/CTLA4Ig-IRES-OX40Ig载体,与pAdeasy-1共同转染BJ5183以进行同源重组,所获得的重组子用LipofectAMINE2000转染293A细胞包装病毒,获得了可同时分别表达CTLA4Ig和OX40Ig的重组腺病毒AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig,并进行扩增和滴度测定,用Western印迹鉴定293A细胞培养上清中目的基因的表达,用混合淋巴细胞反应研究其免疫抑制活性.利用上述方法成功构建了穿梭质粒pT/CTLA4Ig-IRES-OX40Ig;并且获得了重组腺病毒AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig,在感染的293A细胞的培养上清中可以同时检测到CTLA4Ig和OX40Ig分子;AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig、AdCTLA4Ig和AdOX40Ig感染的Lewis大鼠脾细胞(刺激细胞)对Balb/c小鼠的脾细胞(反应细胞)的增殖均具有抑制作用,但AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig感染组的抑制效率明显强于AdCTLA4Ig和AdOX40Ig感染组,体外实验证实该两种分子可协同作用,强烈抑制混合淋巴细胞反应.     

核因子-κB与肺疾病研究进展

核因子-κB是一类广泛存在的多向转录调节作用的核蛋白因子,具有广泛的生物学作用.核因子-κB活化是多种肺疾病病理过程的早期关健步骤,活化后参与许多基因的转录调控,在感染、炎症反应、氧化应激、调亡等过程中发挥重要作用.本文综述了核因子-κ在肺疾病中的作用.     

转录因子AKNA 功能调控的研究进展

转录因子AKNA是具有AT-hook模体的核内蛋白质,与富含AT碱基的DNA区域相结合调控靶基因的转录。AKNA主要在B淋巴细胞、T淋巴细胞、自然杀伤性细胞和干细胞上表达,介导免疫反应的发生。转录因子AKNA的单核苷酸多态性(SNP)可增加宫颈癌的风险,AKNA功能的丧失导致子宫颈肿瘤性病变。敲除AKNA基因可导致炎性因子、蛋白酶和趋化因子的富集,诱发中性粒细胞介导的炎性反应。本文从转录因子AKNA的结构特征、生物学功能和功能调控三方面进行综述,旨在为后续关于AKNA转录调控网络和信号通路的研究提供依据。     

含HTNV S基因重组痘苗病毒在HFRS患者B淋巴母细胞系中的表达

采用Ficoll密度梯度离心法(淋巴细胞分离液)分离肾综合征出血热(HFRS)患者外周血单个核细胞（PBMC),并用EB病毒(EBV)感染B淋巴细胞,建立永生化的B淋巴母细胞系(B—LCL)。然后,用含汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)S基因的重组痘苗病毒感染B—LCL,应用问接免疫荧光检测核衣壳蛋白的表达。结果表明,B淋巴细胞经EBV感染4周左右,可形成永生化B—LCL。成功转化后的B—LCL,体积增大,且增殖的淋巴细胞积聚成团。汉滩病毒S基因在B—LCL中能有效表达核衣壳蛋白。含S基因的重组痘苗病毒感染的B—LCL可用作HTNV核衣壳蛋白特异性CTL活性研究的靶细胞。     

RHR转录因子家族起源、功能以及进化机制的研究进展

转录因子是一类能够通过与基因特异性序列进行结合,从而调控基因转录与表达的蛋白质,对细胞的生物学活性具有重要的调节作用。RHR (Rel-homology region,RHR)转录因子家族属于IF (immunoglobulin fold)转录因子超家族最主要的成员,其成员含有保守的Rel结构域和IPT (immunoglobulin-like fold)结构域。作为古老的转录因子家族,RHR家族成员随着物种演化,通过基因的复制、突变和沉默,不断分化出新型同源基因的同时也伴随着基因的丢失。自然选择导致了各家族成员不同的进化速率,并且在一些功能结构域上展现出了特殊的进化机制。然而,目前有关RHR家族起源和分化的综述比较少见。本文综述了RHR家族各成员的分布、分类、功能及家族进化等方面的研究成果,以期为研究整个转录因子家族的演化机制和物种之间的进化关系提供参考和新的思路。     

用生物信息学方法寻找肝癌特异性表达基因转录调控模式

为了对肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的分子发病机理进行研究,首先对肝癌基因表达谱数据用t-检验算法进行了分析,找到了肝癌中特异性表达基因(characteristicgenes).然后把这些基因结合已知的肝HNF家族转录因子染色质免疫共沉淀结合DNA启动子芯片(ChIP-chip)实验数据用SAEM算法进行分析,得到了肝癌特异性表达基因的转录调控关系,并寻找到了多个HNF家族转录因子调控单基因的转录调控模式.结果表明HNF家族转录因子对大量具有重要功能的肝癌特异性表达基因进行了转录调控,并且多个HNF家族转录因子调控单基因可以形成前馈环和多输入调控等模式.     

核基质与基因表达调控研究进展

核基质是细胞核内由一群复杂多样的非组蛋白构成的纤维网状结构。核基质蛋白具有明显的组织细胞特异性及肿瘤相关性。它作为细胞核的支架结构,在ＤＮＡ的复制、转录、ＲＮＡ加工修饰等重要的细胞内事件中起着支持和调节作用,并通过转录调节因子、核基质结合元件以及核基质蛋白与ＤＮＡ的相互作用等多种途径参与基因的表达调控     

人A33基因5′调控区的组织特异性表达元件

在对人A33基因 5′调控区初步研究的基础上 ,进一步采用体外足迹法、电泳迁移率变更分析(EMSA)和定点突变等实验对A33启动子的 - 10 4～ + 2 5bp区域进行了重点研究 .在A33启动子的- 10 4～ + 2 5bp区域内存在两个转录正调控元件 ,它们分别位于转录起始位点上游 - 86～ - 6 8区(A)和 - 40～ - 19区 (B) .通过对转录因子数据库的查找 ,发现A区与转录因子GKLF (gut enrichedKr櫣ｐｐｅｌ likefactor)的结合位点吻合 ,而B区则没有找到与之相应的转录因子 .EMSA实验表明 ,A区与核蛋白的结合存在组织特异性 ,而B区的结合则无组织特异性 .推测A区所包含的顺式调控元件很可能是决定A33基因组织特异性表达的关键元件 .根据B区所处的位置和富含AT来分析 ,它极有可能是和通用转录因子及RNA聚合酶结合的区域 .A和B两个区域的点突变都可使A33启动子的活性丧失 85 %以上     

人A33基因5′调控区的组织特异性表达元件

在对人A33基因 5′调控区初步研究的基础上 ,进一步采用体外足迹法、电泳迁移率变更分析(EMSA)和定点突变等实验对A33启动子的 - 10 4～ + 2 5bp区域进行了重点研究 .在A33启动子的- 10 4～ + 2 5bp区域内存在两个转录正调控元件 ,它们分别位于转录起始位点上游 - 86～ - 6 8区(A)和 - 40～ - 19区 (B) .通过对转录因子数据库的查找 ,发现A区与转录因子GKLF (gut enrichedKr櫣ｐｐｅｌ likefactor)的结合位点吻合 ,而B区则没有找到与之相应的转录因子 .EMSA实验表明 ,A区与核蛋白的结合存在组织特异性 ,而B区的结合则无组织特异性 .推测A区所包含的顺式调控元件很可能是决定A33基因组织特异性表达的关键元件 .根据B区所处的位置和富含AT来分析 ,它极有可能是和通用转录因子及RNA聚合酶结合的区域 .A和B两个区域的点突变都可使A33启动子的活性丧失 85 %以上     

NF—κB与神经退行性疾病

NF—κB是一种具有多向转录调节作用的蛋白质。它分布广泛,并调节多种基因的转录调控,参与炎症反应、免疫应答以及细胞的增生、转化和凋亡等重要的生理病理过程。最近研究表明,NF—κB与中枢神经系统中神经细胞的生长、发育、塑型有关,并在急、慢性神经退行性变如脑损伤、脑缺血、癫痫、阿尔茨海默病及帕金森病等病理过程中起重要作用。