柑橘体细胞杂种有性后代的创造及杂种鉴定

以异源四倍体柑橘体细胞杂种[哈姆林甜橙(Citrus sinensis Osbeck) 粗柠檬(C.jambhiri Luss)]为父本与二倍体单胚类型宜本杂4号[华农本地早橘(C.reticulata Blanco)×宜昌橙(C.ichangen- sis Swingle)]杂交,采用胚抢救技术获得了110株有性后代植株,通过染色体计数及倍性分析仪鉴定,其中93株植株为3倍体,余下的17林植株为2倍体。RAPD分析表明:获得的有性后代植株均为杂种。     

柑橘体细胞杂种有性后代的创造及杂种鉴定

110 plantlets were obtained from the cross between citrus allotetraploid somatic hybrid [Hamlin sweet orange (Citrus sinensis Osback) + Rough Lemon (C. jambhiri Luss)] (as the pollen parent) and mono-embryonic diploid type Iben No.4 [Huanongbendizao tangerine (C. reticulata Blanco) x Ichang papeda (C. ichangensis Swingle)] by the means of young embryo culture in vitro, and there were 93 triploids and 17 diploids through chromosome counting and the ploidy analyser identification. RAPD analyses showed that all sexual progenies were hybrid.     

两类杂种砧木资源对柑橘幼树生长和叶片矿质营养含量的影响

以柑橘体细胞杂种砧木资源红橘 枳和红橘 粗柠檬、有性杂种砧木资源Troyer枳橙和Swingle枳柚、枳(对照)作砧木的‘国庆4号’温州蜜柑2年生嫁接苗为试验材料．通过盆栽试验研究了砧木对苗木生长和叶片矿质营养含量的影响。结果表明,4种处理生长势比对照旺盛;红橘 枳处理花量极显著地高于对照,其余3种处理则反之;处理基本上不影响叶片N、K、Ca、Mg和Mn含最年变化动态的特征。而明显影响P、Fe和Zn含量的年变化动态的特征;在各不同时期,不同处理对叶片各矿质营养含量有明显的影响。本文还重点讨论了2类杂种砧小资源的利用价值。     

原生质体电融合再生柑橘属间体细胞杂种

电场诱导酸橙(CitrusaurantitumL.)叶肉原生质体与澳洲指橘(MicrocitruspapuanaSwingle)悬浮系原生质体融合,融合产物经培养再生出具有三种叶片形态的植株,绝大部分与酸橙叶片完全相似(即叶肉亲本型植株);有2棵植株叶片大且厚;有1棵植株出现二叶和三叶。细胞学检查表明这些植株均为二倍体。采用RAPD标记对前两种植株进行杂种特性分析,共选用4个10-mer随机引物进行扩增。在引物OPAA-17的扩增产物中,再生植株的带型与酸橙一致;在引物OPA-08的扩增产物中,再生植株的带型与酸橙或澳洲指橘相似;而在引物OPA-04和OPA-07的扩增产物中,再生植株的带型出现三种情况,4个引物的扩增结果证明所分析的植株均是体细胞杂种。综合染色体检查和RAPD标记的结果,表明获得了酸橙与澳洲指橘属间二倍体体细胞杂种植株。     

植物体细胞杂种的遗传特征

综述了植物体细胞杂种的遗传研究。对于核基因的遗传，植物体细胞杂种有核对称杂种和核不对称杂种，双亲染色体数目、稳定性和性状在杂种中存在很大差异。在细胞质基因遗传中，双亲叶绿体基因组在杂种中发生随机分离和非随机分离，很少发生基因重组；双亲线粒体基因组在杂种中发生非随机分离或同时发生基因重组，重组线粒体基因组对杂种生长发育有很大影响。     

柑橘细胞电融合参数选择及种间体细胞杂种植株再生

以“Ｐａｇｅ”橘柚（ＣｉｔｒｕｓｒｅｔｉｃｕｌａｔａＢｌａｎｃｏ×Ｃ．ｐａｒａｄｉｓｉＭａｃｆ）胚性悬浮系原生质体和粗柠檬（Ｃ．ｊａｍｂｈｉｒｉＬｕｓｈ）叶肉原生质体为融合试材,摸索了适合柑橘的电融合参数。研究表明,在ＡＣ（交变电场）１２５Ｖ／ｃｍ、ＤＣ（直流脉冲）１２５０Ｖ／ｃｍ、ＡＣ作用时间６０ｓ、ＤＣ脉冲时间５０μｓ、ＤＣ脉冲个数为３、ＤＣ脉冲间隔为０．５ｓ时融合率较高,双核异核体率可以达到１５％以上。利用不同类型原生质体比重的不同,融合后通过控制离心时间,可以收集到更高比例的双核异核体。融合产物经培养,３～４个月再生小植株。染色体计数结合形态学观察表明,再生的１５０株小植株中７８％为四倍体,其余为二倍体叶肉亲本再生类型。再生植株经过氧化物酶同工酶及ＲＡＰＤ分析,表明得到了体细胞杂种,还证明获得了１株叶肉亲本同源四倍体再生类型。     

RAPD鉴定栽培稻与野生稻体细胞杂种

利用随机引物扩增DNA(RAPD)技术,对栽培稻和野生稻原生质体融合获得的体 细胞杂种进行了鉴定。证实了它们包含有双亲的基因组成分。但来自双亲的基因组成分并不是对等的。一些体细胞杂种含有一个亲本更多的基因组成分,而另一些相反。利用RAPD数据和聚类图讨论了体细胞杂种和双亲的亲缘关系。     

叶绿体SSR标记：柑橘体细胞杂种胞质遗传分析的一种新方法

从水稻(Oryza sativa L．)、烟草(Nicotiana tabacum L．)和黑松(Pinus thunbergii Parl．)等植物的22对叶绿体SSR引物中筛选出5对能用于柑橘叶绿体SSR分析的引物,应用这5对引物对9个组合的柑橘体细胞杂种的叶绿体遗传进行了分析。结果表明：这些组合再生的杂种中叶绿体都呈现随机分离,该现象与以前报道的RFLP分析结果一致,而且其可靠性已被CAPS分析所证实。表明柑橘叶绿体SSR同RFLP及CAPS一样可靠,并且更简单高效、易于操作,特别适合对柑橘等植物体细胞杂种进行早期胞质遗传组成分析。     

澳洲指橘与柑橘属间原生质体电融合再生二倍体体细胞杂种

电场诱导粗柠檬（CitrusjambhiriLush,2n＝2x＝18）叶肉原生质体与澳洲指橘（MicrocitruspapuanaSwingle,2n＝2x＝18）悬浮系原生质体融合,融合产物培养后再生出丛芽,经试管嫁接得到完整植株。再生植株的细胞学检查表明它们具有18条染色体,为二倍体;植株的叶片形态与叶肉亲本（粗柠檬）一样;用6个10-mer随机引物分析再生植株的杂种特性：在4个引物（OPA－07、OPAN－07、OPE－05和OPA－08）的扩增带型图中,再生植株的带型与粗柠檬完全一样,澳洲指橘的特征带未在植株中出现;在引物OPS-13和引物OPA－04的扩增带型图中,再生植株都具有澳洲指橘的特征带。细胞学和RAPD分析的结果表明,通过对称融合得到了澳洲指橘与粗柠檬的属间二倍体体细胞杂种植株。这是柑橘属间对称融合再生二倍体叶肉亲本类型植株的首例报道。     

伏令夏橙与宁波金柑属间体细胞杂种变异研究

伏令夏橙（Ｃｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｏｓｂｅｃｋ）＋宁波金柑（ＦｏｒｔｕｎｅｌａｃｒａｓｉｆｏｌｉａＳｗｉｎｇｌｅ）属间体细胞杂种在田间生长６年,树势较弱,新梢经常枯死,树冠参差不齐。染色体检查发现,除了四倍体之外,还存在其它倍性的细胞,呈嵌合体状态。酯酶同工酶图谱上,多数单株出现一条双亲没有的新带。ＲＡＰＤ分析结果表明,部分植株丢失了亲本的标记带型,表现出遗传上的不稳定性     

柑橘与枳属间体细胞杂种再生及其对脚腐病抗性的评价

Page橘柚 (CitrusreticulataBlanco×C .paradisiMacf.)胚性细胞悬浮系原生质体与枳 (Poncirustrifoliata (L .)Raf.)叶肉原生质体经电场诱导融合 ,4～ 5个月再生 15 0余棵小植株。再生植株根系发达 ,叶片具三叶特征。随机检查 2 0余株再生苗根尖染色体数目 ,表明都为四倍体 (2n =4x =36 )。随机取 7株进行RAPD分析 ,表明被检测植株都为杂种。用引起脚腐病的寄生疫霉菌 (PhytophthoraparasiticaDastar)毒素接种体细胞杂种及双亲叶片 ,结果表明 ,Page橘柚中度感病 ,枳高抗 ,体细胞杂种为抗病类型。     

RAPD分析─鉴定柑桔体细胞杂种的快速方法

本文利用改进的DNA提取方法,从Volkamer柠檬(Citrus volkameriana Ten. and Pasq.)和酸橙(C. aurantium L.)及其原生质体杂种植株的叶片中抽提总DNA,进行RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)分析。结果表明: 在随机选取的15种引物中,有10种可单独或与其它引物一道鉴定这一组合的体细胞杂种。与形态学性状观察、同工酶及ONA杂交分析等方法比较,RAPD分析是一种可在试管苗期即可直接、准确、快速鉴定柑桔体细胞杂种的方法。     

两类柑橘杂种砧木对脐橙幼树生长及若干生理生化指标的影响

以体细胞杂种红橘+枳、红橘+粗柠檬和有性杂种Swingle枳柚、Troyer枳橙(对照)作砧木的脐橙幼树为试材,以盆栽试验研究砧木对幼树的影响。结果表明,体细胞杂种砧木处理和有性杂种Swingle枳柚的树体生长势总体上强于对照;叶片可溶性糖含量较高的是红橘+粗柠檬处理和对照;叶绿素含量最高的是红橘+粗柠檬处理。两年中叶片POD活性分别与当年树冠体积呈负相关。     

叶绿体S S R标记:柑橘体细胞杂种胞质遗传分析的一种新方法

从水稻(Oryza sativa L.)、烟草(Nicotiana tabacum L.)和黑松(Pinus thunbergiiParl.)等植物的22对叶绿体SSR引物中筛选出 5对能用于柑橘叶绿体SSR分析的引物,应用这5对引物对9个组合的柑橘体细胞杂种的叶绿体遗传进行了分析.结果表明:这些组合再生的杂种中叶绿体都呈现随机分离,该现象与以前报道的RFLP分析结果一致,而且其可靠性已被CAPS分析所证实.表明柑橘叶绿体SSR同RFLP及CAPS一样可靠,并且更简单高效、易于操作,特别适合对柑橘等植物体细胞杂种进行早期胞质遗传组成分析.     

用RAPD技术鉴定小麦属间不对称体细胞杂种

用随机引物扩增多态DNA(RAPD)技术对三种不同组合:小麦(Triticum aestivum)( )簇毛麦(Haynaldia villosa);小麦( )羊草(Leymus chinensis)和小麦( )高冰草(Agropyron elongatum)的属间不对称杂种进行分子鉴定,不同杂种植株的基因组经随机引物扩增后,均出现双亲的多态特异产物,证实它们含有双亲的基因组。将引物OPJ-12扩增的高冰草多态特异产物(分子量为0.77bp的DNA片段)分离纯化并标记作探针,用Southern杂交证明了小麦( )高冰草杂种经OPJ-12扩增的0.77kbp特异片段与高冰草这一片段具有同源性。本文结果证明,RAPD技术可作为小麦属间不对称体细胞杂种的一种快速、简便、有效的分子鉴定方法。     

电融合获得用于选择抗CTV砧木的酸橙与甜橙体细胞杂种植株

在已知参数条件下,通过电场诱导酸橙（Cit-rus aurantium L.）叶肉原生质体和沙漠蒂甜橙（C.sinensis Osbeck cv.Shamouti）的胚性愈伤组织原生质体融合,副合产物经培养再生出40棵植株。染色体检查表明所得到的植株具有36条染色体。为四倍体植株。再生植株具有翼叶,叶片厚,表现出多倍体的特征,采用2个10－碱基随机引物鉴别再生植株的杂种特性。在2个引物的扩增带型中,再生植株的随机扩增带图里出现了融合亲本的特征带。对再生植株染色体计数和RAPD分析的结果表明它们是酸橙和甜橙种间异源四倍体体细胞杂种植株。这些体细胞杂种植株的获得为选择具有酸橙优良性状、同时抗CTV的新型砧木提供了好的试材。     

嗜热四膜虫有性后代的分离纯化

在实验条件下诱导四膜虫种群交配进行有性生殖时,交配后的种群中除有性后代外,还会混杂一定比例的亲本细胞,而高纯度的有性后代是研究四膜虫一些基本生物学问题的重要基础。本研究利用四膜虫交配时不能摄食并且新产生的有性后代几小时后才恢复摄食能力的特性,以嗜热四膜虫(Tetrahymenathermophila)交配种群为对象,在其有性生殖阶段后期向交配体系中加入Fe3O4磁性纳米颗粒,未交配的亲本细胞由于能够摄入磁性颗粒而具有磁性;再利用有性后代和未交配细胞的磁性差异,在磁场作用下将有性后代分离纯化出来。通过优化过柱分离的时间点、分离柱的口径、分离柱中铁粉/石英粉的质量等分离条件,有性后代的分离纯度及收率均能达到98%以上。该分离方法亦可为其他种四膜虫或纤毛虫有性后代的分离纯化提供借鉴。     

电融合获得用于选择抗CTV砧木的酸橙与甜橙体细胞杂种植株

在已知参数条件下,通过电场诱导酸橙(Citrus aurantium L.)叶肉原生质体和沙漠蒂甜橙(C.sinensis Osbeck cv.Shamouti)的胚性愈伤组织原生质体融合,融合产物经培养再生出40棵植株.染色体检查表明所得到的植株具有36条染色体,为四倍体植株.再生植株具有翼叶,叶片厚,表现出多倍体的特征.采用2个10-碱基随机引物鉴别再生植株的杂种特性.在2个引物的扩增带型中,再生植株的随机扩增带图里出现了融合亲本的特征带.对再生植株染色体计数和RAPD分析的结果表明它们是酸橙和甜橙种间异源四倍体体细胞杂种植株.这些体细胞杂种植株的获得为选择具有酸橙优良性状、同时抗CTV的新型砧木提供了好的试材.     

印度酸桔与飞龙枳属间体细胞杂种的胞质遗传分析

对印度酸桔（Citrus reticulata） 飞龙枳（Poncirus trifoliata）属间体细胞杂种的3棵8年生植株及其融合亲本的胞质基因组进行了CAPS（Cleaved Amplified Polymorphic Sequences）和RFLP分析。用5对叶绿体和5对线粒体通用引物对（universal primer pairs）对杂种及亲本的总DNA进行PCR扩增,都没有检测到多态性,但扩增产物分别用11种限制性内切酶酶切后,发现3个有多态性的叶绿体CAPS标记和1个线粒体CAPS标记。结果表明杂种的叶绿体都来源于飞龙枳,而线粒体都来源于印度酸桔。为了证实CAPS分析结果的可靠性,用5种限制性内切酶对总DNA进行单酶切,分别与1个叶绿体探针和5个线粒体探针杂交,结果与CAPS分析一致。初步证实该组合体细胞杂种的胞质遗传组成为“印度酸桔的线粒体 飞龙枳的叶绿体”。结果表明细胞融合确实能导致细胞核、线粒体和叶绿体的重新组合,为柑桔体细胞杂种中线粒体偏向来源于悬浮亲本而叶绿体偏向来源于叶肉亲本的胞质分配现象提供了新的证据,并为通过体细胞融合技术定向转移柑桔胞质基因的品种改良思路提供了重要理论依据。