NAIF1对肝癌细胞 HepG2 增殖与迁移能力的影响

目的:在肝癌细胞Hep G2中过表达外源NAIF1(核凋亡诱导因子1),探讨NAIF1的亚细胞定位以及对Hep G2增殖和迁移能力的影响。方法:以真核表达质粒p EGFP-N1为对照组,p EGFP-N1-NAIF1为实验组,瞬时转染肝癌细胞Hep G2,利用免疫印迹方法检测NAIF1蛋白表达效率;以DAPI染核,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白定位,确定NAIF1的亚细胞定位;通过MTT方法绘制细胞增殖曲线;通过transwell小室法检测NAIF1对Hep G2迁移能力的影响。结果:在肝癌细胞Hep G2中,外源表达NAIF1主要定位于细胞核;与对照组Hep G2/p EGFP-N1相比,Hep G2/p EGFP-N1-NAIF1的细胞增殖、迁移能力下降(P<0.05)。结论:外源表达NAIF1蛋白定位于Hep G2细胞核,过表达NAIF1抑制Hep G2的细胞增殖与迁移能力,NAIF1可能作为肝癌治疗的潜在靶点。     

细胞因子组合对肝癌细胞HepG2生长的影响

目的:探讨细胞因子组合在体外对肝癌细胞HepG2生长的抑制作用。方法:采用正交试验法,3种细胞因子(IFN-α2a、IL-2和GM-CSF)分别选择3种浓度,共分为9组组合,利用MTT比色法,检测细胞因子组合处理96 h后,对HepG2细胞生长的抑制作用,筛选3种细胞因子最佳组合,并进行形态学观察。结果:处理96 h后,不同浓度细胞因子组合对HepG2细胞的生长均有抑制作用,最佳组合为A1B1C1,其抑制率为64.61%。显微镜下可见,细胞变圆,胞浆中颗粒增多,增殖变慢,细胞间接触不紧密,细胞周围碎片增多。结论:已筛选到3种细胞因子的最佳组合,其在体外能够抑制HepG2细胞的生长。     

Sal B对肝癌细胞株HepG2的促凋亡作用

目的揭示丹酚酸B(Salvianolic Acid B,Sal B)对肝癌细胞株HepG2的杀伤作用。方法用不同浓度的丹酚酸B处理HepG2细胞,37℃培养24h。用RT-PCR检测促凋亡基因Bax的转录水平,并用流式细胞术检测细胞凋亡的水平。结果①100μmol/L、50μmol/L、25μmol/L等浓度的Sal B处理都能使HepG2细胞促凋亡基因bax的转录水平升高,其中100μmol/L处理组最为明显。②不同浓度的Sal B处理都能使HepG2细胞发生凋亡,其中100μmol/L处理组最为明显。结论 Sal B有促进HepG2细胞凋亡的作用。     

封闭EFNA2 基因表达对肝癌细胞HepG2 的转移和运动的抑制作用

目的:构建Ephrin-A2(EFNA2)基因的干扰RNA重组腺病毒,并观察其对肝癌细胞HepG2转移能力的影响。方法:合成EFNA2基因的干扰RNA片段,用基因重组技术构建于腺病毒载体pAD-X,经293细胞包装得到高滴度重组腺病毒pAEFNA2/siRNA,并用real-time PCR进行EFNA2基因表达的验证。将重组腺病毒pAEFNA2/siRNA感染HepG2细胞,48h后用transwell小室法检测病毒对HepG2细胞侵袭和运动能力的影响。结果:经验证病毒正确构建,且HepG2细胞感染病毒pAEFNA2/siRNA后48小时的real-time PCR检测结果未见到有EFNA2基因的表达。病毒感染后transwell小室可见,HepG2细胞的侵袭和运动能力均受到显著的抑制(分别为105±12 v.s.21±7cells/孔和194±22 v.s.39±11,P<0.01)。结论:成功构建了重组EFNA2siRNA腺病毒,并观察到封闭EFNA2对肝癌细胞HepG2的侵袭和运动均有抑制作用。     

布洛芬对肝癌细胞HepG2增殖及wnt／β-catenin信号通路的影响

研究非甾类抗炎药布洛芬对肝癌细胞增殖和β-catenin信号通路的影响,探讨布洛芬影响肝癌细胞增殖的可能机制.体外培养HepG2细胞,MTT法检测不同浓度布洛芬分别作用24、48和96 h后细胞增殖情况;应用RT-PCR检测布洛芬处理HepG2 48 h后β-catenin、cyclin D1和c-myc转录水平的变化;western blotting检测布洛芬对HepG2中β-catenin1蛋白表达量的影响;免疫细胞化学法观察布洛芬处理组HepG2细胞β-catenin的亚细胞定位.结果表明0.7mmol/L的布洛芬处理细胞48 h后能明显见到细胞增殖受到抑制,抑制率达到53.8%,且抑制作用有时间、剂量依赖性:经布洛芬处理后细胞的β-catenin、cychn D1和c-myc转录也受到显著抑制;布洛芬处理组细胞β-catenin蛋白表达低于对照组;布洛芬处理后β-catenin在胞核中定位减少,胞浆定位增多.因此,布洛芬能抑制肝癌细胞的增殖,且随着处理时间和药物浓度的增加,其抑制作用逐渐增强,其抑制作用可能与调控β-catenin信号通路,影响β-catenin的表达和定位,调节下游相关靶基因的转录有关.     

四逆散对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的:探讨含四逆散药液血清对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法:将人肝癌HepG2细胞分为5组,每组3个复孔。实验组细胞用五氟尿嘧啶(5-FU)或不同浓度的含四逆散药液血清处理48 h后,用倒置显微镜观察含四逆散药液血清处理后人肝癌HepG2细胞形态的变化; MTT法检测含四逆散药液血清对HepG2细胞生长的抑制作用;荧光染色和流式细胞术分别分析含四逆散药液血清对HepG2细胞凋亡的影响。Rho123染色法检测线粒体膜电位变化,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:与对照组比较,含四逆散药液血清处理人肝癌HepG2细胞后,细胞数量显著减少(P<0.01),形态发生改变,呈现典型的凋亡细胞形态; G1期细胞数明显增加,而G2期细胞数量显著减少(P<0.05); Bax、Caspase-3、-9和Cyt-c的表达显著升高,而Bcl-2的表达显著降低(P<0.05);随着含四逆散药液血清浓度增大,HepG2细胞线粒体膜电位显著下降(P<0.05)。结论:四逆散可以抑制HepG2细胞增殖,并通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

不同组分羧甲基茯苓多糖（CMP）对HepG2细胞增殖的影响

目的：探究不同组分羧甲基茯苓多糖（CMP）对HepG2细胞增殖的影响。方法：在不同提取碱浓度和碱处理时间下,采用二次加碱法制备不同组分CMP。利用硫酸 蒽酮法、滴定法和CCK 8法对CMP的含量、取代度和HepG2细胞增殖检测。结果：获得7个组分CMP,含量为85%~90 %,取代度为0.65~0.80。不同浓度CMP培养HepG2细胞24 h下,CMP 750 μg/mL抑制细胞增殖效果最好,其中CMP3抑制率最高达50.035 %。CMP 750 μg/mL培养HepG2细胞24、48、72 h,在48 h下抑制效果最好,其中CMP3抑制效果最高达到76.05 %。在72、48、24 h 下CMP3培养HepG2细胞的IC50分别为26.34、34.06、763.64 μg/mL。结论：CMP能有效抑制HepG2肿瘤细胞的增殖,其中CMP3是7个CMP组分中抑制效果最好的,这与CMP3的含量、浓度呈正相关性,48 h为CMP最适抑制时间。     

速生桉叶水溶提取物对HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨速生桉叶水溶提取物对HepG2细胞的抑制增殖作用及凋亡的影响。方法:采用MTT法检测速生桉叶水溶提取物对HepG2细胞增殖抑制作用;采用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI检测速生桉叶水溶提取物处理后HepG2细胞凋亡的情况。结果:MTT分析显示,当细胞培养24 h时,稀释5、10倍HepG2细胞抑制率分别为(47.32±1.11)%、(15.76±3.50)%;当细胞培养48 h时,稀释5、10倍HepG2细胞抑制率分别为(44.13±10.93)%、(25.93±8.37)%;当细胞培养72 h时,稀释5、10倍HepG2细胞抑制率分别为(59.47±6.90)%、(41.02±4.27)%。流式细胞术结果显示,速生桉叶水溶提取物稀释30倍时可诱导31.03%的HepG2细胞进入早期凋亡阶段,随着稀释倍数的减少被诱导进入凋亡阶段的细胞数目逐渐升高。另外,随着水溶提取物作用时间的延长,进入凋亡阶段的细胞数目也逐渐升高。结论:速生桉叶水溶提取物对HepG2细胞增殖与凋亡具有量-效、时-效关系。     

地塞米松对HepG2细胞分泌载脂蛋白的影响

以培养的人肝癌细胞系HepG2为研究对象,采用“冻干浓缩培养液载脂蛋白测定法”,考察了地塞米松对HepG2细胞载脂蛋白(apolipoprotein,apo)AⅠ、AⅡ、CⅢ、B100及E分泌的影响.结果表明：地塞米松对HepG2细胞apoAⅠ和apoE的分泌有促进作用,对apoAⅡ、apoB100和apoCⅢ的分泌有抑制作用,且这种作用随地塞米松浓度的增加而增强.当培养液中地塞米松的浓度为5.5×10^－5mol/L时,apoAⅠ和apoE的分泌分别增加36.6%和49.4%（P＜0.01）,apoAⅡ、apoB100和apoCⅢ的分泌分别减少38.9%、31.9%和29.8%（P＜0.01）.     

丙型肝炎病毒E2蛋白对HepG2细胞MAPK／ERK的激活

人CD81是丙型肝炎病毒（hepatitis Cvirus,HCV）的细胞表面特异性受体,HCV包膜蛋白－2（E2）可与其结合。细胞个信号调节激酶（extracellular signal-regulated protein kinase,MAPK/ERK1,2）信号途径主要介导细胞增殖及分化。为探讨HCV E2蛋白与人CD81结合对MAPK／ERK活性变化的影响,以HCV E2蛋白刺激HepG2细胞,采用免疫印迹、免疫组化及免疫荧光等方法动态观察细胞内MAPK／ERK的激活情况,并以流式细胞术检测细胞表面CD81的表达。结果表明：HepG2细胞高表达人CD81;HCV E2蛋白可激活细胞内MAPK／ERK;MAPK／ERK的磷酸化反应与HCV E2蛋白浓度、作用时间呈依赖关系;HCV E2－CD81相互作用引发的细胞异常信号转导可能与HCV致病性相关。     

维甲酸对A549细胞增殖和凋亡及Skp2、p27^kip1蛋白表达的影响

目的探讨维甲酸对A549细胞增殖和凋亡及相关基因表达的影响。方法MTT法观察ATRA对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪、AO/EB荧光双染法检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测ATRA处理前后A549细胞Skp2、p27^kip1蛋白表达的情况。结果ATRA处理后①MTT法结果显示ATRA对A549细胞具有增殖抑制作用,在一定范围内呈时间-剂量依赖性。②AO/EB荧光双染色法观察到ATRA 25μmol/L作用A549细胞48h后,即可发现典型的凋亡形态学改变。③流式细胞仪结果出现凋亡峰,与对照组细胞相比,实验组细胞周期延长,主要表现为G0/G1期细胞比例增加,同时S期细胞比例减少。④免疫细胞化学结果显示,ATRA 25μmol/L处理细胞48h后,维甲酸处理组Skp2有明显下调,p27^kip1则明显上调。结论ATRA具有抑制肺腺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与下调Skp2,上调p27^kip1蛋白的表达水平有关。     

CXCL1 在原发性肝癌中的表达及对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的:探究CXCL1在原发性肝癌中的表达及对人肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法:应用免疫组织化学技术(SP二步法)检测48例原发性肝癌组织、13正常肝脏组织中CXCL1表达情况;通过CCK8试剂盒检测CXCL1对HepG2细胞增殖能力的影响。结果:CXCL1在77.1%的原发性肝癌组织中表达,同时CXCL1在原发性肝癌组织中的表达高于正常肝脏组织,差异有统计学意义(P0.01);不同浓度CXCL1处理人肝癌HepG2细胞后,人肝癌HepG2细胞增殖能力明显增强,并且在一定范围内存在明显的剂量效应。结论:CXCL1在原发性肝癌中表达上调;CXCL1能够促进人肝癌HepG2细胞增殖。     

骨髓间充质干细胞和部分肿瘤细胞中Nucleostemin基因的表达

以分离的人胚胎和大鼠骨髓间充质干细胞 (MSCs) ,6种肿瘤细胞株 ,裸鼠肿瘤和转移瘤组织为实验材料 ,以大鼠心肌组织和人胎盘组织为对照 ,探讨nucleostemin基因的表达情况 .RT PCR结果显示 ,nucleostemin基因在MSCs、肿瘤细胞和肿瘤组织中均有不同程度的表达 ,而大鼠心肌和人胎盘组织中无表达 .DNA测序结果证明 ,扩增的PCR产物与GenBank提供的DNA序列完全同源 .SCID裸鼠肿瘤动物模型定量PCR结果证实 ,nucleostemin的mRNA在裸鼠肿瘤组织和转移瘤组织中表达较高 .研究结果表明 ,在细胞中nucleostemin基因不同水平的表达可能与MSCs、肿瘤细胞的增殖和肿瘤的发生、发展与转移有关 .     

The toxicity of opiates and their metabolites in HepG2 cells

The toxicity of codeine (C), codeinone (CO), morphine (M), oxycodone (OC), pholcodine (P) and pholcodine-N-oxide (P-NOX) was assessed in HepG2 cells by determining cell viability via the measurement of lactate dehydrogenase (LDH) leakage through the membrane, depletion of reduced glutathione (GSH) and measurement of total protein content. Incubation of C, M, OC, P or P-NOX with HepG2 cells resulted in no significant loss of cell viability, depletion of GSH or decreased total protein content. In contrast, with CO there was a marked depletion of GSH with significant differences from control cells (P<0.05) being detected after as little as 5 min. This effect preceded the loss of cell viability and the decrease in total protein content. To identify the cause of GSH depletion during incubations with CO, the incubation solutions were analysed by liquid chromatography/tandem mass spectrometry (LC/MS/MS). Analysis showed that a codeinone-glutathione conjugate (CO-SG) had been formed. This adduct was synthesised and characterised by LC/MS/MS and by nuclear magnetic resonance spectroscopy (NMR). CO-SG was quantified in the incubation solutions using the synthesised standard substance. Results obtained in this study support the hypothesis that the toxicity of CO may be partly due to GSH depletion. The absence of LDH leakage and GSH depletion in the incubations containing C or OC suggests, that the presence of both a double bond at Delta 7 and an adjoining keto-group in the 6-position are necessary to elicit the toxicity of M analogues with regard to GSH depletion.     

紫草素对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制及诱导凋亡作用

目的:观察紫草素抑制人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡诱导的作用。方法:用不同浓度的紫草素处理HepG2细胞,MTT检测紫草素对HepG2细胞生长增殖的抑制作用;比色法测定Caspase-3酶活性;Western blot法检测磷酸化Akt蛋白(pAkt)的表达。结果:紫草素能够抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,并呈浓度、时间依赖性,紫草素与HepG2细胞作用24小时后Caspase-3酶活性显著增强,显示紫草素诱导的调亡作用随时间的延长而增加;同时,紫草素处理HepG2细胞后,随着药物浓度的增加,磷酸化Akt蛋白表达下降。结论:紫草素可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,诱导HepG2细胞凋亡,凋亡机制可能与紫草素抑制PI3K/Akt信号途径有关。     

The apoptotic effect of sarsasapogenin from Anemarrhena asphodeloides on HepG2 human hepatoma cells

Sarsasapogenin, a kind of mainly effective components of Anemarrhena asphodeloides Bunge (Liliaceae) has the effects of being anti-diabetes and improving memory. However, there are few reports focusing on its anti-tumor effects. In this study, the sarsasapogenin was extracted from rhizomes of A. asphodeloides Bunge and applied to inhibit HepG2 human hepatoma cells. MTT assay showed that sarsasapogenin induced a distinct dose- and time-dependent diminution of cell viability with IC(50) of 42.4+/-1.0microg/ml for 48h. Furthermore, sarsasapogenin-induced apoptosis of HepG2 cells was verified by Hoechst 33258 staining, electron microscopy, DNA fragmentation and PI staining. Flow cytometry analysis showed that sarsasapogenin-induced cell apoptosis was through arrest of cell cycle in G(2)/M phase. Hence we proposed that sarsasapogenin could be used as an anti-liver cancer drug for future studies.     

慢病毒介导的甲胎蛋白敲减表达抑制肝癌细胞HepG2的增殖

甲胎蛋白（AFP）是原发性肝癌的标志物.本实验室前期研究表明,AFP的表达与肝癌细胞的增殖及细胞周期相关.为了建立高效稳定的AFPsiRNA细胞导入方法,本研究构建了AFP慢病毒siRNA干涉载体pRNAT-U6.2/AFPsiRNA.并将其转入HEK293细胞后,Western 印迹表明,pRNAT-U6.2/AFPsiRNA的干扰效率为88.7%（P<0.05）. pRNAT-U6.2/AFPsiRNA与4个包装质粒共同转染293T细胞包装成慢病毒后感染HepG2细胞,感染3 d时GFP的表达量达95%,感染35 d的子代细胞中GFP的表达量仍稳定在85%.GFP表达量的观察显示,慢病毒载体可以高效并稳定表达外源基因. Western 印迹结果也显示,HepG2细胞被病毒感染3 d和25 d后,AFP表达水平均有降低,抑制率分别为74.8%和63.4%(P<0.05).克隆形成实验表明,AFP沉默后,细胞克隆形成个数降低63%(P<0.01),表明HepG2细胞增殖能力受到抑制.     

MPEP阻断mGlu5抑制肝癌细胞HepG2增殖

代谢型谷氨酸受体5（metabotropic glutamate receptors 5, mGlu 5）在神经系统的多种病理生理过程中发挥重要作用. mGlu5与肝细胞癌的发生发展关系密切,其抑制剂2-甲基-6-(苯乙基）-吡啶（2-methyl-6-(phenylethyl)-pyridine, MPEP）能够促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞的迁移.在此基础上,进一步探讨了MPEP与肝癌细胞增殖之间的关系.结果显示：在无血清和有血清的条件下,MPEP均能显著降低肝癌细胞HepG2的细胞活力.同时发现,有血清条件下MPEP能使HepG2细胞周期停滞在G1 期,显著降低HepG2细胞的DNA合成能力和克隆形成能力,并能下调细胞增殖信号ERK 通路的活性.该研究结果为进一步认识MPEP对肝癌细胞的抑制作用提供了新的实验证据.