怀地黄块根内含梓醇结构的组织化学和超微结构研究

应用半薄切片、组织化学和透射电子显微镜观察相结合的方法,研究了梓醇在地黄块根中的贮存位置及其细胞的超微结构。结果表明,地黄块根的韧皮部和木质部的薄壁细胞是梓醇的贮存场所。     

地黄块根的发育解剖学研究

地黄根的初生构造与次生生长的发生类似一般双子叶植物。但在以后的发育过程中,木栓形成层产生了多层栓内层薄壁细胞,维管形成层则产生了大量高度薄壁组织化的次生维管组织,从而形成了肉质膨大的块根。地黄块根的这种形成方式为一种异常生长。     

怀地黄ISSR扩增条件优化的研究

用CTAB法提取怀地黄嫩叶DNA,进行简单重复间序列标记(ISSR)分析.通过单因子实验分别研究了退火温度、Taq酶单位、Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度和模板DNA浓度对ISSR-PCR反应的影响,找出各自的合适条件,而且每一个合适条件确定以后都被作为后续研究的一个条件.通过各个因子的组合研究建立了适宜于怀地黄ISSR分析的扩增体系25 μL PCR反应体积,1×Taq DNA酶缓冲液(10 mmol/L Tris-HCl,50 mmol/L KCl,0.1% Trion X-100,pH9.0 ),2.5 mmol/L MgCl2,1.5～1.0 U Taq酶,60 ng模板DNA,0.4 μmmol/L引物,各0.4 mmol/L的dATP、dGTP、dCTP和dTTP.合适的退火温度为53～55℃.为用ISSR技术分析鉴定怀地黄种质资源奠定了良好的基础.     

怀地黄多糖双酶法提取工艺研究

本文对怀地黄多糖（polysaccharide of Rehmannia glutinosa f.hueichingensis（Chan et Schih）Hsiao,简称为RGP）双酶法提取工艺（Extracting technology by dienzyme,简称DEET）的条件进行了研究和探讨。双酶提取法即在第一次浸提时分别加入纤维素酶和中性蛋白酶两种生物酶进行多糖的辅助提取。本实验选取提取温度、纤维素酶加量、提取液pH、固液比四个因素,以多糖含量作为指标,通过L9（3^4）正交实验确定此工艺的最佳工艺参数。结果表明：RGP双酶法提取的最佳工艺参数为：浸提温度65℃、浸提液pH5．5、纤维素酶加量7．5％、固液比为1：30;浸提液浓缩比为4：1、沉降剂乙醇添加量5倍于浸提液体积;脱蛋白采用浸提过程中中性蛋白酶脱蛋白法与浸提后Sevag脱蛋白法联合应用方法（简称“S＋N”法）,提取得到的RGP含量及得率可分别为60．26％和8．97％。较传统的水浸醇沉提取工艺RGP含量及得率分别提高了1．5倍和1．4倍。     

PP333对怀地黄试管苗形态及生理特性的影响

研究PP333对怀地黄试管苗生长及一些生理指标的影响。通过单因子实验、比色法和愈创木酚法探讨PP333对试管苗的影响。结果表明,不同浓度PP333均促进试管苗芽的萌发,使根系粗壮,根数增加,低浓度PP333(0.01、0.05mg·L-1)促进试管苗茎的伸长生长,高浓度(0.1、2mg·L-1)抑制茎、叶生长,PP333浓度为2mg·L-1时壮苗效果最佳。PP333处理使试管苗生长中期叶片可溶性蛋白含量、POD活力提高。适宜浓度的PP333可以改变试管苗的生理特性,达到培育壮苗的目的。     

怀地黄活性内生菌的分离鉴定及抗菌抗肿瘤活性

利用平板分离法从怀地黄(Rehmannia glutinosa Libosch)中分离出内生菌共130株,包括67株细菌、50株真菌和13株放线菌。利用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和黑曲霉作为供试菌株,通过对峙试验和平板点接法筛选出8株对3种供试菌株均具有较强拮抗作用的内生菌。经菌种形态观察、生理生化实验以及16S rRNA序列测定,这8株活性内生菌均为假单胞菌属的细菌,并分别与Pseudomonas fluorescens、Pseudomonas thivervalensis、Pseudomonas chlororaphis、Pseudomonas koreensis和一个未定种具有最高相似性。对这8株活性内生菌进行液体发酵、不同有机溶剂抽提和抗菌抗肿瘤研究,结果表明它们的乙醇抽提物和乙酸乙酯抽提物均不同程度地对3种供试菌株和食管癌细胞系Ec9706具有抑制作用。其中2-2号菌株(Pseudomonas chlororaphis)抗菌抗肿瘤作用最强,具有重要的开发价值。     

PP333与BA组合对怀地黄试管苗生长发育的影响

本文研究了PP333与BA组合对怀地黄(Rehmanniaglutinosa)试管苗生长发育的影响。结果表明:(1)与对照相比,不同浓度的PP333与0.5mg.L-1BA组合均严重地抑制试管苗根、茎和叶的生长,表现为植株矮小,生根晚,前期根畸形生长(呈棒状或球状);(2)与单独使用0.5mg.L-1BA相比,低浓度PP333(0.01和0.1mg.L-1)与0.5mg.L-1BA组合促进茎的伸长和加粗;(3)2mg.L-1PP333与0.5mg.L-1BA组合能显著地提高愈伤组织芽的分化率和腋芽的萌发率,有利于试管苗的快速繁殖。     

何首乌块根中异常结构的形成过程

何首乌的块根是一种常用的中药,块根内具有异常的次生结构。在块根的横切面上,自外至内依次为周皮、薄壁组织、排列成一圈大小不等的异常周韧维管束和中央维管柱。在块根形成以前,根的初生和次生结构都是正常的。以后,通常由围绕在初生韧皮纤维束周围的中柱鞘和次生韧皮薄壁组织细胞形成异常形成层,产生异常维管束。此外,还发现少数由中央维管柱分支而成。在块根膨大过程中,束内外以及维管柱次生木质部的薄壁组织细胞也分裂并增大。从而使块根中薄壁组织占80%左右。上述变化过程在不定根的中部开始,向上、下两     

利用RAPD和ISSR分子标记分析怀地黄种质遗传多样性

用RAPD与ISSR技术对怀地黄的8个品种和2个脱毒品系进行了种质遗传多样性分析。分别从80条RAPD引物和44条ISSR引物中筛选出适合怀地黄种质分析的17条RAPD引物和10条ISSR引物,用于RAPD和ISSR分析。17条RAPD引物共扩增出177条带, 多态性位点数为109; 多态性位点比率为61.58%;平均多样性指数(I)为0.3135;每个位点的有效等位基因数（Ne）是1.3641; 10条ISSR引物共扩增出110条带. 多态性位点数为79; 多态性位点比率为71.58%;平均多样性指数(I)为0.3577;每个位点的有效等位基因数（Ne）是1.4037。 基于扩增条带数据库建立了各自的Jaccard遗传相关系数矩阵,构建了相似的分子树状图,将10个供试材料分为2类:一类群含组培85.5、大田85.5、组培9302、大田9302、金状元和金白6个材料;另一类群含北京1号、大红袍、地黄9104和野生地黄4个材料。两种分子标记的分析结果呈极显著正相关(r＝0.649)。结果表明,RAPD与ISSR标记适合于怀地黄种质遗传多样性分析,ISSR标记技术是一种多态性和重复性优于RAPD技术的实用技术。     

发根农杆菌转化怀地黄再生植株

利用发根农杆菌15834菌株感染怀地黄组培苗子叶、叶柄和茎切段,建立了有效的毛状根培养及其植株再生体系。毛状根可直接从受伤的外植体产生,能在无外源激素的1/2MS固体和液体培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。用100μmol/L乙酰丁香酮处理对数生长期的农杆菌菌液感染子叶获得了46.7%的最高转化频率;在附加0.2mg/L KT和3.0mg/L 6/BA的1/2 MS培养基上,毛状根能100%形成愈伤组织,51.49%分化出芽;分化芽在1/2 MS培养基上100%生根,形成具有矮化、节间短和根系发达等特征的转化再生植株且移栽后生长旺盛;1个转化毛状根克隆的梓醇含量为0.557mg/g,是鲜地黄梓醇含量的48.5%,是生地鲜重梓醇含量的18%。rolB基因PCR、Southem blot分析、冠瘿碱纸电泳和RT-PCR扩增检测证明农杆菌Ri质粒上的T-DNA整合到怀地黄基因组中并表达。     

地黄中腺苷含量的影响因素

地黄中腺苷含量的影响因素朱青罗燕燕王瑛龚韬郄春鹏（北京市临床药学研究所,北京１０００３５）ＴｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｆａｃｔｏｒｓｏｎａｄｅｎｏｓｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｈｅｒｏｏｔｔｕｂｅｒｏｆＲｅｈｍａｎｎｉａｇｌｕｔｉｎｏｓａＬｉｂｏｓｃｈ．Ｚ...     

地黄种质资源形态及生物学性状的观察与比较

收集我国地黄种质资源30份,并对其叶片形态、株形、开花期、花色、块根形状、块根皮色、块根肉色等进行观察,对叶片长度、叶片宽度、叶片鲜重、株高、叶片数等性状进行测定。结果表明不同地黄品种之间在叶片长度、叶片宽度、叶片鲜重、株高度、叶片数等都存在极显著差异。根据综合鉴定与评价,将地黄种质资源划分为5个类型。     

地黄组织培养及植株再生的研究

以地黄根茎所获无菌苗为材料,对其愈伤组织诱导、分化和再生植株的获取进行了初步研究。结果表明：取叶片、茎段、叶柄进行愈伤组织诱导,筛选出最适培养基为MS附加2,4-D0．5mg／L、BA1．0mg／L,愈伤组织诱导率可达100％。将叶片接种在分化培养基中,诱导不定芽,其最适分化培养基为MS附加BA 3mg／L、NAA 0．1mg／L,分化率为77．5％。试管苗在改良的MS(大量与微量元素、铁盐和有机物质各1／2)附加NAA 0．05mg／L的培养基上,经过15～20d培养,生根率可达100％。     

不同品种的地黄低聚糖含量的比较研究

采用HPLc-ELSD法,对6个不同品种(包括野生和栽培)地黄的低聚糖进行含量测定.测定结果表明:不同的地黄品种低聚糖含量差异比较显著;栽培品种‘85 -5’、‘9302’和‘北京1号’低聚糖含量比较接近;野生品种‘BA3’的水苏糖含量普遍较低,而蔗糖含量比较高;‘北京1号’水苏糖含量较高,总低聚糖含量比较均衡,占干重...     

地黄炮制过程氨基酸组分分析

利用氨基酸自动分析仪分别测定加工前后地黄中的总氨基酸和游离氨基酸质量分数。分析、比较炮制前后地黄的氨基酸成分变化。炮制前后地黄的氨基酸种类及含量有明显变化,多数氨基酸的含量在炮制后明显下降甚至消失。结论:炮制前后的地黄中氨基酸质量分数差别明显,其中碱性氨基酸质量分数的差别尤其显著,该差异可能是由于炮制过程中发生美拉德反应造成的。     

地黄自毒物质提取及其生物指标测定

连作障碍在药用植物地黄(Rehmannia glutinosa L.)栽培中尤其明显,同一地块上种植一茬地黄后,须经8-10a后方可再种。从怀地黄主产区河南省焦作地区采集种植1a地黄的茬后土壤,采用不同溶剂提取地黄土壤自毒物质并利用生物测试确定抑制率最强的土壤提取液作温室栽培实验以确定对植物生理指标的影响。利用高效液相色谱法(HPLC)对土壤提取液和根系分泌物进行比较,并利用高效液相色谱、傅立叶转换红外光谱(FTIR)和电喷雾离子阱质谱(ESI-MS)技术鉴定地黄连作自毒物质的化学成分。生物测试结果表明水和甲醇提取的地黄茬后土壤自毒物质对地黄生长具有最强的抑制作用;在培养器中加入浓度0.5g/mL的水和甲醇提取液对地黄胚根的抑制率分别达17%和26%,当浓度增至5.0g/mL时,抑制率增加到70%以上。盆栽结果显示甲醇提取的自毒物质导致地黄地上部叶绿素含量减少,根系活力下降,明显抑制了地黄体内超氧化物歧化酶、过氧化物歧化酶、过氧化物酶的活性,加剧了地黄膜质过氧化,以及引起地黄植体内生长素类激素含量下降。高效液相色谱法显示土壤提取液和根系分泌物具有相似图谱。电喷雾离子阱质谱分析共检测到6个特征物质:香草酸、D-甘露醇、二十六烷酸苯羟基乙酯、毛蕊花糖苷、β-谷甾醇和胡萝卜苷。     

Phytochemical Profiles and Antioxidant Activity of Rehmannia glutinosa from Different Production Locations

The chemical components and antioxidant activity of 16 Rehmannia glutinosa samples were investigated to reveal the high‐quality raw resource for pharmaceutical products. 22 main chemical components were detected with significant content differences (P<0.05). The contents of 14 substances reached the maximum in S1 sample such as catalpol (6.74 mg g^?1), rehmaionoside A (1.93 mg g^?1) and rehmannioside D (5.13 mg g^?1). However, the content distribution of the other eight substances had no obvious change regulation. Three antioxidant evaluation methods commonly showed that S1 sample had strong antioxidant activity with a low IC₅₀ value of 0.022 mg mL^?1, a high ABTS value of 524.196 μmol equiv. Trolox g^?1, and a high FRAP value of 200.517 μmol equiv. Trolox g^?1. Considered the medicinal value, S1 had high quality based on the present phytochemical profiles and antioxidant activity. These results also indicated that the root extracts of R. glutinosa could become useful supplement for pharmaceutical products as new antioxidant agents.     

地黄连作对根际微生物区系及土壤酶活性的影响

以地黄连作2年和1年的土壤为研究对象,分别测定了根际微生物区系变化及根际土壤酶活性．结果表明：地黄连作对其根际微生物区系及土壤酶活性产生了较大的影响．随种植年限的增加,根际细菌和真菌减少,但差异均不显著;放线菌增多,连作2年的土壤约为1年的4倍．土壤中氨化细菌、好气性固氮菌、硫化细菌、反硝化细菌和嫌气性纤维素分解菌分别增加了25．99、45．39、11．43、1．36和1．43倍,而好气性纤维素分解菌减少了86．74％．连作地黄根系的分泌物对脲酶、多酚氧化酶、蔗糖酶、蛋白酶和纤维素酶活性具有促进作用,分别增加了62．87％、9．43％、47．91％、139．62％和31．33％,而对过氧化氢酶则呈抑制作用．说明地黄连作会破坏根际微生物种群平衡．