尿素酶试验的最佳pH

尿素酶试验过去一直用来鉴别变形杆菌。由于变形杆菌的尿素酶活性很强,对于实验条件无特殊要求。除变形杆菌外,具有较强尿素酶活性的细菌还有克雷伯氏菌,耶尔森氏菌。而柠檬酸杆菌和阴沟杆菌,则被认为是尿素酶阴性的细菌,或少数为阳性或迟缓阳性,在菌属鉴     

幽门螺旋杆菌重组尿素酶B亚基的纯化及其免疫学性质的研究

目的:幽门螺旋杆菌(Hp)尿素酶是Hp重要的定制因子和致病因子,Hp尿素酶活性位点位于Hp尿素酶B亚基(UreB),研发基于UreB的Hp疫苗是一种很有前景的防治Hp感染的策略。方法:主要利用基因克隆技术从幽门螺旋杆菌标准菌株SS1(Hp SS1)获得Hp尿素酶B亚基基因,并构建含有重组Hp尿素酶B亚基(rUreB)基因的重组表达载体pET-rUreB及其重组菌株;重组菌株经蛋白表达和优化后,利用Ni-NTP镍离子亲和层析和DEAE Sepharose FF阴离子交换层析纯化重组尿素酶B亚基(rUreB),并进一步通过腹腔注射免疫BALB/c小鼠,研究rUreB的免疫学性质。结果:通过基因克隆技术成功获得了Hp尿素酶B亚基基因,并成功构建了重组表达载体pET-rUreB及其重组菌株BL21(DE3)/pET-rUreB,经蛋白表达优化及纯化,可获得高纯度(96.5%)的重组蛋白rUreB。重组蛋白rUreB辅以弗氏佐剂腹腔注射免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA鉴定小鼠能够产生针对天然Hp尿素酶和UreB的高滴度特异性抗体,且能够显著性抑制Hp尿素酶的活性。结论:重组Hp尿素酶B亚基能够在大肠杆菌表达系统中获得较高水平的表达,具有较高的免疫学特异性,其抗体能够有效抑制Hp尿素酶活性。为研究基于尿素酶的防治Hp感染的Hp疫苗奠定了一定的实验基础。     

细菌尿素酶的生化和分子生物学特点

尿素酶属于镍金属酶,能够分解尿素成氨和二氧化碳.细菌尿素酶在氮素循环和致病性方面有重要的作用.本文讨论了细菌尿素酶的生物化学和分子生物学性质,并就尿素酶的活化和调控方式以及生物学效应进行阐述.     

尿素动力学模型及尿素反弹的实验研究

综述了尿素动力学模型的研究进展,并分析了几种模型的优缺点。建立了串联双室模型实验系统,研究了在透析间期尿素反弹的情况。该系统通过控制泵流量（F）来模拟两室室间溶质清除率（KIE）;用KCl代替尿素,通过实验曲线拟合得到KIE、R^2;通过与临床数据比较,获得了适合于尿素反弹系统的KIE,并研究了非灌注室浓度（A）对KIE的影响。结果显示,F=580ml／min较好地匹配了患者透析的尿素动力学特征;基于F=580ml／min进行的A对KIE影响的实验中,A与KIE没有必然联系,KIE平均值为512ml／min,标准差为10．25。且室间溶质浓度达到平衡所需的时间均为35-5min。尿素反弹的串联双室模型实验系统能够对患者透析后的尿素动力学进行较好的模拟,并具有较强的稳定性。     

幽门螺杆菌尿素酶B单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备稳定分泌抗幽门螺杆菌尿素酶B单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的mAb进行鉴定。方法:用初步纯化的重组幽门螺杆菌尿素酶B免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备抗尿素酶B的mAb,用间接ELISA检测mAb的特异性和亲和力,检测mAb腹水效价,鉴定Ig亚类并测定其抗原决定簇。结果:获得8株能稳定分泌抗尿素酶B的mAb杂交瘤细胞系,这8株单抗与能产生尿素酶的小肠结肠耶尔森氏菌、肺炎克雷伯氏菌和普通变形杆菌均无交叉反应,相对亲和力为1.13×10-8～4.66×10-10,腹水mAb效价可达2×104～3.2×105。其中2株单抗属IgG1亚类,3株单抗属IgG2a亚类。8株单抗分属于3种不同的抗原决定簇。结论:获得了IgG1和IgG2a类型的针对3种不同抗原决定簇的特异性幽门螺杆菌尿素酶B的mAb,为进一步用于幽门螺杆菌的临床诊断和实验研究创造了条件。     

产尿素酶大肠杆菌

本文系绕地报告产尿素酶的大肠杆菌。这类菌株在马群中的分离率达21．2％;骡群中次之,为9．7％;而来源于人的为0 9％。带有脲酶的大肠杆菌的马、骡占受检动物的30·9％;作者讨论了马中毒性肠炎和产尿素酶大肠杆菌存在的关系,并提出了在大肠埃希氏菌属中建立以产尿素酶和不发酵甘露酵为特征的亚属的问题。     

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因工程菌发酵工艺的研究

通过不同培养基、不同葡萄糖浓度、不同溶氧条件、补料与非补料对幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)基因工程菌的菌体生长与外源蛋白表达量的影响的比较 ,建立了稳定、适宜的幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因工程菌发酵工艺。多批实验结果证明 ,菌体单产可达 86 g/L ,目的蛋白的表达率为 38.2 %。     

尿素循环关键酶在肿瘤中的作用和机制

尿素循环是将机体代谢产生的氨经过一系列酶促反应生成尿素的过程,对于维持体内氨基酸水平及氨稳态有着重要的作用.完整的尿素循环几乎只在肝脏中进行,因此癌症中的尿素循环通常处于失调状态,肿瘤细胞可以通过调节尿素循环酶的表达来适应环境和调控生物合成,同时尿素循环失调会暴露出癌症的短板,了解尿素循环在癌症中的演变可以用于癌症的诊断和治疗.本文主要介绍尿素循环酶在不同肿瘤中的差异性调控,了解尿素循环在肿瘤细胞中的重编程,总结了尿素循环和肿瘤微环境、肿瘤治疗之间的关系.     

幽门螺杆菌尿素酶基因的研究进展

近年来,幽门螺杆菌的分子生物学研究取得了很大进展,而既是定植因子、又是毒力因子的幽门螺杆菌尿素酶也得到了更加深入的研究。本文就近年来幽门螺杆菌尿素酶基因的结构、转录、表达调控等方面一些新的研究进展作一综述。     

胰蛋白酶与底物在尿素溶液中的结合

胰蛋白酶的专一性底物,对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯,对酶在236mμ的尿素差吸收峰有熄灭作用;不同量的对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯对胰蛋白酶236mμ的尿素差吸收值的影响形成一滴定曲线。在8M尿素溶液中对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯和胰蛋白酶的旋光不具有加和性。这些事实说明在尿素溶液中胰蛋白酶能够和底物结合。二异丙磷酰胰蛋白酶的236mμ尿素差吸收峰亦能被对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯熄灭,指出二异丙磷酰胰蛋白酶仍然具有和对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯结合的能力。用N-溴代琥珀酰亚胺氧化胰蛋白酶的色氨酸残基后,酶的尿素差示光谱消失以及酶的pH差示光谱中反映了一个pK2.8的解离基团,说明色氨酸残基和羧基可能直接或间接与236mμ左右的差示光谱有关。从底物存在下胰蛋白酶在pH1.6—3.6范围内不再呈现pH差示光谱看来,羧基可能参与底物的结合。     

一株尿素酶阴性的新生隐球菌

本文报告从鸽粪标本中分离出的一株尿素酶试验阴性、咖啡酸玉米吐温琼脂培养呈棕色菌落的酵母样真菌。根据该菌袜的生理、生化特性及致病力,认为是尿素酶阴性的新生隐球菌。此外,应注意这种菌在自然界中的存在和对人类造成感染的可能。这是关于从自然环境中分离出尿素酶阴性新生隐球菌的首次发现和报告。     

幽门螺杆菌尿素酶的纯化及其特性

本文利用Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－２００和Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ两步层析,从ＨＰ蒸馏水浸液中提取纯化尿素酶,并对其特性进行了测定,证明ＨＰ尿素酶各含一个６６ｋＤ和２９．５ｋＤ的亚单位,并以６个分子聚合成６２５ｋＤ大分子蛋白,有很好的抗原性,并显示特异的血清学反应。用ＨＰ超声浸液抗原和尿素酶,加入２μｇ霍乱毒素粘膜佐剂,给ＳＰＦ ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠口服免疫,可使８０％小鼠抵抗ＨＰ活菌的攻击,证明尿素酶是一种抗ＨＰ的保护性抗原。     

尿素对热带假丝酵母Candida tropicalis合成长链二元酸途径的调节 Ⅱ.几个关键酶活力的消长

前文已报道尿素及尿素结构类似物对长链二元酸的合成酶系既有抑制作用,也有阻遏作用,从而调节了长链二元酸的合成。本文进一步从离体酶系探索过量尿素对热带假丝酵母在烃类氧化过程中有关三羧酸循环,乙醛酸循环,呼吸链,ω和β氧化等几个关键酶活力的消长关系。实验结果证明,过量尿素(0.2%)以上培养菌体的三羧酸循环三个主要脱氢酶,苹果酸脱氢酶,琥珀酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶(NADP)的比活力分别为正常尿素(0.1%)培养菌体的5.3、3.0、1.7倍。乙醛酸循环关键酶,异柠檬酸裂解酶和苹果酸合成酶分别为正常尿素培养物的2.6和2.8倍。另一方面当尿素过量时ω-氧化酶系活力极微,而β-氧化酶系活力大大提高,以致长链二元酸难以积累。另外过氧化氢酶活力在过量尿素存在时也有显著提高。而谷氨酸脱氢酶、NADH氧化酶和由NAD连结的异柠檬酸脱氢酶在两种菌体内无明显差别。     

尿素对热带假丝酵母Candida tropicalis合成长链二元酸途径的调节——Ⅱ.几个关键酶活力的消长

前文已报道尿素及尿素结构类似物对长链二元酸的合成酶系既有抑制作用,也有阻遏作用,从而调节了长链二元酸的合成。本文进一步从离体酶系探索过量尿素对热带假丝酵母在烃类氧化过程中有关三羧酸循环,乙醛酸循环,呼吸链,ω和β氧化等几个关键酶活力的消长关系。实验结果证明,过量尿素(0.2%)以上培养菌体的三羧酸循环三个主要脱氢酶,苹果酸脱氢酶,琥珀酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶(NADP)的比活力分别为正常尿素(0.1%)培养菌体的5.3、3.0、1.7倍。乙醛酸循环关键酶,异柠檬酸裂解酶和苹果酸合成酶分别为正常尿素培养物的2.6和2.8倍。另一方面当尿素过量时ω-氧化酶系活力极微,而β-氧化酶系活力大大提高,以致长链二元酸难以积累。另外过氧化氢酶活力在过量尿素存在时也有显著提高。而谷氨酸脱氢酶、NADH氧化酶和由NAD连结的异柠檬酸脱氢酶在两种菌体内无明显差别。     

高等植物尿素代谢及转运的分子机理

尿素广泛存在于自然界中,是易于被许多生物（如植物）利用的生长氮源。该文通过概述尿素在不同生命系统中存在的基础生理意义及各类型尿素转运蛋白,讨论了植物细胞中尿素合成与分解的各种途径及尿素在植物氮营养、代谢和运输中的生理作用。迄今为止,在植物中已发现了2类转运尿素的膜蛋白,即MIPs和DUR3,它们分别在低亲和力、高亲和力尿素运输中发挥潜在作用。异源表达结果表明MIPs介导了尿素的被动迁移：而AtDUR3则参与拟南芥根系对尿素的吸收。对MIPs和DUR3转运尿素的酶学特征、亚细胞作用位点和表达调控状况等的研究表明：它们的分子生物学功能与植物的氮营养及氮素再分配和利用相关。     

高等植物尿素代谢及转运的分子机理

尿素广泛存在于自然界中, 是易于被许多生物(如植物)利用的生长氮源。该文通过概述尿素在不同生命系统中存在的基础生理意义及各类型尿素转运蛋白, 讨论了植物细胞中尿素合成与分解的各种途径及尿素在植物氮营养、代谢和运输中的生理作用。迄今为止, 在植物中已发现了2类转运尿素的膜蛋白, 即MIPs和DUR3, 它们分别在低亲和力、高亲和力尿素运输中发挥潜在作用。异源表达结果表明, MIPs介导了尿素的被动迁移; 而AtDUR3则参与拟南芥根系对尿素的吸收。对MIPs和DUR3转运尿素的酶学特征、亚细胞作用位点和表达调控状况等的研究表明: 它们的分子生物学功能与植物的氮营养及氮素再分配和利用相关。     

幽门螺杆菌尿素酶抗原的分离及纯化

本实验采用新型离了交换剂Ｓｏｕｒｅｃｅ Ｑ１５为分离介质,用氯化钠盐浓度梯度洗脱法,从幽门螺杆菌超声处理上清液中纯化了幽累相菌尿毒酶抗原,所得纯化物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析证明具有良好的纯度,只含有分子量为６６０００及２９５００两种蛋白成分,与幽门螺杆菌两种亚基的大小安全相同。以此纯化尿素酶为抗原用于ＥＬＩＳＡ检测临床确诊的幽门螺杆菌感染者血清１２全水感染幽门螺杆者血清１８例,其ＥＬＩＳＡ阳性及     

氧化酶和尿素酶试验对HP感染的鉴别诊断

目的 探讨氧化酶和尿素酶对幽门螺杆菌（HP）感染的检出率和鉴别诊断。方法 采用氧化酶和尿素酶和涂片对1738例胃病患者进行HP检测。结果 1738例中氧化酶试验、尿素酶试验试验阳性检出率分别为47．41％、89．99％,阳性预测值为89．76％,阴性预测值为95．3％;尿毒酶试验的敏感性为99．72％,特异性为96．02％,阳性预浊值为95．36％,阴性预测值为9．76％,两者相比较各个参数间均无明显差（P＞0．05）。结论 氧化酶试验和尿毒酶试验一样对检测HP快速有效,两者联合应用可提供对HP感染诊断和鉴别诊断的准确性。     

用聚乙烯亚胺絮凝和在布上粘附实现降解尿素细胞的固定化

近年来,排除和控制废水中含氮物质,对保护和维持环境有重大意义.尿素肥料工业的产品是尿素和氨以及丰富的含氮废水.尿素废水能用高压水解塔(气提塔)处理,然而该工艺耗资太大.通常,尿素残水经处理后可进一步利用或贮於泻湖晒干.虽然已提出,尿素残水处理可利用固相酶通过生物降解作用来清除氨,但利用固相酶或固定化尿素降解微生物的有关报告则甚少.     

喂尿素对公羊的影响

反刍动物在酶原性共生的条件下,能利用简单的含氮化合物在瘤胃内合成细菌氮,在进一步的消化过程中,这些细菌蛋白重新被机体消化吸收。大约一百年前,在德国有人用实验证明反刍胃内微生物能利用非蛋白氮合成蛋白质。随着尿素工业的发展,现在尿素饲料化进展很快。用尿素代替蛋白质对节约粮食、降低成本有很大的现实意义。目前,尿素在乳牛饲养上应用比较普遍,有关用尿素饲喂公羊对提高公羊精液品质方面的报导却不多。本试验的目的在于探讨给公羊饲喂尿素日粮后,对精液品质、性欲和体重的影响。