抗SEA鸡卵黄抗体用于血吸虫循环抗原检测的初步研究

目的:探讨抗可溶性虫卵抗原(SEA)鸡卵黄抗体(Immunoglobulin Y,IgY)用于血吸虫循环抗原检测的可行性。方法:以纯化的鸡抗SEA卵黄抗体为捕捉抗体,以酶标抗SEA单克隆抗体NP28-5B进行双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(S-ELISA)检测急、慢性血吸虫病病人和健康人血清,并与常规检测抗体的酶联免疫吸附试验(SEA-ELISA)法做比较。结果:S-ELISA法测得SEA浓度(y)与A450值(x)呈明显的正相关(r=0.9481,y=459.22x-108.14)。S-ELISA法检测急性血吸虫病人循环抗原的阳性率为100%,慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率为84.40%,健康人的特异性为96%。两种方法对血吸虫病的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:S-ELISA可用于血吸虫病的免疫诊断。     

单克隆抗体抑制性酶联免疫吸附试验：（I—ELISA）检测日本血吸虫虫卵抗原

检测血吸虫抗原较之检测虫体的明显优点是可准确地估计虫荷以及判断是否活动性感染,有助于了解化疗效果。近年来国内已有用双抗体夹心酶联法检测血吸虫循环抗原的报道。使用高效特异的单克隆抗体可望进一步提高检测的敏感性。本文对单克隆抗体(McAb)I-ELISA检测日本血吸虫虫卵抗原的敏感性和特异性作了初步探讨。有关本法检测感染日本血吸虫的动物和病人血中血吸虫虫卵抗原的情况将另文报道。材料与方法McAb制备:用日本血吸虫虫卵抗原(SEA)免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与SP2/O小鼠骨髓瘤细胞融合,经克隆化后获得3株分泌抗日本血吸虫…     

抗间日疟红内期原虫单克隆抗体识别和检测抗原分子量

检测分析间日疟红内期原虫特异性抗原组分,在间日疟的免疫诊断、抗原分离纯化等方面均具重要意义。作者已成功地制备了一批抗人间日疟红内期原虫单克隆抗体(McAbs),为进一步研究这些McAbs所识别的特异抗原分子,作者将间日疟红内期原虫抗原经十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离,通过转移电泳(Westernblot)将凝胶中的抗原区带转至硝化纤维膜(NC—paper)上,用McAbs进行识别,检测所识别的靶抗原分子量,取得了满意的结果,现报道如下。材料和方法一、可溶性抗原的制备:自流行区采集间日疟患者静脉血,用Percoll分离出原虫,…     

日本血吸虫卵胚胎发育的组织化学研究

血吸虫病的病变和发病机理是由于虫卵在人体组织中引起肉芽肿所致。目前认为发育成熟含毛蚴的血吸虫卵分泌可溶性抗原物质,它致敏寄主后,使淋巴细胞、巨噬细胞和嗜酸粒细胞集聚在虫卵周围形成了肉芽肿,并证明血吸虫卵肉芽肿是属于迟发型超敏免疫反应(Warren,1972)。Warren等(1975)还认为日本血吸虫卵和曼氏血吸虫卵肉芽肿形成的有关免疫因素及发病机理可能有所不同。通过组织化学的途径对组织内日本血吸虫卵胚胎发育的研究,不仅有助于探讨血吸虫卵发育的生理及寄主组织和虫卵之间的相互关系,而且对血吸虫病的病原诊断方面亦有一定的实际意义。为此,作者对沉积于组织内的虫卵从受精卵细胞至形成毛蚴的胚胎发育全过程进行了一般组织学及组织化学的观察。     

日本血吸虫病患者血清对血吸虫卵和成虫抗原的免疫反应

用免疫印渍术分析了33例确诊为日本血吸虫病患者血清对日本血吸虫虫卵抗原(SEA)和成虫抗原(SWAP)的免疫反应,发现患者血清对虫卵和成虫抗原的敏感性分别为100％和97％,而正常人血清则无反应,大多数病例(28/33)血清和SEA抗原反应后,印渍谱上于180,54和32kD处显现较宽区带;对SWAP而言,多数病例(26/32)则在190及64kD处显现区带;而急性患者(21/24)还可在34kD处检出一条较宽区带。这些结果提示了免疫印渍术在日本血吸虫病临床诊断上的价值。     

日本血吸虫循环抗原成分的分析

血吸虫宿主体内存在着多种成分组成的抗原谱。既往研究较多的,在电泳中出现于阳极端的多糖抗原只是其中之一,它定位于血吸虫成虫肠上皮细胞,Deelder等证明受染小鼠尿液中的三种循环抗原均为虫源性,其中两种为不耐热和不溶于三氯醋酸的未知成分。目前许多学者用三氯醋酸提取的循环抗原免疫动物,仅能查出循环抗原中的一种,这可能是过去检查循环抗原方法敏感性不高所致。究竟宿主体内有几种循环抗原及其组分,各自的理化特性和免疫源性如何?作者在Nash(1974),Houba(1976),杨士静(1981)等对多糖抗原研究的基础上,对活虫、活卵进入宿主血循环的…     

超声热处理由卵抗原用于血吸虫病环卵沉淀试验观察

为提高环卵沉淀试验(COPT)诊断血吸虫病的敏感性,用超声热处理血吸虫卵,并作了如下试验。材料与方法从人工感染家兔获得新鲜日本血吸虫卵;经沸水浴加温及超声处理,再经过酒精和乙醚脱水,37℃烘干,即得到松散的粉末——热超声干卵。与常规冻干卵作比较试验。结果与讨论用5批热超声干卵抗原对165例血吸虫病人做COPT,阳性检出率热超声干卵为98.1%,冻干卵为96.4%,二者一致;热超声干卵平均环沉率为26.23%,显著高于冻干卵(20.18%),(P<0.01);用热超声干卵作COPT,其环沉率高的人数比冻干卵多;对同一病例的两种干卵的环沉率比较,也显示出热超声…     

微量间接血凝试验用于斑疹伤寒诊断

用鼠肺培养的普氏立克次体提取的ESS(Erythrocytes Seasltizlng Substance)可溶性抗原致敏6种经醛固鞣化的红血球,结果证明人“O”型、绵羊、家兔红血球较敏感;在37℃或4℃条件下用2．5％戊二醛、1：20,000鞣酸各处理15分钟所致敏的血球抗原血凝滴度高;以2．5％浓度醛固鞣化血球加入等量ESS可溶性抗原致敏为宜。此法制备的血球抗原可冻干保存。血凝反应比补体结合、外斐氏试验敏感性高,特异性强,没有非特异性交叉反应。可用微量塑料板法,便于基层流行病学及临床早期诊断用,亦可用作间接血凝抑制试验检查抗原。     

核酸疫苗初免-蛋白疫苗加强的免疫策略提高日本血吸虫核酸疫苗免疫效果

为研制抗血吸虫疫苗提供实验依据,探讨了抗血吸虫SjGST-32核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫的免疫增强效应及免疫应答特征。将日本血吸虫DNA疫苗VR1012-SjGST-32与重组蛋白疫苗rSjGST-32分别在第0、2和4周免疫小鼠,在第6周攻击感染日本血吸虫尾蚴,攻击感染45 d后剖杀小鼠,计算减虫率、检卵率以及检测肝脏病理变化,观察免疫保护效果;检测小鼠血清中特异性IgG抗体滴度,T细胞增殖反应和抗原特异性CD4+IFN-γ+、CD4+IL-4+和CD4+IL-10+的数量,探讨免疫应答特征。结果显示,DNA初免-蛋白加强的联合免疫组的保护作用优于单独免疫组,显著提高了减虫率(42.3%)和减卵率(59.6%),并且能够显著减轻血吸虫虫卵对肝脏的病理损害;进一步发现,DNA疫苗和蛋白疫苗联合应用增强了机体T淋巴细胞增殖反应、抗体IgG滴度以及抗原特异性CD4+IFN-γ+的产生。这些研究为新型血吸虫疫苗的优化设计和合理应用提供了依据。     

日本血吸虫14-3-3蛋白的表达与诊断价值研究

制备可溶性表达的重组日本血吸虫信号传导蛋白14-3-3(r Sj14-3-3)并优化表达条件,分析其免疫学特性和免疫诊断价值。成功构建了BL21/p ET30a-r Sj14-3-3表达菌株,最佳的表达体系为细菌生长至OD600为0.6~1.0时加入IPTG至最佳终浓度0.1 mmol/L,28℃诱导16 h。上清液中可溶性的r Sj14-3-3蛋白纯化后的浓度为2.804 mg/m L。以r Sj14-3-3为抗原,间接ELISA检测显示,48份急性与35份慢性血吸虫病患者血清的抗体阳性率分别为95.6%和92.0%;与27份华支睾吸虫和15份钩虫患者血清的交叉反应率分别为7.4%和6.7%;与30份健康人血清假阳性反应率为0%。抗r Sj14-3-3兔血清及所制备的多抗可被纯化出的r Sj14-3-3蛋白及血吸虫成虫抗原(AWA)和排泄分泌物(ESA)中的天然Sj14-3-3分子的反应,且多抗效价达1:1 280 000。本研究成功表达并纯化出r Sj14-3-3蛋白,优化了其诱导表达条件,且此蛋白具有较高的抗原特异性。     

日本血吸虫重感染兔肝在生理盐水中冷藏24小时后的虫卵活性观察

本文探讨日本血吸虫重感染兔肝加生理盐水置冰箱浸泡24小时后分离的虫卵活性。1材料和方法感染1500条日本血吸虫尾蚴的26只家兔肝,用常规方法分离虫卵,按兔肝湿重等分为两份。一份即时分离虫卵称即时组,另一份加少量生理盐水(淹没肝组织为度)置冰箱24小时分离虫卵称24小时组。两组所获虫卵均分别制备加热超声虫卵〔1〕和冰冻干燥虫卵。加热超声的两组虫卵用玻片法作环卵沉淀试验以观察环沉率和反应强度。冻干卵两组则制备成1%虫卵抗原用对流免疫电泳(抗原稀释法)检测活性,并用凯氏微量定氮法测含氮量,依据含氮量稀释为10—15μg/ml致敏血球,…     

斑点ELISA检测感染华支睾吸虫兔血清抗体

许多报道表明,斑点ELISA用于单克隆抗体Ig型别和IgG亚类的鉴定及寄生虫病的检测,不仅有较好的敏感性及特异性,而且快速、简便。我们以此法试用于人工感染华支睾吸虫兔血清抗体的检测,结果如下。材料及方法硝酸纤维素膜:浙江黄岩人民化工厂产。华支睾吸虫抗原:冻干成虫可溶性抗原,1:200。检测血清:(1)华支睾吸虫兔血清:采自经口感染华支睾吸虫囊蚴后40—50天粪检虫卵阳性之兔;(2)免疫兔血清:以华支睾吸虫抗原免疫。方法按余等(1982)皮内免疫法进行。血清IgG提纯按北京医学院微生物学教研组(1980)方法分别用50%和33%饱和度(NH4)2SO4盐…     

日本血吸虫32kDa蛋白质基因在真核表达载体中的亚克隆

设计和合成特定寡核苷酸引物,TRIZOL提取日本血吸虫成虫RNA,RT-PCR法扩增日本血吸虫32kDa蛋白质(Sj32)基因编码序列,将扩增产物连接pGEM-T克隆载体,再亚克隆到真核表达载体pBKCMV中.结果RT-PCR法特异性扩增出Sj32编码基因片段,其大小约为1270bp,经双酶切、PCR鉴定表明所构建的质粒pGEM-Sj32和pBK-Sj32中含有目的基因.pBK-Sj32重组质粒的成功构建,为进一步表达Sj32及其在血吸虫病免疫诊断、免疫预防中的作用研究提供了条件.     

日本血吸虫重组信号蛋白14—3—3的纯化及单克隆抗体的制备

纯化日本血吸虫（中国大陆株）重组信号蛋白（rSj14—3—3）,并制备其单克隆抗体。以纯化后的rsj14-3—3蛋白为抗原免疫Balb／c小鼠,用杂交瘤技术制备抗rSj14-3-3的单克隆抗体,并通过ELISA方法和Westernblotting测定抗体的效价与特异性。获得了大量高纯度的rSj14-3-3蛋白：筛选出了能够稳定分泌抗rSj14．3．3单抗的杂交瘤细胞株3H6。单抗亚型为IgG1。实验依靠大肠杆菌表达系统高效表达了rSj14—3—3蛋白,并利用该蛋白制备了单克隆抗体．可用于今后血吸虫病免疫诊断的实验研究。     

两种血吸虫病DNA疫苗的候选抗原基因研究

目的：以日本血吸虫基因SjFABP和SjGST原核表达产物检测二价DNA疫苗pVIVO2-SjFABP-SjGST在体内诱发的特异性抗体。方法：克隆日本血吸虫抗原基因SjFABP和sjGST,构建重组原核表达载体pET30a-SjFABP、pET30a-SjGST及真核表达载体pVIVO2-SjFABP-SjGST;将pET30a-SjFABP和pET30a-sjGST进行原核表达,并将表达产物用镍亲和柱分离纯化;采用Western印迹对日本血吸虫DNA疫苗pVIVO2-SjFABP-SjGST免疫4周后的BALB／c小鼠血清进行特异性抗体检测。结果：克隆了日本血吸虫抗原基因SjFABP（399bp）和町GST（657bp）,并构建了pET30a-SjFABP、pET30a-SjGST及pVIVO2-SjFABP-SjGST重组质粒;经Western印迹检测,pET30a-SjFABP及pET30a-SjGST原核表达的抗原蛋白均能够与经日本血吸虫二价DNA疫苗pVIVO2-SjFABP-SjGST免疫的小鼠的血清产生特异性免疫反应。结论：日本血吸虫町尉即和町GST基因的原核表达系统成功建立;原核表达的抗原蛋白具有免疫原性;以原核表达产物可检测日本血吸虫DNA疫苗pVIVO2-SiFABP-SiGST在体内诱发的特异性抗体。     

高效特异的抗日本血吸虫循环抗原免疫血清制备的研究

制备高效特异的抗血吸虫循环抗原的免疫血清,是提高检测循环抗原方法灵敏度的重要环节。Bawden(1974)曾用淀粉凝胶电泳分离循环抗原,用甲基化牛血清白蛋白作为载体致敏动物,但所得的抗血清特异性较差。平田瑞成(1976)用酚抽提循环抗原制备抗血清,但免疫源性较差。Deelder(1976)     

用日本血吸虫部分cDNA表达质粒文库免疫小鼠产生的保护性效果

寻找保护性效果更好的抗原分子一直是抗血吸虫病疫苗研发领域的热点和难点。国内外筛选日本血吸虫 (Ｓｃｈｉｓｔｏ ｓｏｍａｊａｐｏｎｉｃｕｍ)保护性抗原分子采取的主要策略有 2种 :一是通过构建血吸虫某一生活史ｃＤＮＡ文库 ,采用探针 (核酸或抗体 )从文库或文库表达产物中筛选出特异性抗原基因 ,再逐一评估其保护性效果。该策略的主要缺陷是筛选操作费时费力 ,且效率不高。另一途径则是根据已知的曼氏血吸虫或其它种 (株 )保护性抗原基因序列 ,通过ＰＣＲ或核酸探针等技术筛选与之同源的相应抗原分子 ,这一方法 (尤其是ＰＣＲ方法 )尽…     

葡萄糖-6-磷酸-异构酶抗原对老年人类风湿性关节炎的诊断价值

目的:探讨葡萄糖-6-磷酸-异构酶抗原(GPI抗原)及类风湿因子(PF)的检测对老年人类风湿性关节炎(EORA)的诊断价值.方法:分别用ELISA法、速率散射比浊法检测49例RA患者和49例非RA的老年健康对照者血清GPI抗原和RF.运用四格表和受试者工作特征曲线评估两者对EORA诊断效能.结果:GPI抗原对EORA的敏感性、特异性和准确性分别为81.63%、93.87%及87.75%,阳性和阴性拟然比分别为13.3和0.19.RF诊断EORA的敏感性、特异性和准确性分别为73.46%、79.59%、76.53%,阳性和阴性拟然比分别为3.16和0.35.GPI抗原诊断准确性高于RF(P=0.013).GPI抗原诊断EORA的ROC曲线下面积(AUC)为0.913(95%CI,0.852-0.975),优于RF(P<0.001)结论:GPI抗原对EORA具有较好的敏感性和很高的特异性,在诊断EORA时较RF有更高的价值.     

酶连接免疫吸附试验检测e抗原

1972年Magnius认为在乙型肝炎表面抗原(HB_sA_g)阳性血清中发现的一种新抗原(e抗原),可能与乙型肝炎的传染性和预后有较密切关系。此后该抗原很受重视。但多年来国内外一直使用琼脂免疫扩散法(ID)进行检测,敏感性不高。酶连接免疫吸附试验(ELISA)是七十年代发展起来的一种新的检测技术,有敏感性高、特异性好和操作简便等优点。最近,我们用     

葡萄球菌A型肠毒素的高效表达和分离纯化

根据已知葡萄球菌A型肠毒素 (SEA)的基因序列 ,用PCR从产毒标准株S .aureusFRI 10 0中扩增得到约70 0的SEA基因片段 ,并将该片段克隆至表达载体 pBV2 2 0中 ,实现了高效表达。表达产物以可溶性形式存在 ,表达的毒素用CM SephroseFF离子交换层析进行纯化 ,获得了高纯度的重组SEA ,SDS PAGE显示单一条带。ELISA试验证明所获重组SEA具有与天然SEA相似的免疫学性质。