间充质干细胞旁分泌作用的研究进展

间充质干细胞（MSCs）通常利用多分化特性在组织损伤时起到修复功能。然而,近期研究表明,MSCs大多数治疗作用都是通过旁分泌来发挥作用的,其中最受关注的是可溶性蛋白分泌和细胞外膜泡（EVS）。MSCs释放的EVS可反映细胞的来源,能够影响局部微环境中其他细胞的活动。越来越多人提出利用MSCs分泌的各种因子（称为分泌体）替代MSCs细胞治疗的观点。现就MSCs旁分泌特性、分泌体发生和释放机制以及细胞来源对旁分泌影响等方面的研究进展进行综述。     

间充质干细胞治疗糖尿病的研究进展

糖尿病是目前困扰人类健康的第三大杀手。胰岛移植作为糖尿病的一种有效方法早已得到公认,但是胰岛供体的缺乏和移植排斥反应的存在限制了胰岛移植的临床应用[1]。胰岛素替代疗法是目前治疗糖尿病最有效的方法。然而这种方法也有许多缺陷。间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)具有多向分化潜能的均质性细胞,具有供源丰富、易于获得、有自由供体、避免免疫排斥等优点,因而是较为理想的胰岛B细胞来源[2]。近年来,众多实验研究表明了通过诱导MSC分化为胰岛B细胞治疗糖尿病的可能性。     

间充质干细胞衰老基础的研究进展

间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是再生医学领域和组织工程领域研究应用最广泛的成体干细胞。MSCs不仅随着机体的衰老而衰老,而且MSCs的衰老也被认为是引起机体衰老的主要原因,是许多衰老相关退行性疾病的重要诱因。干细胞治疗的发展为衰老相关疾病的治疗带来了新的方向,然而体外扩增过程中供体细胞容易出现衰老,影响治疗效果,制约临床发展与应用。因此,该文针对MSCs衰老基础研究进行综述,为加快MSCs临床转化提供参考。     

癌细胞分泌蛋白质组富集与鉴定策略研究进展

分泌蛋白质中包含细胞因子、生长因子和激素等具有重要功能的生物活性分子,广泛参与细胞信号传导,细胞增殖、分化和凋亡的调控等多项重要生命过程。因此,从分泌体系中发掘生物标志物和治疗靶标,是癌症蛋白质组研究的一个重要方向。传统的分泌蛋白质体系主要包括血浆、尿液、脑脊液和组织间隙液等,这些系统的一个主要特点是其所包含的蛋白质浓度范围跨度很大,对蛋白质组分离和鉴定提出巨大挑战。而收集肿瘤细胞在无血清体系中培养时所分泌的蛋白质,开展蛋白质组研究,则可以避开常规分泌系统中大量高丰度蛋白质的干扰,获得肿瘤特异性的细胞分泌蛋白谱。近年来,随着蛋白质组学技术的发展和质谱仪的进步,癌细胞分泌蛋白质组学的研究进展很快。我们系统回顾了癌细胞分泌蛋白质组富集方法和鉴定策略的发展,概括了癌细胞分泌蛋白质组研究现状和规模,为该领域的进一步研究奠定基础。     

细胞因子对创伤愈合的影响

创伤愈合是一个复杂的生物学过程,涉及炎症细胞,修复细胞、细胞外基质以及细胞因子之间的相互作用。传统将这一过程分为炎症期、增值期、组织重构三个相互重叠的时期。细胞因子是一类对细胞生长、分化有明显调控作用的小分子生物活性多肽。是细胞与细胞外基质间重要的信号传导物。多种生长因子被释放到伤口部位被认为是创伤愈合所必需的。本文就细胞因子对创伤愈合的促进作用、细胞因子相互之间的协同作用,以及应用前景作以概述。     

骨髓间充质干细胞免疫抑制作用及其机理

近年来间充质干细胞特殊的免疫学特性越来越引起人们的重视,使其成为移植领域的一个研究热点。许多实验室就间充质干细胞的免疫抑制作用和机理做了大量的研究工作,取得了一定的进展。本文简要综述间充质干细胞的免疫抑制作用和机理。     

活性氧在创伤愈合中作用的研究

：创伤愈合是一个复杂的生物学过程,包括出血与凝血、炎症渗出、血管和肉芽组织的形成、再上皮化、纤维化和瘢痕改建等,在这一系列的生物学活动过程中都需要能量支持;高等动物使用氧气作为终端氧化剂,通过对碳水化合物的氧化作用为愈合过程中的各种生命活动提供能量,但该过程却可以产生大量的活性氧,这些活性氧在创伤愈合的过程中扮演着重要的角色,在低浓度情况下可以促进伤口的愈合,而在高浓度时会抑制伤口愈合,而活性量浓度的过高过低都会影响创口的正常愈合过程。     

间充质干细胞免疫调控作用可塑性的研究进展

自1974年Friedenstein等首次发现并分离出兔骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)以来,MSC的基础和临床研究均有一定的进展,尤其是MSC具有免疫调控功能的发现突破了最初仅注重其在多向分化和再生功能方面研究的局限,为MSC的研究开辟了新方向。近年来,MSC在炎症中的作用备受关注,MSC在不同的局部微环境中可呈现出抗炎/促炎的可塑性,并可通过调节固有免疫和适应性免疫重塑局部炎症反应,实现免疫稳态。现就MSC免疫调控作用可塑性及机制方面的研究进展作一综述。     

骨髓来源的间充质干细胞分化能力的鉴定

本文研究了人骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)的成骨及成脂分化的潜能.通过加入诱导成骨的诱导剂,人的MSCs出现成骨分化的机箱,通过碱性磷酸酶活性测定,茜素红染色及主要调控基因BMP2和Runx2的表达,确定了MSCs具有成骨分化的潜能.对于成脂分化,通过油红O染色,及主要标志基因PPARγ的表达确定其具有成脂分化的潜能.所以,从骨髓分离的到的MSCs纯度达到标准,并且具有成骨成脂分化的多向潜能,是一种理想的实验模型细胞.     

去甲肾上腺素对骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:观察去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖的影响及其作用途径.方法:分离培养正常大鼠BMSCs,采用3H-TdR掺入实验检测不同浓度的NE(10-7-10-4 M)作用8h及10-5M的NE作用不同时间(0-24h)BMSCs细胞增殖情况,real time RT-PCR检测肾上腺素能受体α1A-AR,α1B-AR和α1D-AR mRNA表达变化情况.结果:10-7-10-4M的NE作用8h后均促进了BMSCs细胞的增殖.并且在10-5M时NE对BMSCs的促增殖效应最为显著;正常组BMSCs细胞的α1A-AR,α1B-AR,α1D-AR mRNA表达维持在较低水平,加入10-5M的NE作用后α1-AR三个亚型mRNA表达水平均有不同程度的升高(P<0.05).结论:NE能够促进BMSCs的增殖,并且这种促增殖作用是通过AR依赖的信号通路来调节的.     

胎膜来源的间充质干细胞促进烧伤愈合的研究

目的:研究胎膜来源的间充质干细胞在治疗SD大鼠Ⅲ度烧伤中的作用.方法:用胰酶消化法分离足月产胎膜细胞,加入Amino-MAX Ⅱ培养基进行培养.流式细胞仪检测细胞表面标志物CD29、CD73、CDl4、CD45.分别用浓度为3mg/ml、5mg/ml、7mg/mi、9mg/ml的明胶溶液包被脱细胞真皮(ADM),以5x 106/ml的密度将细胞种植在包被和未包被的ADM表面,2小时后收集未贴附在ADM上的细胞,计算细胞种植效率.实验组:以7mg/ml的明胶包被ADM,以5x 106/ml的密度种植第2～3代细胞,培养3～5天后,移植至SD大鼠Ⅲ度烧伤创面;对照组Ⅰ移植单纯的ADM,对照组Ⅱ未进行移植,术后定期观察创面大体情况,计算创面收缩率、表皮再生面积比例,第5周切取新生皮肤组织行HE染色.结果:胎膜分离的细胞以长梭形为主,表达与间充质干细胞相关的表面抗原标志物CD29、CD73,极少表达造血细胞标志物CD14、CD45.不同浓度明胶溶液包被和未包被的ADM,其细胞种植效率均无明显区别(P>0.05);相比对照组,实验组移植物成活时间更长,创面再上皮化时间较早,创面收缩率较小,再生表皮面积亦较多(P<0.05);再生表皮更厚,有明显的表皮突,真皮层毛细血管丰富.结论:成功分离、培养了胎膜来源的间充质干细胞.胎膜来源间充质干细胞复合ADM可促进SD大鼠Ⅲ烧伤创面表皮再生,加速创伤愈合,抑制创面收缩.     

创伤合并海水浸泡后愈合过程的病理学观察

目的观察创伤合并海水浸泡后对伤口愈合时间的影响及愈合过程中的病理学改变。方法以大鼠为实验动物,建立背部双侧圆形创伤模型,创后随机分为对照组和实验组,每组50只,实验组创后置海水中浸泡30min。观察2组创面的愈合生长状况。观察伤口局部愈合过程中的病理学改变,应用免疫组化方法观察愈合过程中伤口修复细胞增殖指数及微血管密度变化。结果对照组平均愈合时间为（12.0±1.0）d,而实验组的平均愈合时间为（14.3±0.8）d;两组在肉芽组织形成时间上以及修复细胞增殖能力上存在差异。结论创伤合并海水浸泡可导致伤口愈合时间延迟,加重创伤局部的炎症反应、延缓肉芽组织形成时间。     

促黑素在创面愈合过程作用的研究进展

促黑素(melanocyte-stimulating hormones, MSH)和其它的黑色素主要是由垂体中央部前阿黑皮素(POMC)衍生的内源性的多肽,也可产生于机体的其它组织,通过结合五种黑色素受体而产生生理学效应,包括抗炎症反应、抗微生物、降脂、抑制瘢痕形成等。本文主要是对MSH的分类及生成路径和在创面愈合过程的抗脂、抗瘢痕、抗微生物和抗炎效应进行了综述,并指出研究MSH对参与伤口修复的干细胞的迁移、增殖和分化的调控作用及分子机制,将更好地揭示干细胞参与创面修复的分子机制,为再生医学研究提供更多的理论支持。     

Mesenchymal stem cell-conditioned medium accelerates skin wound healing: An in vitro study of fibroblast and keratinocyte scratch assays

We have used in vitro scratch assays to examine the relative contribution of dermal fibroblasts and keratinocytes in the wound repair process and to test the influence of mesenchymal stem cell (MSC) secreted factors on both skin cell types. Scratch assays were established using single cell and co-cultures of L929 fibroblasts and HaCaT keratinocytes, with wound closure monitored via time-lapse microscopy. Both in serum supplemented and serum free conditions, wound closure was faster in L929 fibroblast than HaCaT keratinocyte scratch assays, and in co-culture the L929 fibroblasts lead the way in closing the scratches. MSC-CM generated under serum free conditions significantly enhanced the wound closure rate of both skin cell types separately and in co-culture, whereas conditioned medium from L929 or HaCaT cultures had no significant effect. This enhancement of wound closure in the presence of MSC-CM was due to accelerated cell migration rather than increased cell proliferation. A number of wound healing mediators were identified in MSC-CM, including TGF-β1, the chemokines IL-6, IL-8, MCP-1 and RANTES, and collagen type I, fibronectin, SPARC and IGFBP-7. This study suggests that the trophic activity of MSC may play a role in skin wound closure by affecting both dermal fibroblast and keratinocyte migration, along with a contribution to the formation of extracellular matrix.     

伤口愈合肽HPLC分析方法的研究

目的：研究高效液相色谱法（HPLC）分析伤口愈合肽的方法。方法：HPLC测定用Kromasil-C18色谱柱（250mm＊4.6mm,5滋m）,拟确定的色谱条件为：二元线性梯度洗脱,流动相A：0.1%三氟乙酸水溶液;流动相B：0.1%三氟乙酸50%乙腈,流速为1ml/min,检测波长为215nm。结果：线性梯度洗脱条件：起始流动相为A70%：B30%,洗脱最终流动相为A30%：B70%;伤口愈合肽浓度在0.1-0.3mg/ml内,其标准曲线的相关系数为R2=0.9998,回归方程为：y=237.19x-0.3249;日内、日间相对标准偏差都不大于2%;重复性的相对标准偏差都小于药典规定的2.0%。结论：该方法稳定性、重复性良好,符合伤口愈合肽新药研究的实验检测要求。     

Analysis of Allogenicity of Mesenchymal Stem Cells in Engraftment and Wound Healing in Mice

Studies have shown that allogeneic (allo-) bone marrow derived mesenchymal stem cells (BM-MSCs) may enhance tissue repair/regeneration. However, recent studies suggest that immune rejection may occur to allo-MSCs leading to reduced engraftment. In this study, we compared allo-BM-MSCs with syngeneic BM-MSCs or allo-fibroblasts in engraftment and effect in wound healing. Equal numbers of GFP-expressing allo-BM-MSCs, syngeneic BM-MSCs or allo-fibroblasts were implanted into excisional wounds in GFP-negative mice. Quantification of GFP-expressing cells in wounds at 7, 14 and 28 days indicated similar amounts of allogeneic or syngeneic BM-MSCs but significantly reduced amounts of allo-fibroblasts. With healing progression, decreasing amounts of allogeneic and syngeneic BM-MSCs were found in the wound; however, the reduction was more evident (2 fold) in allo-fibroblasts. Similar effects in enhancing wound closure were found in allogeneic and syngeneic BM-MSCs but not in allo-fibroblasts. Histological analysis showed that allo-fibroblasts were largely confined to the injection sites while allo-BM-MSCs had migrated into the entire wound. Quantification of inflammatory cells in wounds showed that allo-fibroblast- but not allo-BM-MSC-treated wounds had significantly increased CD45⁺ leukocytes, CD3⁺ lymphocytes and CD8⁺ T cells. Our study suggests that allogeneic BM-MSCs exhibit ignorable immunogenicity and are equally efficient as syngeneic BM-MSCs in engraftment and in enhancing wound healing.