中国人β—珠蛋白基因—530基序的变异性研究

应用双链ＤＮＡ循环则序法,对中国人群２０例血液学正体个体,７７例β－珠蛋白合成异常患者（４３例）及其部分亲属（３４例）的β珠蛋基因上游－５３０基序进行了序列分析。结果表明,中国人－５３０基序存在（ＡＴ）８Ｔ５,（ＡＴ）７Ｔ７和（ＡＴ）９Ｔ５三种主要的重排类型,以及一种未见报道的稀有重排类型（ＡＴ）１０Ｔ３。进一步经家系连锁分析,获得由β珠蛋白结构基因与－５３０基序重排组成的单体型,结果显示ＩＶＳ－     

β珠蛋白基因5′远端新沉默子克隆及定点诱变

通过凝胶滞留分析和荧光素酶报告基因检测系统,鉴定出人类β珠蛋白基因５′旁侧远端帽位上游－２１３２～－１８２２ｂｐ间存在一个活性沉默子片段（３１０ｂｐ）,将其亚克隆至ｐＵＣ－Ｔ载体中,然后采用人工设计的突变引物,将经ＤＮＡ足纹分析确定的两个结合位点的核心基序（β珠蛋白基因帽位上游－２０１７～－２０１１ｂｐ间的“ＣＴＴＣＣＧＣ”序列和－２００６～－１９９７ｂｐ间的“ＣＡＣＴＴＴＡＴＴＴ”序列）分别定点诱变为“ＣＴＴＡＡＧＣ”和“ＣＡＣＴＴＡＡＧＴＴ”两个突变序列,从而构建成两种突变型３１０ｂｐ片段,可用于对活性沉默子位点的结构与功能及β珠蛋白基因表达调控机制的深入研究。     

急性粒细胞白血病珠蛋白基因表达失衡的研究

应用竞争性逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）测定了１０例急性粒细胞白血病Ｍ＿２型（ＡＭＬ）患者外周血网织红细胞中α／β珠蛋白ｍＲＮＡ的相对含量,其中８例表现不同程度增高,２例正常,均值为１．５１３±０．１８２（±ｓ）,与正常对照组（１．２４±０．０８３）进行ｔ检验比较,有非常显著差异（Ｐ＜０．０１）．此外,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析显示ＡＭＬ患者β珠蛋白基因启动子区序列（５＇端－１３５至＋１２２位核苷酸）无明显异常。说明ＡＭＬ患者珠蛋白基因表达失衡系由于转录异常,很可能系ＡＭＬ的发生对α／β珠蛋白基因的平衡表达产生了某种影响,从而表现为获得性β地中海贫血特征。实验结果为进一步探讨白血病的发病机理及其α／β珠蛋白基因表达失衡的机制奠定了基础。     

高碳酸抑制兔离体基底动脉缺氧性收缩

在离休兔基底动脉观察了ＣＯ＿２浓度、ｐＨ值对血管缺氧反应的影响。在以５－羟色胺（５－ＨＴ,１０￣（－６）ｍｏｌ／Ｌ）预收缩后,缺氧使血管张力升高（Ｔ＿Ｈ）１１４．８７±４０．７５ｍｇ,其占总张力变化的百分数Ｔ（％）为４８．６２±１２．１１（ｎ＝５１）。去内皮对缺氧性收缩无影响。随浴槽液中ＣＯ＿２浓度增加,缺氧性收缩幅度减弱,在Ｐｃｏ＿２为８．００、９．３３和１０．６７ｋＰ８时,Ｔ（％）仅分别为３８．３０±５．３６（ｎ＝１１）、３２．２５±７．７６（ｎ＝１３）和２９．９０±９．２６（ｎ＝１１）,较对照值（Ｐｃｏ＿２＝５．３３ｋＰａ时）均有显著差异（Ｐ＜０．０１）。ｐＨ７．２－７．７时血管缺氧反应无显著变化。一氧化氮合成酶抑制剂Ｌ－ＮＮＡ（１０￣（－６）ｍｏｌ／Ｌ可抑制血管的缺氧收缩反应,也抑制了不同ＣＯ＿２浓度对缺氧反应的影响。结果提示ＣＯ＿２可能经促血管分泌一氧化氮的功能而抑制了缺氧性收缩。     

11例重度内源性高甘油三酯血症患者脂蛋白脂酶基因的序列分析

对成都地区１１例重度内源性高甘油三酯血症（空腹１２～１４小时血浆ＴＧ＞７．６８ｍｍｏｌ／Ｌ）患者脂蛋白脂酶基因外显子１～９的序列进行了分析。结果发现,１１例患者中有４例其ＬＰＬ基因在外显子６,８及９具有３种杂合子变异。其中一种为Ｔｈｒ３６１－Ｔｈｒ（外显子８,Ｃ１３３８→Ａ）突变,为无义突变,尚未见报道,在７４例血脂正常的中国人中的发生频率为１１．４％。另外２种变异Ａｌａ２６１－Ｔｈｒ（外显子６,Ｇ１０３７→Ａ）及Ｓｅｒ４４７－Ｔｅｒ（外显子９,Ｃ１５９５→Ｇ）在７４例血脂正常中国人的频率分别为０％及１０．７％。未发现脂蛋白脂酶催化活性中心Ａｓｐ１５６－Ｈｉｓ２４１－Ｓｅｒ１３２（外显子４及５）的突变。     

补体分子结构中的共有基序

在人补体系统３０多种成分中，约有一半左右的分子中含有某种共的有结构序列。目前已翻，这些基序有ＳＣＲ（ＣＣＰ），ＴＳＲ，ＥＧＦ前体，ＬＤＬ－Ｒ，ＦＩＭ，ＳＰ区等。在补体分子中，有的只含有一种基序，如ＲＣＡ分子只含有ＳＣＲ，Ｐ分子中只含有ＴＳＲ；有的含有多种基序，如Ｃ６，Ｃ７，Ｃ８及Ｃ９等。     

胆囊收缩素对IL－1β损伤的胰岛β细胞功能的保护作用及其机制分析

本实验在分离培养的新生大鼠胰岛上,观察了胆囊收缩素（ＣＣＫ－８）对白细胞介素－１β（ＩＬ—１β）损伤的胰岛β细胞功能的影响。并就其机制进行初步分析。结果表明：（１）ＩＬ—１β（５,１０,２０Ｕ／ｍｌ）能抑制葡萄糖（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）刺激的胰岛素分泌,其抑制作用具有量效关系,抑制率分别为５３．４％,６０．５％和７０．７％。（２）ＣＣＫ－８对ＩＬ－１损伤的胰岛β细胞的功能具有保护作用。预防性地给予ＣＣＫ－８（１０￣（－１０）,１０￣（－９）,１０￣（－８）,１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ）能防止ＩＬ－１β对葡萄糖刺激的胰岛素分泌的抑制作用。治疗性地给予ＣＣＫ－８也能恢复胰岛对葡萄糖刺激的胰岛素分泌的能力。（３）ＣＣＫ　Ａ型受体阻断剂Ｌ３６４７１８（１０ｎｍｏｌ／Ｌ）能阻断ＣＣＫ－８的保护作用,表明这一作用可能是通过ＣＣＫ受体实现的。（４）ＩＬ－１β抑制胰岛素分泌的同时,能升高胰岛组织内ｃＧＭＰ水平,而ＣＣＫ－８能阻止ＩＬ－１引起的ｃＧＭＰ水平的升高。     

宫粉郁金的组织培养和快速繁殖

１植物名称宫粉郁金（Ｃｕｒｃｕｍａ　ｋｗａｎｇｓｉｅｎｓｉｓ）。２材料类别　块茎萌动芽。３培养条件　萌动芽生长培养基：（１）ＭＳ＋６－ＢＡ１ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋ＮＡＡ０．２。不定芽增殖与愈伤组织诱导培养基：（２）ＭＳ＋６－ＢＡ１０＋ＫＴ５;（３）ＭＳ＋６．ＢＡ１０;（４）ＭＳ＋６－ＢＡ５＋ＫＴ２．５;（５）ＭＳ＋６－ＢＡ５;（６）ＭＳ＋６－ＢＡ２＋ＫＴ１。生根培养基：（７）ＭＳ＋ＮＡＡ０．５;（８）ＭＳ＋６－ＢＡ０．５＋ＮＡＡ０．５;（９）ＭＳ。以上培养基均加０．７％琼脂,３％蔗糖,ｐＨ５…     

兔肝金属硫蛋白β结构域的制备和鉴定

制备一定量的Ｃｄ、Ｚｎ兔肝金属硫蛋白,然后脱掉其中的金属,获得不含金属的硫蛋白,用一价金属ＣｕＣｌ或ＡｇＮＯ３以５．８：１的金属：蛋白摩尔比与ａｐｏＭＴ结合,将其β结构域用金属饱和,在３７℃,ＰＨ７．０下用枯草杆菌蛋白酶水解掉未结合金属的α结构域,获得Ｃｕ（Ⅰ）、Ａｇ（Ⅰ）结合的兔肝ＭＴ－Ⅰ、ＭＴ－Ⅱ的β结构域,通过ＨＰＬＣ、羧甲基化后的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、氨基酸组成分析、金属定量、Ｎ末端分析和紫外     

内皮素－1对缺氧肺动脉平滑肌细胞的增殖作用

内皮素（ＥＴ）是至今所发现的最强的内源性血管收缩肽,近年来发现ＥＴ－１能促进血管平滑肌细胞增殖。本研究表明ＥＴ－１对缺氧培养的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）有剂量依赖的增殖作用,缺氧可促进ＰＡＳＭＣ的ＤＮＡ合成且增加ＥＴ－１的丝裂原作用。ＥＴ－１的丝裂原作用主要由其Ａ型受体（ＥＴＲ＿Ａ）所介导,ＥＴＲ＿Ａ的特异拮抗剂ＢＱ１２３可显著抑制缺氧以及缺氧与ＥＴ－１协同所产生的增殖作用,而且发现ＥＴＲ＿Ａ在缺氧培养的ＰＡＳＭＣ中的表达显著高于常氧对照组ＰＡＳＭＣ。本研究表明ＥＴ－１参与了缺氧性肺动脉结构重组,而缺氧可增强ＰＡＳＭＣ对ＥＴ－１的增殖反应性。     

二甲基苯蒽对小鼠皮肤表皮鸟氨酸脱羧酶和转化生长因子βmRNA水平…

本文利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析技术研究了完全致癌物二甲基苯蒽（ＤＭＢＡ）对小鼠表皮鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）ｍＲＮＡ和转化生长因子β（ＴＧＦ－β）ｍＲＮＡ水平的影响。ＤＭＢＡ在１５０μｇ和９００μｇ剂量下一次涂用于小鼠肝肤,可使表皮ＯＤＣ ｍＲＮＡ和ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达增加。ＯＤＣ ｍＲＮＡ为单一的２．０ｋｂ大小的条带,其表达在在３６ｈ时最为明显。而ＴＧＦ－βｍＲＮＡ大小为２．５ｋｂ和１．９ｋｂ,     

野生型及启动子区突变的HPFHAγ基因在MEL细胞中的表达

研究了野生型Ａγ珠蛋白基因、中国型胎儿血红蛋白持续存在综合症（ＨＰＦＨ）Ａγ基因（启动子区－１９６Ｃ－Ｔ突变）及希腊型ＨＰＦＨＡγ基因（－１１７Ｇ－Ａ突变）在鼠红白血病（ＭＥＬ）ＧＭ９７９细胞中的表达,比较每个整合的Ａγ基因明显增加的表达水平,而－１１７Ｇ－Ａ１９６Ｃ－Ｔ突变Ａγ基因未显示比野生型Ａγ基因明显增加的表达水平,而－１１７Ｇ－Ａ空变Ａγ基因在未分化的及ＨＭＢＡ或丁酸钠诱导分化的ＭＥＬＧ     

非同位素PCR－SSCP方法的初步临床应用

单链构象多态性检测法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）是近年发展起来的一项检测人类基因组突变的新技术。然而,在该技术中需要使用放射性同位素标记的核苷酸或引物,从而限制了其广泛临床研究及诊断方面的应用。本文报告一种改进的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法,该方法不用同位素标记引物,而直接在溴乙啶染色的聚丙烯酰胺凝胶上显示ＳＳＣＰ。用该方法对５５例平滑肌肉瘤ｐ５３基因第７外显子突变的检测表明,３８％的瘤组织ＤＮＡ存在异常的ＳＳＣＰ。其中１０例有ＨａｅⅢ和ＭｓｐＩ酶切位点的突变（１８％）,１９例有突变型ｐ５３蛋白的过度表达（９例同时有异常ＳＳＣＰ改变）。而ｐ５３质粒ＤＮＡ,平滑肌瘤及Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病患者基因组ＤＮＡ无ｐ５３基因第７外显子扩增片段的异常ＳＳＣＰ改变。同时,还使用该方法对临床诊断的２０例Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病患者和８例健康对照进行了β－淀粉样蛋白前体基因第１６和１７外显子的扩增及分析,均未发现有异常ＳＳＣＰ改变及ＥｃｏＲＩ,ＢｃｌＩ酶切位点的突变。本研究结果提示,该非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法可靠、敏感、简便、快速,具有潜在的推广价值。     

兔肝金属硫蛋白β结构域的制备和鉴定

制备一定量的Ｃｄ、Ｚｎ兔肝金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ,ＭＴ）,然后脱掉其中的金属,获得不含金属的硫蛋白（ａｐｏＭＴ）．用一价金属ＣｕＣｌ或ＡｇＮＯ３以５．８１的金属蛋白摩尔比与ａｐｏＭＴ结合,将其β结构域用金属饱和,在３７℃,ｐＨ７．０下用枯草杆菌蛋白酶水解掉未结合金属的α结构域,获得Ｃｕ（Ⅰ）、Ａｇ（Ⅰ）结合的兔肝ＭＴ－Ｉ、ＭＴ－Ⅱ的β结构域．通过ＨＰＬＣ、羧甲基化后的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、氨基酸组成分析、金属定量、Ｎ末端分析和紫外扫描等鉴定,证明确实得到了Ｎ末端为Ｍｅｔ,分子量３０００左右,金属蛋白摩尔比为５～５．５１的ＭＴβ结构域,其氨基酸组成与理论值基本相符     

亲和层析纯化肌质网Ca~（2＋）－ATP酶

建立了一种亲和层析纯化肌质网Ｃａ￣（２＋）－ＡＴＰ酶的方法．用非离子型去污剂Ｃ＿（１２）Ｅ＿８溶解肌质网,再通过反应红－１２０琼脂糖亲和层析柱使肌质网Ｃａ￣（２＋）－ＡＴＰ酶纯度从粗品中的６５％提高到９９％,并具有较高ＡＴＰ水解活性．经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,为电泳纯．     

IL－7对早期胸腺细胞发育的作用

胸腺基质细胞分泌白细胞介素７（ＩＬ－７）。ＩＬ－７是早期Ｔ细胞的重要生长因子之一。它能选择性促进ＣＤ４－ＣＤ８－和ＣＤ４＋ＣＤ８－／ＣＤ４－ＣＤ８＋细胞增殖。ＩＬ－７主要维持早期前体Ｔ细胞存活,同时保持其Ｔ前体细胞潜能。ＩＬ－７对胸腺细胞分化的作用目前仍有争议。     

二甲基苯蒽对小鼠皮肤表皮鸟氨酸脱羧酶和转化生长因子βmRNA水平的影响

本文利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析技术研究了完全致癌物二甲基苯蒽（ＤＭＢＡ）对小鼠表皮鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）ｍＲＮＡ和转化生长因子β（ＴＧＦ－β）ｍＲＮＡ水平的影响。ＤＭＢＡ在１５μｇ和９００μｇ剂量下一次涂用于小鼠皮肤,可使表皮ＯＤＣｍＲＮＡ和ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达增加。ＯＤＣｍＲＮＡ为单一的２．０ｋｂ大小的条带,其表达在在３６ｈ时最为明显。而ＴＧＦ－βｍＲＮＡ大小为２．５ｋｂ和１．９ｋｂ,其表达在３６ｈ时最高,到４８ｈ几乎降至正常,但在７２ｈ又有增加。ＯＤＣ和ＴＧＦ－β可能在ＤＭＢＡ诱癌过程中起重要作用。     

澳大利亚三种Callitris植物的核型及其系统学意义

对澳大利亚特产的Ｃａｌｌｉｔｒｉｓ属植物Ｃ．ｐｒｅｉｓｓｉｉ,Ｃ．ｖｅｒｒｕｃｏｓａ,Ｃ．ｅｎｄｌｉｃｈｅｒｉ（柏科）的核型进行了分析,后２种的为首次报道。它们的核型公式分别为Ｋ（２ｎ）＝２２＝２２ｍ（２ＳＡＴ）,２２ｍ（２ＳＡＴ）和２２ｍ（６ＳＡＴ）,均属１Ａ核型类型。染色体相对长度组成同是２ｎ＝２２＝１０Ｍ＿２＋１２Ｍ＿１该３种及其他８种Ｃａｌｌｔｒｉｓ属植物一致的核型Ｋ（２ｎ）＝２２ｍ和１Ａ类型的通常被认为是最对称和原始的。因此该属在柏科的系统发育上也许处于相当原始的地位。     

NA和5－HT对小脑脑片浦肯野细胞自发及诱发电活动的影响

在大鼠小脑脑片上观察了ＮＡ和５－ＨＴ对浦肯野细胞（ＰＣ）的自发放电活动及由白质刺激所引起的诱发放电活动的影响。结果表明：（１）ＮＡ使ＰＣ产生抑制、兴奋和双相反应,以抑制反应为主（７９．８％）;５－ＨＴ引起ＰＣ兴奋和抑制反应,以兴奋反应略多（５７．８％）。（２）先后灌流ＮＡ和５－ＨＴ对同一个ＰＣ自发放电的影响主要为抑制（ＮＡ）－兴奋（５－ＨＴ）（５３．８％）。（３）ＮＡ对ＰＣ的诱发复杂锋电位（ＣＳ）和简单锋电位（ＳＳ）反应,主要产生增强效应（５７．１％和６２．８％）;５－ＨＴ对ＰＣ诱发ＣＳ和ＳＳ反应则主要产生压抑作用（６０．０％和６８．２％）。（４）先后灌流ＮＡ和５－ＨＴ对同一个ＰＣ的诱发ＣＳ和ＳＳ反应,主要表现为ＮＡ对这两种诱发反应的增强和５－ＨＴ的压抑效应（６０．０％和５２．９％）。这些结果提示,ＮＡ能和５－ＨＴ能传入纤维可以通过释放ＮＡ和５－ＨＴ调节ＰＣ的兴奋性水平并改变ＰＣ对爬行纤维和苦状纤维突触传入的反应敏感性,影响小脑皮层神经元网络的感觉运动整合过程。     

Yunnanese(~Aγδβ)~0-地贫缺失桥片段的克隆及缺失连接区的序列测定

为研究导致Ｙｕｎｎａｎｅｓｅ（Ａγδβ）０－地贫缺失事件的分子机制,并从３′并入序列中搜寻增强子类序列,使用ＥＭＢＬ３为载体构建了一例缺失杂合子的基因组文库,筛选到来源于异常染色体１１并包含Ｇγ珠蛋白基因区６．７ｋｂ序列以及１１．５ｋｂ３′并入序列（即缺失桥片段）的克隆．此１１．５ｋｂ序列在正常染色体中位于β珠蛋白基因约下游６６～７８ｋｂ区域．详细分析了这一区域的限制性内切酶图谱．分析了围绕缺失连接区的ＤＮＡ序列,精确定位缺失的５′端点发生在Ａγ珠蛋白基因上游－１１６～－１１７碱基之间．确定缺失的３′端点处于一个Ｌ１序列内,位于β珠蛋白基因下游～６６ｋｂ,距离Ｃｈｉｎｅｓｅ（Ａγδβ）０－地贫缺失３′端点上游～１２．２ｋｂ的一个ＥｃｏＲⅠ位点上游４１３ｂｐ．围绕５′和３′端点的序列之间无明显同源性,说明这一缺失代表了体内的非同源重组事件．这一重组事件可能由Ｌ１序列介导．缺失３′端点下游序列的克隆分离也为进一步从中搜寻加强子类序列奠定了基础