天花粉凝集素糖结合专一性Ⅱ.

本文报道一些糖类、糖苷、糖蛋白和几种外源凝集素对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖或胎盘细胞膜结合的影响。在低浓度时,所用的糖类中,乳糖是最强的抑制剂,蜜二糖和棉籽糖的抑制能力和乳糖相仿,而纤维二糖、蔗糖、麦芽糖,则无明显影响。三个所用的糖蛋白,它们的抑制活性以下列顺序递减:猪甲状腺球蛋白,人血清转铁蛋白,鸡卵白蛋白。未标记的天花粉凝集素和蓖麻凝集素,两者都专一地和半乳糖结合,它们都能竞争标记天花粉凝集素,而伴刀豆球蛋白A和半夏凝集素则不能竞争。由此,我们推测天花粉凝集素主要是和半乳糖结合,但与乳糖的结合能力最强,故推测其结合部位能容纳半乳糖和另一个单糖。     

天花粉凝集素的糖结合专一性

本文对天花粉凝集素的糖结合特性,进行了初步研究。观察到除了半乳糖外,高浓度的葡萄糖也可将天花粉凝集素从酸处理交联琼脂糖亲和吸附柱上洗脱下来。N-乙酰氨基半乳糖对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖的结合的抑制能力和半乳糖相同,甘露糖、葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖仅在高浓度下才有较强的抑制能力。     

天花粉凝集素的糖结合专一性

本文对天花粉凝集素的糖结合特性,进行了初步研究。观察到除了半乳糖外,高浓度的葡萄糖也可将天花粉凝集素从酸处理交联琼脂糖亲和吸附柱上洗脱下来。N-乙酰氨基半乳糖对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖的结合的抑制能力和半乳糖相同,甘露糖、葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖仅在高浓度下才有较强的抑制能力。     

天花粉中三个同工凝集素的分离纯化及其生物学性质研究

运用阴离子交换层析从亲和纯的天花粉凝集素中分离得到三个同工形式的凝集素,它们都具有结合半乳糖的能力,都能与天花粉凝集素的的因清形成免疫沉淀线,并且其它各方面的性质如疏水结合能力也相仿,对它们生物学性质的检测,发现它们都能杀伤黑色素瘤细胞,但缺乏抑制无细胞蛋白质生物合成的能力,另外,对植物中同工形式凝集素的存在进行了讨论。     

若干外源凝集素对胰岛素与其受体相互作用的影响

本文研究了若干外源凝集素对胰岛素与其脂肪细胞胰岛素受体相互作用的影响。结果表明与D-甘露糖和D-葡萄糖专一结合的外源凝集素,如ConA(伴刀豆球蛋白A)、豌豆及蚕豆凝集素可抑制~(125)Ⅰ-胰岛素与其受体的结合。与D-半乳糖专一结合的外源凝集素,如蓖麻凝集素Ⅰ和天花粉凝集素基本上不抑制~(125)Ⅰ-胰岛素与其受体的结合,在低浓度时有一定程度的促进胰岛素与受体结合的能力。另外两个和低聚糖专一结合的半夏凝集素和PHA(菜豆凝集素)的效应和蓖麻凝集素Ⅰ等类似。这些结果说明在胰岛素受体分子表面可能存在着与ConA等专一结合的糖,而且它们在胰岛素受体与胰岛素结合部位的附近。而和其他几个外源凝集素专一结合的糖或低聚糖链则和胰岛素受体与胰岛素结合的部位相距较远,并就这些凝集素对胰岛素与受体结合的促进作用进行了讨论。     

若干外源凝集素对胰岛素与其受体相互作用的影响

本文研究了若干外源凝集素对胰岛素与其脂肪细胞胰岛素受体相互作用的影响。结果表明与D-甘露糖和D-葡萄糖专一结合的外源凝集素,如ConA (伴刀豆球蛋白A)、豌豆及蚕豆凝集素可抑制~(125)I-胰岛素与其受体的结合。与D-半乳糖专一结合的外源凝集素,如蓖麻凝集素I 和天花粉凝集素基本上不抑制~(125)I-胰岛素与其受体的结合,在低浓度时有一定程度的促进胰岛素与受体结合的能力。另外两个和低聚糖专一结合的半夏凝集素和PHA (菜豆凝集素)的效应和蓖麻凝集素I 等类似。这些结果说明在胰岛素受体分子表面可能存在着与ConA等专一结合的糖,而且它们在胰岛素受体与胰岛素结合部位的附近。而和其他几个外源凝集素专一结合的糖或低聚糖链则和胰岛素受体与胰岛素结合的部位相距较远,并就这些凝集素对胰岛素与受体结合的促进作用进行了讨论。     

3种海藻凝集素组分及糖抑制作用的初步研究

从 3种海藻 (铁钉菜IshigeokamuraeYenda、坛紫菜PorphyrahaitanensisChangetZheng和脆江蓠Gracilariabursa pastorisSilva)中分离纯化得到铁钉菜凝集素 (IOL)、坛紫菜凝集素 (PHL)及脆江蓠凝集素 (GBL)。经测定 ,它们分别含有 7%、14 %和 11%的中性糖。氨基酸组成中 ,苯丙氨酸含量最高 ,蛋氨酸和精氨酸次之。 3种海藻凝集素的凝血活性均可被单糖或双糖所抑制 ,在所测试的 13种糖类中 ,能够抑制GBL活性的糖类最多 ,达 5种 ,抑制IOL的糖类最少 ,仅 2种。 3种糖蛋白 (胃粘蛋白、卵粘蛋白和甲状腺球蛋白 )对IOL没有抑制作用 ,而卵粘蛋白能够抑制PHL和GBL的凝血活性     

天花粉中三个同工凝集素的分离纯化及其生物学性质研究

运用阴离子交换层析从亲和纯的天花粉凝集囊中分离得到三个同工形式的凝集素,它们都具有结合半乳糖的能力,都能与天花粉凝集大的抗血清形成免疫沉淀线,并且其它各方面的性质如疏水结合能力也相仿。对它们生物学性质的检测,发现它们都能杀伤黑色素瘤细胞,但缺乏抑制无细胞蛋白质生物合成的能力。另外,对植物中同工形式凝集大的存在进行了讨论。     

棕尾别麻蝇(Sarcophaga peregrina)幼虫与蛹血淋巴凝集素的纯化与特性

用亲和层析法纯化了棕尾别麻蝇幼虫和蛹血淋巴凝集素。以兔红细胞吸附幼虫血淋巴凝集素为抗原制备的抗体、球球蛋白和甲状腺蛋白等三种亲和层析吸附剂纯化得到的幼虫凝集素是相同的,其分子量73kD左右。用甲状腺球蛋白为亲和配基纯化的蛹血淋巴凝集素由二种亚基组成,其分子量分别为30和32kD。幼虫和蛹血淋巴凝集素活性的抑制糖明显不同：乳糖、岩藻糖和N－乙酰半乳糖胺对幼虫血淋巴凝集素活性有抑制作用;而甘露糖胺、半乳糖胺和葡萄糖胺则对蛹血淋巴集素有一定抑制。而且,用兔红细胞吸附幼虫血淋巴凝集素为抗原制备的抗血清对蛹的凝集素活性无交叉反应,表明这两种凝集素是不相同的。虽然本文所纯化的麻蝇蛹血淋巴凝集素的分子量和Komano等报道的麻蝇蛹以及幼虫体壁 伤害诱导的凝集素SPL相同,但其糖的抑制特性有明显差异。     

酶标白桂木凝集素糖蛋白结合特性的分析

采用辣根过氧化物酶 ( HRP)标记白桂木凝集素 ( AHL) ,应用酶联夹心法及糖竞争抑制实验 ,研究 AHL的糖蛋白结合特性 .研究表明 ,AHL能与两种不同类型的糖蛋白结合 ,一类以胃蛋白酶为代表 ,AHL能以高亲和力与胃蛋白酶结合 .其次能与β-乳球蛋白、牛血清清蛋白结合 ,但结合力依次递减 .AHL也能与透明质酸以较高亲和力相结合 .AHL与胃蛋白酶、β-乳球蛋白、牛血清清蛋白、透明质酸的结合受 Me- Gal的强烈竞争抑制 ,亦受 Me- Man\D- Gal\Raf的抑制 .另一类为Con A,AHL与 Con A的结合受 Me- Man的强烈竞争抑制 ,并受 Me- Glc\D- Man\D- Fru\D- Glc的较强抑制 .各种糖的封闭性抑制实验结果与竞争性抑制实验相似 .提示 AHL上存在 O-糖苷键结合位点 .     

半乳糖凝集素糖结合的新模式：一个糖结合域的双重配体结合

半乳糖凝集素家族通过糖识别结构域(CRD)可以专一性识别和结合含β-半乳糖的多糖配体来发挥其生物学功能.到目前发现的CRD对β-半乳糖的识别模式是非常保守的,在结构已知的半乳糖凝集素结构中,一个CRD只能结合一个多糖配体分子.最近,通过对人源半乳糖凝聚素-3 CRD与对硝基TF二糖(TFN)复合物的晶体结构解析首次发现,一个CRD可以同时结合2个TFN分子.与这2个TFN分子有双向结合的残基突变体E165A结构分析显示,一个残基的突变引起的结构上的微小变化会使结合位点2丧失结合糖底物的能力,而位点1的配体结合却不受影响.这表明,结合位点1对糖底物保守的识别和结合是基本的、主要的,而结合位点2对于糖有条件的结合,是额外的、次要的.序列比对和立体化学分析显示,参与新位点2结合的关键残基在其他半乳糖凝集素分子中都是保守的,而它们参与糖配体结合并不常见,表明它们作用的发挥是有条件的.可能在复杂寡聚结构的情况下,如有多重分支结构,双重结合位点将有利于对这类配体分子的辨识和结合,已有一系列研究报道,具有分支结构的寡糖与半乳糖分子的亲和势明显高于单价糖配体,与上述分析相一致.对这类双重位点糖结合的可能生物学意义进行了讨论.     

天花粉凝集素对红细胞补体敏感溶血作用的影响

被激活的补体与红细胞作用产生溶血,补体C_3与其在红细胞膜上的受体反应,是红细胞产生溶血的关键步骤。Mussel提纯了红细胞膜C_3受体,并鉴定其为糖蛋白。近年来,许多人对C_3的组成进行了研究,证明C_3是糖蛋白,推测C_3与红细胞膜上的C_3受体反应时,糖基起主要作用。我们用专一与半乳糖结合的天花粉凝集素与人工补体敏感的红细胞保温,可以降低溶血,同时进一步探讨半乳糖在补体溶血反应中的作用。一材料与方法 1.天花粉凝集素的制备取Sepharose 6B100ml以0.2N HCl浸泡12小时后,换0.02NHCl,55℃,保温4小时,用蒸馏水洗去酸,装柱     

竹叶青蛇毒凝集素的糖结合性质

本文利用竹叶青蛇毒凝集素和去唾流酸的ａ１－酸性糖蛋白之间相互作用的研究系统,对ＴＳＬ的糖结合条件及结合性质作了更为全面深入的研究。研究结果表明,在ｐＨ５－１０的范围内,ＴＳＬ的糖结合活性基本不变,具有较广泛的ＰＨ适应性;ＴＳＬ的温度适应范围较窄,５０℃保温２小时活性便基本更新换代。在简单糖类中,半乳糖是最强的糖结合活性抑制剂。就吡喃型已糖而言,以Ｃ－３和Ｃ－４位置上的取代基的取向最为重要,特别是Ｃ     

蓖麻蚕血淋巴中的凝集素

凝集素是一类蛋白质(或糖蛋白),它们具有凝集细胞的活性,并能够与某种(或某些)糖类专一结合。凝集素现已被广泛地用作研究细胞表面糖蛋白、糖脂的糖链结构以及研究伴随细胞生长和恶性转化时,细胞表面含糖物质变化的探针。另外,凝集素在生物体内的生理意义,也正在引起人们日益广泛的兴趣。     

蓖麻蚕血淋巴中的凝集素

凝集素是一类蛋白质(或糖蛋白),它们具有凝集细胞的活性,并能够与某种(或某些)糖类专一结合。凝集素现已被广泛地用作研究细胞表面糖蛋白、糖脂的糖链结构以及研究伴随细胞生长和恶性转化时,细胞表面含糖物质变化的探针。另外,凝集素在生物体内的生理意义,也正在引起人们日益广泛的兴趣。     

应用凝集素芯片检测肝癌细胞膜表面糖链变化

利用凝集素糖链特异亲和原理构建对细胞膜表面糖链进行即时检测的凝集素芯片体系,检测肝癌发生过程中细胞膜糖链的变化.从H22细胞系、正常小鼠和肝癌模型鼠肝组织中提取细胞进行荧光标记,激光扫描仪检测凝集素位点捕获的细胞,根据凝集素特异亲和性确定细胞膜表面糖表达谱,显微镜下观察捕获细胞的形态.对凝集素芯片捕获细胞的最佳条件进行探讨,用甘露糖抑制试验、流式细胞仪和不同血型红细胞验证了凝集素捕获细胞的特异性.结果显示:正常和肝癌小鼠肝细胞膜表面糖链存在较大差异,正常组只有PSA、DSL、STL、NPL凝集素位点捕获到细胞,实验组只有LTL和DBA位点没有捕获到细胞,提示小鼠肝癌组织细胞膜表面糖链显著增加,细胞膜上唾液酸、乙酰葡萄糖、乙酰半乳糖、甘露糖和半乳糖糖链表达增加,这些糖链及其相关糖蛋白可能在肝癌的发生和发展中起一定作用.该凝集素芯片有较好的稳定性和特异性,可以对细胞膜表面糖链进行动态、即时、通量的检测,为研究细胞膜表面聚糖在细胞发育和癌变等过程中的变化提供了一个技术平台.     

精子膜麦芽凝集素结合糖蛋白抗原某些特性的研究

应用自制的抗牛精子膜麦芽凝集素结合糖蛋白血清,对兔、人、小鼠和仓鼠精子进行了免疫细胞化学定位,结果各种动物精子均呈阳性反应,且以精子顶体区标记最强,与麦芽凝集素亲和细胞化学的标记结果相似。用抗血清处理地鼠精子,再与同种卵子进行体外结合试验,结果精子与卵于透明带的结合受到显著抑制、本实验的结果提示,牛精子膜麦芽凝集素结合糖蛋白抗原具有种间交叉反应性,并可能在精子与卵子透明带结合过程中具有重要作用。     

岩豆(Millettia dielsiana Harms ex Diels)凝集素的分离纯化和性质研究

用猪甲状腺球蛋白-Sepharose 4B作亲和吸附剂,再经Sephadex G-100凝胶过滤,可以从岩豆种子中纯化出岩豆凝集素(MDL)。该凝集素可以凝集人类A、B、O型血细胞和兔红细胞,纯化的MDL凝集兔红细胞的能力可被D-松三糖、邻硝基-苯酚-D-半乳糖和N-乙酰半乳糖胺抑制,甘露糖也有弱的抑制作用。纯化的MDL在PAGE和SDS-PAGE上均显现单一蛋白质染色带,经Schiff’s试剂染色证明为糖蛋白;以酚-硫酸法测得其中性糖含量为6.0％;SDS-PAGE测得亚基分子量为32 000;Sephadex G-100分子筛柱测得其分子量为63 800;等电聚焦电泳显示其等电点为5.1;氨基酸组成分析表明其中Asp、Glu、Phe含量较高,但不含有Pro、Tyr。MDL也是一个强促有丝分裂原,对人外周血淋巴细胞转化率可达81.2％,细胞分裂比率达14.8％。     

植物糖苷水解酶的研究

糖苷水解酶和外源凝集素是研究复合糖类结构和功能常用的两种工具。它们都广泛存在于植物界。我们曾检测和分离了几种植物来源的外源凝集素。本文则对这些材料中几种糖苷水解酶的存在情况作了初步测定,并对糖苷水解酶的相对活性和外源凝集素的糖结合专一性之间是否存在相关性进行了探讨。     

国产兵豆中凝集素的分离纯化与生化特性的研究

从国产兵豆中用葡聚糖凝胶柱层析法分离出一种对人红细胞有凝集作用的凝集素,当其浓度为5—7μg/ml时即可引起血凝。通过电泳分析,分子量、氨基酸组成、糖与金属离子含量的测定,对其纯度进行了鉴定。比较了5种糖对此种凝集素血凝的抑制作用,结果以甲基α-D-甘露糖苷抑制能力最强,D-半乳糖无抑制作用。在交叉亲和免疫电泳中,此种凝集素能对多数原发性肝癌患者血清甲胎蛋白糖基有坟强的结合作用。