纤维素酶水解糠醛渣生产酵母I．纤维素酶的形成和酶解糠醛渣

本实验研究了康氏术霉AS．3．4290(白色突变株)纤维素酶产生和糠醛渣酶解的适宜条件。在稻草粉固体培养基上,纤维素酶产生的最适条件是：稻草粉细度为0．35厘米筛孔的筛下物;培养基含水量67％左右;pH 6.0—6.5;添加氪源是必要的,其中以磷酸氢二铵(4％)和硫酸铵(2％)为佳;培养温度28℃;时间为3天;葡萄糖在浓度低时,对纤维素酶产生有好处,而浓度过高时(大于6％),反而对酶形成有抑制作用。上述培养物直接用于糠醛渣的酶水解,其酶作用的最适条件是：pH5．0,温度50℃,作用时间48小时。葡萄糖和单宁对纤维素酶有抑制作用。     

氨基苄青霉素酰化酶产生菌AS1.586产酶条件的研究

选出了一栋产氨基苄青霉素酰化酶的北京棒状杆菌(Corynebacteria pekinense) AS1.586,并对其产酶条件进行了研究。结果表明,最适培养基成份为(％)：L-谷氨酸钠0．2,酵母膏0.2,磷酸氢二钾0.3,氯化镁0.1,硫酸亚铁0.01,葡萄糖2,硫酸镉0.1,牛肉蛋白胨0.7,起始pH7.0,通气量在250ml 三角瓶中装30ml发酵培养基为最适,于28℃,180转／分的旋转摇床上振荡培养24小时,在此条件下最终酶活力可达5．4u／ml。     

多粘杆菌β-淀粉酶的产生及其性质的初步研究

多粘杆菌(Bacillus polymyxa) As1.546产β-淀粉酶的最适培养基成份(％)为：玉米粉4,豆饼粉2,酵母膏0.5,Na HPO4·12H2O 0．2,NaH2PO4·2H2O 0．03,MgSO4．7H2O 0．05,自然pH(7左右)。250毫升三角瓶装50毫升培养基,旋转式摇床(220转／分),温度为30a℃,培养时间为60小时,每毫升发酵液酶活力可达700单位。酶反应的最适温度为45℃,最适pH为6．5,水解可溶性淀粉生成麦芽糖可达96％。     

苯甲酸1，2-双加氧酶高活力菌株的筛选和发酵条件的研究

从176株细菌中,筛选出苯甲酸1,2-双加氧酶的高活力菌株假单胞菌(Pseudomonas)137。进行了该菌产酶的发酵条件试验。产酶的最适温度为32℃,最适起始pH为6．5—7．0。葡萄糖、麦芽糖和甘油对产酶有明显的抑制作用,苯甲酸钠对产酶有促进作用。氨态氮对菌体生长和产酶是必需的。琥珀酸钠是酶形成的有效诱导物,采用0．1％苯甲酸钠和0．2％琥珀酸钠培养基(pH6．5—7．0),于32℃振荡培养72小时,可获得高活力的苯甲酸1,2-双加氧酶,每克菌体酶活力可达5-8单位。     

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus A_(236)热稳定葡萄糖淀粉酶的纯化及其特性

嗜热真菌ThermomyceslanuginosusA_236在液体培养基中50℃下静止培养14天,粗提酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Toyopearl离子交换层析、Butyl－Toyopearl疏水层析、SephacrylS100凝胶过滤和FPLCMonoQ离子交换层析,得到了凝胶电泳均质的葡萄糖淀粉酶。酶促反应产物经TLC分析为葡萄糖,证明纯化的酶为葡萄糖淀粉酶（EC3．2．1．3）。SDS－PAGE测定其分子量为72,000,不具亚基,PI为4．0,富含Val和Leu。酶反应最适温度和pH分别为70℃和5．0。在pH5．0条件下,酶在60℃保温1h,仍具有原酶活性。酶活性在70℃和80℃的半衰期分别为20min和6min。Ca2+对酶有激活作用,Fe3+、Al3+、Hg2+等金属离子对酶活力有一定的抑制作用。纯酶碳水化合物含量为12．4％。纯酶可水解可溶性淀粉、直链淀粉、支链淀粉、糊精、糖原、麦芽三糖和麦芽糖,其中可溶性淀粉为最适底物。     

高活力β-淀粉酶菌种的选育和发酵条件的研究

产β一淀粉酶的腊状芽孢杆菌(Bacillus cereus)Asl．447,通过紫外线、亚硝基胍和利福平的反复处理诱变,获得一株具有高活力β-淀粉酶的变异菌株M一3,产酶活力从74u／ml提高到5000—7000u／ml。牛肉汁液体培养基成分为：每100ml牛肉汁中加人蛋白胨1g,可溶性淀粉1g,酵母膏0．5g,NaCl 0．5g pH6．0。该变异菌的最适培养条件是：pH6—6．5 30℃48小时。酶的最适反应条件是：温度40℃,pH7 0,pH稳定范围是6—9,酶的抗热性较差,对可溶性淀粉水解率达85％以上。     

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus A236热稳足葡萄糖淀粉酶的纯化及其特性

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus A2a6在液体培养基中50℃下静止培养14天,粗提酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Toyopearl离子交换层析、Butyl-Toyopearl疏水层析、Sephacryl S100凝胶过滤和FPLC Mono Q离子交换层析,得到了凝胶电泳均质的葡萄糖淀粉酶。酶促反应产物经TLC分析为葡萄糖,证明纯化的酶为葡萄糖淀粉酶(EC 3．2．1.3)。SDS-PAGE测定其分子量为72,000,不具亚基,pI为4．0,富含val和Leu。酶反应最适温度和pH分别为70℃和5．0。在pH5．0条件下,酶在60℃保温lh,仍具有原酶活性。酶活性在70℃和80℃的半衰期分别为20min和6min, Ca²⁺对酶有激活作用,Fe³⁺、Al³⁺、Hg²⁺等金属离子对酶活力有一定的抑制作用。纯酶碳水化合物含量为12．4％。纯酶可水解可溶性淀粉,直链淀粉、支链淀粉．糊精、糖原、麦芽三糖和麦芽糖,其中可溶性淀粉为最适底物。     

青霉素酰化酶产生菌的筛选和大肠杆菌AS 1.76产酶条件的研究

为筛选较优的产青霉素酰化酶的菌种,我们从9个属的232株纽菌中选出了19株产青霉素酰化酶的大肠杆菌,其中,AS 1．76和E 110为最好。还对大肠杆菌AS 1.76的产酶条件进行了研究。结果表明,最适的培养基成分是(％)：蛋白胨l,苯乙酸0．2,玉米浆0．3,氯化钠0．5;在250毫升的三角瓶中装30毫升培养基时,通气量正合适：培养基的初始pH以7.0为佳;培养时间15小时。在未加玉米浆的培养基中,少量的Fe2+(5馓克／毫升)对酶形成有刺激作用,过量的Fe2+(大于10教克／毫升)是不利的;在培养基中添加0．3％的玉米浆能降低Fe2+对酶形成毒害作用。     

嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophile)液体发酵产生纤维素酶及酶学性质的研究

探讨了嗜热真菌Chaetomium thermophile产生纤维素酶的液体发酵条件及滤纸酶(FPA)的特性。采用液体发酵培养法,通过对碳源、氮源、培养时间、培养基的起始pH值及产酶过程中pH值和蛋白质含量变化的研究发现：在2％纤维素、1％可溶性淀粉为碳源;2．0％KNO3 0．2％酵母粉为氮源;起始pH值为6．5,50℃下培养9d后,各种酶活最高。发酵过程中,pH值和蛋白质的含量均在前3d下降,后升高。FPA的反应最适温度和pH值分别为60℃和5．5～6．0;且具有较高的热稳定性和DH稳定性。     

产气气杆菌甘油脱氢酶诱导形成的培养条件

筛选出一株产气气扦菌(Aerobacter aerogenes)AS1．490，经甘油诱导培养能在细胞内形成NAD—甘油脱氢酶，每毫升培养液菌体含1—1．4单位酶活力。酶形成的最适发酵条件研究表明：培养基中含3％甘油时酶形成量最高。添加少量葡萄糖或果糖对酶形成有促进作用。无机氮源——铵盐对酶形成是必需的，以硫酸铵最佳，加入0．2％硫酸铵酶活力最高，添加硫酸铵到0．3％或0．4％时，不再增加生物量，酶量略有下降。其他铵盐效能依次为氯化铵、硝酸铵、磷酸氢二铵等。单加有机氮源不利产酶。酶形成的培养基最适起始PH为7．0，生物量亦最高。酶形成的最适温度为30℃，但在20—40℃范围内，生物量随温度的升高而增加。用250ml三角瓶以35mL装液量最适。在上述最适条件下，发酵培养18小时后，细胞生长不再增加。培养至26小时，培养基中甘油基本上完全消耗，这时酶形成量达到最高峰，以后随时间延长酶形成量迅速下降，在42小时后几乎完全消失。     

球孢白僵菌Bb174固态发酵产几丁质酶产酶及酶学特征研究

对球孢白僵菌(Beauveria bassiana)Bb174产几丁质酶进行了固态发酵条件及酶学特征的研究．结果表明,以4：1麸皮：蚕蛹粉、蛋白胨1g·L^-1作为产酶最适培养基,在7．5g培养基中接种3ml液态种子,自然pH下28℃培养2d,酶活可达最高,为126U·g^-1(干培养基)．粗酶液的最适反应温度为40℃,最适反应pH5．0,在30-70℃保温1h,得半失活温度48℃．在30--40℃、pH4～6范围内,酶的性质最稳定．根据Lineweaver-Burk作图法,得到该酶的动力学参数Km为0．52mg·ml^-1,Vm为0．7△E680·h^-1．     

嗜碱菌碱性淀粉酶的研究

分离自内蒙古自治区察汗淖碱湖的嗜碱菌株No．1 0-1,好气,运动,细胞杆状,革兰氏染色阴性。该菌生长pH范围为8．0—13．0,最适生长pH1 0.0-ll.0,为专性嗜碱菌。在含淀粉培养基中产生胞外碱性淀粉酶,最适产酶条件是： 碳源为土豆淀粉,氮源为复合蛋白胨,Nacl浓度为2．O％,Na2CO3浓度为1．0—1．5％(pH9．9-10．5)。 酶的最适反应pH为10．0,稳定pH8．0,最适反应温度为50℃。作用于直链淀粉其水解产物为β-构型,主要产物是麦芽糖,其次为麦芽三糖、葡萄糖和麦芽四糖。嗜碱菌No.10-1产生的酶为碱性β-淀粉酶。     

一株产碱性蛋白酶菌株的选育及其发酵条件的研究

从土壤中分离到的553株芽孢杆菌中选出一株产蛋白酶活力较高菌株,经紫外线和亚硝基胍诱变,获得一株产碱性蛋白酶的菌株,酶活力可达10000u／m1,此菌株经鉴定为地衣状芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。适宜的发酵条件：培养基由6％玉米粉(山芋粉或葡萄糖),4％豆饼粉(或其水解液),Na,HP0．·12Hz0 0．4％,KH：P0·0．03％,Na zc0,0．1％组成,pH7．O,37℃旋转摇床振荡培养{2一q6小时。酶作用的最适条件：60℃,pH9．0一10．5,在pH6．0—10．5范围内稳定。酶受DFP抑制。     

金龟子绿僵菌固态发酵产壳聚糖酶

对金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）AS3．4606产壳聚糖酶进行了固态发酵条件优化及酶学部分特征的研究。正交实验结果表明,以麸皮为碳源,日本根霉菌丝体粉末为氮源,在起始pH5．0,m（碳）：m（氨）为1：4,m（干重）：m（液体）为1：1．4,27℃下培养120h,壳聚糖酶活性可达35．08U／g（干培养基）。粗酶液的最适反应温度为40℃,最适反应pH为5．0,酶在pH5．0～6．0条件下稳定性最高。该酶不能水解固体甲壳素和纤维素粉末,最适底物为胶体壳聚糖。     

大肠杆菌(Escherichia coli A S 1.357)L-天门冬酰胺酶的研究I. L-天门冬酰胺酶高产菌株的筛选

从87株细菌中筛选取得L-天门冬酰胺酶的高产菌株大肠杆菌(Escherichia coli AS 1.357)。采用7.5—10％玉米浆培养基(pH7.0一7.5),于37℃振荡培养8小时,可获得高活力的L一天门冬酰胺酶(4．6单位／毫升)。在我们的实验条件下,葡萄糖不利于L-天门酰胺酶的形成．     

醋酸钙不动杆菌产生的耐热碱性脂肪酶的研究

从福建省福州市郊区土壤中分离筛选到一株活力强的作用温度高的碱性脂肪酶野生型菌株：醋酸钙不动杆菌F-1903。该菌产酶培养基组成(％)：大豆粉2.O、玉米浆1.0、糊精1.0、磷酸氢二钾0．5、硝酸钠0．5。产酶最适条件：发酵培养基起始pH9.0,温度26℃,周期2。小时。酶作用最适温度54℃,最适pH9．2。Ca2+件对酶有激活作用,EDTA有抑制作用。     

脂肪酶产生菌Geofrichum sp. AS 2.1135产酶条件及酶一般性质的研究

在92株能同化油的地霉属菌株中,Geotrichum sp. AS2．1135菌株产脂肪酶活力为50—60u／ml,对其产酶条件的研究表明,不饱和长链脂肪酸和油类有利于酶的形成。在4％豆饼粉作为有机氮源的培养基中,加入0．2％尿素,酶活力显著增加,酶活达150u／ml。用聚乙二醇橄榄油乳化系统测定酶的作用最适pH为8．0,最适温度为4O一42℃。在pH4一9时5℃下存放24小时,或在pH 5和8时45℃保持15分钟,酶活力不变。     

拟康氏木霉(Trichoderma psudodoningii)UV III产纤维素酶液体发酵研究

以拟康氏木霉(Trichoderma psudodoningii)TH为出发菌株,经紫外诱变荻得一抗高浓度葡萄糖阻遏突变株uV III,其液体发酵最适产酶培养基为(w/V)豆皮粉3%,硝酸铵0.6%,磷酸二氢钠0.65%,硫酸镁0.25%,氯化钙0.15%,pH5.0;最佳发酵条件为30℃,125r/min发酵7d CMCase活力可达103.55 IU/mL,滤纸酶活可达5.51 IU/mL,β一葡萄糖苷酶活可达0 96IU/mL,分别比出发菌株TH提高了1.40、2.34、0.60倍.     

假丝酵母尿酸酶形成条件

选出了一株产尿酸酶的产朊候丝酵母(Candida utilis)AS2．117。此菌株尿酸酶形成条件的研究表明：尿酸、黄嘌呤和鸟嘌呤对酶形成起诱导作用;玉米浆对菌株生长和酶形成起十分重要的作用;蔗糖、葡萄塘、D-甘露糖和果糖是酶形成的适合碳源;生物素对酶产生有促进作用;在含有玉米浆培养基中加入无机氮源对产酶无作用,添加有机氮略增加产酶量。尿酸酶形成最适培养基组成为(％)：蔗糖;,玉米浆3,尿酸0．1,蛋白胨0．1,生物素0．05,KCI0．1,NaCl 0.1。最适pH为6．2。在250ml三角瓶中装30ml培养基为最适。在200r／min的旋转摇床上25℃振荡培养21h,在此条件下最终酶活力可达0．6u／ml。     

聚半乳糖醛酸酶高产菌的产酶条件研究

通过单因素及正交试验对米曲霉（Aspergillus orza）C491产生聚半乳糖醛酸酶的发酵条件进行了优化。该菌株的摇床发酵滤液以桔子果胶为底物时酶活力可达344．8U／mL。产酶最适培养基组成为：麦芽汁（糖度6％）中添加6％桔皮粉,2％硫酸铵（w/v）。最适培养条件：起始pH4（灭菌前）,30℃,r/min,培养112h。Tween80可以促进C－491产酶。