流行性出血热病毒灭活后免疫原性的初步研究

本文用较高感染滴度的Vero-E6细胞和小白鼠乳鼠脑病毒,经56℃1小时加温或1:2,000福尔马林灭活后,免疫成年小白鼠、黑线姬鼠和长爪沙鼠。结果Vero-E6细胞培养的病毒均未使动物产生可测出的抗体,而小白鼠乳鼠脑病毒则获得良好的抗体阳转率(92％)。同时证明,热灭活较福尔马林灭活者好,加佐剂较不加佐剂好。     

流行性出血热灭活疫苗加强免疫效果观察

流行性出血热(EHF)灭活疫苗对初免一年或一年半后的25名志愿者加强免疫1针,未发现局部和全身副反应,可使初免后中和抗体阴性者或初免后阳性转阴者,中和抗体全部阳转,且中和抗体几何平均滴度与初免相比有成倍的增长。表明此疫苗的初免是有效的,即使初免后未检出中和抗体,但对EHF病毒抗原仍具有强烈的回亿反应,因而EHF灭活疫苗加强免疫是十分必要的。     

流行性出血热灭活疫苗人体试验的反应观察

由流行性出血热(EHF)病毒浙_(10)株感染沙鼠肾细胞,经0.05％β-丙内酯灭活研制成的EHF灭活疫苗,于4℃放置7个月后,对10名志愿者免疫三针(0天、7天、28天各注射1ml)。结果免疫者的局部和全身均无任何副反应。首针免疫后第28天,血清用反向被动血凝抑制试验(RPHIA)、ELISA和间接免疫荧光试验(IFA)检测EHF抗体,分别有9人、9人和8人阳转,第42天,血清用三种方法检测抗体均全部阳转。空斑减少中和试验(PRNT)于第28天有4人阳转,第42天有9人阳转。上述结果表明,此疫苗对人体有较好的的安全性和免疫原性。     

流行性出血热病毒核酸的提取

本文报告流行性出血热R22和A9株病毒培养,同位素标记及核酸提取的初步研究,並获得了该病毒核酸的3个片段即L、M、S、分子量分别约为:3.8、1.9和0.86×10~5道尔顿,不论用20～70％蔗糖密度梯度离心提纯的病毒,或用30％蔗糖垫层离心的粗制病毒,均获同样结果,但多数情况下,用蔗糖密度梯度离心时,除病毒峰外,还发现主要由细胞组份(即线粒体和核糖体等)组成的另一峰,并经常影响病毒RNA的提取,对如何获得纯净病毒及其核酸进行了讨论。     

流行性出血热病毒的细胞融合作用

我们的实验结果揭示流行性出血热病毒(EHFV)在酸性条件下可导致感染细胞发生融合,细胞间隙消失,细胞界限不清,细胞和细胞连在一起,形成多核的巨细胞体,姬姆薩染色比未融合细胞浅。融合液(Eagle’s基础培养液,含0.2％BSA,20mmol/L HEPES),用1.0NNaOH调pH至5.0—6.0时,细胞融合最甚,几乎所有的感染细胞都     

感染流行性出血热病毒家兔病毒血症的研究

本文采用流行性出血热病毒114株实验感染家兔,用免疫荧光法及病毒培养技术研究了家兔病毒血症动态,发现感染后第6天,病毒抗原首先在淋巴细胞及单核细胞中出现;次日,亦可见于粒细胞中,第10—12天的抗原反应较强,第15天则明显减弱至消失。而在红细胞及血小板中始终未见明显的抗原反应。从感染后第3—13天的血浆中分离出病毒;感染后第6—15天,外周血单核细胞病毒分离阳性。结果表明,流行性出血热病毒在接种局部增殖后,侵入血液,并在白细胞中复制增殖,可能使病毒随血循环播散至全身其它组织脏器,造成因血传播引起的靶器官感染。     

不同来源的肾综合征出血热病毒对Vero细胞的致病变作用

前文报道,肾综合征出血热病毒76-118株能使Vero细胞产生病变。本文报道76-118株和另11株不同来源的肾综合征出血热病毒(H537、A9、H5、R178、HB55、R22、Z10,沟3、L99、A16和J10)对Vero细胞的致病变作用(CPE )。其中除沟3株外,大部分毒株在感染Vero细胞后的第一代即可见明显的CPE。CPE的特点与76-118株相似,主要是感染细胞粘聚、融合,形成网状结构。CPE能被特异性抗HFRS病毒血清和型特异性单克隆抗体所中和抑制,但不能被特异性抗呼肠孤病毒Ⅲ型免疫血清所中和抑制。HFRS病毒对Vero细胞的致病变作用,对进一步研究HFRS病毒的某些生物学特性及实验方法等均有重要意义。     

人轮状病毒ZTR-5株灭活疫苗的制备及小鼠血清免疫学评价

目的: 研究人轮状病毒ZTR-5株灭活疫苗的制备及在实验小鼠中的免疫原性评价。方法: 轮状病毒ZTR-5株在MA104细胞上经蚀斑筛选纯化后,获得单一克隆接种至Vero细胞上适应性培养,免疫荧光定量检测病毒的感染性滴度,对收获的病毒液进行离心、超滤、分子筛纯化,甲醛灭活,抗原定量检测Al(OH)₃吸附制备的实验性疫苗。使用不同剂量(8EU、32EU、128EU、256EU)经肌内注射免疫小鼠,共免疫三次,免疫间隔2周。采用间接ELISA法检测血清特异性抗体效价。 结果: 通过蚀斑纯化,筛选得到一株纯化的病毒株ZTR-5纯-1,在Vero细胞上适应性后感染性滴度达7.35logCCID₅₀/ml;大量培养收获的病毒原液滴度为7.57logCCID₅₀/ml,制备获得轮状病毒样品抗原含量为2 560EU/ml;经肌内注射,初次免疫后,所有剂量组动物均获得抗体阳转,阳转率为100%;第一次加强免疫后,各组血清特异性抗体水平均明显增高,免疫剂量为128EU和256EU的两组小鼠血清抗体效价均达1∶10 240;第二次加强免疫后,各剂量组(8EU、32EU、128EU、256EU)血清抗体效价依次达1∶5 120,1∶7 456,1∶14 481.54,1∶14 481.54。 结论:人轮状病毒ZTR-5株可在Vero细胞上稳定增殖,所制备的疫苗具良好免疫原性,用128EU/2次免疫即可获得良好的免疫效果。     

EHF灭活疫苗扩大人体试用的效果观察

流行性出血热(EHF)沙鼠肾细胞灭活疫苗,经75名自愿者扩大试用,未发现不良反应。中和抗体阳转率达70.6～96.7％,4℃保存14个月的疫苗,仍有较高的中和抗体阳转率,再一次证明此疫苗是安全有效的,且有良好的稳定性。接种程序为0、7、28天内三次免疫与0、28、60天内三次免疫无明显差别。皮下接种佐剂苗产生的中和抗体滴度高于肌肉接种的佐剂苗和疫苗。     

肾综合征出血热病毒糖蛋白的提纯和鉴定

以感染肾综合征出血热病毒(HFRSV)的Vero E6细胞为材料,用免疫亲和层析结合制备聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)从感染细胞中提纯了HFRSV两种糖蛋白。先用免疫亲和层析从感染细胞的粗制抗原中获得含有四种蛋白的混合液,用[~3H]-氨基葡萄糖在感染细胞中标记病毒糖蛋白,观察到[~3H]-氨基葡萄糖只结合入78K和57K的病毒蛋白。再用制备SDS-PAGE从HFRSV混合液中提纯78K和57K两种蛋白。实验证明这两种糖蛋白均具中和抗原决定簇,57K的糖蛋白尚具血凝活性,初步鉴定表明这两种糖蛋白相当于文献报道的HFRSV G_1和G_2。     

流行性出血热(EHF)双价纯化灭活疫苗——I 期临床观察

根据卫生部药审(91)特申体第02号文件,本品纯化灭活双价疫苗92年完成了Ⅰ期人体反应及血清学效果观察。91001批双价疫苗以0,1,2月和0,14,35天程序免疫,91002批以0,1,2月程序免疫,各接种15人。接种后未出现任何不良反应,与Ⅰ型,Ⅱ型单价疫苗相同,是安全可靠的。两种免疫程序,二针次免疫后皆能产生较高免疫抗体,接种后半年仍保持一定抗体水平。中和抗体(PRNT)均在1∶10～1∶20,ELISA1∶478～1∶549(GMT),阳转率100％,再次证明本型纯化疫苗安全有效,并具有较高免疫活性,本型疫苗也可采用二针次(0,1月),总量2ml免疫。     

胶州市2001—2010年肾综合征出血热流行病学分析

对胶州市2001—2010年肾综合征出血热疫情资料进行了描述性流行病学分析。2001—2010年胶州市肾综合征出血热年发病率3.34/10万～11.96/10万,近三年呈逐年下降趋势。男、女性别比为2.91∶1;以青壮年发病为主,40～49岁组发病率为最高(22.69/10万),10～19岁组发病率最低(0.26/10万);农民所占比例最高,其次为工人。全市发病率最高的是东部镇。肾综合征出血热严重危害胶州市人民健康,应列为防治重点,在抓好爱国卫生健康教育的同时,需进一步扩大疫苗接种范围。