雷公藤的杀虫作用研究与应用

卫矛科植物雷公藤(Tripterygium wilfordli Hook)是我国著名的杀虫植物。文章对雷公藤的杀虫活性、主要有效成分、作用机理及田间药效4个方面的研究与应用进行综述。雷公藤对多种昆虫有毒杀、拒食、麻醉、生长发育抑制和种群抑制作用;雷公藤定碱、雷公藤次碱、雷公藤春碱、雷公藤吉碱、雷公藤嗪碱、雷公藤新碱和雷公藤甲素、雷公藤内酯酮是其主要杀虫活性成分;雷公藤生物碱作用于昆虫的神经系统和中肠肠壁细胞,Na+,K+-ATP酶可能是雷公藤甲素的靶标之一;雷公藤还具有较好的田间防效。最后,对雷公藤作为杀虫植物资源的开发利用前景和今后的研究方向作了展望。     

云南红豆杉内生放线菌TAR11活性代谢产物的初步研究

目的：初步研究从云南红豆杉植株根部筛选到的一株抗植物病害的内生放线菌TAR11的活性代谢产物性质。方法：以枯草芽孢杆菌为指示菌、以抑菌活性为指标,测定TAR11发酵液的最小抑菌浓度;用不同温度、pH值处理,了解活性物质的稳定性;用有机溶剂对活性物质萃取和溶解,并用纸层析对活性物质进行初步分类。结果：TAR11发酵液抗菌物质的最小抑菌浓度为0．78％,对温度敏感,在酸性和中性条件下稳定,可被三氯甲烷萃取,能溶于水、甲醇、乙醇、丙酮、乙醚。结论：低浓度的放线菌TAR11代谢产物能强烈抑制枯草芽孢杆菌活性,经纸层析实验初步鉴定为一类碱性抗生素。放线菌TAR11有望开发成为新一代生物药物。     

30种药用植物提取物杀虫杀菌活性研究

采用微量点滴法和载毒叶片饲喂法测定30种药用植物乙醇提取物对粘虫3龄幼虫的触杀、胃毒以及拒食活性。结果表明,供试样品在50mg·mL-1浓度下均无明显的触杀或胃毒作用,但卡瓦胡椒和川陈皮对试虫有一定的拒食活性,其中卡瓦胡椒24h拒食中浓(AFC50)为4.12mg·mL-1,48h为9.12mg·mL-1。采用抑制菌丝生长速率法和抑制孢子萌发法测定离体杀菌活性的结果表明,供试样品在2mg·mL-1浓度下,卡瓦胡椒和厚朴对供试病原菌均有较强抑制作用。毒力测定结果表明,卡瓦胡椒对玉米大斑病菌、番茄灰霉病菌、小麦根腐病菌、油菜菌核病菌4种病原真菌菌丝生长抑制的有效中浓(EC50)分别为108、258、290、205mg·L-1,厚朴分别为208、331、345、408mg·L-1;卡瓦胡椒对玉米大斑病菌、玉米小斑病菌、烟草赤星病菌3种病原真菌抑制孢子萌发的有效中浓(EC50)分别为155、195、268mg·L-1,厚朴则分别为151、242、241mg·L-1。根据以上结果,我们认为卡瓦胡椒和厚朴的乙醇提取物具有较高的杀菌活性,其有效成分值得进一步研究。     

拟黄花乌头中生物碱的杀虫活性研究

为探索拟黄花乌头 Aconitum anthoroideum DC. 作为生物农药的应用价值,以拟黄花乌头整株为研究对象,在活性跟踪的基础上,综合应用硅胶柱层析、ODS、Sephadex LH-20等方法对拟黄花乌头甲醇粗提物进行分离纯化,从中分离得到了4个生物碱类化合物,分别为4-hydroxynicotinic acid methyl ester (1)、Ranaconitine (2)、Lappaconitine (3)、13-hydroxylappaconitine (4),其中4-hydroxynicotinic acid methyl ester为首次从天然产物中分离得到。采用点滴法测定4个化合物对褐飞虱 Nilaparvata lugens Stal和白背飞虱Sogatella furcifera Horvath的触杀活性,结果表明4种化合物对褐飞虱和白背飞虱具有显著的触杀活性,处理后48 h的LD50 分别为0.26~0.38 μg/头、0.25~0.33 μg/头。研究结果为进一步研究拟黄花乌头中的杀虫活性成分提供基础数据。     

一株放线菌次生代谢产物化学成分的研究

目的：研究放线菌这类重要的可再生资源的次生代谢产物的化学成分。方法：通过对一株采集于云南西部土壤放线菌的发酵培养,发酵液经TLC分离纯化、高效液相分析检测、核磁共振和质谱测定。结果：从其次生代谢产物中分离获取了8个化合物,其中4个化合物的结构已经初步确定。结论：4个化合物中两个具有抗肿瘤活性,两个具有抑菌活性。     

天然产物抗病毒活性成分的研究进展

按照化学成分结构类型的不同,将近五年来具有抗病毒活性的天然产物研究近况做一综述,旨为以天然产物为研究对象,大力开展开发抗病毒药物提供依据。     

除莠活性链霉菌的系统发育研究及其活性产物分析

从云南地区土壤中分离到一株具有除莠活性的放线菌（Actinomycetes）,对其产生的活性物质进行了分离、纯化及分析。从该菌株的发酵液中获得了有除莠活性的黄色结晶,薄板层析的结果表明,该结晶为多组分混和物,且每一组分均具有除莠活性。通过红外分析对其组分作了初步鉴定。同时对该菌株进行了形态、化学及系统发育学研究,根据16S rDNA全序列构建了系统发育树,结果表明此菌株应属于链霉菌属（Streptomyces）,同时具有耐低温和耐盐的特性。     

S-159-06菌株活性产物对植物病原菌的抑菌谱及拮抗机理初探

对S-159-06菌株活性产物的抑菌谱及其拮抗机理作了初步研究,结果表明：S-159-06活性产物具有较广的抑菌谱,对多种病原真菌和细菌具有较好的抑制作用;S-159-06活性产物能强烈抑制病原菌菌丝的生长和孢子的萌发,可引起病原菌菌丝扭曲,菌丝膨大成串珠状,分枝增多,分枝顶端膨胀后细胞壁破裂,原生质外溢,产生溶菌作用;使分生孢子数减少,孢子萌发畸形,萌发率降低;在温室条件下,S-159-06活性产物不仅能阻止番茄灰霉病菌菌丝的入侵,而且在植物体内有内吸作用,对已侵入的菌丝有较好的治疗作用。     

青霉TS67菌株活性产物的抗真菌作用

本文初步探讨了青霉TS67(Penicillum sp.)的发酵活性产物对植物病原真菌的抑制作用机理,实验结果表明,用其50%的发酵液分别处理玉蜀黍平脐蠕孢菌(Bipolarismaydis)和大豆尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)120 h后,菌丝生长的抑制率分别为77.78%和70.30%,对孢子产生的抑制率分别达58.8%和73.5%:同时发现用50%发酵液处理病原茵的无性繁殖孢子12 h后,孢子萌发抑制率分别达78.3%和62.O%.经显微镜观察抗菌活性物质处理后的菌丝体,发现菌丝体表面瘤状畸形、菌丝生长顶端不规则膨胀、内部发生原生质浓缩,初步推测青霉TS67主要通过影响植物病原真菌的细胞壁而实现抑制作用.     

藁本提取物杀虫活性初步研究

分别采用点滴法、三角瓶熏蒸法和小叶碟添加法测定了藁本（Ligusticum sinense Oliv．）提取物对粘虫（Mythimna separata Walker）和小菜蛾（Plutella xylostella L．）幼虫的触杀、熏蒸和拒食活性,同时也测定了对黄粉虫（Tenebrio molitor L．）蛹的生长发育有抑制作用,并对其致毒症状、作用方式进行了初步探讨。结果表明,不同溶剂提取物中,丙酮冷浸提取物对粘虫毒杀活性较高;其丙酮提取物对粘虫和小菜蛾3龄幼虫均具有较高触杀及熏蒸活性,24h触杀LD50分别为0．062 3mg干样／头和0．150 2mg干样／头;12h熏蒸LC530分别为24．3422 mg干样／L和10．601 5mg干样／L;对黄粉虫（Tenebrio molitor L）蛹的生长发育有抑制作用,ID50为6．5157mg干样／头;粘虫中毒后先后表现出兴奋、痉挛、麻痹等症状,最后死亡;对黄粉虫蛹生长发育的抑制作用类似于保幼激素活性。     

低磷胁迫对雷公藤幼苗形态指标及生物量的影响

采用土培的方法,研究了磷(P)胁迫对雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)1年生和3年生幼苗在一个生长季内形态指标及生物量的影响。结果表明:低P处理显著抑制了雷公藤幼苗地上部分的增长,而对地下部分的影响较小,导致根冠比的增加,在相同P水平处理下,3年生雷公藤的根冠比高于1年生的;低P胁迫显著影响了雷公藤的生物量积累及分配,雷公藤幼苗总生物量及1年生雷公藤细根生物量占根系生物量的比例下降,根系生物量在总生物量中的比例及3年生雷公藤细根生物量在根系生物量中的比例上升。这表明3年生雷公藤对P逆境有更好的适应机制,对低P林地套种雷公藤的苗龄选择有参考价值;雷公藤幼苗的株高、最长枝均与生物量呈显著的正相关,可作为耐低P雷公藤良种选育中优良性状的指标。中轻度的P胁迫不显著影响根系生物量的积累,维持较大比例的根系是雷公藤适应低P胁迫的主要策略。     

茉莉酸甲酯处理雷公藤悬浮细胞的基因差异表达分析

以不同浓度茉莉酸甲酯(MeJA)为诱导子对雷公藤悬浮细胞进行处理,采用cDNA-AFLP技术对差异表达基因进行研究。结果表明,茉莉酸甲酯在50～400μmol/L浓度范围内对雷公藤悬浮细胞总碱的积累呈抑制作用。茉莉酸甲酯处理后,分析筛选出了19个雷公藤悬浮细胞内差异表达的基因。通过与NCBI蛋白质数据库比对,7个片段的功能得以预测,涉及植物细胞的信号转导、转录调控和能量代谢等。这些结果对今后利用生物技术手段提高雷公藤生物碱含量奠定了一定基础。     

雷公藤AP2/ERF转录因子基因的克隆与分析

该研究以雷公藤发状根为材料,根据雷公藤根转录组数据设计引物,采用RT-PCR方法克隆得到2个雷公藤AP2/ERF转录因子,分别命名为TwAP2/ERF1基因(GenBank登录号:GAVZ01042389.1)和TwAP2/ERF2基因(GenBank登录号:GAVZ01016765.1)。TwAP2/ERF1基因含有一个525bp开放阅读框(ORF),编码186个氨基酸;TwAP2/ERF2基因的ORF为789bp,编码262个氨基酸;2个基因编码的蛋白质均为亲水性蛋白质。系统进化分析表明,TwAP2/ERF1与油桐(Vernicia fordii)AP2/ERF(APQ47444.1)和木油桐(Vernicia montana)AP2/ERF(APQ47365.1)相似性较高,TwAP2/ERF2与毛果杨(Populus trichocarpa)AP2/ERF(XP_002304640.1)和樱桃(Prunus pseudocerasus)AP2/ERF(ALD84477.1)相似性较高。雷公藤发状根经MeJA诱导后,TwAP2/ERF1基因的相对表达量明显提高,并于处理后9h达到最高值,为对照表达量的16.77倍;而MeJA处理对TwAP2/ERF2基因的表达表现出抑制作用,但于处理后48h相对表达量有所提高。研究表明,雷公藤TwAP2/ERF1转录因子响应MeJA早期诱导正调控,推测其可能参与调控雷公藤植物次生代谢产物的生物合成,该研究结果为阐明雷公藤次生代谢物质的生物合成调控与利用现代生物技术提高雷公藤植物细胞中次生代谢物质的含量奠定了基础。     

内生真菌和内生细菌接种对雷公藤生长和次生代谢产物积累的影响

为探究内生真菌与内生细菌对雷公藤(Tripterygium wilfordii)的生长和次生代谢产物积累的相互作用,用内生真菌NS33、NS6和内生细菌LG3、LY1单独或跨界联合接种雷公藤,对雷公藤的生长和雷公藤甲素、雷公藤红素合成进行了研究。结果表明,单独或混合培养的菌株具有分泌铁载体、吲哚乙酸(IAA)和溶磷能力,对种子萌发、芽伸长和根系活力有显著促进作用。接种菌株NS33、NS6、NS6-LG3和NS6-LY1均显著促进了雷公藤组培苗的生长。单独或联合接种菌株均能显著提高雷公藤组培苗雷公藤甲素和雷公藤红素的积累,其中NS33-LG3和LG3的作用最显著。菌株NS33与LG3能够协同促进IAA的分泌、小麦幼苗根系活力和雷公藤红素的积累;菌株NS6与LY1协同提高了雷公藤组培苗的高度、质量和雷公藤红素的积累。因此,内生真菌与内生细菌联合接种对雷公藤生长和次生代谢产物积累具有一定的协同效应,显示出实际应用潜力。     

Effects of triptolide from Tripterygium wilfordii on ERα and p53 expression in two human breast cancer cell lines

The aim of the study was to discover possible differential cytotoxicity of triptolide towards estrogen-sensitive MCF-7 versus estrogen-insensitive MDA-MB-231 human breast cancer cells. Considering that MCF-7 cells express functional Estrogen receptor α (ERα) and wild-type p53, whereas MDA-MB-231 cells which are ERα-negative express mutant p53, the anti-proliferation effect of triptolide on MCF-7 and MDA-MB-231 cells were examined, the apoptotic effect and cell cycle arrest caused by triptolide were investigated, ERα and p53 expression were also observed in this paper. The results showed that the anti-proliferation effects were induced by triptolide in both cell lines. But the value of IC₅₀ in MCF-7 cells for its anti-proliferation effect was about one tenth of that in MDA-MB-231 cells, which indicated that the effect is more potent in MCF-7 cells. Condensed chromatin or fragmented nuclei could be found in MCF-7 cells treated with only 40 nM triptolide but in MDA-MB-231 cells they couldn’t be observed until the concentration reached to 400 nM. Triptolide induced significant S cell cycle arrest along with the presence of sub-G0/G1 peak in MDA-MB-231 cells, whereas there was only slightly S cell cycle arrest on cell cycle distribution in MCF-7 cells. The role of p53 in two breast cancer cells was examined, the results showed that the mutant p53 in MDA-MB-231 cells was suppressed and the wild-type p53 in MCF-7 was increased. Moreover, triptolide could down regulate the expression of ERα in MCF-7 cells. The results showed that triptolide is much more sensitive to ERα-positive MCF-7 cells than to ERα-negative MDA-MB-231 cells, and the sensitivity is significantly associated with the ERα and p53 status.     

雷公藤提取物中主要物质基础及其抗肿瘤活性研究北大核心CSCD

为进一步阐明雷公藤中的主要物质基础,并评价其抗肿瘤活性。该研究采用柱层析、HPLC等技术,对雷公藤提取物进行研究。结果表明:(1)从雷公藤95%乙醇提取物中分离得到12个化合物,根据理化性质及波谱数据鉴定各化合物的结构分别为α,β-amyrenone(1)、3β-acetoxyolean-12-en-28-oic acid(2)、antriptolactone(3)、ω-hydroxypropioquaiacone(4)、3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-propenal(5)、3-methoxy-4-hydroxy phenylethanol(6)、vanillin(7)、3,4,5-三甲氧基苯酚(8)、对羟基苯甲酸(9)、对羟基苯甲醛(10)、vanillyl alcohol(11)、2,6-dimethxy-1,4-benzoquinone(12)。其中,化合物1、2、5、12为首次在该属植物中分离得到。(2)采用噻唑蓝(MTT)法对12个化合物进行抗SH-SY5Y细胞株、K562细胞株和Hel细胞株3种肿瘤细胞系细胞增殖活性的筛选,并对活性较好的化合物12进行Hoechst荧光染色和促凋亡作用的检测发现,化合物2、3、5、12具有一定的抗肿瘤活性,其中化合物12的抗肿瘤活性最为显著(SH-SY5Y细胞、Hel细胞、K562细胞的IC_(50)值分别为35.6、14.3、28.8μmol·L^(-1))。该研究结果进一步丰富了雷公藤的化学成分,发现了1个具有明显抗肿瘤活性的单体物质,为雷公藤的进一步开发提供了科学依据。     

黔产昆明山海棠化学成分及其抑菌活性研究

该研究采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、半制备型高效液相色谱和重结晶等方法分离纯化,从黔产昆明山海棠乙醇提取物中分离得到11个化合物,并采用96孔板微量稀释法对化合物进行抑菌活性测定。结果表明:利用NMR,MS等现代波谱技术以及化合物的理化性质并结合参考文献分别鉴定为3-O-乙酰基齐墩果酸(1),雷酚萜(2),3-氧代齐墩果酸(3),β-谷甾醇(4),木栓酮(5),β-谷甾醇棕榈酸酯(6),雷公藤红素(7),大黄素(8),雷公藤内酯甲(9),雷藤二萜醌B(10),ent-kauran-16β,19-diol(11)。抑菌活性结果显示,化合物3、7和8具有较好的抑菌作用,MIC值为2~16μg·mL-1。其中,化合物6、11为首次从该植物中分离得到,化合物11为首次从雷公藤属植物中分离得到,且首次发现了化合物3、7对绿脓杆菌和青枯菌具有明显的抑制作用。     

撕裂蜡孔菌(Emmia lacerata)SR5抑菌特性及生防潜力评价

【背景】撕裂蜡孔菌(Emmia lacerata)是一种在世界范围内广泛分布的白腐真菌,对植物病原真菌有较好的抑制作用,可作为生防真菌进行开发和利用。【目的】对撕裂蜡孔菌SR5的抑菌能力和胞外产铁载体能力进行测定,挖掘其生防潜力。【方法】采用平板对峙法检测SR5对9种植物病原真菌的抑菌能力,并通过不同浓度的发酵原液测定真菌胞外代谢物的抑菌效果;结合铬天青S(chrome azurol S, CAS)检测法测定真菌产铁载体能力,明确SR5抑菌特性。【结果】SR5以过度生长的方式快速竞争营养和生存空间,拮抗9种植物病原真菌,抑菌率为23.7%–62.7%,对可可毛色二孢(Lasiodiplodia theobromae)的拮抗等级为Ⅳ级,而对其余8种病原真菌的拮抗等级为Ⅲ级,其中对香港丽赤壳(Calonectria hongkongensis)和间座壳(Diaporthe sp.)抑菌效果最佳;CAS检测法表明SR5能产生分泌型铁载体,产铁载体能力中等,最高铁载体活性单位(siderophore unit, SU)为44.1%。【结论】SR5以过度生长方式快速竞争营养和生存空间,而且以分泌...     

青稞HvBAS1基因的克隆及表达分析

细胞色素P450单加氧酶(CYP450)是参与植物代谢的最大酶家族,其中CYP734A亚家族成员广泛参与植物激素油菜素类固醇(BRs)的失活。该研究以青稞农家品种‘肚里黄’幼苗为实验材料,通过人工合成激素24 表油菜素内酯(24 eBL)和BRs合成抑制剂油菜素唑(BRZ)处理,分析BRs对青藏高原特色作物青稞(Hordeum vulgare L. var. nudum Hook. f.)的影响;采用RT PCR技术从青稞中克隆HvBAS1基因,并运用实时定量PCR检测其表达特征,为深入分析HvBAS1基因的功能奠定研究基础。结果显示：(1)24 eBL能够显著促进青稞幼苗的生长,而BRZ处理后幼苗长势明显减缓。(2)从青稞中成功克隆到2个与拟南芥BRs失活基因BAS1高度同源的CYP734A亚家族基因,即HvBAS1 1和HvBAS1 2;HvBAS1 1开放阅读框全长1 629 bp,编码542个氨基酸;HvBAS1 2长1 689 bp,编码562个氨基酸,二者氨基酸序列相似性为76.42%;亚细胞定位预测结果显示二者均存在于内质网。(3)实时定量PCR检测发现,青稞HvBAS1 1与HvBAS1 2的表达模式完全不同,其中HvBAS1 1在青稞根中的表达量高于叶中,而HvBAS1 2在叶中的表达量高于根,且随着苗龄的增大,HvBAS1 1在根中的表达呈先升高后降低的趋势,HvBAS1 2在叶片中呈先降低后升高的变化趋势;BRZ处理青稞幼苗后,其HvBAS1 1与HvBAS1 2基因的表达较对照均显著下调,且HvBAS1 2下调更为明显。研究表明,HvBAS1 1和HvBAS1 2很可能都参与了青稞内源BRs的失活,但二者的功能存在差异。     

Biosynthesis of pyridine alkaloids from Tripterygium wilfordii

Nicotinic acid-6-¹⁴C and nicotinamide adenine dinucleotide-carbonyl-¹⁴C were rapidly metabolized in T. wilfordii Hook. with formation of all compounds in the pyridine nucleotide cycle. Nicotinic acid-6-¹⁴C and the nicotinamide moiety of NAD were efficiently incorporated into wilfordic acid and hydroxywilfordic acid, the pyridinium moieties of the ester alkaloids. The structures of wilfordic acid and hydroxywilfordic acid were confirmed using GLC-MS. The molecular formulae of the four isolated alkaloids were determined by high resolution MS and agreed with earlier results based on elemental analysis.