封面说明

我国奶牛较少,黄牛资源丰富。借助胚胎移植利用黄牛繁殖纯种黑白花奶牛,是加速发展我国良种奶牛的有利途径。西北大学生物系和广州军区英德军马场合作,于     

奶牛ZFX+ZFY基因片段的克隆、测序及PCR对奶牛性别鉴定灵敏度研究

奶牛胚胎的性别鉴定是多年来奶牛业研究和探素的问题,尤其在体外授精。胚胎分割冷冻,保存及胚胎移植一系列生物科学高技术发展和应用的今天,这一问题的解决显得更加重要和迫切。用分子杂交的方法也可对胚胎进行早期性别鉴定,但这一方法必须要有大量的样品DNA,而且所需时间长,并受到实验条件的限制,很难在基层和生产中推广应用。 pCR方法除了有前述特点外,还同时具有所需设备简单,操作方便,易于在生产中推广应用。为此．我们对奶牛的ZFX及ZFY基因片段进行克隆、测序。并以此设计出分别对ZFX及ZFY具特异的引物,以奶牛血液DNA为模板进行PCR护增对奶牛性别鉴定灵敏度试验。     

牛胚胎工程实用化研究通过验收

浙江省农科院畜牧研究所通过 4年的攻关 ,已完成省“九五”重点项目“牛胚胎工程技术实用化研究” ,于2 0 0 0年 10月通过专家验收。该项研究已基本形成了同步发情—胚胎选择—胚胎移植—受体饲养管理的实用技术体系 ,为我省应用高新技术 ,建立良种牛繁育体系提供了技术保证。浙江省因良种覆盖率低 ,牛群品质较差 ,每头奶牛年均产奶量及肉牛平均胴体重都远远低于国外水平 ,急需引进优质种源 ,改良牛群 ,提高生产效益。但引进活畜价格昂贵 ,运输困难 ,检疫繁琐 ,而引进优质奶牛、肉牛的冷冻胚胎 ,既可以利用浙江省本地母牛作受体 ,节省成本 ,…     

我国动物学家取得试管水牛性别控制成果

2月13日上午11点20分,在广西水牛研究所的一头杂交母水牛,通过分离XY精子性别控制产下了雌性水牛双犊。据悉,这在世界尚属首例。据介绍,这两头性控试管水牛犊体重均为29kg。“姊妹花”出生经历了复杂、严密的科学设计:首先,用流式细胞仪分离出良种摩拉水牛精液的X精子和Y精子;然后, 将X精子与本地母牛的卵母细胞进行体外受精生产性别控制的胚胎;最后将3枚雌性胚胎移植给一头受体母牛,经10月怀胎后生产出来。该项由国家自然科学基金、广西壮族自治区人民政府主席基金、自治区科技厅科技攻关项目资金联合资助的水牛性别控制研究项目由卢克焕教授主持,广西水牛研究所和广西畜禽品种改良站共同参与完成。该项成果的关键技术是分离XY 精子技术。这意味着水牛生公生母完全可能人为控制。     

发育工程与家畜改良

二十世纪七十年代后胚胎移植几乎引起一场家畜繁殖技术的革命,并波及到胚胎学、发育生物学、免疫学、遗传学等基础学科。随之产生了一些新尖的技术与之相互配合,形成了熔各种知识和技术手段于一炉,瞄准应用的研究领域——发育工程。本文集中讨论胚胎移植、冷冻、性别鉴定、卵母细胞体外受精、受精卵核移植和嵌合体及转基因动物制作等发育工程技术的兴起及其对家畜遗传改良所产生的积极影响。     

家畜胚胎工程研究现状与展望

畜牧业即将进入一个可根据产品和环境需要制做和快速繁殖动物的令人兴奋的时代。这正是由于胚胎工程出现的结果。胚胎工程或叫胚胎技术(embryo technology),是以胚胎移植为基础,以转基因动物为中心的,通过人工操作胚胎,定向改变动物性状使之为人类造福的一系列生物技术的总称。其中主要包括:胚胎移植,体外生产胚胎,胚胎克隆,性别鉴定和转基因技术等。这些新技术与人工授精和选种等老技术相结合将会形成大规模生产、销售及移植遗传优秀家畜的景然有序的生产线。本文将综述胚胎工程主要技术目前的研究和应用现状及存在问题,并对近期和长远发展前景作一展望。     

间接免疫荧光鉴别奶牛胚胎性别的研究

本实验用H—Y抗体的间接免疫荧光方法对奶牛6—7日龄胚胎进行性别鉴别。用数排卵法获得的胚胎,共选37枚在含H—Y抗血清的M2培养液中温育30min,用M2培养液清洗后,在含FITC—荧光标记的羊抗鼠IgG二抗的M2中温育30min,经洗后的胚胎在Nikon倒置荧光显微镜下鉴别有无荧光,结果21枚胚胎有特异免疫荧光,判作雄性胚胎;16枚无特异免疫荧光,判作雌性胚胎,分别占57％和43％。这与自然出生公母犊各约50％和性比率无显著差别(P>0.25),判定为雄性的5枚胚胎移植给3头受体奶牛(每头移植1或2枚)、3枚判定为雌性胚胎移植给2头受体奶牛一头移植一枚,枚、另一头移植2枚)移植后两个月时检查有3头受体怀孕,其中,一头移植有荧光胚胎的受体返植无荧光胚胎的2头受体各产一母犊(体重皆41kg)。     

中国的动物胚胎技术研究进展

胚胎移植技术最早是由英国的Walter Heape率先研究的,随后经过了胚胎学家几十年的努力才在上个世纪来期逐渐开始广泛应用于医学生殖,畜牧业,动物保种等领域。本文集中论述中国的胚胎移植技术发展以及它在畜牧业领域的应用。 在中国商业性的动物胚胎移植正在蓬勃发展,其成功率已经和国外同行相差不大。通过胚胎移植工作者的努力,一些从事商业性胚胎移植的公司已经能够做到鲜胚移植后奶牛的妊娠率55％～70％,冷冻胚胎的妊娠率达到45％～60％。不仅如此,在各个省还建立了自己的专门的冷冻胚胎中心,为本省的畜牧产业提供胚胎或者相关的服务。 在动物保种方面,胚胎技术给人们提供了一种全新的思路：通过胚胎技术将活的胚胎冷冻在液氮罐以实现永久保存。例如中国科学院动物所陈大元先生提出通过胚胎移植技术实现对大熊猫的物种保存,并取得了一定的成果。 随着经济和社会的进一步发展,人民生活水平的提高对于肉和奶的需求会进一步提高。依靠常规的选育技术来改良牲畜是无法满足人民对于畜牧产品急切要求,要实现畜牧业的跨越式发展,就必须依靠科技的力量来实现畜牧业的大发展,满足人民生活需要。胚胎技术等新技术会为我国的畜牧业的产业提高提供了一个新的机遇,可以相信,在不远的将来,动物胚胎技术必将在中国有一个较大发展。     

流式细胞仪原理及其在奶牛性别控制上的应用

流式细胞仪分离得到的定性奶牛精子,借助人工授精技术或其他相关技术已经生产出许多预知性别的后代奶牛。流式细胞仪分离精子的原理是基于携带有X或Y性染色体精子的DNA含量不同。高性能的流式细胞仪可以达到每小时分离1.5～2×108个精子,并且准确率可达到90%。该项技术的应用使得奶牛的人工授精和低温保存技术更为便利,并且该项技术也可以用于其他养殖动物X、Y精子的分离。     

我国首个体细胞克隆牛胚胎移植中心成立

,中国农业大学和芦台经济技术开发区日前签署协议,中国第1个体细胞克隆牛胚胎移植中心在唐山正式成立。据了解,早在2001年,中国农业大学就和芦台经济技术开发区合作,建立了生物技术实验基地。第2年4月,中国第1头地方优质奶牛在芦台经济技术开发区诞生。此后,在这个开发区又陆续培育出5头体细胞克隆优质奶牛。今年又培育出具有世界最新药物蛋白基因的两头克隆奶牛。目前,芦台经济技术开发区的克隆牛成活率处于我国领先水平。此次成立的我国第1个体细胞克隆牛胚胎移植中心将成为华北地区克隆奶牛繁育基地和生物工程服务中心。摘自《科学时报》…     

应用生殖免疫方法制作性别化冷冻精液对奶牛性别控制的研究

本实验在种公牛站精液生产过程中应用生殖免疫技术方法 ,制作性别化冷冻精液 ,结合人工授精技术进行奶牛性别控制的研究实验。根据精子DNA含量存在的差异 ,利用荧光染料与精子DNA结合 ,通过蔗糖溶液密度梯度离心法 ,分离出和鉴别出牛精液中的X与Y精子作为抗原。经与小鼠免疫后 ,制成H Y抗血清IgG ,再经酶联免疫吸附法 (ELISA)析测表明 ,获得了具有一定纯度和工作效价的阳性抗Y精子的H Y抗血清IgG ,H Y抗血清对性别化精液冷冻前 ,解冻后活力的影响与对照组无显著差异。配种受胎试验结果表明 ,性别化冷冻精液在获得与正常冷冻精液相似的情期受胎率的同时 ,对后代性别比率有显著影响 ,奶牛产母犊率可达 60 7% ,比自然产母犊性比率理论值提高 1 0 7个百分点 (P <0 0 5 )。     

奶牛ZFY、ZFX基因片段的克隆及测序

奶牛的早期胚胎性别鉴定是奶牛胚胎分割及移植技术产生较大经济效益的前提,用PCR技术进行早期胚胎性别鉴定具有准确、快速、灵敏度高的特点.利用人和鼠的性别分化相关的DNA序列ZFY、ZFX基因序列设计的引物对公牛和母牛的染色体DNA、PCR扩增,将扩增产物定向克隆到pUC118上,获得ZFY、ZFX转化子,并测定了ZFY、ZFX基因的序列,发现两者同源性达88.2%,以此为基础可设计引物和探针,以PCR方法进行高灵敏度的奶牛性别鉴定.     

牛冷冻试管胚胎性别鉴定的应用

利用双引物PCR技术对优质良种牛体外受精的冷冻胚胎进行性别鉴定。并对分割后的半胚分别进行PCR扩增和染色体分析,两种方法的判定结果相吻合,在本实验条件下,利用减少PCR体系中细胞的数量来确定最低的模板DNA的检出量,2－细胞不能检测,4－细胞检出率为62．5％,8－细胞为90％,16－细胞以上为100％。对23牧经过性别鉴定后的胚胎进行移植,获得5头纯种试管牛,产犊率为21．7％,与正常的胚胎移植 结果27．3％（3／11）无显著差异,预测性比为100％符合。     

激素诱发绵羊超数排卵及移植试验

胚胎移植,亦称受精卵移植,简单涵义就是:从一头优良母畜(简称供体)的输卵管内取出受精卵或早期胚胎,移植到另一头生产性能较差的同种或同品种母畜(简称受体)的相应部位,“借腹怀胎”,繁育后代。这项技术结合超数排卵,在畜牧业生产上应用后,可以充分发挥优良母畜的繁殖潜力,在短期内达到迅速扩大良种畜群的目的。随着受精卵保存技术的不断提高,如     

奶牛胚胎移植中GnRH、PGF2α同期发情处理效果的比较

同期发情处理是牛胚胎移植中一项重要的技术,不同的方法因不同的环境条件产生不同的效果。本文就同期发情的不同方法进行了比较,以寻找适合当地条件的曲 情方案。１９３头健康,经产的黑白花奶牛分为３个组,用３种不同的方法进行同期发情处理和胚胎移植。第１组;注射１次Ｌｕｔａｌｙｓｅ;第２组;注射２次Ｌｕｔａｌｙｓｅ;第３组：注射Ｆｅｒｔａｇｙｌ－Ｌｕｔａｌｙｓｅ－Ｆｅｒｔａｇｙｌ。     

用来提高动物繁殖力的胚胎移植技术

胚胎移植是从供体雌畜收集胚胎并移给受体雌畜使之成为继续妊娠的代理母亲的技术。胚胎移植技术几乎已经用于每种家畜和多种野生动物,包括人类和灵长类。近十年来,胚胎移植程序日趋精密。包括在牛中完善使用非手术移植方法,长期胚胎培养和冷冻保存以及最近的显微操作和许多与遗传工程有关的技术。这是一门迅速发展并且大火缩短了发明和使用之间的时间隔的科学。随着新技术的发展,潜在用途继续增加。Walter Heape 1890年报告他得到一窝用胚胎移植方法出生的小兔。     

牛胚胎移植成功

我国牛胚胎移植研究工作已经开展。由中国科学院遗传研究所203组与上海市牛奶公司第七牧场协作进行的奶牛胚胎移植试验,在我国首获成功,于1978年8月获得了胚胎移植后生下的公、母牛犊各一头。母犊初生重42公斤,公犊初生重40公斤。小久前,在上海召开的全国牛胚胎移植经验交流会上,遗传所与上海市牛奶公司报告了他们合作取得的这项成果。与会代表兴致勃勃地参观了这两头生下几个月的胚移小牛和试验母牛,对牛胚胎移植试验的成功感到鼓舞,一致认为,这次会议开得及时、开得成功,对我国牛胚胎移植研究工作的进一步开展有积极的推动作用。参加会议的有北京、上海、广东、广西、内蒙古、黑龙江、贵州、安徽等十四个省(市、自治区)科研、教学及     

试管牛和试管羊胚胎性别的鉴定

奶牛和山羊的卵母细胞经过体外成熟、体外受精和体外发育至桑椹期,在显微操作下,吸取4～6个胚胎细胞,应用巢式PCR技术对其DNA进行SRY基因的测定以进行胚胎性别鉴定。共有27枚转有外源基因的试管牛胚胎和207枚转基因试管羊胚胎进行了SRY基因检测。选取10枚经过性别鉴定的牛胚胎移植于8头受体母牛和124枚已知性别的羊胚胎移植于44头受体母羊,移植后妊娠率分别为37．5％（牛,3/8）和61．4％（羊,27/44）。最后产生1头分娩牛犊和2头流产胎牛以及14头分娩羊羔和2头流产胎羊,它们的性别与胚胎性别鉴定的结果完全相符。 Abstract: The oocytes of bovines and goats were subjected to in vitro maturation,in vitro fertilization(IVF)and in vitro development upto morula stage．4～6 embryonic cells were aspirated with micro-manipulating and the embryo sexes were identified by detecting SRY gene with nested PCR procedure．A total of 27 transgenic IVF bovine and 207 transgenic IVF goat embryos were performed SRY gene detection．10 bovine and 124 goat sexed embryos were selected to be transferred into 8 bovine and 44 goat recipients,respectively,leading to the pregnant rates of 37．5％( in bovine,3/8)and 61．4％(in goat,27/44)．In the end,1 cattle and 14 goatlets were born at term but 2 fetal bovine and 2 fetal goats were miscarried．Their sexes were fully in accordance with the embryonic sex predetermination．     

哺乳动物胚胎的冷冻保存

哺乳动物精子冷冻保存试验于1950年获得成功,它标志着近代低温生物学的开端。冷冻精液结合人工授精,使得种公牛的配种潜力得到最大限度的发挥,良种公牛的精子可以普及到各处,甚至是偏僻的地方。良种后代的增加,不仅决定于公畜,也有赖于母畜。优良母畜繁殖潜力的提高,也是改良畜群的一方面。胚胎移植不仅可以充分利用优良母畜的繁殖潜力,同时把优良公畜和母畜都加以考虑。有些国家把胚胎移植作为完成育种计划的一种辅助方法,在牛的繁育上起了作用。精子能够低温     

胚胎移植——畜牧业发展的助推器

胚胎移植———畜牧业发展的助推器王磊刘敏（山东省农科院,２５０１００）（济南市十一中,２５０００１）胚胎移植,在我国俗称借腹怀胎,它是将一头良种母畜配种后形成的早期胚胎取出,移植到另一头（或几头）同种的、生理状态相同的母畜生殖器官的相应部位,使之继续...