大鼠子宫异位症模型建立方法的比较

目的将自体子宫内膜组织同时种植于大鼠体内三个不同部位,建立的子宫内膜异位症模型进行比较评估。方法取30只雌性未交配性成熟大鼠,将自体子宫内膜组织种植于左侧腹壁、子宫卵巢韧带和右侧皮下筋膜层与腹壁肌层间,术后第21天取出异位组织,进行组织形态学观察。结果异位内膜可以在大鼠不同部位同时生长,体积和重量均无显著性差异,其种植成功率差异不显著（93%-100%）,且种植物组织形态相似。结论此手术方法建立的大鼠子宫内膜异位症模型异位内膜病理改变与EMs患者类似,但皮下种植更简单,更直观,可减小损伤,便于反复实验及连续性观察研究。     

改良皮下种植法建立大鼠子宫内膜异位症模型

目的:采用改进的皮下种植法建立大鼠子宫内膜异位症的疾病模型,在保证成模的前提下,使皮下种植法建立大鼠子宫内膜异位症模型更加简单易操作,且成模效果更明显,术后易寻找病灶。方法:取性成熟期雌性SD大鼠10只,体重约250±5 g,术前五日连续给予苯甲酸雌二醇注射0.04 mg/每天,然后采用改良的皮下种植法建立大鼠子宫内膜异位症模型,既将大鼠自体双侧子宫切下,取其中一侧子宫种植至皮下血供较丰富处,术后第十日起连续五日给予苯甲酸雌二醇注射,于术后四周可观察腹部皮下病灶。结果:造模四周后见皮下种植的皮肤处有明显的圆形突起,切开皮肤可见种植的一侧子宫完整成活,与周围界限清晰,病灶明显易见,血运丰富。结论:实验结果证明此种方法较文献提供的皮下种植法更为简单易操作,省去了分离子宫内膜与肌层的步骤,且有病灶明显术后易寻找病灶的优点。     

大鼠子宫内膜异位模型的建立与组织学观察

目的为开发诊治子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)的新药研究提供理想的动物模型。方法取雌性未交配性成熟大鼠,术前雌激素诱导,麻醉开腹取部份右侧子宫,将内膜种植于左腹壁内,术后16周取出包块,进行组织形态学、组织化学观察。结果异位内膜在腹壁内生长,呈隆起囊状小包块,内有黏液,具有正常子宫内膜基本组织结构,囊腔较大。异位内膜中有糖原、RNA的存在。结论该手术方法建立的子宫异位内膜生长良好,术后一周就可摸及包块大小,为开发研究子宫内膜异位症的新药提供了方便。     

非动情期SD大鼠子宫内膜异位症模型的建立

目的　研究SD大鼠非动情期子宫内膜异位症建立方法和异位病灶的组织学形态及体液免疫反应。方法　采用外科诱导法对 40只非动情期和 40只动情期SD雌性大鼠行子宫组织自体移植手术。采集造模前后的血液进行体液免疫IgG、IgA、IgM、C3 、C4 的观察 ;手术后 7周取健侧子宫中段的在位内膜和移植的异位内膜行组织学研究。结果　SD大鼠非动情期进行子宫组织自体异位种植术成模率 95% ,与大鼠动情期进行子宫组织自体异位种植术成模率 94 8%比较 ,二者差异无显著性 ;异位内膜上皮细胞功能活跃 ,有类似正位子宫内膜的周期变化 ,其生理特征与正位子宫内膜基本相同。且造模后大鼠体液免疫反应敏感IgG、C3 增高 (P <0 0 1、3 P <0 0 5) ;IgM降低 (P <0 0 1)、IgA、C4 差异无显著性。结论　SD大鼠非动情期和动情期进行子宫组织自体异位种植术均可建立良好的子宫内膜异位症模型     

人子宫内膜异位症裸鼠模型的建立

目的建立人子宫内膜异位症裸鼠模型。方法通过开腹手术方法将人子宫内膜组织块种植于裸鼠盆腹腔,观察其生长情况,并进行病理检查。结果成功建立人子宫内膜异位症裸鼠模型,种植病灶能保持原有内膜组织的形态结构,并可见血管生成明显。结论子宫内膜异位症裸鼠模型的建立是子宫内膜异位症早期临床研究的理想模型。     

改良大鼠子宫内膜异位症模型的建立及微血管密度观察

目的对皮下筋膜层与腹壁肌层之间移植自体子宫内膜制作的子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）模型进行评估。方法取10只雌性未交配性成熟大鼠,术前雌激素诱导,手术开腹取右侧子宫,将自体子宫内膜种植于双侧皮下筋膜层与腹壁肌层之间,术后第29天取出异位组织,进行组织形态学观察,免疫组织化学染色观察微血管密度（Microvessel density,MVD）。结果异位内膜在腹壁内生长,呈隆起囊状小包块,内有黏液,具有正常子宫内膜基本组织结构。异位内膜中微血管密度较在位内膜和正常子宫内膜高。结论此手术方法建立的大鼠子宫内膜异位症模型异位内膜病理改变与EMs患者类似,可以作为子宫内膜异位研究的动物模型。     

内皮抑素转基因治疗子宫内膜异位症大鼠模型的实验研究

目的:了解内皮抑素(ES)转基因治疗子宫内膜异位症大鼠模型的疗效。方法:构建子宫内膜异位症大鼠模型,选择建模成功的大鼠为实验研究对象,随机分为ES转染组(I组)24只、载体对照组(Ⅱ组)20只和阴性对照组(Ⅲ组)20只。I组病灶局部注射lipofectamine-endo-pBud复合物进行基因转染,Ⅱ组注射lipofectamine-pBud复合物,Ⅲ组注射PBS用于对照。通过实时荧光定量PCR法检测异位病灶中ES基因的相对表达量,用Western-blot测定ES-HA融合蛋白及ES蛋白的相对表达量,来判断转染成功与否。用ELISA法对大鼠血清中ES及血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平进行测定,用免疫组化SP法对ES、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)以及微血管密度(MVD)的表达进行测定,用游标卡尺对转染前后各组大鼠异位病灶的长、宽进行测量,计算体积,分析各指标实验前后的差异,观察内皮抑素转基因治疗子宫内膜异位症大鼠模型的疗效。结果:注射相应试剂后2周,I组异位病灶组织中ES基因的相对表达量高于两对照组(P<0.05),有ES-HA融合蛋白表达,且ES蛋白的相对表达量显著高于两对照组(P<0.01);I组血清中ES水平显著高于两对照组(P<0.01),VEGF水平显著低于两对照组(P<0.01),三组ES与VEGF在血清中的表达水平呈负相关(r=-0.805);I组异位病灶组织中ES表达明显高于两对照组(P<0.01);MMP-2的表达明显少于两对照组(P<0.01);MVD明显少于两对照组(P<0.01);三组ES与MMP-2在异位内膜中的表达呈负相关(r=-0.700);I组异位病灶体积明显小于两对照组(P<0.01)。结论:阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导的重组质粒endo-pBud病灶内直接注射法可以成功实现ES在子宫内膜异位症大鼠异位内膜中的表达,并对子宫内膜异位症大鼠模型有治疗作用。     

内皮抑素转基因治疗子宫内膜异位症大鼠模型的实验研究

目的：了解内皮抑素（ES）转基因治疗子宫内膜异位症大鼠模型的疗效。方法：构建子宫内膜异位症大鼠模型,选择建模成功的大鼠为实验研究对象,随机分为ES转染组（I组）24只、载体对照组（Ⅱ组）20只和阴性对照组（Ⅲ组）20只。I组病灶局部注射lipofectamine-endo-pBud复合物进行基因转染,Ⅱ组注射lipofectamine-pBud复合物,Ⅲ组注射PBS用于对照。通过实时荧光定量PCR法检测异位病灶中ES基因的相对表达量,用Western-blot测定ES-HA融合蛋白及ES蛋白的相对表达量,来判断转染成功与否。用ELISA法对大鼠血清中ES及血管内皮细胞生长因子（VEGF）水平进行测定,用免疫组化SP法对ES、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）以及微血管密度（MVD）的表达进行测定,用游标卡尺对转染前后各组大鼠异位病灶的长、宽进行测量,计算体积,分析各指标实验前后的差异,观察内皮抑素转基因治疗子宫内膜异位症大鼠模型的疗效。结果：注射相应试剂后2周,I组异位病灶组织中ES基因的相对表达量高于两对照组（P〈0.05）,有ES-HA融合蛋白表达,且ES蛋白的相对表达量显著高于两对照组（P〈0.01）;I组血清中ES水平显著高于两对照组（P〈0.01）,VEGF水平显著低于两对照组（P〈0.01）,三组ES与VEGF在血清中的表达水平呈负相关（r=-0.805）;I组异位病灶组织中ES表达明显高于两对照组（P〈0.01）;MMP-2的表达明显少于两对照组（P〈0.01）;MVD明显少于两对照组（P〈0.01）;三组ES与MMP-2在异位内膜中的表达呈负相关（r=-0.700）;I组异位病灶体积明显小于两对照组（P〈0.01）。结论：阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导的重组质粒endo-pBud病灶内直接注射法可以成功实现ES在子宫内膜异位症大鼠异位内膜中的表达,并对子宫内膜异位症大鼠模型有治疗作用。     

人子宫内膜异位症裸鼠模型的建立及雌、孕激素受体的表达

目的　为子宫内膜异位症 (EM)的临床研究提供实验动物模型。方法　实验组 :取EM和正常育龄妇女分泌晚期子宫内膜 ,剪碎 ,随机置入裸鼠盆腹腔 ,实验Ⅰ组切除卵巢 ,实验Ⅱ组不切除卵巢 ;对照组 :同法置入人大网膜。术后给雌激素支持。各组裸鼠分别于 5、10、15、2 0、2 5、3 0d脱颈椎处死 ,观察异位病灶生长情况。免疫组化SP法检测异位病灶雌、孕激素受体表达。结果　子宫内膜种植 5d即见异位病灶牢固粘附 ,主要发生在腹壁(56% )、膀胱旁脂肪 (2 1% )等部位 ,可见腺体细胞及散在间质细胞 ,时间越长 ,病灶与裸鼠组织融合越明显 ,盆腹腔粘连越重。用EM患者和正常育龄妇女内膜移植的异位病灶无差别 ,实验Ⅰ组和实验Ⅱ组的裸鼠所形成的异位病灶亦无差别 ,它们的雌、孕激素受体表达未显示差别 ,多数呈弱表达。结论　裸鼠做为EM早期动物模型科学、简便、可行。     

大鼠薄型子宫内膜模型的建立和鉴定

为探索宫腔注入无水乙醇建立薄型子宫内膜模型的可行性,将25只大鼠分3组:对照组(宫腔注入生理盐水),5分钟组(宫腔注入无水乙醇并贮留5 min),10分钟组(宫腔注入无水乙醇并贮留10 min),经测量子宫内膜变薄者为造模组,5分钟组有14个子宫内膜变薄,10分钟组无一例纳入造模组.免疫组织化学检测角蛋白、波形蛋白、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、雌激素受体α(estrogen related recep-tor alpha,ERα)的表达.结果发现5分钟组造模组与对照组单位内膜面积中角蛋白面积、单位间质面积中波形蛋白面积和子宫内膜中VEGF平均光密度差异有统计学意义(P<0.05),造模组与对照组子宫内膜ERα组织学积分无差异(P>0.05).表明宫腔注入无水乙醇并贮留5 min可以成功建立薄型子宫内膜模型,成功率为70%.     

大鼠代膀胱模型的建立

目的建立用于肠黏膜处理研究的大鼠代膀胱模型。方法雌性SD大鼠2组,实验组以4cm末段小肠重新构建大鼠膀胱,对照组行假手术。术后1月测量代膀胱容量,代膀胱内黏液残留量,观察代膀胱黏膜对水、电解质的吸收、分泌功能等。结果术后1月,实验组大鼠膀胱容量增加（P〈0．01）;黏液残留量：0．907±0．193g;代膀胱黏膜对水、K^＋、NH4^＋表现为吸收,对Na^＋、Cl^-、HCO3^-表现为分泌。结论此模型适用于肠黏膜处理的研究。     

激肽释放酶转基因大鼠模型的建立

目的建立KLK1转基因大鼠模型。方法腹腔注射PMSG-HCG（150-150IU/kg）超排不同周龄（4-8周）SD大鼠比较超排效果的差异,以可用于注射胚胎数作为评判标准确定最佳超排周龄。构建pBC-klk1转基因构件,经酶切、纯化后通过显微注射方法导入SD大鼠受精卵原核并移植到同期受孕的SD受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用PCR和Southern方法检测鼠尾DNA鉴定基因型,通过RT-PCR和免疫组化方法检测klk1基因表达。结果4-8周SD大鼠超排后分别获得受精卵14±14.8、30±15.2、13.3±13.7、13±14.7、8±5.7,5周龄大鼠超排效果最好,与其他周龄大鼠相比有显差异,P〈0.05;显微注射1538枚卵,移植685（44.53%）枚卵于31只受体输卵管中,12（12/31,38.7%）只怀孕,共产仔62只,经PCR检测获得6只阳性鼠,Southern检测3只阳性。对Southern检测阳性转基因大鼠子代进行RT-PCR检测和免疫组化分析证明klk1基因在肾脏、胰腺和乳腺内表达。结论成功建立klk1基因表达的转基因大鼠模型,该模型是高血压病研究的理想动物模型。     

大鼠动脉粥样硬化动物模型的建立和评价

目的利用免疫损伤和高脂喂养结合的方法建立大鼠动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）动物模型。方法5周龄Wistar大鼠腹腔注射卵清白蛋白和尾静脉注射牛血清白蛋白佐以灌喂维生素D3,高脂饲料喂养大鼠,FeSO4加入到饮水中。检测大鼠不同时间的血脂水平、血液生化指标和病理变化。结果（1）AS模型组的TC、HDL、LDL显著高于正常对照组（6.1±2.52比1.3±0.10;2.46±1.01比1.02±0.13;3.76±1.67比0.52±0.063;P〈0.05）。（2）模型组的C反应蛋白（CRP）、心肌激酶（CK）、心肌激酶同工酶（CK-Mb）显著高于正常对照组（4.99±2.26比0.183±0.160;996.3±82.8比293.8±167.1;669.5±128.1比177.5±86.5;P〈0.05）。（3）采用HE染色发现模型组大鼠的主动脉出现斑块的沉积,而正常大鼠无病变的产生。结论该方法能够诱导大鼠产生高血脂症状,随着时间的延长心肌发生损伤,同时出现炎症症状,并在动脉壁上形成斑块。