Mir-106b对阿尔茨海默病昼夜节律调控的初步研究

目的探讨mir-106b在阿尔茨海默病发病中的作用。方法取6月龄APPswe/PSΔE9小鼠脑组织,进行microRNA芯片的检测;利用real-time PCR对芯片检测结果进行验证;构建mir-106b表达载体,将其转染至SH-SY5Y细胞中构建mir-106b稳定转染的稳转细胞系。用Targetsan、Pictar、miRanda等靶基因预测软件,对mir-106b的靶基因进行预测,根据靶基因的功能选择可能与AD发病相关的靶基因,并用Western blot对所选择的靶基因在稳转细胞中的表达进行验证。用双荧光素酶报告检测系统检测mir-106b与其靶基因的结合位点。结果芯片结果显示,与野生型小鼠相比,6月龄APPswe/PSΔE9小鼠脑组织中mir-106b的表达下降,经real-time PCR验证,mir-106b的表达在APPswe/PSΔE9小鼠脑组织中的表达较野生型小鼠升高,差别具有统计学意义（P=0.03）。mir-106b稳转细胞系较对照mir-106b的表达升高2～5倍。神经PAS结构域蛋白2（neuronal PAS domain protein2,NPAS2）在mir-106b稳转细胞中的表达明显下降。双荧光素酶报告实验证实：与对照相比,带有NPAS2的3＇UTR的荧光素酶报告载体与mir-106b表达载体共转染,海肾荧光素酶/萤火虫荧光素酶的相对活性降低;荧光素酶报告载体的NPAS2-3＇UTR突变后与mir-106b表达载体共转染,海肾荧光素酶/萤火虫荧光素酶的相对活性升高。结论mir-106b可能通过调节机体生物钟基因NPAS2的表达,影响阿尔茨海默病人的生活节律,参与阿尔茨海默病的发生。     

阿尔茨海默病中mir-34a作用机制的探讨

目的探讨mir-34a在阿尔茨海默病发病机制中的作用。方法取3月龄和6月龄APPswe/PSΔE9小鼠脑组织,进行microRNA芯片的检测;利用real-time RT-PCR对芯片结果进行验证;采用western blot的方法检测APPswe/PSΔE9小鼠和对照小鼠脑组织中bcl2蛋白的表达情况;通过构建mir-34a稳定转染细胞系和mir-34aknockdown研究mir-34a与bcl2之间的关系;通过构建bcl23’UTR-荧光素酶报告载体,验证bcl23’UTR序列中包含mir-34a的结合位点。结果mir-34a在模型小鼠中表达水平明显升高,并且其表达水平与bcl2蛋白水平呈负相关;通过体外实验,我们发现mir-34a过表达可以明显降低bcl2蛋白水平,反之,当我们抑制mir-34a的表达以后则可以增加bcl2蛋白水平;荧光素酶报告载体实验表明bcl23’UTR序列中包含mir-34a的结合位点。结论bcl2可能是mir-34a重要的功能靶点,mir-34a的过表达可能通过下调bcl2的蛋白水平,从而参与AD的发生。     

阿尔茨海默病中miR-29c对APP表达调控的初步研究

目的探讨microRNA29c（miR-29c）在阿尔茨海默病中的作用。方法采用了microarray芯片检测3月龄、6月龄APPswe/PSΔE9双转基因阿尔茨海默病小鼠大脑中microRNA表达情况并利用实时定量PCR验证结果可靠性,通过microRNA靶基因数据库预测选出与阿尔茨海默病相关的靶基因,构建miR-29c表达载体,将其转染SH-SY5Y及HEK-293T细胞,在高表达miR-29c的SH-SY5Y及HEK-293T细胞系中验证miR-29c对靶基因的调控作用。将靶基因APP mRNA的野生及突变3’UTR序列克隆到双荧光素酶报告基因载体,用双荧光素酶报告检测系统检测miR-29c与靶基因的结合位点。结果根据microRNA芯片结果筛选出在3、6月龄APPSWE/PS1ΔE9双转基因小鼠大脑表达均有差异的miR-29c,通过实时定量PCR证实miR-29c在3月、6月、9月龄小鼠中表达明显升高。通过microRNA靶基因数据库预测miR-29c可以调控阿尔茨海默病的靶基因APP,利用Western blot检测到高表达miR-29c的SH-SY5Y细胞及HEK-293T细胞中APP蛋白表达减少。将miR-29c表达载体与带有野生及突变APPmRNA的3’UTR的双荧光素酶报告载体共转染HEK-293T细胞,通过双荧光素酶检测系统检测未找到miR-29c与APP mRNA 3’UTR的结合位点。结论 miR-29c对APP表达的具有负向调控作用,但其调控位点可能不位于其3’UTR区域。     

MicroRNA在阿尔茨海默病发病机制中的作用

microRNA通过转录后水平调控细胞的蛋白质表达,在神经系统的发育、分化及功能行使中发挥着重要作用。阿尔茨海默病是一种以进行性认知功能障碍为特征的神经退行性疾病,患者脑内microRNA的表达发生改变,异常表达的microRNA可从多种途径影响疾病的发生与发展,对microRNA在阿尔茨海默病中作用的研究不仅有利于疾病发病机制的诠释也有利于microRNA调控机制的探讨。     

双转基因小鼠模型中microRNA-153对RTN4的表达调控

目的探讨mir-153在阿尔茨海默病发病机制中的作用。方法通过microRNA芯片及Real-timePCR检测APPswe/PSΔE9双转基因小鼠脑内mir-153的表达;构建高表达mir-153的稳转细胞系,通过western-blot检测稳转细胞系内RTN4的蛋白表达;构建野生型及突变型RTN4的3’UTR荧光素酶报告载体,分别将其与mir-153表达载体或microRNA阴性对照载体共转染入293T细胞内,检测海肾荧光素酶的相对活性以验证mir-153对RTN4 mRNA的作用靶点。结果 microRNA芯片及Real-time PCR检测均证实3月龄APPswe/PSΔE9双转基因小鼠脑内mir-153的表达较同龄野生对照显著降低;在高表达mir-153的稳转细胞系内RTN4的蛋白水平明显降低;共转染野生型RTN4的3’UTR/mir-153表达载体可使海肾荧光素酶相对活性较共转染野生型RTN4的3’UTR/miRNA阴性对照质粒组显著降低（P〈0.05）,而共转染突变型RTN4的3’UTR/mir-153表达载体组则较之无明显差异。结论在3月龄APPswe/PSΔE9双转基因小鼠脑内存在mir-153的异常表达;mir-153可调控RTN4的蛋白表达;mir-153对RTN4的表达调控是通过结合RTN4 3’UTR 839-845碱基处的作用位点而实现的。     

miR-106b在阿尔茨海默病中的作用机制

目的 探讨miR-106b在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发病中的作用.方法 取3月龄和6月龄APPswe/PSΔE9小鼠脑组织,进行microRNA芯片的检测;利用real-time PCR检测3、6、9月龄APPswe/PSΔE9小鼠脑组织中miR-106b的表达,对芯片检测结果进行验证;通过构建miR-106b稳定转染细胞系和miR-106b knockdown研究miR-106b与TGFBR2表达之间的关系; 构建TGFBR2 3'UTR-荧光素酶报告载体,验证miR-106b是否可以直接调控TGFBR2蛋白的表达;采用Western blot的方法检测APPswe/ΔPSΔE9小鼠和对照小鼠脑组织中TGFBR2蛋白的表达情况.结果 miR-106b在3月龄和6月龄AD模型小鼠脑组织中表达升高,在9月龄模型小鼠脑组织中表达降低;通过体外实验,我们发现miR-106b与TGFBR2蛋白的表达呈负相关;荧光素酶报告实验表明TGFBR2 3'UTR序列中包含miR-106b的结合位点;TGFBR2蛋白在3、6、9、12月龄AD模型小鼠脑组织中表达均降低.结论 miR-106b可能通过调控TGFBR2蛋白的表达影响TGF-β信号通路,从而参与AD的发病.     

阿尔茨海默病的非转基因动物模型概述

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种由多种因素引发、在临床上表现为不可逆认知功能下降的神经退行性疾病。AD是当今世界所有国家均面临的一大挑战,其包括遗传型和散发型,其中95%以上的患者为散发型。目前,关于AD发病机制以及药物靶点的研究多在转基因动物模型上展开,此类模型大多根据遗传型AD中出现的基因突变发展而来,只能代表与遗传型AD相关的病例,忽视了后天因素在疾病发生发展过程中的重要推动作用。本综述基于AD发病假说,总结了近期发展的一些非转基因AD动物模型,主要是大、小鼠模型,并讨论了它们的优缺点及应用前景,为科研工作者选择合适的动物模型提供参考和依据。     

阿尔茨海默病相关转基因小鼠模型的构建

将人类淀粉样前体蛋白瑞典型突变基因（APPSW）与血小板衍生的生长因子α链（PDGFα）的顺式调控因子结合,构建成PDGF－APPSW转基因;并通过原核显微注射法将之导入C57小鼠受精卵内,成功地获得PDAPSW转基因小鼠模型,共出生22只仔鼠,其中5只基因组内有PDAPSW整合。     

5× FAD转基因小鼠在阿尔茨海默病研究中的应用进展

5×FAD转基因小鼠(transgenic mice with five familial Alzheimer’s disease)是携带5个家族性基因突变的APP/PS1转基因小鼠,其中与β-淀粉样蛋白前体(amyloid precursor protein, APP)相关的突变为K670N/M671L(Swedish)、1716V(Florida)和V7171(London),与早老素-1(presenilin 1,PS1)相关的突变为MI46L和L286V。5×FAD小鼠在1.5月龄时脑内已有大量的β-淀粉样蛋白(β-amyloid, Aβ),2月龄时开始出现神经炎性斑(neuritic plaque, NP)。5×FAD小鼠的病理表型包括淀粉样斑块聚集、神经元丢失、神经胶质细胞增生和记忆功能障碍等。5×FAD小鼠的生物学特性可能涉及脑内Aβ斑块的形成变化、Tau蛋白过度磷酸化、突触功能障碍、神经炎症反应、线粒体功能障碍、血脑屏障损伤、神经元损伤、内质网应激和眼部病变等。作为阿尔茨海默病的经典动物模型,5×FAD转基因小鼠在早期即可模拟AD患者晚期的神经病理过程及行为学表现,被广...     

阿尔茨海默病中的磁铁矿作用机制

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)与铁代谢异常密切相关.目前研究发现人脑内有生物磁铁矿的存在.磁铁矿是一种含有两种价态铁的铁氧复合物,呈反铁磁性耦合,在AD病人脑中其含量和结构均出现异常,表明磁铁矿在AD的发病中可能发挥重要作用,氧化应激可能是磁铁矿发挥作用的一个重要途径.深入研究磁铁矿的形成...     

ApoE4转基因小鼠在阿尔茨海默病研究中的应用进展

载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)在脑中参与胆固醇和脂质代谢,将胆固醇输送到神经元,并清除脂质碎片以促进髓鞘修复。ApoE4是ApoE三种亚型之一,为散发型阿尔茨海默病(sporadic Alzheimer’s disease, SAD)最主要的遗传危险因素。其发病机制可能涉及增加脑内β-淀粉样蛋白(β-amyloid, Aβ)沉积并减少其清除率、Tau蛋白过度磷酸化、脂质代谢异常和血脑屏障损伤。ApoE4转基因小鼠最早在2～4月龄出现Aβ相关病理表型,4月龄时海马总Tau蛋白和磷酸化Tau蛋白含量增加,且发生神经元丢失、树突损坏及突触减少,9月龄空间学习记忆能力下降。ApoE4转基因小鼠广泛用于AD防治药物的研究,如胆碱酯酶抑制剂利斯的明、谷氨酰胺酶拮抗剂JHU-083、GABA能神经元受体增强剂戊巴比妥、改善脑血管功能障碍的表皮生长因子、二十二碳六烯酸、菊粉和姜黄素等。本综述可为ApoE4转基因小鼠在AD研究中的应用提供参考与借鉴作用。     

Aβ在APP/PS1双转基因与APP/PSl/Tau三转基因阿尔茨海默病模型小鼠脑海马区分布的比较研究

目的:比较研究Aβ免疫阳性产物在老年APP/PSl双转基因(2xTg)与APP/PSl/Tau三转基因(3xTg)阿尔茨海默病模型小鼠海马的分布。方法:采用15月龄2xTg与同龄3xTg,分别进行Aβ单克隆抗体6E10免疫组化检测Aβ阳性神经元及斑块。结果:在海马区2xTg组Aβ沉积多发生于细胞外,形成大量Aβ阳性斑,而3xTg组则主要沉积于细胞内。结论:这种Aβ分布的差异可能与3xTg模型早期即有神经元丢失有关。     

Aβ在APP／PS1双转基因与APP／PS1／Tau三转基因阿尔茨海默病模型小鼠脑海马区分布的比较研究

目的：比较研究Aβ免疫阳性产物在老年APP／PSI双转基因（2xTg）与APP／PSI／Tau三转基因（3xTg）阿尔茨海默病模型小鼠海马的分布。方法：采用15月龄2xTg与同龄3xTg,分别进行Aβ单克隆抗体6E10免疫组化检测AB阳性神经元及斑块。结果：在海马区2xTg组Aβ沉积多发生于细胞外,形成大量Aβ阳性斑,而3xTg组则主要沉积于细胞内。结论：这种Aβ分布的差异可能与3xTg模型早期即有神经元丢失有关。     

炎症在阿尔茨海默病中作用机制的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种进行性神经退行性疾病,特征是认知功能下降,主要影响个体的记忆和学习能力.AD发病机制至今尚不明确,主要有β淀粉样蛋白沉积和神经原纤维缠结两大核心病理,这些蛋白质沉积可以通过持续的炎症和氧化应激致神经元功能障碍和细胞死亡,大脑中这种持续的免疫反应已经被认为...     

端粒和端粒酶紊乱促进阿尔茨海默病的机制研究进展

端粒是真核细胞染色体末端的特殊结构,由DNA与蛋白质复合而成,可保护染色体末端免于降解和融合。随着细胞分裂,端粒逐渐缩短,从而驱动细胞和个体衰老,但是部分细胞可以通过表达端粒酶或其他方式延长端粒。阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种与衰老密切相关的神经退行性疾病,大量研究揭示了血液或大脑细胞端粒长度改变与个体AD风险以及AD病程密切相关。AD小鼠模型研究数据表明,延缓端粒缩短可显著改善学习记忆能力,端粒酶可以通过依赖和不依赖其酶活性的方式改善小鼠的认知能力和病理表型。该文总结了端粒的结构与功能,综述了端粒长度改变与AD风险间的相关性研究,讨论了端粒酶预防AD发生发展的分子机制,系统性解析端粒及端粒酶紊乱与AD间的联系,对于扩大AD研究的广度和深度具有积极意义。     

基于网络药理学的大黄治疗阿尔茨海默病作用机制研究

基于网络药理学探讨大黄治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制.借助TCMSP数据库及Uniprot数据库筛选出大黄有效成分及靶点基因.通过Drugbank、Dis Ge NET和TTD数据库筛选出阿尔茨海默病的靶点基因;成分靶点与疾病靶点映射后使用Cytoscape 3.7.1软件构建药物有效成分-靶点蛋白相互作用网络,使...     

基于网络药理学的四君子汤治疗阿尔茨海默病作用机制研究

基于网络药理学探讨四君子汤治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制.借助TCMSP数据库及Uniprot数据库筛选出四君子汤有效成分及靶点基因.通过Drugbank、Dis Ge NET和TTD数据库筛选出阿尔茨海默病的靶点基因;成分靶点与疾病靶点映射后使用Cytoscape 3.7.1软件构建药物有效成分-靶点蛋白相互作用...     

阿尔茨海默病性别差异机制的研究进展

阿尔茨海默病是(Alzheimer's disease,AD)一种中枢神经系统退行性疾病,以认知、记忆障碍为主要临床症状,老年斑和神经纤维缠结为主要病理特征。AD发病率、临床表现和病理改变具有显著的性别差异,本文从大脑结构与功能、性激素类型、基因表达以及社会行为习惯等方面综述AD性别差异机制的研究进展。     

脂联素改善阿尔茨海默病模型小鼠焦虑情绪及工作记忆

目的：探讨脂联素（APN）预处理对9月龄三转基因阿尔茨海默病（3xTg-AD）模型小鼠学习记忆能力和焦虑情绪的影响。方法：选取9月龄3xTg-AD小鼠及C57BL/6J小鼠,分为4组：WT+Saline组、3xTg-AD+Saline组、WT+APN组和3xTg-AD+APN组,每组8只。将全部小鼠进行侧脑室埋管术后,恢复7 d,在自由清醒状态下分别经侧脑室给予生理盐水或APN,采用旷场、新物体识别及Y-迷宫3种行为学手段检测小鼠的情绪及学习记忆能力。结果：①在旷场实验中,与WT+Saline组小鼠相比,3xTg-AD+Saline组小鼠在中央区域的活动时间明显缩短,在外周区域的活动时间明显延长,给予APN后可有效逆转3xTg-AD小鼠的该现象,表明脂联素可有效缓解3xTg-AD小鼠的焦虑情绪。②新物体识别实验中,3xTg-AD+Saline组小鼠的辨别指数为（-16.7±10.1）%,明显低于WT+Saline组的（18.0±8.2）%（P<0.01）和3xTg-AD+APN组的（15.7±8.8）%（P<0.01）,表明脂联素可明显改善3xTg-AD小鼠的识别记忆能力损伤。③Y-迷宫实验中,3xTg-AD+Saline组小鼠的自发交替正确率为（40.0±1.7）%,明显低于WT+Saline组的（56.6±4.6）%（P<0.01）和3xTg-AD+APN组的（53.9±5.6）%（P<0.01）,表明脂联素能够逆转3xTg-AD小鼠工作记忆能力的损伤。结论：脂联素可以改善9月龄3xTg-AD小鼠的焦虑情绪及识别记忆和工作记忆能力损伤,可能在AD的预防和治疗中发挥有效作用。     

秀丽隐杆线虫模型在阿尔茨海默病研究中的应用

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是一种与年龄相关的神经退行性疾病,该疾病的病理特征为老年斑（SPs）和神经原纤维缠结（NFTs）的存在。目前,阿尔茨海默病患病率呈现逐年上升的趋势,寻找完全治愈或延缓阿尔茨海默症发展的有效疗法和药物迫在眉睫。秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）的基因和神经元功能与人类具有高度同源性,可作为研究阿尔茨海默病发病机制研究的较好模型。本文综述AD的发病机制假说、秀丽隐杆线虫AD模型以及线虫模型在AD治疗中的应用进展,旨在为后续研究AD提供理论参考。