应用RAPD方法对近交系小鼠进行遗传检测的研究

目的　为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法。方法　用 6条随机引物对 6个品系近交系小鼠基因组DNA进行PCR扩增。结果　 6条随机引物中p2、p3、p5和p6四引物扩增的条带差异较为明显。结论　RAPD方法是一种有效的近交系小鼠遗传检测手段     

近交系剑尾鱼的STR遗传检测技术

目的建立近交系实验用鱼DNA检测方法,用于遗传质量控制。方法以RR-B、RW-H、BY-F三个近交系剑尾鱼的基因组DNA为主要研究对象,并以非选育剑尾鱼作对照,采用STR（short tandem repeat）引物扩增方法检测不同品系在DNA上的异同。设计10对STR引物,优化PCR电泳条件,使用相同的实验条件进行重复,以得到可靠的扩增条带,筛选出特异性引物。结果有4对引物可扩增出稳定条带,1对引物（AY204223）的PCR扩增条带在非选育群中表现多态性,在RR-B与BY-F系表型一致,与RW-H表型不同。这些STR位点能够区分剑尾鱼三个近交系品系。结论STR检测技术可望用于近交系剑尾鱼的遗传质量监测。     

红鲫C1HD近交系RAPD标记的建立

目的建立红鲫C1HD近交系的RAPD标记。方法从80条随机引物中筛选出20条扩增效果和多态性较好的引物,对8尾红鲫C1HD近交系和8尾普通红鲫基因组DNA进行RAPD扩增。结果S333引物扩增出一条特异性条带,大小约为2.1 kb。结论S333引物扩增出的特异性条带可以作为区分普通红鲫与红鲫C1HD近交系的分子遗传标记。     

近交系剑尾鱼的遗传生化标记研究

目的通过研究对RR-B、RW-H、BY-F三个近交系和非选育剑尾鱼的研究比较,建立近交系剑尾鱼的遗传生化标记检测技术。方法依照国标GB／T14927.1-2008的遗传操作规程优化实验条件,对三个近交品系及非选育群剑尾鱼的不同组织的6个遗传生化位点进行研究,以得到其遗传生化图谱。结果在6个生化位点中,同一品系剑尾鱼同工酶存在组织特异性,多数同工酶在肝中活性较强。同一生化位点在不同品系间存在差异。RR-B系在葡萄糖磷酸异构酶（Gpi）、6-磷酸葡萄糖脱氢酶（Gpd）位点表现出特异性条带,RW-H系在过氧化氢酶（Ce）位点表现出特异性条带。同一生化位点在各品系内表现较为一致,而在非选育剑尾鱼中在上述三个生化位点表现出多态性。在酯酶（ES）、碱性磷酸酶（AKP）、乳酸脱氢酶（LDH）位点,各品系谱带不易区分其差异。结论建立了剑尾鱼近交系生化标记检测技术,可望用于近交系剑尾鱼的遗传质量监测。     

布氏田鼠封闭群遗传结构的随机扩增多态DNA分析

目的使用随机扩增多态DNA标记建立标准化的布氏田鼠封闭群遗传质量控制分子标记库。方法使用高盐沉淀法从鼠尾中提取布氏田鼠基因组DNA。采用40条PRAD引物对布氏田鼠封闭群进行PCR扩增,琼脂糖电泳分离条带,参考标准分子量标记计算条带大小,并使用多态位点数、单态位点数以及多态位点比率评价种群的遗传多样性。结果筛选出8个能获得清晰稳定扩增条带的RAPD标记。这8个RAPD标记检测到的多态位点数存在明显差异。8个引物得到的遗传多态位点的数据之和能揭示种群的遗传结构。结论本实验建立了检测布氏田鼠封闭群遗传结构的RAPD标记。     

木霉肽类代谢产物对豇豆土著根瘤菌遗传性状的影响

利用RAPD与ISSR分子标记检测手段,分析了哈茨木霉T2-16肽类代谢产物处理豇豆土著根瘤菌,对其遗传性状的影响,同时,比较了RAPD和ISSR两种不同分子标记在检测根瘤菌种间的遗传相似性以及遗传变异性的分辨力.实验中,从100条引物中筛选到具有多态性的ISSR引物5条,从80条引物中筛选到具有多态性的RAPD引物6条,用5条ISSR引物扩增出54条带,多态性条带比率为75.93 %;6条RAPD引物扩增出61条带,多态性条带比率为68.85 %.两种分子标记均能揭示出处理前后根瘤菌间的遗传差异,但ISSR标记比RAPD标记可检测到更大的遗传变异.根据两种标记的结果,对供试的根瘤菌进行聚类分析,结果表明,土著根瘤菌经木霉肽类代谢产物处理后,与出发菌株相比,表现出一定程度的遗传分化和遗传差异性.     

利用RAPD和ISSR分子标记分析怀地黄种质遗传多样性

用RAPD与ISSR技术对怀地黄的8个品种和2个脱毒品系进行了种质遗传多样性分析。分别从80条RAPD引物和44条ISSR引物中筛选出适合怀地黄种质分析的17条RAPD引物和10条ISSR引物,用于RAPD和ISSR分析。17条RAPD引物共扩增出177条带, 多态性位点数为109; 多态性位点比率为61.58%;平均多样性指数(I)为0.3135;每个位点的有效等位基因数（Ne）是1.3641; 10条ISSR引物共扩增出110条带. 多态性位点数为79; 多态性位点比率为71.58%;平均多样性指数(I)为0.3577;每个位点的有效等位基因数（Ne）是1.4037。 基于扩增条带数据库建立了各自的Jaccard遗传相关系数矩阵,构建了相似的分子树状图,将10个供试材料分为2类:一类群含组培85.5、大田85.5、组培9302、大田9302、金状元和金白6个材料;另一类群含北京1号、大红袍、地黄9104和野生地黄4个材料。两种分子标记的分析结果呈极显著正相关(r＝0.649)。结果表明,RAPD与ISSR标记适合于怀地黄种质遗传多样性分析,ISSR标记技术是一种多态性和重复性优于RAPD技术的实用技术。     

65份野生油茶种质遗传多样性的ISSR和RAPD标记分析

利用ISSR和RAPD标记,对名邛台地野生油茶种质进行遗传多样性分析。从60条简单重复序列引物中筛选出16条引物,在65份样品中共扩增出213条带,其中多态位点为203个,多态位点百分率为95.31%;从30条寡居核苷酸引物中筛选出8条引物,共扩增出105条带,其中多态性位点94个,多态位点百分率为89.52%。结果表明:名邛台地野生油茶种质具有较丰富的遗传多样性,ISSR和RAPD标记可以应用于油茶种质遗传多样性分析。     

近交系小鼠过氧化氢酶-2遗传生化标记位点的研究

目的为了进一步完善近交系小鼠遗传生化标记检测方法,对近交系小鼠过氧化氢酶-2生化标记位点进行研究。方法将CBA/Ca与BALB/c交配得到杂交F1代动物,同时将CBA/Ca与C57BL/6交配得到杂交F1代动物,然后通过F1代动物之间的交配,以及F1代动物与母代的回交,得到F2代动物,对F2代动物进行过氧化氢酶-2生化标记检测。结果在杂交F1代不表现的过氧化氢酶-2的b型基因,在F2代出现。结论近交系小鼠过氧化氢酶-2遗传生化标记位点的等位基因a是完全显性的。     

一种新的近交系实验动物遗传监测方法及小鼠性别相关RAPD标记的发现

我们用21个10 bp的随机短引物对来自昆明、成都、上海、北京四个地方的BALB/c小鼠以及C57BL小鼠、昆明种小白鼠进行了随机扩增多态DNA(RAPD)分析,发现13个引物的扩增产物在BALB/c小鼠和C 57 BL小鼠中有差异,8个引物的扩增产物在BALB/c小鼠和昆明种小白鼠之间不同.在四个地方的BALB/c小鼠中,成都、上海、北京的BALB/c小鼠其遗传背景均一,而来自昆明的BALB/c小鼠中,有2只的4个引物的扩增产物不同于其它的BALB/c小鼠,表明这两只BALB/c小鼠可能曾发生过某种程度的遗传改变或污染。实验结果显示RAPD方法是一种有效的近交系实验动物遗传监测手段。实验中一个有趣的结果是,在OPG 2、OPE 4、OPE 9的扩增产物中,发现了严格的性别依赖的PAPD标记。OPE 9扩增产物中,凡雄性个体都有一条0.88 kb的标记.OPG 2、OPE 4则在所有的雄性个体中多扩增出一条约1.2 kb的带。通过交叉PCR扩增和斑点杂交证明OPG 2、OPE 4 得到的雄性特异性RAPD标记虽分子大小一致,但不具同源性。这些性别相关RAPD标记的染色体定位和性质分析正在进一步进行中.     

应用40对微卫星引物对6种近交系小鼠遗传背景进行监测的研究

采用40对引物的微卫星DNA PCR遗传质量符合要求的BALB／C－nu0nu-,DBA/2,SCID,T739,TA2,615等6种近交系小鼠进行遗传监测,结果26对引物有稳定的扩增结果,5对引物表现为单态性,21对引物表现出多态性,其中D2Nds3,D3Mitl5,D3Mitl7,D3Mit18,D16Mit7等6对引物表现出显著的多态性,反映了各品系小鼠独特的遗传背景,可应用于区别小鼠品系,监测系间的遗传污染,为有关小鼠品系积累了遗传背景资料,有助于将实验动物的遗传监测从表墼这度到DNA水平。     

河南地方野生小鼠与近交系小鼠的扩增片段长度多态性分析

目的 从分子水平上阐明河南省兰考地区捕获的野生小鼠(LK)与4个小鼠品系(B6,BALB/c,DDK,PWK)之间的遗传差异及遗传关系,从而进一步确定该种野生小鼠的种属及培育野生来源近交系小鼠品系.方法 利用25对引物,对野生小鼠及4个小鼠品系进行扩增片段长度多态性(AFLP)分析.结果 检测到2035条扩增条带,多态...     

10个品系小鼠的RAPD 分析

小鼠是应用最为广泛的实验动物,预先了解品系或近交系的遗传纯度或系间遗传距离,对于试验材料的选取和实验结果分析都有很大帮助.传统的实验动物遗传监测多限于基因表型的检测,检测位点在整个基因组中所占比例小,分布不均.由于RAPD方法的优势,用一系列引物可检测出覆盖整个基因组的遗传改变,在动、植物品系鉴定和遗传监测方面已取得大量成果(陈洪等,1994;沈曦等,1999),但对多品系小鼠的研究报道较少.因此,本研究选用10个常用小鼠品系,筛选较好的多态标记,建立各品系的RAPD图谱,以区分不同品系的小鼠,为今后的质量监测工作提供参照标准;同时根据RAPD扩增结果计算出各品系间的相对遗传距离,在DNA水平探讨不同品系小鼠间的亲缘关系.     

辽宁省6种常用近交系小鼠10个微卫星位点的遗传质量检测报告

目的利用微卫星技术对辽宁省6种近交系小鼠进行遗传质量分析。方法根据Mouse Genome Database和相关文献选取10个多态信息丰富的位点和引物,进行PCR扩增和PAGE电泳,对小鼠的遗传多态性进行研究。结果不同品系小鼠同一位点的扩增结果表现出多态性,同一品系同一位点表现单态性,所有小鼠的10个位点都处于纯合状态;遗传距离分析表明,C57BL/10与C57BL/6J小鼠之间的遗传距离最近,为0.1021,遗传距离最远的是BALB/c与C57BL/10、C57BL/6J,分别为0.1635和0.1614。结论运用所筛选的10个微卫星位点可以对近交系小鼠进行遗传质量检测,说明该方法具备可行性。     

昆明小鼠4个可能近交系的基因分型验证

在我国,昆明小鼠作为一种实验动物广泛应用于药理和遗传学相关的研究领域。但由于昆明小鼠属于远交群,而且不同地区的种群间已经出现了严重分化,缺乏具有显著特征的近交系,这使得它在生物学上的应用受到了很大的限制。研究人员已经以昆明小鼠为背景培育出了几个可能的近交系,但由于缺乏可靠的遗传检测,至今未得到广泛的认可和应用。文章收集昆明小鼠的4个已经60代以上兄妹交配繁殖的可能近交系,并以两个标准近交系BALB/c和C57BL/6为参照,利用30个微卫星标记对每个品系的5只小鼠进行了微卫星基因分型,进而分析其遗传纯度。结果发现,品系A1和品系N4在本研究所用的30个位点均呈纯合状态;而T2和N2均在D15Mit16位点呈杂合状态。本研究第一次为我国昆明小鼠近交系的遗传学纯度提供了可靠的分子水平证据。今后应当加强昆明小鼠近交系的标准化,以扩大其在遗传学方面的应用。     

Random sequence oligonucleotide primers detect polymorphic DNA products which segregate in inbred strains of mice

The random amplification of polymorphic DNA (RAPD) using primers of arbitrary nucleotide sequence has been extremely valuable in identifying heritable markers in a variety of systems. The present studies examined whether the RAPD technique can identify large numbers of polymorphisms that can be used to construct genetic maps in inbred strains of mice. By screening the inbred mouse strains C57BL/6J and DBA/2J with 481 random 10-mer oligonucleotide primers, we identified 95 polymorphisms and mapped 76 of these by use of the BXD series of recombinant inbred (RI) strains. The results clearly demonstrate that the RAPD technique allows for the identification of large numbers of DNA-based polymorphisms that distinguish these two inbred strains of mice,and that such markers can readily be used to construct molecular genetic linkage maps.     

用微卫星标记技术对国内BALB/c小鼠遗传质量的分析

为了解和掌握国内BALB/c小鼠遗传质量状况,验证微卫星标记技术在近交系小鼠遗传检测中应用的可靠性,应用所筛选的小鼠不同染色体上的14个微卫星基因座,通过PCR扩增对北京、上海、沈阳、广州、长春、重庆和哈尔滨7个地区11个厂家提供的BALB/c小鼠进行遗传质量分析.结果北京、上海、哈尔滨及广州地区7家BALB/c小鼠在14个基因座均呈现一条清晰条带,且群体间呈单态性.沈阳、广州、长春和重庆4个群体有8个基因座在群体内表现杂合或呈多态性;其中沈阳和长春分别在1个基因座上表现多态性和杂合;广州另一群体有4个基因座出现杂合或多态性;重庆群体有7个基因座表现为杂合或多态性,在D10Mit180基因座与上海群体比较呈现多态性.     

SNP genotyping for the genetic monitoring of laboratory mice by using a microarray-based method with dualcolour fluorescence hybridisation

Ensuring the genetic homogeneity of the mice used in laboratory experiments contributes to the Reduction aspect of the Three Rs, by maximising the quality of the data obtained from any animals that are used for these purposes, and ultimately reducing the numbers of animals used. Single nucleotide polymorphism (SNP) genotyping is especially suitable for use in the analysis of the genetic purity of model organisms such as the mouse, because bi-allelic markers remain fully informative when used to characterise crosses between inbred strains. Here, we attempted to apply a microarray-based method for a SNP marker to monitor the genetic quality of inbred mouse strains, so as to validate the reliability, stability and applicability of this SNP genotyping panel. The amplified PCR products containing four different SNP loci from four inbred mouse strains were spotted and immobilised onto amino-modified glass slides to generate a microarray. This was then interrogated through hybridisation with dual-colour probes, to determine the SNP genotypes of each sample. The results indicated that this microarray-based method could effectively determine the genotypes of the four selected SNPs with a high degree of accuracy. We have developed a new SNP genotyping technique for effective use in the genetic monitoring of inbred mouse strains.