大鼠免疫性血小板减少模型的研究

采用注射兔抗大鼠血小板血清（ＡＰＳ）方法,建立了大鼠免疫性血小板减少模型。大鼠腹腔注射１：４稀释的ＡＰＳ（０．７ｍｌ／２００ｇ体重）,连续３ｄ,可使血小板数量显著降低,其降低率为８１±９％（ｎ＝１２）,且其骨随巨核细胞增生活跃,但注射ＡＰＳ后对血中红细胞数和白细胞数无明显影响．在注射ＡＰＳ的同时,给予大鼠灌胃强的松（１ｍｇ／２００ｇ体重）,可抑制ＡＰＳ所致的血小板减少的下降程度,并促进停止注射ＡＰＳ后血小板数的恢复。以上结果表明,该模型符合免疫性血小板减少性紫癜的病理特征。     

抗人活化血小板单抗SZ一51嵌合抗体的构建及表达

ＳＺ－５１是一种抗人活化血小板单克隆抗体,并显示了很好的导向血栓显像与导向溶栓性能。为了减少该单抗的免疫原性以及能获得高效表达的ＳＺ－５１“人源化”单抗,我们构建了真核表达载体ａ－Ｌｙｓ１７－５１ＶＫ／Ｈｕ．ａ－Ｌｙｓ３０－５１ＶＨ／Ｈｕ。应用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法分别将重、轻链表达载体导入骨髓瘤细胞ＳＰ２／０中,并在相应的选择性培养基中进行耐药克隆筛选,经过体外长期传代培养和二次单克隆化,获得了一株高效表达重组ＳＺ－５１嵌合抗体的细胞株。培养上清中抗体蛋白的表达量为５ｍｇ／Ｌ,经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实重组嵌合抗体具有与亲本鼠源单抗相同的ＧＭＰ－１４０结合特性,而且能与鼠源ＳＺ－５１单抗竞争结合活化血小板。本研究结果表明,基因工程“人源化”ＳＺ－５１单抗可以作为导向载体进行导向显像与导向溶栓,并为今后进一步应用于临床展示了良好的前景。     

三种高脂乳剂诱导实验性大鼠高脂血症模型的比较

目的探索理想的大鼠高脂血症动物模型造模方法。方法参考文献改进3种大鼠高脂配方,并制成高脂乳剂给大鼠灌胃,14d后眦内静脉取血测定血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）的含量。结果三种高脂配方均不同程度的使大鼠血清中脂代谢紊乱。结论高脂配方3可在短时间内形成高脂血症大鼠模型。     

降浊颗粒预防性给药对实验性高脂血症大鼠血脂含量的影响

目的:研究降浊颗粒对实验性高脂血症大鼠血脂含量的影响。方法:采用高脂高胆固醇饲喂大鼠4周,建立大鼠高脂血症模型,造模同时给药,分别于给药第2、4周后剪尾取血,检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量。结果:降浊颗粒分别以800mg/kg、400mg/kg和200mg/kg给大鼠预防性灌胃2周及4周时,均具有明显降低高脂模型动物血清TC、TG和LDL-cho含量,同时使TC/HDL-cho比值也明显降低的作用(与模型组比较分别为(P<0.001;P<0.01或P<0.05),并具有良好的量-效关系。结论:降浊颗粒可明显抑制实验性大鼠高脂血症的形成,主要能明显降低血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇含量。     

肠道有益菌群增效剂对高脂血症大鼠模型的影响

实验用血脂检查法,探讨对人工高脂血症大鼠模型灌胃肠道有益菌群增效剂９６０１（ 青春双歧杆菌加低聚木糖） 与９６０２ 青春双歧杆菌加葡萄糖酸钙微生态调节剂,１４ｄ 后检测血清总胆固醇（ＣＨ） 和甘油三酯（ＴＧ） 水平。结果表明：９６０１ 与自然恢复组比有显著差异,Ｐ＜ ０．０１ ,ＣＨ 降低率为３３ ％ ,ＴＧ 降低率为４４ ％ ;９６０２ 与自然恢复组别有显著差异,Ｐ＜ ０．０１ ,ＣＨ 降低率为４１ ％ ,ＴＧ 降低率为４８ ％ ;９６０１ 与三株口服液组比Ｐ＜ ０．０１ ,ＣＨ 降低率为３９ ％ ,ＴＧ降低率为４３ ％ 。１４ｄ 后９６０１ 与９６０２ＣＨ 与ＴＧ 水平均已恢复到正常水平,而自然恢复ＣＨ 仍高２５ ％ ,ＴＧ 仍高１７ ％ ,尚未恢复到正常水平。     

山楂降脂汤对高脂血症大鼠血脂水平的调节和血管内皮保护作用

目的观察山楂降脂汤对高脂血症大鼠血脂水平调节和血管内皮的保护作用,以及对肝组织的影响。方法采用高脂饲料饲喂法建立高脂血症大鼠模型,通过山楂降脂汤高、中、低剂量和阳性对照药血脂康分别灌胃,观察大鼠的一般情况及肝、肾组织的病理变化,检测大鼠丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆固醇（TCHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、一氧化氮（NO）和内皮素-1（ET-1）的含量。结果山楂降脂汤高、中、低剂量均能显著降低模型大鼠血液ALT、AST、UA、TCHO、TC、LDL-C、ET-1含量（P〈0.05,P〈0.01）,提高HDL-C、NO含量（P〈0.05,P〈0.01）,其中山楂降脂汤的作用随剂量递增。结论山楂降脂汤能显著调节机体的血脂水平,有效预防高脂血症和保护血管内皮细胞功能。     

毛菊苣醇提物对高脂血症性脂肪肝大鼠作用机制初探

目的:目前,国内外研究集中在毛菊苣降糖降脂方面的作用,并已有相关药物上市,但实验表明毛菊苣在保肝降脂作用方面也具有很好的效果,本文旨在探讨毛菊苣醇提物治疗高脂血症性脂肪肝的作用机制。方法:采用高脂饮食喂饲大鼠复制高脂血症性脂肪肝大鼠模型,实验分组为模型组、毛菊苣醇提物治疗高剂量组和低剂量组、苯扎贝特对照组和正常对照组;以高、低剂量毛菊苣醇提物进行干预,然后测定各组大鼠血清及肝组织中乳酸脱氢酶(LDH)、低密度脂蛋白(LDL)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、丙二醛(MDA)等指标的含量。结果:模型组大鼠血清及肝组织中LDH、TG、TC、LDL、MDA等活性均较正常组明显升高(P0.05),说明高脂饲料造模成功;与模型组比较,测得各治疗组大鼠血清、肝组织中相应指标均明显降低(P0.05;或P0.1);毛菊苣醇提物高剂量组与阳性对照组相比无显著差异。结论:实验结果表明:通过高脂饮食饲喂SD大鼠建立高脂血症动物模型的实验是成功的;同时,毛菊苣醇提物能够使脂肪肝大鼠的体重降低,降低肝脏脂肪性病变,降低脂肪肝大鼠血清ALT、AST含量,降低大鼠血清TC、TG、LDL-c,升高HDL-c;对模型SD大鼠肝脏中异常升高的MDA、LDH、LD均有明显的降低作用;形态学检查显示,醇提物高剂组肝脏脂变程度明显减轻,脂滴数量减少,提示该药物具有保肝降脂的药理作用。     

一种新型高脂血症易感大鼠的血脂水平与心血管并发症

目的观察一种新型高脂血症易感WSHc大鼠经高脂饲料诱导后血脂的动态变化和心血管并发症病理特点,为WSHc大鼠的应用提供参考。方法取7～8周龄雌性WSHc大鼠20只和Wistar大鼠10只,进行高脂饲喂,另取同周龄同性别的WSHc大鼠和Wistar大鼠各10只饲喂普通饲料,分别作为正常对照。观察高脂饲喂2、4、8、12、16周时的血脂动态变化,饲喂16周后采用心动超声检测大鼠心功能及左心结构,病理组织学观察心脏及主动脉病变。结果与正常对照组比,高脂饲喂2周后WSHc大鼠与Wistar大鼠血清总胆固醇(TC)与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)均显著升高;高脂饲喂的WSHc大鼠TC、LDL-c水平为:(6.34±2.12)mmol/L、(2.56±0.94)mmol/L,而高脂饲喂的Wistar大鼠TC、LDL-c水平仅为(2.93±0.23)mmol/L,(0.63±0.12)mmol/L;在高脂饲喂期间,WSHc大鼠TC始终维持在高水平状态。饲喂16周后,WSHc大鼠心脏射血分数升高,左心室室壁增厚,并出现心肌纤维化,心肌细胞凋亡程度增高;主动脉内膜增厚,弹力纤维排列紊乱,形成早期动脉粥样硬化病变。而Wistar大鼠经高脂饲料诱导后,心功能及心血管病变不明显。结论 WSHc大鼠对外源性胆固醇敏感,高脂饲喂后易发高脂血症及心血管疾病,且TC、LDL-c水平与临床高脂血症更接近,相较于普通大鼠,更适用于高脂血症及相关心血管并发症的实验研究。     

大豆磷脂对老龄大鼠单胺氧化酶,血小板,动脉内膜的影响

本文观察了饲料添加剂大豆磷脂对老龄大鼠脑组织单胺氧化酶(MAO)活力、血小板聚集功能及主动脉内膜的影响。结果表示喂大豆磷脂24月龄大鼠组的大脑皮层、小脑、海马的MAO活力较对照组高,接近3月龄组;二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板释放三磷酸腺苷(ATP)的量高于3月龄组,低于对照组;主动脉内膜扫描电镜观察内皮细胞轮廓清晰可见,有少数桥样结构,表面未见斑块样附着物,对照组则呈粥样硬化形态特征。上述结果提示,大豆磷脂作为饲料添加剂对某些衰老现象有明显的改善。     

D-木糖对高脂血症大鼠脂代谢调节的作用机制

为了探讨D-木糖对于高脂血症模型大鼠(Rattus norregicus)脂代谢的调控作用及其分子机制,以高脂饲料饲喂Wistar雄性大鼠7周建立了高脂血症模型大鼠,以同批次饲喂普通饲料的大鼠作为正常对照组;后将高脂血症模型大鼠再分为4组,包括高脂血症模型组,高浓度D-木糖给药组(给药剂量按照大鼠的体重为1.2 mg/g·d),中浓度D-木糖(给药剂量0.6 mg/g·d)给药组,低浓度D-木糖给药组(给药剂量0.3 mg/g·d)。给药组以灌胃方式给药,正常对照组和高脂血症模型组动物同时灌胃等量生理盐水。6周后处死动物取材,计算脂/体比;肝冰冻切片观察肝的病理学变化;肝匀浆处理,以蛋白质印迹法测定高密度脂蛋白受体(HDL-R)的表达变化;同时测定相关血液生化指标。结果表明,高脂血症模型大鼠给予D-木糖干预后,各剂量给药组的体重与脂/体比显著低于高脂血症模型组(P<0.05),二者谷胱甘肽过氧化物酶、总脂酶表达差异显著(P<0.05),但胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白的差异不显著(P>0.05);病理学改变表现突出,高浓度给药组肝细胞坏死与高脂模型组以及中低浓度给药组相比明显减轻,小叶结构完整,脂肪变程度轻,且较少炎性浸润;HDL-R蛋白表达水平在正常对照组与高脂血症模型有显著差异,各剂量给药组HDL-R水平呈现一定的药物浓度依赖性,高浓度给药组更接近于正常对照组。说明高脂血症大鼠经D-木糖治疗后,肝脂肪性变和肝细胞坏死程度减轻,肝细胞HDL-R的缺乏得到明显改善,证实D-木糖在改善高脂血症大鼠肝细胞损伤状况、保护肝组织结构与功能完整的过程中发挥调节作用。     

侧脑室注射orexin 对顺铂诱导大鼠异食癖的影响*

目的:研究化疗后止呕药联合侧脑室注射orexin能否改善顺铂诱导的异食癖与食欲减退,进一步探索吡嘧司特联合orexin抗呕吐的机制。方法:1腹腔注射止呕药并侧脑室置管给予orexin,观察大鼠高岭土摄取及摄食改变。2EIA法测量脑脊液中P物质含量。结果:1顺铂中高剂量组高岭土摄入增加、摄食和体重减少,呈量效依赖关系(P0.05~0.01)。2恩丹西酮早期抑制高岭土摄入(P0.05)。联合用药后延长该效应且晚期增加摄食(P0.05)。3阿瑞吡坦晚期抑制高岭土摄入,呈量效依赖关系(P0.05~0.01),联合用药后第4天,高岭土摄取减少、摄食增加(P0.05)。4吡嘧司特晚期抑制高岭土摄入,呈量效依赖关系(P0.05~0.01)。高剂量吡嘧司特晚期增加摄食(P0.05)。联合用药后第4、5天,高岭土摄入减少,第1、4、5天摄食增加(P0.05)。5注射顺铂脑脊液中P物质浓度升高(P0.05)。联合用药能够降低P物质浓度(P0.05)。结论:联合应用orexin能够延长止呕药作用期并改善顺铂引起的食欲减退。吡嘧司特通过减少P物质的含量,抑制高岭土摄入。     

天麻钩藤饮联合醒脑开窍针刺法对急性脑梗死患者血管内皮功能、脑血管储备功能及CD62P、CD63表达的影响

摘要 目的：探讨天麻钩藤饮联合醒脑开窍针刺法辅助治疗对急性脑梗死患者血管内皮功能、脑血管储备功能及血小板表面-颗粒膜糖蛋白（CD62P）、溶酶体膜糖蛋白（CD63）表达的影响。方法：选择2017年1月至2019年12月收治的急性脑梗死患者80例,依照随机数字表法分为对照组（40例,予以常规治疗）和观察组（40例,常规治疗的基础上给予天麻钩藤饮联合醒脑开窍针刺法辅助治疗）,比较两组临床有效率及治疗前后的美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分、长谷川智能量表（HDS）评分、Barthel指数、血管内皮功能指标（包括一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1））、脑血管储备功能指标[脑血管储备功能（CVR）、脉动指数（PI）]及血小板CD62P、CD63水平。结果：观察组的临床总有效率为92.50%（37/40）,对照组的临床总有效率为70.00%（28/40）,2组比较差异有统计学意义（P<0.05）。观察组NIHSS评分明显低于对照组,HDS评分和Barthel指数均明显高于对照组（P<0.05）。观察组治疗后血清NO、CVR水平水平明显高于对照组,血清ET-1、PI及血小板CD62P、CD63表达水平均明显低于对照组（P<0.05）。结论：在常规治疗的基础上,天麻钩藤饮联合醒脑开窍针刺法辅助治疗急性脑梗死的临床疗效显著,能够明显改善血管内皮功能、脑血管储备功能、神经功能,提高生活质量,改善血小板CD62P、CD63表达。     

Orexin 和P物质对顺铂诱发大鼠异食癖的影响

目的:观察食欲素(Orexin)和P物质(SP)对顺铂诱发大鼠异食癖的影响。方法:雄性Wistar大鼠被随机分为对照组和顺铂处理组,顺铂处理组给予大鼠顺铂(3或6 mg/kg,腹腔注射),对照组给予等量生理盐水。记录顺铂大鼠摄食高岭土量、摄食量的改变;Real-time PCR法观察顺铂对大鼠下丘脑Orexin和延髓中SP前体-前速激肽原A(PPT-A)m RNA表达的影响;分别和联合应用SP受体(NK1受体)拮抗剂阿瑞匹坦和Orexin-A对顺铂大鼠异食癖和摄食量的作用。结果:皮下注射3 mg/kg(低剂量组)的顺帕后大鼠高岭土摄入量和摄食量与对照组相比无明显差异(P0.05),而注射6 mg/kg(高剂量组)顺铂后,大鼠高岭土摄入量与对照组和低剂量组相比显著增加(P0.05);高剂量的顺铂作用12 h时,大鼠延髓内PPT-A的m RNA表达有轻微增加,但无统计学差异(P0.05),24 h后,延髓内PPT-A的m RNA表达量显著增加(P0.05)。在此后持续观察的5天中,顺铂可持续引起延髓中PPT-A的mRNA表达增高,在第5天时PPT-A的m RNA仍维持166.23±16.92%的高表达。高剂量顺铂抑制大鼠下丘脑中Orexin的mRNA表达,24 h时Orexin降低幅度最明显,为对照组的34.81±7.22%(P0.05)。此后检测的5天,Orexin浓度均低于对照组;将阿瑞匹坦和orexin联合应用,大鼠高岭土摄入量较单独应用阿瑞匹坦或orexin明显减少,摄食量显著增加(P0.05)。结论:P物质和orexin通路对顺铂化疗大鼠的异食癖和摄食量调控具有协同作用。     

共轭亚油酸对高脂血症大鼠脂质代谢及visfatin基因表达水平的影响

目的建立高脂血症大鼠模型,分析共轭亚油酸（CLA）对其脂质代谢和visfatin基因表达水平的影响,为进一步研究CLA对脂肪代谢的调控机制奠定基础。方法用高脂饲料饲喂雄性Wistar大鼠,4周后断尾采血测定血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（CHO）和血糖（GLU）含量,将构建成功的高脂血症大鼠分为实验组和对照组,实验组每天定时灌胃CLA（0.8 mL/0.1 kg）,每周定时称重,记录采食量;4周后眼球采血,测定血清中GLU、CHO、TG、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）水平;断颈处死大鼠,分离体脂并提取肝脏总RNA,半定量RT-PCR分析visfatin基因表达水平。结果高脂饲料饲喂4周后,模型组大鼠血清TG、CHO、GLU明显高于对照组大鼠（P〈0.05）,表明高脂大鼠模型构建成功。灌胃CLA 4周后,实验组大鼠体重、体脂和采食量低于对照组大鼠（P〈0.05）,血清中GLU、CHO、TG、LDL含量明显降低,但实验组HDL浓度升高。RT-PCR实验结果表明,实验组大鼠visfatin基因表达水平明显低于对照组大鼠（P〈0.05）。结论CLA能降低高脂血症大鼠摄食量,改善高血脂大鼠脂质代谢,并能降低visfatin基因的表达水平。     

大鼠心脏插管留置术的探讨

目的探讨大鼠右心房插管留置术实验方法。方法20只SD大鼠进行右心房导管置入术,术后随机分为2组（导管穿弹簧正内孔组、导管穿弹簧侧边入内孔组）,每组各10只。导管在体内固定后由颈背部引出,穿过弹簧,导管另一端固定于饲养笼外的支架上,导管外接三通管等。结果24 h对两组模型进行实验观察。（1）导管穿弹簧正内孔组：只有1只导管弹簧设备未完全破坏,另9只模型的导管被咬断或拉出了出来,10只模型都不能从导管抽取血液样本。（2）导管穿弹簧侧边入内孔组：导管和弹簧设备都完好,其中9只模型都能从导管抽取血液样本。结论导管穿弹簧侧边入内孔组模型方法是成功的,有一定的推广价值。     

Molecular defects of the platelet P2 receptors

Human platelets express three types of P2 receptors, which play important roles in platelet function: P2X₁, P2Y₁ and P2Y₁₂. Only patients with either quantitative or qualitative abnormalities of the platelet P2Y₁₂ receptor have been well-characterized so far. Deficiencies of P2Y₁₂ are associated with nucleotide deletions in the open-reading frame, frameshifts, and early truncation of the protein, or with a nucleotide substitution in the transduction initiation codon. Congenital dysfunctions of P2Y₁₂ are associated with molecular defects involving the sixth trans-membrane domain or the adjacent third extracellular loop of the receptor, which identify a region of the protein whose integrity is necessary for normal receptor function. A mutation, predicting a lysine to glutamate (Lys174Glu) substitution was associated with decreased ligand binding to the receptor, suggesting that it is responsible for disruption of the adenosine diphosphate (ADP)-binding site of the receptor. Patients with P2Y₁₂ defects display a mild-to-moderate bleeding diathesis, characterized by mucocutaneous bleedings and excessive post-surgical and post-traumatic blood loss. Defects of P2Y₁₂ should be suspected when ADP, even at high concentrations (≥10 μM), is unable to induce full, irreversible platelet aggregation. Tests that evaluate the degree of inhibition of adenylyl cyclase by ADP should be used to confirm the diagnosis.     

血脂康胶囊对高脂模型大鼠EPCs功能的影响

目的:高脂血症可增加心血管事件的发生率,本研究降脂红曲制剂血脂康胶囊对高脂模型大鼠的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生物学功能的影响。方法:给予Wistar大鼠高脂饲料30 d,造成高血脂大鼠模型,灌服血脂康胶囊。密度梯度离心法分别分离正常对照组,高脂模型组和血脂康治疗组大鼠骨髓单核细胞,应用EGM-2MV进行体外培养。以4~6代EPCs为靶细胞。采用Edu标记技术、CCK-8检测法、粘附能力测定试验、改良的Boyden小室、Matrigel法、荧光定量RT-PCR等方法分别检测EPCs增殖、粘附、迁移、体外成血管及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)等炎性因子的表达。结果:高血脂模型组大鼠EPCs的增殖、粘附、迁移及成血管能力均明显低于对照组,但炎症因子MCP-1表达则高于对照组;与高脂模型组EPCs比较,血脂康可明显促进EPCs的增殖、粘附、迁移及成血管,下调MCP-1的表达。结论:高脂状态下大鼠EPCs的增殖、粘附、迁移及成血管等生物学功能受损,血脂康能调整脂质代谢,改善高脂血症大鼠EPCs功能,从而起到保护血管内皮的功能,减少心血管疾病的发生。     

五味子对实验性水上漂浮及高强度运动大鼠垂体-性腺轴的影响

目的研究五味子对实验性水上漂浮及高强度运动大鼠垂体-性腺轴的影响。方法 34只SD大鼠随机分为非应激对照组（A组,n=10）、应激对照组（B组,n=12）和五味子干预组（C组,n=12）。A组不接受任何刺激,在生理盐水灌胃1周后进行取样。B组和C组进行为期10 d的递增负荷跑台训练,分别用生理盐水和五味子灌胃1周后,行3 h水上漂浮及3 h跑台高强度运动,结束即刻取血,测定血清皮质酮（CORT）、睾酮（T）、黄体生成素（LH）;随机取一侧睾丸,HE染色观察组织病理结构;电子显微镜下观察超微结构。结果 （1）B组大鼠与A组相比,睾酮水平显著下降;C组大鼠与B组相比,睾酮水平无明显变化,皮质酮水平显著降低;黄体生成素在3组之间均无显著变化。（2）HE染色示3组大鼠睾丸组织病理无明显变化。（3）电子显微镜观察发现,B组大鼠睾丸Leydig细胞线粒体肿胀,电子密度增高;C组大鼠睾丸Leydig细胞线粒体结构趋向于正常,可见分泌颗粒。结论五味子对实验性水上漂浮及高强度运动大鼠睾酮水平无明显作用,对睾丸超微结构有一定保护作用。