切断猫L_2背根后脊髓Ⅱ板层一氧化氮合酶的表达变化

采用 NADPH- d酶组织化学方法 ,观察一氧化氮合酶 (NOS)在成年猫脊髓 L2 节段板层的分布 ,并探讨切断 L2背根对 板层 NOS含量的影响。结果显示 ,NOS主要分布于正常成年猫脊髓 板层的神经膨体及少数神经元胞浆内。切断L2 背根 10天后 ,手术侧 板层 NOS的平均灰度较非手术侧明显增加 (P<0 .0 5 ) ,神经膨体密度则较非手术侧明显减少 (P<0 .0 1) ,这表明 ,切断背根可致相应节段脊髓 板层 NOS含量明显减少。提示 NOS在成年猫脊髓 板层的生理和病理变化中可能有其功能意义     

背根切断对脊髓后角Ⅱ板层BDNF,NT-3表达的影响——免疫组织化学研究

目的　采用免疫组织化学技术探讨切断背根 (L1)后脊髓Ⅱ板层脑源性神经营养因子 (BDNF)和神经营养因子 3 (NT 3)表达的变化。方法　将成年雄猫 5只行单侧L1背根切断术 (对侧为非手术侧 )。术后 5天取L1脊髓制作2 0 μm厚冰冻切片 ,用BDNF及NT 3抗体分别进行免疫组化染色。观察BDNF、NT 3免疫阳性反应物在脊髓的分布 ,计数单位面积内Ⅱ板层BDNF阳性膨体密度及NT 3阳性细胞数。结果用t检验进行统计分析。结果　BDNF样免疫反应物在Ⅱ板层主要分布于神经膨体 ,NT 3样免疫反应物在神经元及胶质细胞均有分布。背根切断后 ,手术侧Ⅱ板层BDNF阳性膨体数量明显较非手术侧者减少 (P <0 0 1)。而手术侧Ⅱ板层NT 3阳性神经元及胶质细胞数量则较非手术侧者明显增加(P <0 0 1)。结论　背根切断后脊髓Ⅱ板层BDNF ,NT 3的表达发生不同变化。BDNF减少 ,而NT 3表达增多。提示BD NF和NT 3在脊髓损伤修复中的不同作用。     

去部分背根后猫脊髓Ⅱ板trKC表达的变化

目的　探讨部分去背根猫脊髓 板 (L3 、 L5) trk C的表达变化。方法　将 15只成年猫分正常组、单侧备用根术 (切除一侧 L1 - L5,L7- S2 背根节 ,保留 L6备用根 )后 3天和 10天组 (n=5 )。取各组脊髓 L3 、L5节段制作 2 0 μm冰冻切片 ,用 trk C兔抗血清以免疫组织化学 ABC法染片 ,观察 tr KC在脊髓 板层的分布 ,测量各组 板层 tr KC的平均灰度。结果　在正常组 tr KC阳性物主要分布于脊髓腹角中间带及背角深部的神经元。而 板层仅见 tr KC匀质状阳性染色。去部分背根后 3天 ,手术侧 L3 、 L5脊髓 板层 tr KC的平均灰度均较非手术侧及正常组者增加 (P<0 .0 5 )。 10天时 ,手术侧 L5平面 tr KC的平均灰度已恢复到近对侧和正常对照组水平 (P>0 .0 5 ) ,而 L3 平面仍较对侧及正常组者高 (P<0 .0 5 ) ,但已较3天者减少 (P<0 .0 5 )。去部分背根后 3天 ,手术侧 L3 、 L5脊髓 板层 tr KC的含量均较非手术侧及正常组者减少。 10天时 ,手术侧 L5平面 tr KC的含量已恢复近对侧及正常水平 ,而 L3 平面虽有恢复 ,但仍未达正常者水平。结论　 tr KC的表达变化可能与脊髓可塑性有关。     

切断部分背根对脊髓Ⅱ板层c-jun,c-fos表达的影响——免疫组织化学研究

目的：探讨c-fos、c-jun与脊髓可塑性的关系,方法：将成年雄猫25只分为正常组、假手术后3天组,假手后10天组,单侧备用根术（切除一侧L1－L5,L7－S2北根节,保留L6为备用根）后3天组和单侧备用根术后10天组（每组5只）。取各组动物的L5脊髓用4％多聚醛固定后制作20μm厚冰冻切片,每例动物间隔5张切片,分别用c-fos（稀释度1：3000,Sigma）,c-jun（稀释度1：1000,Santa Cruz)抗体行ABC免疫组化染色,DAB棕色反应显色,结果：正常组及假手术组猫脊央灰质各层内,c-jun的免疫阳性反应物主要出现在神经元胞核,但胞浆亦有弱阳性反应。部份去背根后3天及10天,单侧各用根手术组Ⅱ板层c-jun阳性神经元的数量及反应强度均正常组及假手术明显增多（P＜0．05）,但术后3天与10天组间无显差异（P＞0．05）。与c-jun比较,各组脊髓内均未见c-fos的阳性细胞。结论：切断部分背根导致脊髓Ⅱ板层c-jun表达上调,提示c-jun可能与脊髓Ⅱ板层可塑性有关。     

针刺对部分背根切断后猫脊髓Ⅱ板层SP、CCK、L－ENK和5－HT神经纤维可塑性的影响──免疫组化定量分析

本研究用免疫组化结合图像分析观测了针刺对切除一侧Ｌ１－Ｓ２背根（保留Ｌ６背根）猫脊髓Ｌ５Ⅱ板层内含Ｐ物质（ＳＰ）、胆囊收缩素（ＣＣＫ）,亮氨酸脑啡肽（Ｌ－ＥＮＫ）和５－羟色胺（５－ＨＴ）神经纤维可塑性的影响。结果如下：非针刺组手术侧Ⅱ板层ＳＰ和ＣＣＫ阳性面积分别为非手术侧的７７％和４６％,而针刺组手术侧ＳＰ已恢复到非手术侧水平,ＣＣＫ为非手术侧的６６％,均比非针刺组明显增加。术后３０天再切断Ｌ６备用根后两组动物手术侧ＳＰ和ＣＣＫ阳性面积显著下降,表明针刺促进备用根中ＳＰ和ＣＣＫ神经纤维发生可塑变化;手术切断背根上Ｌ－ＥＮＫ阳性面积无影响,而针刺后有所增加,表明针刺能影响中间神经元的Ｌ－ＥＮＫ神经纤维发生可塑性变化;背根切断后下行投射的５－ＨＴ阳性面积明显增加,而针刺无进一步促进作用。     

肝细胞生长因子在正常大鼠腰段脊髓和背根神经节的表达

目的:观察肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)在大鼠脊髓和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的表达。方法:取健康成年6只SD大鼠运用免疫组织化学染色技术检测HGF在腰段脊髓、背根神经节内的表达和分布。结果:在L4-6段脊髓,HGF免疫阳性产物可见于各板层神经元,尤以脊髓前角运动神经元明显;在DRG中,HGF免疫阳性物质可见于以大、中型为主的神经元的胞浆及突起中。结论:脊髓和背根神经节内的HGF通过与受体c-Met结合可能在神经再生及突触可塑性方面起一定作用。     

猫内脏躯体反射节段性的分析

刺激猫内脏大神经,在一根肋间神经记录反射放电(VSR),然后切断与记录的神经同节段或邻近节段的背根,或孤立脊髓,分析 VSR 的传入与传出间的节段关系。结果是不论切断同节段背根或其他节段背根,只要保留一部分节段的内脏传入,即可记录到 VSR,但幅度减小,潜伏期延长。横切脊髓,孤立出一个节段的脊髓,保留其背根腹根,亦可在该节段的传出神经记录到 VSR。孤立出多个节段的脊髓,但只保留高位一根背根,在低位肋间神经也同样可记录到较小的 VSR。     

神经生长因子家族成员NGF、BDNF、NT-3和NT-4在猫L6脊髓的分布

采用免疫组织化学方法观察神经生长因子家庭成员NGF、BDNF、NT3和NT4在成年猫L6脊髓的分布.结果在L6脊髓灰质均可见四种生长因子的免疫阳性细胞,这些细胞主要是腹角及背角深部的大神经元及背角浅层的小神经元.灰质内亦内NGF、NT3及NT4阳性的胶质细胞,但数量多少不等.其中NT3者最多,其次是NGF,NT4者最少.此外,Ⅱ板层内还可见较多BDNF及少量NT-3阳性神经膨体.本文结果表明,在成年猫脊髓存在NGF、BDNF、NT3和NT4,但其分布有差异.     

吗啡对备用根大鼠脊髓Ⅱ板层背根终未的影响——抗氟化物酸性磷酸酶组化定量研究

应用酶组化方法和图象分析探讨脊髓Ⅱ板层无髓传入纤维终末标记物——抗氟化物酸性磷酸酶(fluoride-resistant acid phoshatase,FRAP)活性的变化,从而了解吗啡对备用根大鼠的侧支出芽有无促进作用。结果显示:备用根大鼠手术侧L_3、L_4和L_5节段Ⅱ板层FRAP阳性反应物面积因切除了大部分腰段背根于17天时下降到最低水平,于34天时L_3平面开始回升,即其阳性面积比17天时增大5倍多。吗啡备用根大鼠17天时其术侧Ⅱ板层阳性反应物面积也降到最低水平,唯L_3Ⅱ板层的阳性面积比17天备用根者大4倍,表明17天时阳性面积已开始回升;而到34天时术侧L_4Ⅱ板层阳性面积比17天时增大75％,比34天备用根大鼠增大一倍。表明吗啡促进了背根无髓纤维的侧支出芽,而出芽的纤维更快地分布到L_4节段,稍后也分布到L_4节段Ⅱ板层。     

福尔马林致痛对大鼠脊髓和背根神经节的P2X3的影响

目的:探索福尔马林致痛后大鼠脊髓和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的P2X3表达变化。方法:选取健康成年正常SD大鼠25只,分正常对照组和实验组;实验组为右侧足底皮下给予0.1ml 5%福尔马林,分别观察15min、30min、1h、3h后处死,采用免疫组织化学方法及图像分析技术检测脊髓腰段及L4～6背根节P2X3的表达情况。结果:与正常对照组相比,实验15min、30min、1h组脊髓后角Ⅱ层P2X3表达未见变化,实验3h组可见P2X3表达升高,但未见明显差异;实验15min、30min组DRG神经元P2X3表达未见变化,1h组开始表达上调,3h组表达明显升高,与各组相比有显著性差异。结论:福尔马林致痛能引起脊髓和背根神经节P2X3的表达上调,可能是其产生伤害性作用的机制之一。     

神经生长因子家族成员NGF、BDNF、NT-3和NT-4在猫L6脊髓的分布

采用免疫组织化学方法观察神经生长因子家庭成员NGF,BDNF、NT3和NT4在成年猫L6脊髓的分布。结果;在L6脊髓灰质均可见四种生长因子的免疫阳性细胞,这些细胞主要是腹角及凝角深部的大神经元及背角浅层的小神经元,灰质内亦内NGF,NT3及NT4阳性的胶质细胞,但数量多少不等,其中NT3者最多,其次是NGF,NT4者最少,此外,Ⅱ板层内还可见较多BDNF及少量NT-3阳性神经膨体,本文结果表明,在成年猫脊髓存在NGF,BDNF、NT3和NT4,但其分布有差异。     

针刺对鼠部分背根切断模型的背根神经节和脊髓背角内生长相关蛋白GAP43表达的影响

制备大鼠备用根模型 （切断单侧腰骶背根Ｌ２, ３, ４, ６, 及Ｓ１, ２, 保留Ｌ５ 背根）, 用免疫组织化学和原位杂交方法研究生长相关蛋白ＧＡＰ４３ 在相应节段背根神经节和脊髓背角表达的变化及针刺对其表达的影响。结果发现, 切断一侧Ｌ２, ３, ４, ６, 及Ｓ１, ２ 背根后, 它们对应的背根神经节内ＧＡＰ４３ 表达与正常对照组和假手术组相比无显著性差别, 而备用根神经节Ｌ５ 的ＧＡＰ４３ 表达较正常对照组和假手术组明显增强; 手术侧Ｌ５ 水平脊髓背角与正常对照组相比ＧＡＰ４３ 阳性信号加强。针刺后可促进手术侧Ｌ５ 神经节内ＧＡＰ４３ 表达增加; Ｌ５ 水平脊髓背角ＧＡＰ４３ 阳性信号也进一步加强这表明在一定条件下, 神经系统损伤可诱发中枢神经系统ＧＡＰ４３ 介导的可塑性变化, 针刺可通过ＧＡＰ４３ 对神经的可塑性起调节作用。     

猫腰髓中GABA能神经元的分布及年龄相关变化

目的观察和比较GABA能神经元在青年猫和老年猫L6段脊髓的分布,探讨GABA能神经元在脊髓中分布的年龄相关变化及意义.方法免疫组织化学ABC法.结果青年猫与老年猫L6段脊髓灰质内,GABA能神经元及神经纤维分布广泛,各个Rexed板层均可见GABA-IR细胞,其中背侧灰质阳性最强,其次是腹侧灰质.标记的GABA能神经元胞体为卵圆形、三角形、多角形和星形,可分为大、中、小三种类型.经比较,老年组GABA能神经元的数量及免疫反应性均明显低于青年组.结论老年动物脊髓调节功能的减弱可能与GABA能神经元减少有少.     

鸡胚脊髓背角中神经营养活性物质的初步分离和检测

从9d龄鸡胚脊髓背、腹角组织提取液中,用SephadexC-75凝胶层析法分离出DⅠ和DⅡ,VⅠ和VⅡ各组蛋白质组分,体外培养检测各组分对鸡胚背根节的神经营养活性,结果表明,DⅡ组分具有明显的促背根节神经突起生长的作用,而DⅠ组分无此作用;经SDS-PAGE电泳检测,DⅡ组分中蛋白质的分子量范围是61-15kD。而腹角的分离组分VⅠ和VⅡ对背根神经节神经突起的生长并无明显作用。     

电针对大鼠足底疼痛病灶所属脊髓节段一氧化氮合酶阳性反应的影响

采用NADPH-d组织化学方法,观察电针对大鼠一侧足底注射5%福尔马林50μl后病灶所属脊髓节段（L4-L6）一氧化氮合酶（NOS）阳性反应的影响。结果表明,福尔马林组大鼠L4-L6节段脊髓胶状质NOS阳性反应较生理盐水组显著增强,电针治疗组大鼠L4-L6节段脊髓胶状质NOS阳性反应与生理盐水组无显著差异。但明显弱于福尔马林组,提示电针治疗能抑制大鼠足底疼痛病灶所属脊髓节段NO合成,减弱脊髓神经元的敏感化,从而发挥镇痛作用。     

通过脊髓-延脑-脊髓回路引起的脊髓背根电位

过去的工作提示在针刺抑制内脏-躯体反射的效应中,针刺信号沿着脊髓腹外侧索上行至延脑,激活包括中缝大核在内的延脑内侧网状结构,由此发出下行冲动至脊髓,阻遇内脏Aδ传入纤维冲动的向上传递。本工作在经麻痹的清醒猫刺激以上神经回路的各个部分,均能在腰段及胸段引起背根电位。为了刺激上行纤维,我们将右半部胸段脊髓分离出一段,其尾端切断,前端仍与脊髓相连。在 T2-4水平将这样半孤立的脊髓(S_p)挂在钧形电极上刺激,所引起的 L6背根电位的潜伏期是48±6;在 P9水平刺激中缝大核(R_m)引起的 L6背根电位的潜伏期是36±3,刺激背外侧索表面引起的 L6背根电位潜伏期仅3—5毫秒。背根电位的时程和反射的抑制时程大体相符,但后一时程一般总是要长些。刺激 S_p 和 R_m 引起的背根电位的长度常数均在3毫米左右,表示是较细纤维的去极化。如在脊髓 T2-3水平切割背外侧索,则由刺激 S_p(T5-7)及 R_m 引起的 L6及 T11背根电位均消失。毁损延脑内侧网状结构后,刺激 S_p 引起的 L6及 T11背根电位大为减弱或消失。以上结果指示通过我们所提出的神经回路能引起脊髓较细传入末梢发生去极化,这种突触前机制可能在针刺镇痛效应中起一定的作用。     

慢性炎症痛引起DRG感觉神经元P2X3受体表达的改变

目的探讨脊髓背根神经节（dorsal root ganglia,DRG）P2X3受体参与大鼠足底慢性炎症痛相关的热痛觉过敏机制。方法 1）用行为学的研究方法,以大鼠右侧后脚掌注射松节油加石蜡（各占50％）0．1ml建立后脚掌慢性痛模型,用热测痛的方法测量后脚掌皮下注射松节油后的痛阈,每天1次,连续测15d。2）用免疫组织化学技术观察大鼠后脚掌慢性炎症后第2天和第7天,炎症侧脊髓背根神经节（L4—6）神经元中P2X,受体阳性细胞类型的分布变化;以及正常脊髓背根神经节（L4—6）神经元中P2X,受体阳性细胞类型的分布作为对照。结果1）炎症后大鼠后脚掌侧痛阈出现降低,在第2天痛阈达到最低,后逐渐恢复,14d后恢复正常痛阈值。2）正常大鼠P2X,主要表达于DRG的中小神经元上,炎症后DRG（L4—6）,中小型P2X,受体阳性细胞数比对照组明显增加。细胞平均面积增大。结论后脚掌慢性炎症痛可以引起大鼠对伤害性热刺激的痛觉过敏,并导致脊髓背根神经节（L4—6）神经元qbP2X3受体阳性细胞数目增加,表明P2X3在DRG的中小神经元的改变可能对松节油引起脚掌炎症痛时热痛觉过敏的形成与维持起重要作用。     

代谢型谷氨酸受体五种亚型在猫脊髓内的分布—免疫组织化学方法研究

为研究代谢型谷氨酸受体各亚型在猫脊髓内的定位分布特征,本实验采用免疫组织化学方法调查了代谢型谷氨酸受体五种亚型（ｍＧｌｕＲ１,ｍＧｌｕＲ２,ｍＧｌｕＲ３,ｍＧｌｕｒ５及ｍＧｌｕＲ７）在猫脊髓（颈２、颈６、胸５、腰６、骶１－２）内的分布状况。结果如下：（１）在背角深层（Ⅲ－Ⅳ层）和腹角内分布有大量中小型（＜３０μｍ）ｍＧｌｕＲ１样免疫反应阳性神经元,背角浅层（Ⅰ、Ⅱ层）为阴性;（２）ｍＧｌｕＲ２／３样免疫反应阳性产物仅见于背角Ⅱ层内侧部,其它部位为阴性;（３）致密的ｍＧｌｕＲ５样免疫反应阳性产物主要分布于猫脊髓背角Ⅱ层的神经毯内,背角Ⅰ层及深层呈中等密度染色;（４）致密的ｍＧｌｕＲ７样免疫反应阳性产物分布于背角Ⅱ层的神经毯内,背角Ⅰ层及深层（Ⅲ－Ⅳ层）呈中等密度染色。此外,腹角运动神经元和骶髓副交感核内的神经元亦呈现ｍＧｌｕＲ７样免疫反应阳性。单侧切断背根,发现术侧背角浅层内ｍＧｌｕＲ７样免疫反应阳性产物密度略有降低,而ｍＧｌｕＲ５样免疫反应阳性产物密度与对侧基本相同。本研究结果显示代谢型谷氨酸受体五种亚型在所调查的猫脊髓各节段内（颈２、颈６、胸５、腰６、骶１－２）的分布存在差异,提示它们在介导谷氨酸传递的信     

BDNF，NT-3在猫背根神经元的自分泌和旁分泌作用初探—原位杂交和免疫组织化学研究

探讨脑源性神经营养因子 (BDNF)、神经营养因子 3 (NT- 3)在成年猫背根节 (DRG)神经元是否存在自分泌或旁分泌作用方式。用特异的 trk B、 trk C抗体及 BDNF、 NT- 3的 c RNA探针 ,以免疫组化及原位杂交双标法观察了成年猫 L6DRG神经元 BDNF m RNA与 trk B、 NT- 3 m RNA与 trk C的关系 ,以了解 BDNF、 NT- 3在成年猫 L6 DRG神经元有无自分泌或旁分泌作用。结果表明 ,在成年猫 L6 DRG BDNFm RNA阳性细胞主要是部分中、小神经元 (4 2～ 5 7μm,<42μm) ,而 trk B阳性细胞则主要是部分大神经元 (>5 7μm)。未见双标的 BDNF m RNA和 trk B阳性神经元 ,但见一些双标的卫星细胞。与BDNF者比较 ,大多数大神经元既表达 NT- 3 m RNA,又表达 trk C。这表明在成年猫 L6 DRG神经元 ,NT- 3可能存在自分泌方式。但本文的结果未证明 BDNF在成年猫 L6 DRG神经元存在自分泌。     

灵芝孢子和L-NNA对脊髓损伤后背核线粒体细胞色素氧化酶活性的影响

目的探讨灵芝孢子和一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂L-NNA联合应用对大鼠脊髓半横断后受损伤的背核线粒体细胞色素氧化酶活性的影响.方法将20只SD成年雌性大鼠(200-250g)行右侧T11脊髓半横断30d后,对受损伤脊髓做细胞色素氧化酶酶组化染色;用图像分析方法检测L1脊髓段背核线粒体细胞色素氧化酶活性的变化,用酶组化电镜技术观察L1脊髓段背核细胞色素氧化酶活性的分布位置.结果与对照组相比,L-NNA组和灵芝孢子组L1脊髓损伤侧背核线粒体细胞色素氧化酶活性有所提高,灵芝孢子 L-NNA组损伤侧背核线粒体细胞色素氧化酶活性最大.各组L1脊髓背核细胞色素氧化酶活性均出现在线粒体内,具有细胞色素氧化酶活性的线粒体存在所有神经元胞体及其树突和轴突内,也存在于神经胶质细胞胞体及其突起内.结论灵芝孢子和L-NNA均可提高大鼠脊髓半横断后受损伤的脊髓背核线粒体细胞色素氧化酶的活性,两者联合应用更能提高受损伤的背核线粒体细胞色素氧化酶的活性.