植物体内超氧物自由基（O2^—）检测的EPR自旋捕捉技术

McCord和Fridovich在1968年发现了超氧物歧化酶(SOD)并研究了其生物学作用,提出了氧毒害的超氧物自由基学说。此学说已为越来越多的实验证实。在研究动物和植物的衰老以及逆境生理时,常需测定SOD酶,因此超氧物自由基(?)检测就显得十分重要。用酶学分析技术检测(?),不仅灵敏度低,而且由于(?)和羟自由基(·OH)均可产生     

超氧物歧化酶:作用面广尚需最后证实

氧原子是空气普通氧带阴电的分子,能极大地损伤活生物体。氧原子与脂肪、蛋白和DNA的反应性极强,能损伤细胞和组织,引起广泛的疾病。超氧物岐化酶(SOD)是一种能将氧原子转换成普通氧分子的酶。在欧洲,用牛超氧物岐化酶可在有限程度上治疗骨性关节炎。现在巳能用重组DNA技术大量生产,并试用于治疗一些其他疾病。在美国或欧洲现已临床试用它于器官移植手术、治疗心脏病发作和关节炎。     

凤眼莲超氧物歧化酶活性与抗寒性的关系

低温使凤眼莲叶内SOD活性降低,同时叶组织电解质外渗增加和TTG的还原力降低。用适量的联吡啶季胺盐(Paraquat)处理凤眼莲叶片,使超氧物歧化酶活性增强,则能减轻低温引起的伤害。试验提供了超氧物歧化酶与抗寒性有关的直接证据.     

莲子超氧物歧化酶的特性分析

比较了莲子、豇豆、绿豆、玉米、花生、菜心等6种植物种子的胚或胚轴超氧物歧化酶(SOD)的活性和热稳定性,其中莲子胚轴中SOD活性及耐热性最高。莲子胚轴粗提液中的SOD有Mn-SOD和Fe-SOD两种类型,而Fe-SOD耐高温。经100℃处理、硫酸铵沉淀、SephadexG-100凝胶过滤和DEAE-纤维素柱层析,获得纯化的耐热性强的超氧物歧化酶。纯化酶对KCN不敏感,活性受H     

生理高温对佛州侧耳超氧物歧化酶的影响*

佛州侧耳(PleurotusfloridanusSinger)子实体在生理高温(32±l℃)条件下,O2吸收速率和超氧阴离子(O2-)产生的速率增加;脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的积累增多.超氧物歧化酶(SOD)活性升高;过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)的活性相应地发生变化;放线菌素D抑制生理高温下SOD活性的升高;O2-清除剂甘露醇和外源SOD都影响生理高温对SOD的诱导效应;表明该侧耳在生理高温条件下SOD酶活性激应性的升高是O2-参与了SOD基因表达的调控,促进酶蛋白的合成.     

燕麦叶片衰老与活性氧代谢的关系

燕麦连体叶片与高体叶片衰老中,过氧化氢酶和超氧物歧化酶(SOD)活性下降,脂类过氧化产物丙二醛(MDA)迅速积累,组织自动氧化速率显著加快。植物激素BA,GA_3,2,4—D及光、亚胺环己酮(CH),EDTA处理均不同程度地延缓离体叶片的衰老过程,同时抑制过氧化氢酶和SOD活性下降,阻止MDA的积累和组织自动氧化速率的提高.推测叶片衰老中活性氧起着重要的作用。     

土壤渍涝对芝麻根系生长及抗氧化物酶活性的影响

在渍水条件下芝麻根系生长速度下降,干物质积累减少,根系的抗氧化物酶--超氧物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性先增后下降,POD活性下降较缓慢,超氧自由由基(O·-2)产生速率和丙二醛(MDA)含量随淹水时间的延长而升高.     

酵母超氧物歧化酶高产菌的选育

采用常规筛选方法从300多株不同种属的酵母菌中筛选到两株细胞生物量和超氧物歧化酶(SOD)含量都较高的菌株(酿酒酵母,编号为Y-8和Y一111)作为实验出发菌.经单倍体分离、N-甲基-N-亚硝基-N’-硝基胍(MNNG)诱变和群体杂交等手段,从中选育出一株细胞生物量略高于实验出发菌、超氧物歧化酶高达1350U/g湿菌体的SOD高产菌株(编号为ZDF-48),它的SOD产量分别为实验出发菌株Y-8和Y-111的2.2 倍和2.4倍.经分离纯化后蛋白含量及超氧物歧化酶活性测定等研究,证明我们选育出的ZDF-48是一株生产超氧物歧化酶的优良品系.     

乳清分离蛋白酶解物的抗氧化活性研究

研究了乳清分离蛋白(WPI)酶解物对DPPH.、超氧阴离子自由基和羟基自由基的清除效果,同时用还原法研究了其抗氧化活性。结果表明,WPI酶解物在体外具有较强的抗氧化能力。木瓜蛋白酶酶解物和胰蛋白酶酶解物对DPPH.、超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除能力和还原能力强于胰凝乳蛋白酶酶解物和胃蛋白酶酶解物。     

几种检测超氧物歧化酶活性反应的比较

超氧物歧化酶(SOD)的基质·O′_2是极不稳定的,因此检测SOD活性至今都是采用间接的方法。曾被用于该酶活力测定的方法有如下几种反应系统:①SOD在硷性条件下抑制肾上腺素的自动氧化;②SOD抑制氮蓝四唑(NBT)光化还原;③SOD在黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶存在下对NBT还原的抑制效应;④SOD在黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶存在下对细胞色素C还原的抑制。但最后这一反应在应用于组织粗提液时,细胞色素C氧化酶有严重干扰,所以目前较普遍采用的是前三种。本文通过对前三种反应的条件比较,进一步了解这些反应在检测SOD时的适宜条件及反应机理。     

急性低氧/复氧胁迫对克氏原螯虾抗氧化-能量代谢的影响

为研究低氧/复氧胁迫对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)抗氧化及能量代谢的影响,将克氏原螯虾暴露于(1.0±0.1) mg/L急性低氧胁迫和后续(6.8±0.2) mg/L复氧环境中,于低氧胁迫1h、6h及复氧1h、12h分别采集肝胰腺、鳃和血淋巴,研究低氧/复氧胁迫下克氏原螯虾抗氧化-能量代谢酶的活力变化,分析鳃和肝胰腺组织的超微结构改变。在低氧胁迫下,肝胰腺和血淋巴中SOD酶活力显著下降(P<0.05);复氧以后,肝胰腺、血淋巴及鳃组织中SOD酶活力均出现了显著上升(P<0.05)。SOD酶活力变化可能与复氧过程中超氧阴离子自由基的过量产生有关。在复氧12h后,血淋巴和鳃组织中MDA含量均出现了显著性增加(P<0.01),提示机体细胞在复氧胁迫下产生了脂质过氧化。在低氧胁迫下,肝胰腺、鳃和血淋巴中ACP、AKP酶活力显著上升(P<0.05);在复氧12h后,肝胰腺和鳃组织中ACP酶活力显著降低(P<0.01)。显示低氧/复氧胁迫影响了机体的非特异性免疫应答。在急性低氧胁迫下,肝胰腺、血淋巴与鳃组织中的LDH含量和总ATPase活力均显...     

三唑酮提高水稻幼苗抗旱性的研究

在-0.5MPa渗透胁迫下三唑酮提高水稻(Oryza sativa L.)幼苗相对含水量,降低丙二醛(MDA)含量,提高了抗旱性。三唑酮(75mg/L)可提高渗透胁迫下水稻幼苗过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性,对超氧物歧化酶(SOD)活性影响不大。加入蛋白质合成抑制剂环己亚胺试验证明,三唑酮对POD的效应是促进酶蛋白的合成。     

水稻叶片的衰老与超氧物歧化酶活性及脂质过氧化作用的关系

研究了从抽穗开花到籽粒成熟过程中,水稻植株顶部三片叶子的超氧物歧化酶(SOD),脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量及二磷酸核酮糖羧化酶活性的变化。实验结果表明:叶片的衰老伴随着 SOD 活性、RuBP 羧化酶活性及叶绿素含量的降低、丙二醛含量显著增高。分离了三个 SOD 的同工酶,证明为 Cu—Zn SOD。观察了 SOD 同工酶在叶片老化及酶液存放不同时间中的变化。讨论了叶片衰老过程中氧自由基对酶及质膜的损伤影响。     

水稻幼苗的低温伤害与膜脂过氧化

水稻幼苗在低温处理过程中,随着低温时间的延长和伤害的发展,叶片组织电阻急剧下降、膜保护酶超氧物歧化酶(SOD)活性降低、膜脂过氧化产物——丙二醛(MDA)含量明显增加。用四种自由基清除剂对水稻幼苗进行预处理,降低了低温引起的 MDA 含量的增生。相反,用 SOD 抑制剂预处理水稻幼苗,则提高了低温下 MDA 的含量。由此可以认为:水稻幼苗的低温伤害原因之一是与 SOD 活性受抑,加剧了自由基引发的膜脂过氧化作用,从而使膜受损伤有关。     

茉莉酸甲酯对烟草愈伤组织一些活性氧生成和相关酶活性的影响

烟草愈伤组织用茉莉酸甲酯(MJ, 1mgml-1)处理;同时将愈伤组织在含AIP(0.1mmol/L,水杨酸合成抑制剂)和/或AOA(1mmol/L,乙烯合成抑制剂)的MS培养基上进行暗培养,测定在活性氧产生和脂质过氧化中起作用的相关酶活性及一些代谢物的含量。结果表明,茉莉酸甲酯能激活超氧阴离子的产生,提高脂氧合酶同工酶1(LOX1)的活性从而启动脂质过氧化,对脂氧合酶同工酶3(LOX3)没有明显影响;降低过氧化氢(H2O2)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及抗坏血酸过氧化物酶(APX)等保护酶的活性,减少了膜脂过氧化中有毒物质丙二醛(MDA)的含量。AIP和AOA都对MJ的作用有不同程度的影响。MJ调节超氧阴离子和过氧化氢生成以及相关酶活性是通过不同的信号转导途径,MJ调节超氧阴离子和MDA生成、SOD和APX活性很可能是通过乙烯起作用,且对MDA生成和APX活性的调节可能通过水杨酸起作用;MJ直接调节LOX1活性,但对LOX3活性没有明显作用。     

酪蛋白酶解物的抗氧化活性研究

研究了酪蛋白酶解物对DPPH、超氧阴离子自由基和羟基自由基的清除效果,同时用还原法研究了其抗氧化活性.结果表明,酪蛋白酶解物在体外具有较强的抗氧化能力.木瓜蛋白酶酶解物和胃蛋白酶酶解物对DPPH、超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除能力强于胰凝乳蛋白酶酶解物和胰蛋白酶酶解物.胰凝乳蛋白酶酶解物和胰蛋白酶酶解物的还原能力强于木瓜蛋白酶酶解物和胃蛋白酶酶解物.     

大豆和花生种子超氧物歧化酶的同工酶研究

大豆种子超氧物歧化酶(SOD)同工酶谱带有7～8条,花生有5条,它们当中电泳迁移率最低的一条属于Mn-SOD,其余的都是Cu-Zn-SOD。 Mn-SOD在pH 3和pH 12时,很快丧失催化活性,而Cu-Zn-SOD能在一定时间内保持催化活力。经纯化的SOD同工酶的催化活性对pH的改变更为敏感。 酶液在存放过程和高温处理时,Cu-Zn-SOD的催化活性比Mn-SOD有较好稳定性。 在变性剂SDS作用下,Cu-Zn-SOD能保持催化活性而Mn-SOD活力丧失;相比之下,β-巯基乙醇使Cu-Zn-SOD失活而Mn-SOD仍有部分活力。8M脲存在时,SOD活力普遍下降,但Cu-Zn-SOD比Mn-SOD下降更厉害。SOD和β-巯基乙醇同时存在时,全部SOD同工酶完全失活。     

不同进化类型大豆种子超氧物歧化酶的比较

本文对不同进化类型大豆种子超氧物歧化酶(SOD)进行了比较分析。结果表明:(1)供试三种进化类型大豆种子的 SOD 同工酶酶谱一致,均为7条,其中一条为 Ma-SOD,其余6条为 Cu-Zn-SOD。(2)SOD 活性表现为:野生类型明显高于中间类型,中间类型明显高于栽培类型。(3)随着大豆籽粒百粒重的增大,种胚的 SOD 活性降低。(4)种皮颜色由黑到黄,种皮的 SOD 活性降低。讨论了大豆种子 SOD 活性与 Sofa 亚属内大豆进化的关系。     

几种昆虫体内保护酶系统活力的研究

菜粉蝶(Pieris rapae)体内存在着超氧物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶POD)等保护酶系统,SOD活力水平与虫龄关系密切。溴氰菊酯处理菜粉蝶后10分钟,SOD、CAT及POD的活力水平均高于正常虫体。溴氰菊酯处理褐边绿刺蛾 (Parasa consocia) 和褐刺蛾 (Thoseapastornata)后,中毒的虫体内SOD及CAT活力随着中毒程度加重而逐渐上升,接近死亡时又急剧下降;未中毒的活虫体内SOD及CAT活力水平比对照活虫为高,表明与昆虫耐药性有关。在褐边绿刺蛾和褐刺蛾体内未测得POD。     

用固定化方法研究超氧化物歧化酶的活性与结构的关系

 采用吸附、包埋、共价交联等方法固定化超氧化物歧化酶(SOD)所得固定化酶活力回收都不高,表明酶的催化反应速率受超氧阴离子自由基(O_2~-)扩散速率的控制。用海藻酸钠包埋SOD,固定化酶不表现活力,破固定化后所得的糊状物却有很高的活力。用戊二醛交联所得的固定化酶活力回收率也很低,表明ε-NH_3~+的正电荷是酶活力所必需。