在蛙胚切片中应用正丁醇透明和苏木精整染的方法介绍

在教学上,常用蛙卵做脊椎动物发生的观察材料。由于蛙胚切片染色方法繁琐,卵黄易破碎,往往得不到满意的切片,因此,我采用正丁醇脱水,取得较满意的效果。这种方法的优点有二:(1)能与水、酒精及石蜡互溶,故脱水之后可不经过二甲苯透明而直接进行石蜡浸透包埋。(2)脱水时很少引起组织收缩和变脆。采用苏木精-伊红整染,其特点是颜色鲜艳,无过染现象。 1.取材于3—5月到郊外池塘或稻田采集材料(蟾蜍或青蛙卵),一般在上午八时左右采集,此时的蛙胚处于囊胚期,以后各期可在双筒解剖镜下进行鉴别,选择所需的发育时期的胚胎,分别进行固定。 2.固定用Tellyesniczky氏液(重铬酸钾0.5克、冰     

植物材料光学和电镜蛋白A-金胶体结合体标记技术

这里介绍一种可在光学显微镜薄切片和电子显微镜超薄切片上标记的技术。我们初步应用这一技术来做燕麦球蛋白的定位,结果是成功的(图版图1,2)。现将操作方法简述如下: 一、样品制备 1.把切成2—3微米~3的新鲜材料,用磷酸缓冲液(pH 7.1)配制的3—4％甲醛(加2.5％蔗糖),在室温固定2小时; 2.用磷酸缓冲液清洗两次,每次30分;     

高分子人工血管材料大鼠肌肉内的急性期反应

本实验研究临床常用的几种人造血管生物材料在大鼠体内引起的急性期组织反应,并与自主研发的丝素蛋白改性聚氨酯(Silk fibroin-polyurethane(1:1),SF-PU(1:1))材料相比较,以期找出组织相容性最佳的材料。将涤纶(Dacron)材料、膨化聚四氟乙烯(Expanded polyterafluoroethylene,e-PTFE)材料、聚氨酯(Polyurethane,PU)材料、以及丝素蛋白改性聚氨酯复合材料(SF-PU(1:1))埋植入大鼠肌肉内,通过大鼠急性毒性实验、肌肉植入局部组织反应实验、局部组织切片染色、白细胞及血小板计数,探讨几种材料对大鼠的局部及全身影响,研究比较各组材料的组织相容性。结果表明:涤纶材料的组织相容性较差;其余各组材料的局部组织炎性反应较轻,且白细胞及血小板计数与假手术组无显著性差异。故认为涤纶作为临床上常用的人造血管材料组织相容性最差,所研发的SF-PU(1:1)材料及另两种临床上常用的e-PTFE材料和PU材料的组织相容性较好,尤以SF-PU(1:1)材料的组织相容性最好,结合SF-PU(1:1)优异的物理性能,在小口径人造血管的研制方面有很大的研究前景。     

大白菜是观察胞间连丝的好材料

大白菜 ,是北方常见的蔬菜 ,在教学过程中 ,我们发现 ,大白菜也是观察胞间连丝的好材料。方法是 :取 ·正 ·在·生 ·长的大白菜叶片一枚 ,取其叶柄 ,谨慎地将叶柄从外向内纵向折断 (此时内表皮一般还连在一起 ) ,用镊子撕去一块内表皮 (外表皮有时也可以 ) ,做成装片 ,在显微镜下可以观察到清晰的胞间连丝。此方法有以下优点 :1)取材方便　大白菜在我国北方种植很普遍 ,且春、夏、秋 3季均可大田种植。2 )制片方便　以往用黑枣做实验材料观察胞间连丝 ,需做切片 ,切片的薄厚影响观察效果 ,所以成功率较低 ;而用白菜叶柄做实验材料 ,只需做…     

用新鲜材料观察四种基本组织

从刚处死的动物身上取下所需的新鲜材料,观察动物四种基本组织的方法,取材容易,操作简便,不需要特殊药品及仪器,对缺少切片、标本的中学是很有用的。实验动物蟾蜍或蛙、小鼠都可。一般器材显微镜、天秤、载玻片、盖玻片、细口玻璃瓶、解剖器、大头针、青霉素小瓶、软木轮、培养皿(或用药瓶的塑料盖代用)、滤纸、大针、吸管。药品 30—40%氢氧化钠水溶液(以33％最佳),1%硝酸银水溶液,0.9%生理盐水、蒸馏水、紫药水或碘酒(市售)、任格(Ringer)氏液(两栖类生理盐水)。实验方法 1.处死动物:蟾蜍(或蛙)用探针毁脑和脊髓。小鼠用颈椎脱位法。 2.取材和观察上皮组织: 单层扁平细胞及细胞间质的观察取蟾蜍(或蛙、小鼠)肠系膜一块,铺展于带孔的软木轮上,四周用大头针固定。用蒸馏水洗肠系膜2—3次,洗毕,将此软木轮放在培养皿内(或塑料瓶盖),然后在肠系膜上滴入1%硝酸银溶液(液体没过肠系     

观察"胞间连丝"实验的改进

观察“胞间连丝”是生物学专业及中学生物学演示不可缺少的实验。实验材料一般选用柿核胚乳 ,作徒手切片及染色来观察。本人在多年实验教学过程中 ,曾在前人介绍处理染色基础上进行改进 ,切片用 1%龙胆紫 - 1%次甲基兰(或甲基兰 ) - 1%酸性品红复染法进行观察 ,可当堂完成 ,方法简易 ,效果较好 (《徽州师专学报》自然版 ,1990 .1.)。近两年来 ,又在此基础上对染色方法进一步改进 ,切片改用 0 .2 %龙胆紫溶液染色 10 min左右 ,然后水洗观察 ,可见柿核胚乳细胞壁被染色浅紫色 ,而胞间连丝被染成紫色 (或深紫色 )。此染色方法更简便单一 ,效果…     

消化道平滑肌分化的标记物选择

鉴别低分化肿瘤的组织学起源,常需借助免疫组化染色、在染色前,合理选择出特异性强、敏感性高的抗体、对及时确定诊断等具有重要意义、为作好平滑肌分化的标记物选择,本文观察了同时作过desmin(结蛋白)和ASMA(平滑肌肌动蛋白)标记的30例消化道平滑肌肉瘤切片,对两抗体的染色结果进行了对比分析.1 材料和方法30例均取自我院1986—1992年手术切除标本、10%福尔马林固定,石蜡切片4μm厚.93年用ABC法(试剂盒为 Vector公司产品),同时对30例切片进行了desmin和ASMA标记(抗血清为Dako公司产品).工作稀释度为1:50.desmin标记前,切片经0.05%胰蛋白酶消化.肿瘤旁肠肌壁和血管平滑肌作实验阳性对照,Tris-Hce,缓冲液取代—抗作平行阴性对照.阳性染色反应分为弱阳性(+):阳性细胞数<25%;中度阳性(++ ):阳性细胞数25～50%;强阳性(卅):阳性细胞数>50%.统计学处理用X~2检验.     

观察梯形穿孔板的好材料——桦木导管分子

取二、三年生新鲜桦木枝条用FAA固定液固定保存。实验时用徒手切片或滑走切片机切片,经番红·固绿染色;如用离析材料观察效果     

淋巴组织H.E染色"发灰"现象的纠正方法

在常规病理制片技术工作中 ,经常发现淋巴组织 (如淋巴结、鼻咽部组织及扁桃体等 )由于处理不当 ,造成切片染色后组织中间出现发灰现象 ,即镜下核浆染色模糊不清或组织成片不着色。这样将给临床病理诊断带来很大困难。为此 ,我们经大量实验 ,对原组织蜡块再切片后采用下述方法进行处理 ,收到了较好的染色效果。材料和方法1.标本来源 :选取 2 5例 H.E染色切片发灰的淋巴组织原蜡块再进行切片 ,切片厚 5μm。2 .切片的处理方法 :(1)将原蜡块所制切片浸入二甲苯 、 脱蜡各 5 min;(2 )无水酒精 、 浸洗各 2 min;(2 )用无水酒精乙醚等量 (1∶…     

观察动作电位的好材料

《生理学实验》中 ,观察神经动作电位这一实验 ,都是用蟾蜍的坐骨神经为实验材料。但我感到以蟾蜍的坐骨神经为实验材料有不方便处 :如受季节的限制 ,造成取材难 ,神经的长度不够 ,在进一步做动作电位的传导实验时 ,不能完成。为此 ,笔者采用鱼的侧线神经 ,来做这一实验 ,克服了上述的不足 ,实验效果很好。具体的做法是 :在市场购买中等大小的活鲤鱼 ,用单面刀片在鱼体的侧线前端 (近鳃盖后缘 1.5cm左右 )切开 1cm左右深的横向切口 ,后端切开 0 .5cm左右深的横向切口 ,然后用镊子从前端把侧线神经轻轻拉出 ,置生理液中保存备用即可。经对比…     

神经纤维中单胺神经递质的荧光组织化学显示实验

近几年,我们在实验教学中,以大白鼠眼睛虹膜为材料,用乙醛酸诱发荧光,得到满意的效果。根据我们的体会,该法反应稳定,敏感性高,操作简便,实验时间短(整个实验需2小时左右),适应于大学实验课教学的要求。为促进高校实验教学交流,现将该法介绍如下: 实验原理神经系统中的单胺能神经元所含的单胺类     

植物石蜡制片中透明和脱蜡技术的改良

石蜡切片是植物科学研究领域中一项重要的实验技术,为组织学的发展做出了卓越贡献。制片过程中采用不同试剂和处理程序对切片质量有较大的影响。该文针对常规石蜡切片方法在操作步骤上存在的繁琐及试剂安全性等问题,摸索出改进方法。实验结果表明,采用histolene(C1OH16)、环保透明剂van-clear、正丁醇(n-butanol)和松节油(oil of turpentine)代替二甲苯(xylene),可避免二甲苯的毒性危害;同时精简了传统石蜡切片的操作程序,缩短了实验周期并提高了制片质量。     

2002年生物奥赛冬令营实验试题(续)

(三)植物学实验题(100分)(四)动物学实验题(一). 观察指定的几种植物叶片的切片,描述它们的解剖学特征.根据这些特征指明它们属于哪一类型的植物(旱生植物、湿生植物、中生植物、沉水植物、浮水植物和挺水植物)的叶片,并说明你的依据.其中第一号切片中,有两个同一植物的不同叶片的切片,但结构上有差异.说出它们的区别是什么,并说出形成这种差异的原因。(40分)(二). 根据你所掌握的植物学知识,设计下列几个实验(设计要具体,如所需要的实验材料、仪器设备、试剂药品的浓度和配制方法以及操作方法等),用文字详细说明.(每小题各15分)A.观察植物…     

植物石蜡制片中透明和脱蜡技术的改良

石蜡切片是植物科学研究领域中一项重要的实验技术, 为组织学的发展做出了卓越贡献。制片过程中采用不同试剂和处理程序对切片质量有较大的影响。该文针对常规石蜡切片方法在操作步骤上存在的繁琐及试剂安全性等问题, 摸索出改进方法。实验结果表明, 采用histolene(C_1O H₁₆)、环保透明剂van-clear、正丁醇(n-butanol)和松节油(oil of turpentine)代替 二甲苯(xylene), 可避免二甲苯的毒性危害; 同时精简了传统石蜡切片的操作程序, 缩短了实验周期并提高了制片质量。     

玉米(籽粒)是观察胞间连丝的好材料

取玉米籽粒(颖果)浸泡在盛有清水的烧杯中一天左右。用镊子剥去表皮,露出糊粉层,制作徒手切片,注意刀口与糊粉层平行。把切成的薄片放在盛有清水的培养皿中。用镊子或毛笔挑取厚度均匀的薄片(不要破坏糊粉层细胞),放在载片的水滴上,或加一滴番红液,加盖片后在高倍镜下观察,即可清晰地看到胞间连丝。效果较好。     

一种用于DAPI染色的方法--Steedman's wax包埋切片法

以植物的胚珠和子房为实验材料,介绍一种用Steedman's wax 包埋对组织切片中的细胞核进行DAPI染色的方法.Steedman's wax 作为一种低熔点多酯蜡,具有与石蜡相似的性质,切片方法同常规石蜡切片,适合于切成厚度大于5 μm的连续切片.Steedman's wax包埋的切片能成功地进行DAPI染色.与用压片法和Technovit 7100或GMA包埋切片法进行的DAPI染色相比,用Steedman's wax 包埋切片法进行的DAPI染色具有廉价、操作简便、可进行连续切片、图象清晰等优点,特别在植物细胞程序化死亡(PCD)的研究中及细胞核DNA含量测定方面,有着较大的应用价值和潜能.     

青霉的液体悬浮培养法——对初中观察青霉实验的改进

青霉的观察是初中植物教学必做的实验之一。现行教材的操作方法是:将长有青霉的桔子皮在载玻片上涂抹,效果不理想。大学实验中采用的是玻璃纸半透膜培养等方法,在中学受条件限制也不理想。针对上述问题,笔者通过实验,在方法上加以改进,获得较为满意的效果。具体方法如下: 首先,用桔子皮(或旧皮革)按常规方法培养,获得成熟的青霉孢子。然后,按下面步骤进行:①将马铃薯或苹果等合适材料切碎,研磨,加适量清水(笔者采用材料:水=1:10的比例),用脱脂棉过滤,除去较大的材料团块,避免影响观察效果。②在大试管中加少量制得的研磨液,用接种环刮取成熟的青霉孢子,接入大试管中,充分振荡,     

一种用于DAPI染色的方法Steedman＇s wax包埋切片法

以植物的胚珠和子房为实验材料,介绍一种用Steedrnan‘s wax包埋对组织切片中的细胞核进行DAPI染色的方法。Steedrnan‘s wax作为一种低熔点多酯蜡,具有与石蜡相似的性质,切片方法同常规石蜡切片,适合于切成厚度大于5μm的连续切片。Steedrnan‘s wax包埋的切片能成功地进行DAPI染色。与用压片法和Technovit 7100或GMA包埋切片法进行的DAPI染色相比,用Steedrnan‘s wax包埋切片法进行的DAPI染色具有廉价、操作简便、可进行连续切片、图象清晰等优点,特别在植物细胞程序化死亡(PCD)的研究中及细胞核DNA含量测定方面,有着较大的应用价值和潜能。     

根癌农杆菌介导的芦荟遗传转化条件的研究

以美国库拉索芦荟(Aloe.arborescens)的横切薄层切片(transverse thin cell layer, tTCL)作为转化受体, 通过受体材料对抗生素的敏感性实验和Gus 基因瞬时表达率的研究, 找出了较适合的外植体转化条件。研究表明:芦荟对头雹霉素(cefotaxime) 和羧苄霉素(carbenicillin)不敏感, 而对卡那霉素(kanamycin)和潮霉素(hygromycin)敏感;用靠近顶芽的材料得到的横切薄层切片芽再生率高, 有较高的Gus 基因瞬时表达率;乙酰丁香酮(acetosyringone)在芦荟转化是不可缺少的, 对其转化有明显的促进作用。     

怎样进行徒手切片

我们最近在工作中得到一种徒手切片的经验,介绍如下: 1.材料的处理把需要切片的材料先切成薄片,再把薄片切成2—3毫米宽1厘米长的小片。如果是叶片则天然成为薄片,对一些细小的茎要观察茎的横切面的全面构造也可以整个切。对材料原来就很硬的可以用新鲜标本来切。 2.切片技术把被切材料放在一张质地较好的卡片纸或牛皮纸上,用左手食指按住,右手持刀片贴住食指先切去一部分,然后紧贴食指以平行方向切割,切割时刀片始终紧贴食指,食指地位也保持不动;仅利用指头肌肉活动,作极细微的指头退缩运动,这样方法如果多练习几次,即可熟练(如图)。作者总结本方法优点如下:(1)不须夹持