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1.
为深入了解乙肝病毒 (HBV)致癌机理 ,用套式PCR对广西 14例血清HBVDNA阳性的原发性肝癌患者癌组织、10例乙型病毒性肝炎患者血清及 10例乙肝病毒无症状携带者血清HBV核心基因启动子进行扩增 ,阳性者用Sanger氏双脱氧法做序列分析 ,发现肝癌组织 10例PCR阳性 ,阳性率 71.4 % ,所有PCR阳性标本的整合体均有乙肝病毒核心基因启动子双突变序列 (nt 176 2A→T ,176 4G→A) ,并且在其周围各序列都有不同部位的点突变 ,标本C14核苷酸的缺失突变高达10个。乙肝患者 6例PCR阳性 ,其中 3例乙肝病毒核心基因启动子发生双突变。无症状携带者中 4例PCR阳性 ,其中仅 1例发生双突变。结果提示乙肝病毒核心基因启动子双突变在肝癌患者中较常见 ,肝炎患者次之 ,无症状携带者居最后。 相似文献
2.
肝癌组织中HBV核心基因启动子突变的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
为深入了解乙肝病毒(HBV)致癌机理,用套式PCR对广西14例血清HBV DNA阳性的原发性肝癌患者癌组织、10例乙型病毒性肝炎患者血清及10例乙肝病毒无症状携带者血清HBV核心基因启动子进行扩增,阳性者用Sanger氏双脱氧法做序列分析,发现肝癌组织10例PCR阳性,阳性率71.4%,所有PCR阳性标本的整合体均有乙肝病毒核心基因启动子双突变序列(nt 1 762 A→T, 1 764 G→A),并且在其周围各序列都有不同部位的点突变,标本C14核苷酸的缺失突变高达10个.乙肝患者6例PCR阳性,其中3例乙肝病毒核心基因启动子发生双突变.无症状携带者中4例PCR阳性,其中仅1例发生双突变.结果提示乙肝病毒核心基因启动子双突变在肝癌患者中较常见,肝炎患者次之,无症状携带者居最后. 相似文献
3.
RT—nested PCR检测肾综合征出血热患者血清病毒核酸 总被引:3,自引:0,他引:3
采用异硫氰酸胍-酚-氯仿(AGPC)一步法提取病毒RNA,并依据肾综合征出血热病毒(HFRSV)核蛋白(NP)编码基因保守区核苷酸序列合成两对巢式引物,建立了逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nestedPCR)检测HFRSVRNA方法,应用此法对HFRSV感染的VeroE6细胞培养液及HFRS患者血清中的病毒RNA进行检测。结果显示,感染细胞培养液及35例HFRS患者血清均为阳性,正常的VeroE6 相似文献
4.
本文采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术对212例住院及门诊病人其中肝病患者98例(慢性肝炎43例、肝炎后肝硬化47例、原发性肝细胞癌8例)进行HCV-RNA检测。结果98例慢性肝病患者血清中HCV-RNA-PCR阳性27例(27.6%),114例非肝病患者血清中HCV-RNA-PCR阳性9例(7.9%),两组间差异非常显著(P(0.01),各种肝病患者的HCV-RNA-PCR阳性率均高于非肝病组。68例患者同时进行了HCV-RNA-PCR检测和抗-HCV检测,25例抗-HCV阳性的患者中HCV-RNA-PCR,21例阳性(84%),43例抗-HCV阴性的患者中HCV-RNA-PCR,9例阳性(20.1%)、有输血及血制品史者48例,其中HCV-RNA-PCR阳性16例(33.3%),164倒无输血史者中HCV-RNA-PCR阳性20例(12.2%),两组间差异非常显著(P(0.01)。结果表明:1.HCV感染与慢性肝病有密切联系,说明HCV感染是慢性肝炎、肝硬化、肝癌的致病因素;2.HCV-PCR法具有特异性好、灵敏度高、简便快速等特点,弥补了抗-HCV检测的不足之处,是目前确定HCV感染的主要手段;3.HCV感染与输血关系密切,因此对献血员进行常规HCV检测对预防由输血所致HCV感染有着极其重要的临床意义。 相似文献
5.
用套式多聚酶链反应(Nested-PCR)技术对169对HBsAg及HBsAg/HBeAg阳性孕妇及其新生儿外周血清进行了HBV-DNA检测,103对HBsAg阳性孕妇及其新生儿外周务中HBV-DNA阳性率分别为72.8%和33.0%;66对HBsAg和HBeAg双阳性的孕妇及其新生儿外周血清中HBV-DNA阳性率分别为86.4%和43.9%,对55例HBsAg及HBsAg/HBeAg阳性产妇产后 相似文献
6.
本文采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术对212例住院及门诊病人其中肝病患者98例(慢性肝炎43例、肝炎后肝硬化47例、原发性肝细胞癌8例)进行HCV-RNA检测。结果98例慢性肝病患者血清中HCV-RNA-PCR阳性27例(27.6%),114例非肝病患者血清中HCV-RNA-PCR阳性9例(7.9%),两组间差异非常显著(P〈0.01),各种肝病患者的HCV-RNA-PCR阳性率均高于 相似文献
7.
应用ELISA和PCR法检测502例乙肝病人血清,401例HBsAg阳性血清中,有114例(28.4%)抗-HCV和HCVRNA双项阳性,25例(6.2%)HCVRNA单项阳性;21例(5.2%)抗-HCV单项阳性。将HBsAg乙肝病人分成HBVDNA,HBeAg阳性组和HBVDNA,HBeAg阴性组。前者抗-HCV阳性率为11.6%~20.5%,HCVRNA阳性率为16.2%~20.5%。后者抗-HCV阳性率为20.2%~55.6%,HCVRNA阳性率为23%~60.3%。结果说明长期携带HBV者和慢性乙肝病人均可重叠HCV感染。HBVDNA阳性组抗-HCV和HCVRNA阳性率明显高于HBVDNA阳性组 相似文献
8.
Epstein-Barr病毒(EBV)进入鼻咽上皮细胞的途径,是人们研究EBV与鼻咽癌(NPC)的病因关系时所必须回答的一个问题。用抗EBV受体(EBVR/CR_2)单抗检测上皮细胞中该受体的表达已有报道,但对上皮细胞中EBVR/CR_2的基因结构仍需研究。我们采用PCR扩增和不对称PCR直接测序法,首次检测了10例NPC及3例正常人胚鼻咽上皮(Humanembryonicnasoparyngealepithelium,HENE)组织样本中EBVR/CR_2的EBV结合区的编码序列。这一片段的DNA序列测定结果显示,人NPC细胞和正常HENE细胞的EBVR/CR_2的EBV结合区的编码序列,与正常人B淋巴细胞的EBVR/CR_2的相应序列完全相同,提示EBV感染鼻咽上皮细胞可能与EBVR/CR_2基因的EBV结合区结构改变无直接关系。 相似文献
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10.
用套式多聚酶链反应技术监测乙型肝炎病毒的母婴垂直传播 总被引:4,自引:0,他引:4
用套式多聚酶链反应(Nested-PCR)技术对169对HBsAg及HBsAg/HBeAg阳性孕妇及其新生儿外周血清进行了HBV-DNA检测。103对HBsAg阳性孕妇及其新生儿外周血清中HBV-DNA阳性率分别为72.8%和33.0%;66对HBsAg和HBeAg双阳性的孕妇及其新生儿外周血清中HBV-DNA阳性率分别为86.4%和43.9%。对55例HBsAg及HBsAg/HBeAg阳性产妇产后的初乳进行了HBV-DNA检测,结果HBV-DNA阳性率为36.4%。结果表明HBsAg和HBeAg双阳性的孕妇及其新生儿外周血清HBV-DNA检出率较HBsAg单阳性的孕妇及其新生儿要高,其初乳中HBV-DNA的检出率也高。还对105例注射了乙肝疫苗及高价乙肝特异性免疫球蛋白的6月龄婴儿的外周血清进行了HBV-DNA检测,结果有23例阳性。 相似文献
11.
本文实验设计了套式PCR引物进行HBVDNA诊断。外引物限定HBVC基因的一个613bp片段,内引物限定其内-507bp的片段,扩增后产物被限制性内切酶图谱证明。该技术的特异性强,重复性好,灵敏性达到1-10fg,对HBV血清可做出明确诊断。应用这项技术,对42例HBcAb血清进行了检测,实验表明仅HBcAb阳性血清同带HBsAg的HBcAb阳性血清一样,体内持续进行着大量HBVDAN复制。 相似文献
12.
从临床肝病患者中选择两例HCV和HBV重叠感染者HSQ和SZH,他们血清中的生化指标丙氨酸转氨酶(ALT)持续异常,肝活检病理示有严重的肝损伤。在ALT异常期,血清学检测结果为HBsAg、HBeAg阳性,抗HCVIgG(包括C22、C33c)阴性,但套式PCR检测HCVRNA阳性,核心区cDNA序列分析发现该区有1个密码子(GGCnt385—387)缺失,对应缺失的氨基酸是甘氨酸(GLY),从血清学检测和序列分析结果推测,在HCV和HBV重叠感染中,HBV和HCV均可处于持续复制状态,抗HCVIgG抗体阴性可能是HCV的多蛋白前体翻译和病毒颗粒装配受到HBV干扰的结果。 相似文献
13.
HBV整合片段对人PCNA基因启动子的调控 总被引:3,自引:1,他引:2
H7C是从一例肝癌组织中克隆得到的HBV整合片段,其中保留有preS2基因的启动子及C端缺失的preS/S蛋白的阅读框架,我们用共转染方法研究了该整合片段地增殖细胞核抗原启动子的影响。结合表明在HepG2细胞中,含有上述HBV整合片段DNA的质粒PKSH7C-HpaI能以剂量依赖方式激活PCNA启动子。对SV40启动子而言,PCNA启动子有1-2倍的更高激活。而破坏preS/S表达的两个亚克隆PK 相似文献
14.
病毒性肝炎HAV,HBV,HCV,HDV和HEV重叠感染的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采用ELISA法检测了108例乙型肝炎病毒(HBV)感染者血清中的五种肝炎病毒──甲型(HAV)、乙型(HBV)、丙型(HCV)、丁型(HDV)和成型(HEV)肝炎病毒的标志物,并采用PCR技术检测了患者血清HBVDNA、HCVRNA及HDVRNA。结果五种肝炎病毒重叠感染者35例(32.4%),单纯HBV感染者73例(67.6%)。HBV、HAVM重感染率为4.6%,HBV、HCV二重感染率为9.2%,HBV、HDVM重感染率为14.8%,HBV、HEV二重感染率为1.9%,HBV、HCV和HDV三重感 相似文献
15.
利用PCR技术行反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
设计一对PCR引物,其中上游引物的5’端除目的基因外,还加T7RNA聚合酶启动子序列,以质粒(pSVLD3)为模板,通过PCR扩增出带有T7RNA聚合酶启动子序列的139bp的cDNA片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组RNA中核酶(Ribozyme)区的cDNA该核酶具有自身裂解功能,经测序发现该cDNA有2个碱基变异,以此PCR产物为模板,通过T7RNA聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其 相似文献
16.
抗甜菜坏死黄脉病毒单链抗体表达载体的构建及其表达 总被引:2,自引:0,他引:2
用PCR方法以分泌抗甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)单克隆抗体的杂交瘤细胞的基因组为模板,扩增了编码BNYVV单抗的重链可变区(VH)基因。测序表明,该VH序列属于小鼠II(A)亚类,全长为360bp,编码120个氨基酸。将其和先前克隆的轻链基因分别插入到一个含有连接VH和VL基因的连接序列的质粒之中,构建成单链抗体(scFv)基因的表达载体pTCscFv。将质粒在大肠杆菌中表达,ELISA法检测出 相似文献
17.
利用MPCR技术从乳腺组织分离到抑癌基因BRCA1的cDNA片段,将此914bp的片段克隆进质粒pUC118,并经全序列测定证实。序列分析表明,BRCAIcDNA编码的肽链NN2-末端有一锌指结构,抑癌基因BRCAI的产物可能是DNA结合蛋白,cDNA序列存在两个变异位点:一个是第409位的C→A(Asp→Glu):另一个是第879位的A→T(MIa同义突变)。以该片段为探针,检测6例乳腺癌组织中BRCAImIMA表达,一例表达明显下降,一例没检测到表达的mIMA产物,说明一些乳腺癌组织的BRCA1基因转录水平降低 相似文献
18.
本文以聚合酶链式反应(PCR)对35例乙型肝炎免疫指标(HBVm)全阴性的原发性肝细胞癌(PHC)患者血清,外周血单核细胞(PBMC)肝活检标本进行乙型肝炎病毒HBV-DNA检测,其检出率分别为34.29%,60.00%,68.57%,说明一部分血清HBVm全阴性的PHC患者血清并非无传染性,ELSIA法具有一定局限性。PBMC内有相当的HBV-DNA存在,这对于研究PHC患者体内HBV的存在情况 相似文献
19.
应用PCR技术扩增出HBVDNAC基因片段并与pAT153质粒重组,转化到E.coliRRI中,经体内扩增,提纯,用光生物素标记,制备了C基因的重组质粒探针。该探针检测灵敏度在Southern印迹中达1pg,在点印迹中为5pg。用此探针以Southern印迹方式配合PCR技术检测乙肝病人血清中的HBVDNA,在53例PCR产物电泳检测阴性的样品中,Southern杂交又检出18例阳性。 相似文献
20.
应用PCR技术扩增出HBV DNA C基因片段并与pAT153质粒重组,转化到E.coli RRI中,经体内扩增,提纯,用光生物系标记,制备了C基因的重组质粒探针。该探检测灵敏度在Southern印迹中达1pg,在点印迹中为5pg。用此探针以Southern印迹方式配合PCR技术检测乙肝病人血清中的HBV DNA,在53例PCR产物电泳检测阴性的样品中,Southern杂交又检出18例阳性。 相似文献