MnSOD与CuZnSOD基因转染细胞在电离辐射敏感性中的作用

诱导超氧阴离子（Ｏ２·）的产生是电离辐射损伤细胞和组织的重要机制之一。超氧化物歧化酶ＭｎＳＯＤ和ＣｕＺｎＳＯＤ是细胞内清除Ｏ２·的主要抗氧化酶。本研究将ＭｎＳＯＤ和ＣｕＺｎＳＯＤｃＤＮＡ真核表达载体分别导入ＣＨＯ细胞,以稳定表达这两种酶的ＣＨＯ细胞系为细胞模型,通过分析细胞形态学、线粒体功能和受照射细胞Ｄ０值变化比较研究了ＭｎＳＯＤ和ＣｕＺｎＳＯＤ对细胞辐射敏感性的影响。结果表明,ＭｎＳＯＤ表达的增强能明显降低细胞的辐射敏感性,同时维持线粒体的正常代谢功能,而ＣｕＺｎＳＯＤ则不能。由此提示ＭｎＳＯＤ和ＣｕＺｎＳＯＤ对细胞的辐射敏感性存在着不同的调控机制。     

人类巨细胞病毒与人类肿瘤

人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染能导致多种细胞生物学特性的改变,通过分子病毒学及分子生物学方法在数种人类恶性肿瘤组织中检出ＨＣＭＶＤＮＡ和（或）基因产物。ＨＣＭＶ基因产物可通过激活细胞内多种因子基因,刺激原癌基因表达,抑制抗癌基因产物功能等多种途径干扰细胞生长,分化的调控机制,诱导细胞发生恶性变,ＨＣＭＶ持续感染可以增加受感染细胞恶性特征的表达,大量实验结果证实了ＨＣＭＶ的致癌潜能,揭示了ＨＣＭＶ在     

CD23McAb抑制活化B细胞增殖机制的初步探讨

本研究用ＣＤ２３单克隆抗体交联活化的人扁桃体Ｂ细胞,证明ＣＤ２３ＭｃＡｂ对Ｂ细胞呈双向调节效应,即：高浓度区抑制Ｂ细胞增殖,低浓度区促进Ｂ细胞增殖,继而,用对Ｂ细胞有抑制效应浓度的ＣＤ２３ＭｃＡｂ交联Ｂ细胞膜ＣＤ２３分子,通过研究抑制效应恢复条件,探讨了ＣＤ２３ＭｃＡｂ产生抑制效应的作用机制。结果显示：去除ＣＤ２３ＭｃＡｂ后,抑制作用不能恢复,用ＳＡＣ再次活化,使Ｂ细胞恢复增殖状态,用促Ｂ细胞增殖     

细菌潜生体胞内节律振动对温度反应的研究

针对细菌潜生体胞内节律性振动对温度的反应性进行实验,以认识环境因素对波源（ＣｅｌＷａｖｅＯｒｉｇｉｎ）的影响,并进一步分析波源运动的机制。用相差显微镜油镜观察奇异变形杆菌（ＰｒｏｔｅｕｓＭｉｒａｂｉｌｉｓ）潜生体（ＣｒｙｐｔｉｃＧｒｏｗｔｈＣｅｌ,ＣＧＣ）菌落边缘,见到沿多个潜生体细胞长轴方向进行的快速黑白交替流动,温度升高时消失,温度降低时加剧。这种群体细胞在原位的同步节律性振荡是细胞在低温下发生胞内分子节律性凝结－溶解交替过程形成的,为一种胞内前分子马达的运动,我们称之为细胞波源     

《分子识别机制》

《分子识别机制》《分子识别机制,（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ）由ＭｉｃｈｅｌＤｅｌａａｓｅ编著,１９９１年ＶＣＨＰｕｂｌｉｓｈｅｒ出版,２８５页。分子识别机制是用现代方法去研究化学和生物系统相互作用的分子基础。该书汇...     

iNOS在不同种属血管细胞中诱导表达差异的比较研究

为了探讨不同种属血管细胞中ｉＮＯＳ基因诱导表达的差异及其分子机制,采用Ｎｏｒｔｈ－ｅｒｎ印迹、电泳迁移率改变分析（ＥＭＳＡ）和细胞转染实验对ｉＮＯＳ基因在人、牛、大鼠血管内皮细胞（ＥＣ）和兔、大鼠平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）中的诱导表达和转录调控机制进行了研究．结果显示,ＩＬ－１β可诱导人、大鼠的ＥＣ和大鼠的ＶＳＭＣ表达ｉＮＯＳ,但对兔ＶＳＭＣ和牛ＥＣ无诱导作用．在ＩＬ－１β＋ＴＮＦ－α＋ＬＰＳ作用下,人和大鼠血管细胞ｉＮＯＳ的表达活性显著高于牛和兔,同一种属动物的ＶＳＭＣ比ＥＣ更易被诱导活化．用含有大鼠ｉＮＯＳ基因上游－１０３７～－４３８片段的报告基因转染这些细胞,经细胞因子和ＬＰＳ处理后,被转染细胞的ＣＡＴ活性变化与细胞的ｉＮＯＳ表达活性相一致．上述结果表明,ｉＮＯＳ表达调节具有种属特异性和细胞特异性．ＥＭＳＡ证实在不同种属的ＥＣ和ＶＳＭＣ中,与ｉＮＯＳ基因表达调控区（－１０３７～－７８７）相互作用的蛋白因子是不均一的．提示不同种属血管细胞内特异转录因子的种类及浓度不同和（或）反式因子与顺式元件相互作用的方式不同可能是这种差异的分子基础．     

天然和氧化修饰型LDL,VLDL及HDL对培养人动脉平滑肌细胞原癌…

动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）是动脉粥样硬化（ＡＳ）斑块中的主要细胞,它的增殖在ＡＳ形成过程中极其重要,脂蛋白和氧化修饰型脂蛋白对ＳＭＣ增殖的影响以及ＳＭＣ增殖与原异常表达的关系是当前ＡＳ发病机制研究的热点之一,我们在建立人主动脉ＳＭＣ体外培养方法的基础上,观察了ＬＤＬ,ＶＬＤＬ及ＨＤＬ和相应的氧化修饰型脂蛋白对培养人ＳＭＣｆｏｓ,ｍｙｃ,ｅｒｂ－Ｂ原癌基因转录表达的影响,结果表明：（１）ＨＤＬ对ＳＭＣ     

血管平滑肌细胞增殖调控机理的研究进展

高血压和动脉粥样硬化是以血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖为主要病理特征的疾病,研究ＶＳＭＣ增殖调控机制对揭示这类疾病的发病机理具有重要意义。本文介绍ＶＳＭＣ表型转化的基因标志、组蛋白Ｈ_１激酶ｐ３４~（ｃｄｃ２）和生长因子对ＶＳＭＣ增殖的调节作用等方面的研究进展。     

人MCP cDNA在NIH3T3细胞中表达及功能研究

通过构建表达人膜辅因子蛋白ＭＣＰ编码区全长ｃＤＮＡ的重级载体ｐｃＤＮＡ３ＭＣＰ,以磷酸钙沉淀法转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞,用Ｇ４１８筛选阳性克隆,并鉴定ＭＣＰ ｃＤＮＡ在细胞中的表达。将血清梯度稀释并与细胞孵育,然后检测细胞活力：灭活的人血清不能引起对照细胞与ＭＣＰ转染细胞的胞毒作用,而新鲜人血清可使对照细胞发生补体依赖的细胞毒反应,ＭＣＰ转染细胞由于ＭＣＰ蛋白的合成,细胞受到保护不发生该反应。另外,Ｍ     

钙调素对细胞周期的调节

ＲＣ３细胞是一种用真核表达载体Ｐ＾ｃａｍ转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞建成的可调钙调素（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ,ＣａＭ）高表达细胞模型。通过分子杂交及蛋白免疫印迹方法证实在地塞米松（Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｍｅ,ＤＸＭ）作用下,ＲＣ３细胞可高表达ＣａＭ．ＣａＭ拮抗剂三氟拉嗪（ｔｒｉｆｌｕｏｐｒａｚｉｎｅ,ＴＦＰ）则使Ｇ１期细胞增加,Ｓ期细胞减少。高表达ＣａＭ使细胞分裂指数提高,Ｇ２期细胞减少,有丝分裂前期细胞     

水稻光合作用途径改良的可能性

日本《化学与生物》,１９９８年３６卷２期第８９Ｎ～９４Ｎ页报道：植物因其光合作用方式不同,分为Ｃ３植物、Ｃ４植物和ＣＡＭ植物。Ｃ３植物与Ｃ４植物光合能力不同,Ｃ３植物仅叶肉细胞与光合作用有关,在Ｃ３光合作用途径,通过Ｒｕｂｉｓｃｏ（核酮糖－１,５－...     

垂体腺苷酸环化酶激活肽对血管壁细胞成分的作用及其机制的实验研究

以培养的猪主动脉内皮细胞（ＥＣ）和肺动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）为主要实验对象, 垂体腺苷酸环化酶激活肽（ＰＡＣＡＰ）对正常及高脂环境下培养的ＥＣ、ＳＭＣ形态和功能的影响,并对其作用机制进行了初步探讨。结果显示：ＰＡＣＡＰ可部分对抗高脂因素造砀ＥＣ、ＳＭＣ形态的损伤;能提高ＥＣ抗动脉粥样硬化（ＡＳ）物质的产生;抑制ＳＭＣ的增殖;并具有抗脂质氧化作用。本研究表明,ＰＡＣＡＰ对ＥＣ、ＳＭＣ具有一定程度的细     

心衰发生的新假说：细胞凋亡可能是慢性压力超负荷导致心衰的机制

心衰发生的新假说：细胞凋亡可能是慢性压力超负荷导致心衰的机制最近,Ｂｉｎｇ在ＪＭｏｌＣｅｌｌＣａｒｄｉｏｌ上的编辑部文章中,提出了一个心衰发病机制的新假说,认为细胞凋亡可能是慢性压力超负荷导致心肌细胞死亡、心功能异常和心衰的重要机制。大量实验表明,压...     

膜去极化与cAMP在胰岛细胞株HIT中诱导CBP片段的转录活性

为了研究 Ｃ Ｂ Ｐ在胰岛 Ｈ Ｉ Ｔ 细胞中调节基因转录的机制,将不同的 Ｃ Ｂ Ｐ片段瞬时转染到细胞中,观察其转录活性．实验表明,在胰岛 Ｈ Ｉ Ｔ 细胞中,膜去极化及 ｃ Ａ Ｍ Ｐ 均可诱导 Ｃ Ｂ Ｐ３０（ Ｃ Ｒ Ｅ Ｂ结合功能区）转录活性增强,并有协同效应． Ｐ Ｋ Ｃ对 Ｃ Ｂ Ｐ３０ 的转录活性无影响;与 Ｃ Ｒ Ｅ Ｂ有更强结合力的 Ｃ Ｂ Ｐ Ｋ Ｉ Ｘ Ｓ／ Ｂ（氨基酸序列短于 Ｃ Ｂ Ｐ３０ 的 Ｃ Ｒ Ｅ Ｂ结合功能区）其基本转录活性及膜去极化、ｃ Ａ Ｍ Ｐ诱导下的转录活性均比 Ｃ Ｂ Ｐ３０ 更强．反义 Ｃ Ｒ Ｅ Ｂ 的过度表达可降低 ｃ Ａ Ｍ Ｐ诱导的 Ｃ Ｂ Ｐ的转录活性．提示在胰岛 Ｈ Ｉ Ｔ 细胞中,膜去极化及 ｃ Ａ Ｍ Ｐ对共转录因子 Ｃ Ｂ Ｐ转录活性的调节作用通过 Ｃ Ｒ Ｅ Ｂ介导．     

慢性肺心病肺动脉平滑肌细胞的胶原合成：体内及体外观察

肺动脉构形重建（ｓｔｒｕｃｔｒｕｒａｌｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ）是慢性肺心病的重要血管病变,但其发生机制至今未完全明了。病变以血管中膜平滑肌细胞肥大、增生和细胞外基质（包括纤维性与非纤维性成分）增多导致的血管壁增厚、血管腔狭窄为特征。本文用天狼星红－偏振光显微镜观察,真彩色全自动图像分析法,测量１０例慢性肺心病尸检肺小动脉中膜厚度及中膜内Ⅰ、Ⅲ两型胶原的含量和所占的百分比。用３Ｈ－胸腺嘧院核苷和３Ｈ－脯氨酸掺入法,观察缺氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）对培养的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣＳ）ＤＮＡ及胶原合成的影响。结果：（１）肺心病组４３７支肌型肺动脉平均中膜厚占血管直径的百分值高于对照组５±１．０８％;（２）肺心病组的Ⅰ型和Ⅲ型胶原面积分别占中膜面积的５４．６２％和５１９％,而对照组两型胶原占中膜面积小于２％。（３）ＨＥＣＣＭ组平滑肌细胞的３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－脯氨酸掺入量（ｃｐｍ值）,均明显高于常氧对照组（ＮＥＣＣＭ）,两组相比,有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。（４）细胞周期分析,ＨＥＣＣＭ组平滑肌细胞的Ｇ０／Ｇ１期细胞数百分值比ＮＥＣＣＭ组少２８％,Ｇ２＋Ｍ期细胞百分值则比ＮＥＣＣＭ组高３０％。可以认为,缺     

慢性低氧性肺动脉高压鼠原代培养肺动脉平滑肌细胞内钙的检定

用共聚焦激光扫描显微镜观察经Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ负荷的慢性低氧性肺动脉高压（ＨＰＨ）大鼠原代培养的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）的形态与内游离Ｃａ２＋浓度的动态变化。结果表明：原代培养的（ＨＰＨ）大鼠的ＰＡＳＭＣ与正常大鼠相比,①细胞内游离Ｃａ２＋浓度增加,但其收缩性减弱;②随培养日数增加,咖啡因（Ｃａｆｅｉｎ）所致的细胞内储钙池－肌浆网的Ｃａ２＋释放作用逐渐减弱,直至消失;③血管紧张素Ⅱ（ＡＴ－Ⅱ）升高细胞内钙作用明显增强;④部分呈大红色细胞对多种缩血管物质敏感性增强。结果提示,ＨＰＨ大鼠的ＰＡＳＭＣ的内钙明显增加,其调节机制处于紊乱状态。     

反义RNA抑制人黑色素瘤细胞表面粘附分子CD44的表达及抑瘤效应

将细胞表面粘附分子ＣＤ４４Ｓ的ｃＤＮＡ反向插入到真核细胞表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ－ＣＡＴ和ＭＭＴＶ－ＬＴＲ启动子下游,构成ＣＤ４４Ｓ的反义ＲＮＡ载体．将其用电击法导入ＣＤ４４＋的人黑色素瘤细胞系ＨＭＭ２３９,转录出的反义ＲＮＡ能不同程度地抑制ＨＭＭ２３９表面ＣＤ４４的表达．ＣＤ４４的表达被抑制后,瘤细胞与透明质酸的结合力下降,细胞的体外生长速率不受影响．将其接种裸鼠皮下,发现其致瘤性明显降低     

垂体腺苷酸环化酶激活肽对血管壁细胞成分的作用及其机制的实验研究——PACAP与动脉粥样硬化关系的探讨

以培养的猪主动脉内皮细胞（ＥＣ）和肺动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）为主要实验对象,研究了垂体腺苷酸环化酶激活肽（ＰＡＣＡＰ）对正常及高脂环境下培养的ＥＣ、ＳＭＣ形态和功能的影响,并对其作用机制进行了初步探讨。结果显示：ＰＡＣＡＰ可部分对抗高脂因素造成的ＥＣ、ＳＭＣ形态的损伤;能提高ＥＣ抗动脉粥样硬化（ＡＳ）物质的产生;抑制ＳＭＣ的增殖;并具有抗脂质过氧化作用。本研究表明,ＰＡＣＡＰ对ＥＣ、ＳＭＣ具有一定程度的细胞保护作用,因此提示ＰＡＣＡＰ可能具有一定的抗ＡＳ作用。     

反义RNA抑制人黑色素瘤细胞表面粘附分子CD44的表达及抑瘤效应

将细胞表面粘附分子ＣＤ４４Ｓ的ＣＤＮＡ反向插入到真核细胞表达载体ＰＭＡＭｎｅｏ－ＣＡＴ和ＭＭＴＶ－ＬＴＲ启动下游,构成ＣＤ４４Ｓ的反应ＲＮＡ载体,将其用电击法导入ＣＤ４４的人黑色素瘤细胞系ＨＭＭ２３９,转录出的反义ＲＮＡ能不同程度地换制ＨＭＭ２３９表面ＣＤ４４的表达,ＣＤ４４的表达被抑制后,瘤细胞与透明质酸的结合力下降,细胞的体外生长速率不受影响,将其接种裸鼠皮下,发现其致瘤性明显降低。     

含CD自杀基因腺病毒载体的构建及其应用

构建了含ＣＭＶ启动子、大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ｃｄ）基因的复制缺陷型重组腺病毒载体（ＡｄＣＭＶＣＤ）。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＲＴ－ＰＣＲ鉴定证实,ｃｄ基因已克隆进入ＡｄＣＭＶＣＤ,并在受染细胞中表达。经氯化铯密度梯度离心法纯化的病毒滴度达１×１０１５ｐｆｕ／Ｌ。经１００ｍ．ｏ．ｉ．的ＡｄＣＭＶＣＤ感染的ＨｅＬａ和Ｃ６细胞株在１００μｍｏｌ／Ｌ５ＦＣ处理后,细胞存活率＜２０％。同时也观察到ＡｄＣＭＶＣＤ／５ＦＣ系统有很强的旁杀伤效应,将３．３％的ＡｄＣＭＶＣＤ受染细胞与９６．７％的野生型细胞混合,经５０μｍｏｌ／Ｌ５ＦＣ处理后,＞６０％的细胞被杀死。ＡｄＣＭＶＣＤ／５ＦＣ系统的建立为肿瘤基因治疗的研究提供了新的手段。