质粒研究与载体构建

922365 甲基营养细菌中新质粒的鉴别[英]/Brenner,V.…∥Antonie Leeuwenhoek J.Microbiol.-1991,60(1).-43～48[译自DBA,1991,10(25),91-14504] 从50种甲基营养菌菌株(其中30种来自土壤)中筛选质粒DNA。用碱性清除溶菌物法从专性甲基营养型甲基单胞菌属(Methylomonas sp.)菌株R103a中分离出36kb质粒pIH36,并构建了其限制性图谱。检测了甲基杆菌属(Methylobacterium)桃红色色素的兼性甲基营养菌中的4种质粒;菌株R15d中的质粒plB200(200kb)和pIB14(14kb),菌株M17中的pWU14(14kb)和     

香蕉乙二醛酶基因增强酿酒酵母对非生物胁迫抵抗能力的研究

从香蕉cDNA文库中克隆到了一个香蕉(Musa acuminata AAA subgroup)乙二醛酶(glyoxalase,GLO)基因(MaGLO14)。构建了带有MaGLO14的酵母表达载体PYES2-MaGLO14,转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)尿嘧啶营养缺陷型菌株INVSC1,挑取转化子进行PCR和酶切鉴定,证实获得了转基因菌株。通过比较转基因菌株和非转基因菌株在NaCl、高温、低温、干旱、UV胁迫下的生长状况,证明转基因菌株在以上非生物胁迫条件下的存活菌落数均高于非转基因菌株。利用酿酒酵母初步证明MaGLO14具有增强酵母菌对非生物胁迫抵抗力的功能。     

植物遗传工程

950657 碗营井素对大夏种子贮藏蛋白基因在转基因矮牵牛中表达的影响[英]/Fujiwara,T.…,PlantPhysi01.一1992,99(1).一263～268["译自DBA,1992,11(14),92—08042] 构建了转基因矮牵牛(Petumia hybrida)。它携带大豆7 S种子贮藏蛋白(声一conglycinin)的口k或夕一亚基基因,目的是检测矮牵牛中是否存在不同的基因表达方式。将质粒pBINl9-口,和pB-INl9一声导入根癌土壤杆菌C58C1 RifR(质粒p—G V2260)中。用得到的菌株侵染矮牵牛cv.VR杂种的叶圆盘,并于8月内再生转基因植株,将转基因植株未成熟种荚外植体培养在含或不含甲硫氨酸的固…     

季节性干旱对中亚热带人工林显热和潜热通量日变化的影响

植被与大气间的显热和潜热通量的日变化是大气过程和植被生理过程的显著标志。本研究利用ChinaFLUX千烟洲站典型的夏季雨热不同季的季节性干旱的试验条件,探讨了2003年季节性干旱对该生态系统显热和潜热通量日变化变异幅度和峰值时间的影响。研究表明：显热通量的日变化变异幅度年平均值为176 W/m2。潜热通量的日变化变异幅度年平均值为171 W/m2。显热通量到达日变化峰值的时间平均为11:57。全年潜热通量的日变化都在午后达到峰值,平均值为12:33。季节性干旱造成显热通量的日变异幅度明显增大,从144W m-2增加到321 W m-2。而潜热通量的日变异幅度明显降低,从324 W/m2减小到198 W/m2。,显热和潜热通量日变异幅度的相对变化明显增大,从-165 W/m2增加到76 W/m2,气温和饱和水汽压差是影响显热和显热日变异幅度及其相对变化的主要控制因素。干旱胁迫期,深层水对显热通量日变化变异幅度及其与潜热通量日变化变异幅度的相对变化的作用更显著,而潜热通量日变化变异幅度与气象要素关系不显著。季节性干旱造成显热通量日变化的峰值时间和显热和潜热通量日变化峰值时间的相对变化明显向下午偏移,显热通量日变化的峰值从上午11:31到中午12:17,相对变化从1小时到1小时20分钟。季节性干旱对潜热通量日变化峰值时间没有显著的影响。非干旱胁迫期,显热通量日变化峰值时间和显热及潜热通量日变化峰值时间的相对变化均与气温负相关,而干旱胁迫期,则与气温正相关。潜热通量日变化峰值时间与气象要素关系均不显著。该生态系统显热和潜热通量日变化峰值的相对变化主要受降水量的季节分配控制,在干旱胁迫期降水的作用更加明显。潜热和显热通量日变化峰值时间的相对变化总体上都受植被与大气间的耦合程度控制。     

DNA分析与扩增

924297降解2,4一二氯苯氧乙酸(2,4一O)的质粒pJP4的PCR和基因探针检测〔英〕/Neilson,J.W.一/Appl .Environ.Mierobiol一1992,55(4)一1271~1275[译自DBA,1992,11(11),92-06019〕 用PCR和DNA探针灵敏性检测2,4一D降解菌真养产碱菌(Azca不‘夕e,ese:t,o,hos)JMPi34(含质粒pJP4)。甩2个20一聚寡核普酸DNA引物扩增pJP 4 tfdB基因的Zosbp区,并优化扩增条件 (94℃变性1分30秒、72℃退火并延伸1分钟、72℃最后延伸7分钟,共进行25轮)。PCR和5产端标记DNA探针的杂交都是对含pJP4或其衍生质粒pRO103菌株专性的。检测灵敏性为30oocfu…     

基因重组菌质粒稳定性的提高与苯丙氨酸发酵的研究

本研究用具有苯丙氨酸生产抗反馈抑制基因pheA^FR、aroF^FR及温度敏感型阻遏基因CI857的质粒pSYl30—14和具有分配机能的低拷贝质粒pSYl6,重组构建了具有苯丙氨酸生产基因系统的质粒：psY200一14,然后使其转化到大肠杆菌AT2471中,育成了基因重组菌株AT247l／psY200—14。试验表明,该菌株质粒稳定性比原菌株AT2471／psYl30—14有较大的提高,当存在选择压时,在30～42℃范围内维持100％的高稳定性。应用此重组菌株,在2．5L通气搅拌罐进行发酵试验,在搅拌转速850rpm,通气速率1．Ovvm,38．5℃和pH7．O的条件下,发酵48h苯丙氨酸生成量达14．2g／L,比原株增产l1．8％。     

质粒研究与载体构建

924281 嵌合质粒RSFIO10衍生物由大肠杆菌向枯草芽抱杆 菌的接合迁移[俄」/Doroshenko,V.G.…I B iotekhnologiya一1992,z一23一25〔译自DBA, 1992,11(11),92一06026〕 构建了穿梭载体质粒pERsF,它含有RSF 1010的复制子和迁移系统(来自质粒pAYC32)及 温敏复制子pE194(来自质粒pTVI)。质粒 pERSF可被枯草芽抱杆菌细胞稳定遗传,且在非选 择条件下经重复继代培养也不会遗失。通过接合只 能将pERSF由大肠杆菌C600转人大肠杆菌W335。 和枯草芽抱杆菌168。菌株168的所有氯霉素抗性转 接合体都是热敏型的。缺少将质粒由大肠杆菌转入…     

固氮作用

<正> 854902 位于三叶草根瘤菌共生质粒上的固氮基因和结瘤基因的机构[英]/Scott,D.B.…//Arch.Microbiol.-1984,139(2～3).-151～157[译自 DBA,1985,4(2),85-00815]作为鉴定三叶草根瘤菌 NZP514菌株的     

我国啤酒花根癌土壤杆菌的初步研究

1983—1984年,对北京、浙江、山东等地啤酒花种植地区的啤酒花冠瘿病发病情况进行了调查,并采集、分离到啤酒花根癌土壤杆菌16株。对其生物型、质粒类型、寄主范围和对土壤杆菌素8{(agrocin 84)的敏感性进行了测定。证明所测菌株都属于土壤杆菌生物I型菌,质粒类型为胭脂碱型(nopaline),具有较广的寄主范围,其中11株菌对土壤杆菌素8{敏感,5株菌不敏感。对1 0株菌的质粒进行了检测。在琼瞻糖凝胶电泳图上表明,所有菌株都含一个与pTiC58大小相同的质粒,此外,大多数菌株还含有l一3个隐蔽质柱。     

橡胶干旱胁迫对东方真叶螨发育和繁殖的影响

本研究通过明确寄主植物橡胶受干旱胁迫对重要害螨东方真叶螨Eotetranychus orientalis发育和繁殖的影响,为该螨成灾预警及有效防治提供科学依据。本试验在温度30℃±1℃、相对湿度75%±5%和光周期14 L∶10 D的人工气候室条件下,观察了寄主植物橡胶盆栽植株在重度干旱(30%≤土壤含水量W<40%)、中度干旱(40%≤W<50%)和轻度干旱(50%≤W<60%)3种干旱程度胁迫和对照处理(正常土壤墒情60%≤W<80%)条件下东方真叶螨的个体发育历期、寿命、存活和繁殖情况,组建年龄-阶段两性生命表。结果显示,干旱胁迫处理植株的东方真叶螨卵期、幼螨期、前若螨期、后若螨期及成熟前期的发育历期均短于对照处理的,但成螨寿命长于对照处理的,雌螨产卵量大于对照,并且随着干旱程度的加重其发育历期随之缩短、成螨寿命随之延长和产卵量随之增加。该螨实验种群的内禀增长率γ、周限增长率λ和净增值率R₀在重度干旱胁迫植株上的为最大,显著高于轻度干旱胁迫及对照处理植株的种群,东方真叶螨在重度、中度、轻度干旱胁迫和对照处理的内禀增长率γ分别为0.14...     

不同水分胁迫对刺槐生理的影响

本文以二年生刺槐为供试材料,探讨水分胁迫对其生理的影响,为园林绿地中刺槐的灌溉提供理论指导.结果表明,水淹和干旱胁迫明显影响刺槐的生长.水淹11 d后,qP值、ETR值、Fv'/Fm'值和净光合速率的明显下降,qN值上升,19 d后植株死亡.中度干旱胁迫(土壤含水量在8%～15%之间)对植株生长有一定影响,表现为净光合速率的下降和qN值上升等;干旱胁迫(土壤含水量低于10%)严重抑制植株的生长,表现为qN值上升,而qP、ETR、Fv'/Fm'和净光合速率下降,处理19 d后干旱组植株死亡.轻度干旱(土壤含水量在15%～25%之间)适宜植物生长,表现为3次测定的qP、ETR、Fv'/Fm'、Fv/Fm和净光合速率都较高且稳定.土壤含水量日变化在15%～25%以内受轻度干旱胁迫是园林中刺槐的最佳灌溉方式,既不影响景观效果,同时也能节约灌溉用水.     

华癸中生根瘤菌共生质粒的定向标记、消除与结瘤功能的鉴定

采用Tn5-mob-sacB转座子对华癸中生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)菌株7653R的共生质粒进行定向标记,获得该质粒标记菌株7653RT14.利用sacB基因对蔗糖的敏感性,对标记质粒进行消除实验,获得7653R的共生质粒消除突变株7653R-1.测得Tn5-mob-sacB转座频率高于10-5.突变株的培养特征与出发菌株基本一致.采用琼脂管法对7653RT14和7653R-1进行回接实验,结果显示7653RT14能正常结瘤固氮,表明Tn5的插入并未影响其共生能力,但失去共生质粒的7653R-1则为不结瘤或只结个别小瘤.稳定性实验结果表明供试菌株的标记质粒在本实验条件下是稳定的,可以作为共生质粒转移的供体菌.     

中国棘豆属新分类群

甘肃棘豆系新系Sect. Mesogaea Bunge Ser. Kansuenses C. W. Chang, ser. nov. Planta magna. Foliola 8—14—juga, 7—13 (—25) mm longa, 3—gmm lata. Racemus longus, densior; calyx tubulosus, 8—14mm longus;flos magnus, corolla 11—17mm longa, flava, carinae mucro c. 1mm longus. Typus nominis seriei:Oxytropis kansuensis Bunge Species 3 et Varietas unica, septentrionalis, boreali-occidentalis et australi-occidentalis Sinae incolae. 植株高。小叶8—14对,长7—13(—25)mm,宽3—9mm。总状花序长,花排列较密;花萼筒状,长8—14mm;花大,花冠长11—17mm,黄色,龙骨瓣的喙长约1mm。系名模式:甘肃棘豆Oxytropis kansuensis Bunge。本系有3种,1变种,分布于我国华北、西北和西南部。1.白花棘豆新变种     

一株原油降解菌的分离鉴定及降解特性研究

[目的]对从大连湾原油污染海域生长的海绵中分离的原油降解菌2-9进行鉴定及降解特性研究.[方法]采用16S rRNA基因序列同源性分析、生理生化指标测定、DNAG+C含量测定、全细胞脂肪酸组成测定、碳源利用实验等多种方法对该菌株进行鉴定,并通过降解实验测定其对原油的降解情况.[结果]菌株2-9鉴定为Nitratireductor basaltis,革兰氏阴性,接触酶和氧化酶阳性.在GenBank中与其16S rRNA基因序列相似度最高的模式株为Nitratireductor basaltis J3T,相似性为99％.可生长的pH范围为6.0-10.0,最适生长pH值为8.0;可生长温度范围为15℃-42℃,最适生长温度为30℃; NaCl浓度生长范围是0-8％(W/V),最适生长盐度为2％.该菌株可以利用多种糖和有机酸的碳源,其DNA G+C含量为57.29 mol％,主要脂肪酸组成为ω7c-十八碳单不饱和脂肪酸(63.61％)、ω8c型环式十九碳饱和脂肪酸(16.97％)、饱和十八碳脂肪酸(4.28％)和十六碳饱和脂肪酸(3.39％).同时,考察了该菌株对原油的降解效果,在人工海水培养基中,14d内对原油(初始浓度为1 g/L)的平均降解率为63.5％.[结论]菌株2-9是一株具有开发潜力的原油降解菌.     

外源ABA和水分胁迫对不同基因型三叶草生长的影响

在室内研究了不同浓度外源ABA处理和不同水分胁迫对6种不同基因型的三叶草(Trifolium subterraneum L.)生长的影响.当三叶草的第四片叶完全展开时,向营养液中施加不同浓度的ABA时对盆栽土壤进行控水.在处理的1,4,7和11 d,测定植株鲜重、叶片数、最长根长,以表示三叶草的生长状况.各参试品种以上三项生长指标均受外源ABA和水分胁迫的影响而呈现下降的趋势.同时,叶片水势值随ABA浓度的增加和水分胁迫强度的增加而明显降低.在10-4 mol/L ABA处理11 d后,参试品种平均生长量的减少与水分胁迫15 d后其生长量的减少的结论一致.在不同浓度ABA处理下,不同基因型三叶草平均叶片数,完全展开叶面积和每株干物质重约降低了50%,而其根冠比却增加了80%.不同基因型三叶草生长参数间的变化及排序结果与盆栽相同品种获得的实验结果非常相似.品种Clare、Nuba 和Seaton Park在对照和处理下均表现最好.由于三叶草对一定浓度范围的外源ABA的反应与其在盆栽水分胁迫下的反应结果十分相似,因此,利用外源ABA处理的方法来研究不同基因型三叶草的耐旱性将可能是一种行之有效的方法.     

我国植物青枯菌的内生质粒及其与致病性的关系

检测了来自我国不同地区的龙葵、苎蔗、芝蔗、木蔬黄、油橄榄、桑、烟草、姜、辣椒、茄、蕃茄、甘薯、花生和马铃薯等14种寄主植物的51株野生型青枯菌的内生质粒(1ndigesPlasmid),并对其中20株野生型菌株及其相应的20株“突变型”菌株进行了质粒的比较研究。14株野生型菌株和10株“突变型”菌株含有1或2个质粒,质粒分子量不一,最小的在5Md以下,最大的为120Md。有些野生型菌株(ssl、Snl、E4、Pc2、Tin9、Z2、P3、PoI、P03、Po¨．)和它们的“突变型”菌株均不含质粒;另一些野生型菌株(MS、M6、El、P9．)和它们相应的“突变型”菌株却具有电泳迁移率相同的质粒;这些菌株的致病性与质粒的存在没有关系。但某些野生型菌株(P7、P8。zl、z3、M2、P041．)不含质粒,而它们的“突变型”菌株中却出现了质粒,这些菌株的致病性的丧失与质粒的形成之间可能有关。     

温泉嗜热菌LY的分离鉴定及质粒的初步研究

目的:从海南温泉中分离鉴定嗜热微生物,并了解其生理生化特征,同时对其质粒进行初步研究.方法:稀释平板法分离嗜热菌;形态学、生理生化和分子生物学方法进行菌种鉴定;氯化铯超速离心法测定菌株(G+ C) mol％含量;利用吖啶橙消除菌株质粒并分析质粒消除前后的生物学特性.结果:获得1株温泉嗜热菌菌株LY,其最适生长温度在80 ～ 85℃之间,最适pH值为6.0,对链霉素、卡那霉素、四环素、氨苄青霉素、氯霉素敏感.结合形态学、生理生化测试和16S rRNA序列分析鉴定菌株为Bacillus sp.LY.菌株的(G+C)mol％含量为66.90％.菌株质粒大于3000 bp,质粒消除前后,其生物学特性无明显差异.结论:温泉嗜热菌LY可作为耐热候选菌株进行后续深入研究.     

质粒R144drd3对于大肠杆菌DNA复制发动突变型dnaP18的非整合抑制

通过接合转移,把F1、F11、P、W、X、Ⅰ型的14种质粒分别引入大肠杆菌复制发动突变型dnaP 18,发现只有Ⅰ型质粒R144对于dnaP18具有抑制作用,消阻遏质粒R144 drd3的抑制能力高于质粒R144约一万倍而达到完全的抑制。以下事实说明R144 drd3并不通过整合到dnaP18细菌的染色体上而带来对于dnaP18的抑制:(1)dnaP18(R144drd3)细菌的染色体标记的转移频率在10~(-7)以下,而其质粒标记Km~R的转移频率约10~(-1);(2)这些菌株的DNA抽提物的电泳图谱和电子显微镜照相都说明质粒DNA的存在。 用带有质粒R144 drd3的E.coli作为供体,用E.coli dnaP18菌株作为受体,通过噬菌体P1转导得到的两种Km~R转导子中一种能在42℃形成菌落,而另一种则不能;将转座子Tn10转座到R144drd3上以后,同样使受体成为能在42℃形成菌落或不能形成菌落两类。这些结果表明,质粒R144drd3上存在着与dnaP18抑制有关的特定区域或基因。     

银杏叶黄酮类化合物含量及相关酶活性对温度和干旱胁迫的响应

温度和土壤水分是影响银杏叶黄酮类化合物合成的重要环境因子,为了探讨温度和水分对银杏叶黄酮类化合物合成的影响,研究3个温度水平[5℃～15℃(T1)、15℃～25℃(T2)、25℃～35℃(T3)]与3个土壤含水量水平[田间持水量的55%～60%(W1)、田间持水量的40%～45%(W2)、田间持水量的30%～35%(W3)]对银杏叶黄酮类化合物含量、叶片黄酮类化合物合成上游的3个关键酶[苯丙氨酸解氨酶(PAL)、肉桂酸4-羟基化酶(C4H)、4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)]活性的影响。结果表明:(1)温度和干旱胁迫显著影响PAL、C4H和4CL的活性以及银杏叶类黄酮含量;随着环境胁迫的进行,3种酶活性普遍呈增加趋势,但不同酶之间也存在一定差异。(2)低温(T1)与高温(T3)胁迫均显著促进PAL活性;T1则更加有利于叶片中C4H活性的增加;4CL活性的变化复杂,在胁迫处理的前期(14d和28d),干旱条件是影响银杏叶4CL活性的主要因子,而到42d之后,温度因子则成为主要影响因子。(3)银杏叶类黄酮含量均随着胁迫时间的推进而显著减少,在胁迫前期,干旱是影响类黄酮含量的主要因素,而到42d之后,温度因子占主导作用。(4)相关分析表明,在温度和干旱胁迫下,PAL、C4H和4CL以及银杏叶生物量均与黄酮含量存在负相关关系;尽管环境胁迫促进了相关酶的活性,但银杏叶片中的类黄酮含量却呈下降趋势。     

持续干旱胁迫下外源精胺对红椿幼苗的形态与生理调节效应的影响

为了掌握持续干旱胁迫下外源精胺(Spm)对红椿幼苗的形态和生理调节效应,本研究以2年生红椿盆栽幼苗为试验对象,在人工遮雨棚中开展干旱胁迫及外源精胺调节试验,试验设置4个持续干旱胁迫处理:(1)对照(土壤相对含水量45%~50%,每天浇水至饱和状态,CK);(2)轻度干旱胁迫(土壤相对含水量30%~38%,持续干旱7 d);(3)中度干旱胁迫(土壤相对含水量25%~30%,持续干旱14 d);(4)重度干旱胁迫(土壤相对含水量20%~25%,持续干旱21 d)。然后,连续3天对轻度、中度和重度干旱胁迫处理喷施外源Spm(浓度为1 mmol·L-1)进行修复调节,并正常管护5天。结果表明:喷施Spm对重度干旱胁迫下植株形态损伤的修复速度远低于轻度和中度干旱胁迫植株;在对照、轻度干旱胁迫(或中度、重度)以及喷施外源Spm调节三者之间,红椿幼苗叶片相对含水量和叶绿素含量均差异极显著(P0.01);在对照、中度干旱胁迫(或重度)以及喷施外源Spm调节三者之间,红椿幼苗叶片相对电导率均差异极显著(P0.01);在对照、轻度干旱胁迫以及喷施外源Spm调节三者之间,红椿幼苗叶片MDA含量和POD含量差异显著(P0.05);在对照、重度干旱胁迫以及喷施外源Spm调节三者之间,红椿幼苗叶片MDA含量和POD含量差异极显著(P0.01);在对照、重度干旱胁迫以及喷施外源Spm调节三者之间,红椿幼苗叶片游离脯氨酸含量差异极显著(P0.01);喷施1 mmol·L-1Spm可修复红椿在遭受干旱胁迫时造成的形态和生理损伤并提高植株的持续抗旱能力,其修复作用对轻度和中度干旱胁迫更为显著。