广东眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2的分离纯化及抗血小板聚集作用

目的 研究眼镜王蛇毒中酸性磷酸脂酶Ａ２对血小板的作用。方法 采用ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｓｘ Ｃ－２５Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐ「ｈａｄｅｘＡ－２５,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５多步柱层析法,聚丙烯酰胺产胶电泳,酸性磷脂酶Ａ２酶活性测定;血小板聚集实验。累进要从粗中分离纯化出一酸性磷脂酶Ａ２单体,分子量为１４ＫＤ;等电点ＰＩ３．８;ＰＬＡ２比值２０μｍｏｌ．ｍｇ＾－１．ｍｉｎ＾－１;小     

江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A2抑制制血小板作用的机理

江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２（ＡＰＬＡ２）对多种致聚剂引起的血小析具有抑制作用,这种抑制并非是由于ＡＰＬＡ２与血小板膜结合,引起膜流动性降低造成。ＡＰＬＡ２不裂解血小板,电镜观察表明它能抑制血小析部颗粒的中心化,使之不易被激活。进一步研究显示ＡＰＬＡ２是作用在骨架上,使致聚剂引肌动蛋白单体聚合难以进行,ＡＰＬＡ２导致的ｃＡＭＰ浓度的升高正说明了这点。结果提示ＡＰＬＡ２首先作用于轿小板细胞膜,引起ｃＡＭ     

尖吻蝮蛇酸性磷脂酶A2的纯化和初步晶体学

为进一步揭示影响血小板聚集活性的结构基础,纯化了江西尖吻蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒａｄｕｎ ａｃｕｔｕｓ）酸性磷脂酶Ａ２。江西省吻蝮蛇蛇毒经ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换柱层析,两步ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换柱层析以及Ｍｏｎｏ）ＧＦＰＬ离子交换柱层析,得到了ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳和等和集电泳均一的磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）,其分子量为１６．５ＫＤ,等电点为４．３,经测定,该酶具有抑制ＡＤＰ诱地     

广西产眼镜蛇毒酸性磷脂酶A2的分离纯化及性质研究

目的　从广西产中华眼镜蛇毒 ( N aja naja atra)中分离了一种新的磷脂酶 A2 ( PLA2 ) ,并研究其性质。　方法　磷脂酶 A2 ( PLA2 )的分离纯化采用 CM5 2、CM-Sepharose CL-6 B离子交换柱和 SepharoseCL-6 B凝胶柱 ,磷脂酶 A2 ( PLA2 )的性质采用经典方法进行。　结果　分离后的磷脂酶 A2 经过聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和 HPLC检测 ,其为单一组分。SDS-PAGE测定它的分子量为1 5 0 0 0± 1 0 0 0。等电聚焦测得它的等电点为 6 .3。它的最适温度为 5 5℃ ,最适 p H值为 8.5。氨基酸成分分析表明该酶由 1 2 6个氨基酸组成 ,以 Asp、Ala、Gly、Cys居多。Fe3 、Zn2 、EDTA对其酶活力起抑制作用 ;K 、Ca2 、去垢剂对其活力起促进作用。荧光光谱分析表明该酶的色氨酸残基、组氨酸残基可能位于分子表面。药理实验表明 :该酶具有抗胰蛋白酶作用、抗凝血作用、间接溶血作用以及对青蛙具有心脏毒性。　结论　广西产中华眼镜蛇毒磷脂酶 A2 与其它来源的 PLA2 同源性高 ,但性质不尽相同。     

长白山白眉蝮蛇蛇毒酸性PLA_2质谱鉴定及其对血小板聚集的抑制作用

通过对纯化得到的长白山白眉蝮蛇蛇毒磷脂酶A2（ABUSV-PLA2）进行胶内胰蛋白酶酶解,产生的肽段经高效液相色谱-电喷雾串联质谱（HPLC-nESI-MS/MS）进行序列测定,蛋白鉴定采用SequestBioworks软件完成。ABUSV-PLA2与其它蛇毒来源PLA2的氨基酸序列比对表明：ABUSV-PLA2是一种新的蛇毒酸性磷脂酶A2。以ADP诱导的人血小板聚集实验结果表明：ABUSV-PLA2对ADP诱导的血小板聚集有轻微的解凝效应,但具有显著拮抗血小板的聚集作用,并呈现明显的剂量-效应关系,IC50为356nmol/L。     

蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2的空间晶体生长

对血小板聚集抑制剂—蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2结晶研究的基础上,进行了空间结晶买验,与地面对照实验结果比较,空间的微重力环境对该酶的晶体生长有明显的改进作用.     

Sepharose 4B一步法对金环蛇蛇毒磷脂酶A2的分离纯化

利用经酸处理的Sepharose 4B为层析介质,以含0.2mol/L半乳糖,pH7.4台氏液作为洗脱液,从广西产金环蛇(Bungarus fasciatus)蛇毒中一步分离得到一种磷脂酶A2.用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量为14 kDa.N端部分序列测定表明,所分离得到的磷脂酶A2其N端16个氨基酸残基序列与已报道的金环蛇蛇毒磷脂酶A2同功酶Ⅵ(Lu & Lo,1978)一致.该酶糖含量较高,为13.4%;具有弱的磷脂酶A2活性,无毒,也无溶血和出血毒活性.     

江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A2基因的表达

将江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２基因克隆至表达载体ｐＢＬＭＶＬ２,转化入大肠杆菌ＲＲ１,经过温敏诱导,ＳＤＳ－Ｐ;ＡＱＧＥ检测,在约１４ｋＤ处有一表达条带。表达产物酸性磷脂酶Ａ２约占细菌蛋白总量的３０％,并以包涵体的形式存在。纯化包涵体后,将产物变性,复性,然后用ＦＰＬＣ Ｓｕｐｅｒｏｓｅ＾ＴＭ１２纯化,产物经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测只有单一条带。     

竹叶青蛇毒磷脂酶A2的分离纯化和性质研究

竹叶青蛇毒磷脂酶Ａ_２的分离纯化和性质研究冯波,吴卫甲,钱嵘,王克夷,周元聪（中国科学院上海生物化学研究所,２０００３１）关键词竹叶青蛇毒,磷脂酶Ａ_２;血小板聚集磷脂酶Ａ。在哺乳动物胰脏和蛇毒毒液中含量较丰富,其中蛇毒磷脂酶Ａ。除能水解甘油磷脂的第二...     

江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A_2的荧光光谱学研究

用荧光光谱方法研究了江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A_2(NPLA_2).研究结果表明NPLA_2分子中确实含有一个色氨酸残基.且位于NPLA_2分子表面;我们还发现荧光探针bis-ANS在NPLA_2分子上有一结合区,其解离平衡常数为11.6μmol/L ;利用结合了的bis-ANS与NPLA_2分子中色氨酸残基之间的能量传递计算出两者之间的距离为17.7(?).     

江浙蝗蛇毒酸性磷脂酶A_2抑制血小板作用的机理

江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２（ＡＰＬＡ２）对多种致聚剂引起的血小板聚集具有抑制作用,这种抑制并非是由于ＡＰＬＡ２与血小板膜结合,引起膜流动性降低造成。ＡＰＬＡ２不裂解血小板,电镜观察表明它能抑制血小板内部颗粒的中心化,使之不易被激活。进一步研究显示ＡＰＬＡ２是作用在细胞骨架上,使致聚剂引起的朋动蛋白单体聚合难以进行,ＡＰＬＡ２导致的ｃＡＭＰ浓度的升高正说明了这点。结果提示ＡＰＬＡ２首先作用于血小板细胞膜。引起ｃＡＭＰ浓度升高,影响到细胞骨架的正常功能,进而抑制了血小板的聚集。     

五步蛇蛇毒磷脂酶A_2的纯化及部分性质

经Sephadex G-75和QAE-Sephadex A-50离子交换层析等方法,从湖南产五步蛇(Agkistrodon acutus)蛇毒中纯化一种均一的酸性磷脂酶A_2。SDS-PAGE测得分子量为15.8kD,按氨基酸残基计算其分子量为14.352kD,IEF-PAGE测得等电点为5.32。氨基酸组份分析表明磷脂酶A_2分子由128个氨基酸残基组成,富含Asp和Glu,不含中性糖。PLA_2酶活性的最适温度为45℃,最适pH为8.5左右,没有抗胰蛋白酶的活性,具一定的热稳定性。K~+、Ca~(++)和Na~+离子激活,而Cd~(++)、Sn~(++)、Cu~(++)、Li~+、Hg(++)、Zn~(++)、Fe~(++)和Co~(++)离子可抑制或完全丧失酶活力。手工微量顺序分析测得PLA_2分子N-末端氨基酸为Leu。此酶对小白鼠的LD_(50)至少大于10mg/kg(ip)。     

尖吻蝮蛇毒内一种新的抗血小板凝集蛋白agkisacutacin的纯化及其性质

从皖南尖吻蝮蛇毒中经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化得到抗血小板凝集蛋白agkisacutacin ,纯化的agkisacutacin由分子量为 1 4kD和 1 5kD的 2条肽链通过二硫键连接 ,能有效抑制ristocetin诱导的血小板凝集 (IC5 0 为 1 8.5mg/L) ,能轻微抑制凝血酶诱导的血小板聚集 (IC5 0 为 1 .2 2 g/L) ,但对ADP、胶原诱导的血小板聚集无影响。agkisacutacin不具有纤溶活性、抗凝活性、磷脂酶A2 活性和出血活性 ,是一种潜在的安全、有效的抗血小板性栓塞的药物     

蛇毒蛋白C激活物的初步研究

目的：研究蝮蛇毒蛋白Ｃ激活物的分离纯化与理化性质。方法：经ＤＥ５２－纤维素、ＣＭ－Ｓｐｈａｄｅｘ Ｃ－５０、Ｇ－７５柱层析,从安徽芜湖产蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎ ｈａｌｙｓ）蛇毒中纯化一种均一的蛋白Ｃ激活物（ＰＣＡ）。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定分子量约为１５５０００Ｄａ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测定等电点为４．８。它能使人血浆的ＫＰＴＴ明显延长,显示出强烈的抗凝活性。通过中和试验与显色肽定量实验表明,     

江浙蝮蛇蛇毒中性磷脂酶A2的结构模拟研究

从我国江浙蝮蛇蛇毒纯化出的中性磷脂酶Ａ２（ＡＴＸ）不仅具有酶催化活性,还具有突触前神经毒性。用图象模拟和能量极小化及分子动力学方法,根据美国西部菱斑响尾蛇（Ｃ．ａｔｒｏｘ）蛇毒ＰＬＡ２的晶体结构构建了ＡＴＸ二体和单体模型,它们的基本折叠与Ｃ．ａｔｒｏｘＰＬＡ２是很相似的。能量计算表明,二体的总势能比单体相应能量的两倍低２６３．６ｋｃａｌ／ｍｏｌ;ＡＴＸ二体模型中两亚基间的作用与Ｃ．ａｔｒｏｘＰＬＡ     

江浙蝮蛇毒L—氨基酸氧化酶的分离纯化及其性质鉴定

从江浙蝮蛇粗毒中经SephadexG 15 0凝胶过滤、DEAE SepharoseCL 6B以及FPLCSuperose 12分离出一种蛋白质。该蛋白质经SDS PAGE测定在非还原和还原条件下分子量均为 5 7kD左右 ,等电聚焦测得其等电点约为 4.9。生物活性测定表明该蛋白质具有L 氨基酸氧化酶活性 ,能够抑制由ADP和胶原所引起的血小板聚集 ,具有抑制革兰氏阴性菌的作用 ;并且具有细胞毒性 ,能够诱导细胞凋亡     

蝮蛇毒蛋白C激活成份的柱层析分离及生物学性质

本文以浙江产蝮蛇毒为材料,经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０二次柱层析,分离到的峰Ⅱ蛋白组份具有强烈抗血液凝固活性,并能够激活人血浆中的蛋白Ｃ,特异地使发色底物分解而产生颜色,生色反应光密度变化确定峰Ⅱ组份激活作用的大小。峰Ⅱ组份无直接生色作用,其激活血浆蛋白Ｃ的反应曲线类似国外同类产品Ｐｒｏｔａｃ,与激活物的蛋白浓度和血浆浓度成正比关系,但激活作用较Ｐｒｏｔａｃ弱。