古丈县南方红豆杉天然群体的遗传多样性研究

通过对分布于湖南省古丈县的南方红豆杉(Taxus chinensis)天然群体中30个个体的功能叶片的过氧化物酶(POD)和酯酶(EST)同工酶谱带的分析,研究了该天然群体的遗传多样性水平.结果表明:30个个体中都存在有迁移率相同的谱带(4条),占酶谱带总数的26.7%;两个酶系统共检出15条酶谱带,等位基因位点数4个,其中多态位点数3个,单态位点数1个,多态位点百分数P=75%,平均每个位点的等住基因数A=3,平均有效等位基因数Ae=2.75,平均期望杂合度He=60.7%,平均实际杂合度Ho=22.2%,表明该群体有较丰富的遗传多样性.     

同工酶与桑品种遗传变异的关系

通过以冬芽为材料,对７６８１桑进行过氧化物酶,细胞色素氧化酶酶谱分析,结果表明７６８１桑是亲本体细胞融合的真杂种;     

云南红豆杉的发展与利用

云南红豆杉主要分布在滇西,滇西北。经检测比较,云南红豆杉内含紫杉醇等高效治癌药用成份,高于其他几种红豆杉,具有很高的开发利用价值。但资源稀少,属国家保护植物。因此,发展云南红豆杉人工造林、培育资源,是开发利用的根本途径,利用云南红豆杉幼林,可以缩短生产周期,并利用其萌发能力,可以连续利用。云南红豆杉造林技术可行,经济效益高,市场对紫杉醇需求量大。     

云南红豆杉细胞的悬浮培养

在云南经豆杉细胞悬浮培养中,适宜的增减基为Ｂ５,接种量为０．５－０．８ｇ干重细胞／１００ｍｌ培养基,２,４－Ｄ浓度为１．０ｍｇ／Ｌ;培养细胞的生长周期约３０ｄ;增减基中较高浓度的蔗糖（４０ｇ／Ｌ）可提高紫杉醇含量;添加的椰子汁（ＣＭ）、酪蛋白氨基酸（ＣＡ）和水解乳蛋白（ＬＨ）３种有机添加剂均能提高培养细胞中紫杉醇的含量,但只有ＣＭ和ＣＡ能促进细胞的生长。于Ｂ５培养基中添国不同浓度的ＮＨ４ＮＯ３对培     

天目山银杏群体遗传变异的同工酶分析

本文利用同工酶电泳方法,研究了天目山银杏群体的遗传变异性,计算了4种同工酶(GDH,G-6PDH,PRX,SDH)8个位点上的等位基因频率和每个位点的平均杂合率。结果表明:天目山银杏群体的遗传变异性较小,各位点的平均杂合率仅为0.150±0.004,呈现较大程度的遗传同一性,因此认为天目山银杏很可能是僧人在寺庙旁栽植的银杏留下的后代。     

云南红豆杉的组织培养及植株再生

云南红豆杉的嫩枝外植体在含有２,４－Ｄ,ＮＡＡ和ＫＴ的６,７－Ｖ培养基上产生了愈伤组织,进一步分化出芽,芽长成嫩枝后的转移到含ＩＢＡ或ＩＢＡ和６－ＢＡ的Ｗｈｉｔｅ培养基上分化出根,形成再生小植株,再生植株的移栽容易成活。本研究为云南红豆杉的快速繁殖提供了方法。     

云南红豆杉细胞的悬浮培养

在云南红豆杉细胞悬浮培养中,适宜的培养基为B5,接种量为0．5～0．8g干重细胞／100ml培养基,2,4－D浓度为1．0mg／L;培养细胞的生长周期约30d;培养基中较高浓度的蔗糖（40g／L）可提高紫杉醇含量;添加的椰子汁（CM）、酪蛋白氨基酸（C）和水解乳蛋白（LH）3种有机添加剂均能提高培养细胞中紫杉醇的含量,但只有CM和CA能促进细胞的生长。于B5培养基中添加不同浓度的NH4NO3对培养细胞无明显影响。     

真鲷野生群体和人工繁殖群体的同工酶遗传差异

采用水平淀粉凝胶电泳技术对采集于黄海海州湾海域的真鲷野生群体和经过2代人工繁育的养殖群体进行了同工酶遗传变异研究。分析检测了2个群体各50个样本肌肉和肝脏组织的13种同工酶共20个基因位点,其中MDH_a、GPI、PGM等10个位点为多态位点,ME和EST-b为变异程度比较高的位点。野生群体和人工繁殖群体的多态位点比例分别为45%和25%（P _0.95）;群体平均观察杂合度分别为0.141±0.044和0.095±0.043。结果表明,真鲷的野生群体和养殖群体拥有较高程度的遗传变异水平,但是养殖群体的遗传变异水平比野生群体有一定程度的降低。养殖群体遗传变异水平的降低在一定程度上是由于亲鱼数量少所致。比较了同工酶分析和RAPD分析的结果。将此两种技术相结合在鱼类群体遗传多样性分析中具有比较实际的意义。     

产紫杉醇类云南红豆杉内生真菌筛选的研究

采用无菌技术从云南红豆杉中分离得到200余株内生真菌,经过PDA液体培养基发酵后用TLC、HPLC等方法检测,发现其中有一株的胞外分泌物中含有紫杉醇,标号12．3,2。经过形态学鉴别,其属于青霉属（Penicillium）。利用微生物（特别是内生真菌）产紫杉醇是新的途径,该菌株具有进一步研究的价值。     

中国红豆杉属及其近缘植物的遗传变异和亲缘关系分析

采用水平式淀粉凝胶电泳技术,对中国产红豆杉属Taxus 3种1变种以及白豆杉Pseudotaxus chienii共12个居群的遗传多样性进行了检测。对7个酶系统9个酶位点的分析结果表明,红豆杉属和 白豆杉的种内遗传多样性水平较高,各类群的多态位点比率(P)为44.4％～77.8％,等位基因平均数 (A)为1．6～2．1,平均期望杂合度(He)和实际观察杂合度(Ho)分别为0.065～0.152和0.068～0.111。 根据对等位酶实验结果的分析,结果表明除云南红豆杉T．yunnanensis与红豆杉属其它几个种的遗传 一致度稍低(I=0.727～0.804)外,红豆杉属的其它几个种的遗传一致度较高(0.906～0.995),体现其 亲缘关系很近。笔者建议将红豆杉属的这几个种合并为一个种,并根据地理分布及不同生境发生的变 异在种下设地理宗。同时根据等位酶的实验分析结果,白豆杉和红豆杉属各种的比较有显著差异,支持白豆杉作为单独属Pseudotaxus的处理。     

云南红豆杉培养细胞系的建立

紫杉醇(Taxol)最初是从红豆杉属植物短叶红豆杉(Taxus brevifolia)树皮中分离出的一种二萜类化合物^[1]．对卵巢癌,转移性乳腺癌和恶性黑色寮瘤等患者疗效显著^[2],全世界红豆杉属植物有近11种,都含紫杉醇成分．但含量很低,加之现存数量很少,生长极为缓慢．造成了紫杉醇原料供应的危机^[3]。紫杉醇化学合成已经成功^[4-6],但繁杂的反应过程及前体化合物来源的限制使得它们无法实现商业化生产。最近从短叶红豆杉中分离出一种生产紫杉醇的内寄生真菌Tgromyer andreanae^[7]．由于紫杉醇含量仅为24～50ng/L．没有实用价值。植物细胞和组织培养可能是解决天然抗肿瘤药物长期供应的有效方法之一^[8]。自1991年Christen等人申请利用红豆杉细胞培养物生产紫杉醇专利以来^[9]．有关红豆杉细胞培养的研究已有不少报^[10-12]。但云南红豆杉(T.yunnanensis)仅见愈伤组织诱导的报道^[13]。本文报道云南红豆杉愈伤组织诱导和细胞培养的初步结果,并分析了细胞培养物中紫杉醇含量。     

云南红豆杉离体胚的培养

在MS培养基上生长的云南红豆杉离体胚的萌发率较高,达80％;成熟种子胚的萌发率高于未成熟胚;胚的萌发率随着种子贮存时间的延长而下降;胚乳有助于胚的萌发。胚培养1个月左右可获得正常的红豆杉幼苗,成苗率15％～20％。幼苗中的紫杉醇含量为0.004％,远远低于成年树皮中紫杉醇的含量(0.02％)。     

滇西北云南红豆杉群落物种生态位与种间联结

在对滇西北云南红豆杉(Taxus yunnanensis)群落的野外调查基础上,采用生态位宽度、生态位重叠和基于2× 2联列表的χ²检验、联结系数(AC)的方法,分析了群落种群间的相互关系。结果表明:物种的重要值与相对应的生态位宽度存在着极显著正相关;云南红豆杉、丽江铁杉(Tsuga forrestii)与青荚叶(Helwingia japonica)的生态位宽度大于其它种群;在1225个种对中有48.16%的生态位重叠值为0,同时χ²统计量中有4%为中性联结,说明群落中木本植物种群间资源利用性竞争较强。生态位宽度较大的种群间往往生态位重叠也较大;云南红豆杉与丽江铁杉之间的生态位重叠值要明显高于与其它种群的,Schoener指数为0.875。χ²检验表明云南红豆杉与其它种群之间表现为无联结。联结系数中显著负联结的种对要多于显著正联结,群落物种受到较大的外来干扰。联结系数与生态位重叠值之间存在极显著正相关,并能用Cubic指数建立回归方程模型。     

Genetic Variation and Relationships Within Taxus and Between the Genus and Pseudotaxus in China

In the present paper, genetic diversity of 12 populations of four Taxus taxa and one species of monotypic genus Pseudotaxus in China were studied by horizontal starch gel electrophoresis. Seven enzymes encoded by nine loci were assessed. Genetic diversity within 5 taxa were relatively high with the proportion of polymorphic loci ( P ) ranging from 44.4 % to 77.8 %, average number of alleles per locus (A) from 1.6 to 2.1; mean expected and observed heterozygosity ( He, Ho) per locus from 0. 065 to 0.152 and 0. 068 to 0.111, respectively. Combined with the analysis of other characters, the results from allozyme analysis suggest that there be very close relationships between the three species and one variety in Taxus, with high genetic identities (I) between them(from 0. 727 to 0. 995) except those between T. yunnanensis and other taxa in Taxus (0. 727～ 0. 804). Consequently, we propose that these taxa in Taxus be treated as different geographical races within a single species. Also the taxonomic position of Pseudotaxus as a distinct genus is supported by ourallozyme data.     

云南红豆杉传粉生物学研究

云南红豆杉（Taxus yunnanens／s）是分布于我国西南部及不丹和缅甸北部的红豆杉属植物。用石蜡切片法、电镜扫描和整体透明染色法观察了云南红豆杉成熟小孢子和胚珠的结构,在野外观测了云南红豆杉的花期及传粉滴的活动规律。结果显示：云南红豆杉为单核小孢子,没有气囊,有（无）活力的小孢子水合后都急剧膨胀,胚珠单个生于叶腋。云南红豆杉雄株的散粉期在11月中旬到12月中旬,胚珠下弯期从11月下旬持续到2月中旬。在雄株散粉期内及人工授粉的传粉滴持续存在的时间较短,而且授粉后不再出现,在非散粉期内的传粉滴持续存在的时间较长,而且在消失后又会重新出现。红豆杉属植物可能的传粉机制：（1）传粉滴大而且裸露,持续存在的时间较长,有助于提高传粉效率。（2）小孢子能在常温下较长时间的保持活性,不具备远距离飞行的特征,有利于在一定范围内保持较高的小孢子密度;（3）虽然小孢子散粉期短且易变,但胚珠的成熟期较长,从而保证了花期可遇。传粉期内的降水和低的种群密度可能是影响红豆杉传粉效率的主要因素。     

云南红豆杉中紫杉醇和四种紫杉烷类化合物含量

云南红豆杉中紫杉醇和四种紫杉烷类化合物含量项伟张宏杰阮德春孙汉董（云南省林业科学院,昆明６５０２０４）（中国科学院昆明植物研究所,昆明６５０２０４）Ｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｔａｘｏｌａｎｄｏｔｈｅｒ４ｔａｘａｎｅｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓｉｎＴａｘｕｓｙｕ...     

Isoenzyme Variation in Asian Beans

Electrophoretic variation of isoenzyme characters encoded by 20 gene loci has been studied in 9 species of Asian beans, comprising subgenus Ceratotropis of the genus Vigna. Four species of hypogeal germination type, V. angularis, V. umbellata, V. dalzelliana and V. minima, are shown to form a distinct monophyletic group in the subgenus, sharing common electromorphs of two major isoenzymes of aspartate aminotransferase. V. glabrescens is confirmed to be an allotetraploid derivate of two diploids closely related to V. radiata and V. umbellata, but divergent from their contemporary accessions analyzed. V. trilobata is the most variable species of the subgenus in isoenzyme characters. It reveals intraspecific differentiation at several isoenzyme loci correlated with the seed morphology and geographical localization.     

云南红豆杉内生真菌Talarom yces sp.T1BF的化学成分研究

采用色谱技术从云南红豆杉内生真菌Talaromyces sp.T1BF的PDA平板发酵物中分离得到4个化合物.经波谱数据分析及与文献对照,分别鉴定为5α,6α-环氧-24( R)-甲基胆甾-7,22-二烯-3β-醇(1)、醌茜素(2)、苔色酸(3)和间甲基苯酚(4).化合物1为首次从该属真菌中分离获得.     

几种真菌诱导子对云南红豆杉细胞产生紫杉醇的影响

自１９９３年以来,紫杉醇（Ｔａｘｏｌ）已成为临床上治疗乳腺癌和卵巢癌的重要药物。由于其药源植物—红豆杉属植物（ＴａｘｕｓＬ．）生长非常缓慢,体内紫杉醇含量很低,且资源有限,所以人们一直在寻找解决紫杉醇药源短缺的方法。用红豆杉属植物组织培养技术生产紫杉醇被认为是一种有潜力的方法之一,受到人们的高度重视。虽然有关这方面的报道较多［１］,但该研究仍处在试验阶段,还未见用此方法商业化生产紫杉醇的报道。其重要原因是目前红豆杉属植物离体细胞的紫杉醇产量还比较低,而且不稳。人们仍在继续寻找提高紫杉醇产量的方法…