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溴化氰可裂解北京鸭apo A-I为11个肽段,通过测定纯化后各片段分子量玫N末端氨基酸序列确定片段3-10在apoA-I分子中的位置,分别为64-204,74-240,64-206,1-136,1-63,171-206,207-204和137-170,并对上述片段功能进行研究,结果为:(1)这结片均可与脂质结合形成大小不同的脂质体,其大小与片段长短成正比。(2)Apo A-I溴化氰片段3-10激活 相似文献
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本文对北京鸭apoA-Ⅰ溴化氰裂解片段的理化性质、部分结构和抗原性以及其与鸭肝细胞膜HDL受体的结合进行了研究。apoA-Ⅰ用溴化氰裂解后经HPLC分离得两个纯的肽段P5和P6,对二肽段作了氨基酸组成分析,并分别测定了P5,P6N端的14和9个氨基酸残基序列。通过与鸡apoA-Ⅰ的比较,根据同源性及肽段大小,定出P5、P6分别位于鸭apoA-Ⅰ的第138-170aa和第75-136aa的区域。Immuno-blotting法测定结果表明,P5、P6都含有鸭apoA-Ⅰ的抗原决定簇;用Western-blotting免疫检测,发现鸭apoA-Ⅰ的P5、P6二片段都能与鸭肝细胞膜HDL受体结合,提示鸭apoA-Ⅰ的中间区域即第75-170aa区域可能参予鸭apoA-Ⅰ与鸭肝HDL受体的结合。 相似文献
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本文对北京鸭apoA-Ⅰ溴化氰裂解片段的理化性质、部分结构和抗原性以及其与鸭肝细胞膜HDL受体的结合进行了研究。apoA-Ⅰ用溴化氰裂解后经HPLC分离得两个纯的肽段P5和P6,对二肽段作了氨基酸组成分析,并分别测定了P5,P6N端的14和9个氨基酸残基序列。通过与鸡apoA-Ⅰ的经较,根据同源性及肽段大小,定出P5、P6份别位于鸭apoA-Ⅰ的第138-170aa和75-136aa的区域。Imm 相似文献
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大鼠大脑微血管片段的分离纯化及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:分离大鼠大脑微血管并纯化去除完整的神经细胞,用于克隆血脑屏障上的特异表达基因.方法:采用液相合成法制备粒径200~500 nm的铁氧体磁珠,经两侧颈内动脉插管注入大鼠大脑半球.采用机械分离和酶消化相结合的方法解离脑组织,用筛网滤去组织块和大血管,再在磁场下分选标记磁珠的微血管片段,并从形态学、分子生物学和生物活性角度鉴定获得的脑微血管片段.结果:扫描电镜下没有发现微血管周围存在完整的神经细胞,但在部分区域有胶质的终足包裹.全脑组织微管相关蛋白2a、谷氨酰胺合成酶和CD31的RT-PCR产物均在相应位置出现阳性条带,分离纯化的脑微血管仅CD31阳性.微血管片段内皮细胞摄取的Rh123荧光强度显著低于传代培养的微血管内皮细胞荧光强度.结论:采用本方法可以获得高纯度的、不附带完整神经细胞的脑微血管片段. 相似文献
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载脂蛋白(apo)A-I主要存在于血清高密度脂蛋白(HDL)组分中,少量存在于极低密度脂蛋白(VLDL)中。我们在研究北京鸭血清脂蛋白时偶然发现鸭低密度脂蛋白(LDL) 相似文献
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从人工贫血的北京鸭网织红细胞中直接提取总RNA,经Oligo(dT)-纤维素柱层析分离获得珠蛋白mRNA,并经蔗糖密度梯度离心首次得到了电泳单一条带的北京鸭球蛋白mRNA。从凝胶电泳以及蔗糖密度梯度离心鉴定其沉降系数为9S。在麦胚无细胞体外翻译体系中测定了它们的蛋白翻译活力。鸭珠蛋白mRNA促进了~3H-亮氨酸参入新生蛋白的活力,达到对照组的10倍。所翻译的蛋白产物在SDS-聚丙烯酰胺凝胶上的电泳行为与天然鸭珠蛋白一致。 经Oligo(dT)-纤维素及蔗糖密度梯度离心提纯的珠蛋白mRNA,在AMV反转录酶及DNA聚合酶的作用下,分别合成了单链及双链cDNA。其双链链长,经凝胶电泳分析,约为500碱基对。 相似文献
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嗜硫色谱分离纯化碱性脂肪酶及其氨基酸序列测定 总被引:1,自引:0,他引:1
扩展青霉(Penicillium expansum)FS1884所产生的碱性脂肪酶经硫酸铵沉淀、Sephacryl S-200柱层析后,再经嗜硫色谱(Thiophilic Chromatography)柱层析,被纯化了173.8倍,最终比活为5694.9U/mg。纯化后的脂肪酶达到了SDS-PAGE电泳纯、PAGE电泳纯以及毛细管液相色谱(Capillary Liquid Chromatography)纯。该脂肪酶N-端氨基酸序列测定的结果是:A T A D A A A F P D L H R A A K L S S A,与来自青霉属其它真菌脂肪酶一级结构作了比较。 相似文献
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蚯蚓两种抗菌肽的分离纯化及部分性质 总被引:20,自引:1,他引:20
经硫酸铵沉淀、超滤、阳离子交换分离和反相快速蛋白质液相色谱(FPLC)分析,得到了两种新的蚯蚓抗菌肽F-1与F-2,经电喷雾离子源质谱(ESI-MS)测定,其相对分子质量为535.27和519.27.串联质谱(MS/MS)数据表明F-1的肽序列为Ac-Ala-Met-Val-Ser-Ser,F-2的肽序列为Ac-Ala-Met-Val-Gly-Thr.最小抑菌浓度(MIC)实验表明,F-1与F-2对鹑鸡肠球菌(Enterococcus gallinarum)、绿脓杆菌(Pseudomonas pyocyanea)、鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumanii)、土生克雷伯氏菌(Klebsiella terrigena)的最小抑菌浓度分别为11.4 mg/L和12.85 mg/L,对粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的最小抑菌浓度分别为22.8 mg/L和25.68 mg/L.对真菌白色念株菌(Candida albicans)没有表现为完全的抑制作用. 相似文献
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乳抗氧化肽的分离纯化与结构鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
本文检测了不同分子量范围的WPI(乳清分离蛋白)酶解物的抗氧化活性,结果表明各个组分显示出不同的抗氧化活性,其中分子量小于5 kDa的组分最强。采用凝胶过滤色谱对分子量小于5 kDa的WPI酶解物进行分离,抗氧化活性强的组分继续采用RP-HPLC进行纯化。通过MALDI-TOF-MS与氨基酸组成分析鉴定该活性肽为His-Ile-Arg。 相似文献
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圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化和特性 总被引:3,自引:0,他引:3
圆弧青霉突变株PG37 发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质5 200 u 的碱性脂肪酶, 纯化倍数16 .5 , 得率33.2% , 在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)上均呈现单一蛋白质条带。SDSPAGE 和凝胶过滤分别测得酶的分子量为27.5 kD和29 kD, 表明该酶以单体形式存在。N末端10 个氨基酸的序列测定结果为ATADAAAFPD, 与已知的碱性脂肪酶的N 末端序列没有同源性。酶学特性研究结果表明, 该酶的最适作用温度为25 ℃, 在30 ℃以下稳定,40 ℃处理20 min 仅残留30 % 酶活性;pH 稳定范围在6.5~10.5 , 最适pH 为10 .0 。低浓度的碱性蛋白酶对PG37 碱性脂肪酶活性的影响较小, 可同时添加在洗涤剂中。 相似文献
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人血管能抑素基因N端片段的表达、纯化及其生物活性测定 总被引:9,自引:0,他引:9
以中国人胎盘脐带组织为材料 ,提取组织总RNA ,用RT PCR方法合成人血管能抑素cDNA ,将该cD NA克隆进 pSP72载体获得重组质粒 pSP72C。以pSP72C为模板 ,PCR方法合成编码血管能抑素N端 189aa的基因片段 ,将其克隆进pET 3c载体获得重组表达质粒 pET CN ,转化E .coliBL2 1(DE3) ,SDS PAGE分析显示 ,在IPTG诱导下 ,人血管能抑素N端基因片段获得了有效表达 ,表达量约占菌体总蛋白质的 35 .3% ,主要以包涵体形式存在。包涵体经过洗涤、裂解、蛋白质复性以及SephadexG 10 0凝胶过滤层析等步骤纯化后 ,获得了纯度约92 .6 %的人血管能抑素N端片段 ,CAM实验证明具有显著抑制鸡胚新生血管生成活性。 相似文献
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钙调素(Calmodulin,简称CaM)是一种多生理功能的调节蛋白,在脑的功能活动中有重要作用。本文采用苯基琼脂糖(phenyl-Sepharose CL 4B)层析和葡聚糖凝胶(Sephadex G-50)过滤法,从北京鸭脑中分离纯化出CaM。纯化的CaM经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和等电聚焦(IEF)电泳鉴定均为一条区带。分子量为19kD,等电点(pI)为4.15,消光系数为1.83。 对纯化的鸭脑CaM的活性和性质进行了研究。它可明显地激活牛环核苷酸磷酸二酯酶活性,在有Ca~(2+)存在的条件下,SDS-PAGE中出现电泳迁移速度的改变,紫外吸收光谱具有已知CaM特有的吸收多峰形,并观察了Ca~(2+)对荧光发射光谱的影响。其氨基酸组成中,1/3是酸性氨基酸,苯丙氨酸和酪氨酸的比例为8:2。与猪CaM和牛CaM的物理化学性质作了比较。 相似文献
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斑点热群立克次体中国分离株rOmpA基因片段的克隆和序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
用Rr190.70p-602n引物扩增了斑点热群立克次体(spottedfevergrouprickettsiae,SFGR)中国分离株(BJ-90株、Ha-91株和HLJ-054株)及SFGR国际标准株西伯利亚立克次体(Rickettsiasibiricu)246株和派克立克次体(R.parkeri)的rOmpA基因片段,将PCR产物克隆入pGEM-T载体中,用双脱氧法进行序列测定,并与SFGR的rOmpA基因已知序列进行了比较。结果表明,SFGR国际标准株间rOmpA基因片段的核苷酸同源性为90.06%~96.62%,推定氨基酸的同源性为83.05%~94.35%,中国分离株与国际标准株及参考株rOmpA基因片段比较的结果发现:BJ-90株及Ha-91株与西伯利亚立克次体标准株的核苷酸同源性分别为99.06%和98.31%,推定氨基酸的同源性则为98.87%和96.61%,HL-93株和HLJ-054株与日本立克次体(R.japonica)核苷酸同源性较高,分别为96.62%和95.68%,推定氨基酸的同源性为92.09%和89.27%。在中国分离株内,BJ-90株和Ha-91株的核昔酸同源性高达99.2… 相似文献
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利用简并PCR及DNA步移法,从杨柳田头菇Agrocybe salicacola YAASM0711菌株中扩增得到了一个4 231 bp的核酸片段.经过比对及序列预测,所获得序列中含有杨柳田头菇交配型编码基因中的信息素受体部分,其序列长度为1194 bp,包含4个内含子,5个外显子的长度分别为217 bp,113 bp,67 bp,138bp,449 bp.拼接后的ORF全长984 bp,编码327个氨基酸残基.该序列与灰盖鬼伞Coprinus cinerea、双色蜡蘑Laccaria bicolor信息素受体氨基酸序列较为相似,含有7个跨膜区.信息素受体遗传进化分析显示,其与多个物种信息素受体聚集在一起,可能与真菌信息素受体的多种起源有关. 相似文献
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烙铁头蛇毒L—氨基酸氧化酶的分离、纯化及其生物学活性 总被引:6,自引:2,他引:4
通过DEAESephadexA 5 0阴离子交换柱 ,SephadexG 75分子筛 ,ResourseQ阴离子交换柱三步层析从湖南产的烙铁头蛇毒中分离、纯化得到一个L 氨基酸氧化酶 (TM LAO) ,它由两个非共价的亚基组成 ,每个亚基的分子量为 5 5kD。与台湾产的烙铁头蛇毒L 氨基酸氧化酶分子量 ( 70kD)不同。TM LAO的N末端氨基酸序列是ADNKNPLEECFRETNYEEFLEIAR ,与报道的蝰科的L 氨基酸氧化酶的相似性比眼镜蛇科的要高。TM LAO能抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌的生长 ,杀死肿瘤细胞以及诱导血小板聚集。这些活性能被过氧化氢酶所抑制 ,说明TM LAO生理学功能主要是通过酶反应产生的过氧化氢 (H2 O2 )介导的 相似文献
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阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)的一个主要的病理特征表现为神经细胞表面大量地呈现β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein, Aβ)。淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)是与AD病理密切相关的膜蛋白,它经β-裂解途径剪切后生成s APPβ、Aβ和AICD片段。Aβ能引发细胞内质网氧化应激、线粒体功能障碍等,但s APPβ和AICD片段对细胞的影响还有待进一步的研究。本实验采用慢病毒介导质粒转染技术,分别构建了稳定过表达s APPβ、Aβ和AICD片段的SH-SY5Y细胞系,并分析了其细胞活力、细胞膜损伤、胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平和线粒体膜电位去极化程度。结果表明, Aβ或AICD片段可在一定程度上导致细胞活力下降、细胞膜受损、胞内ROS水平升高和线粒体膜电位发生去极化,从而对细胞产生氧化损伤作用。 相似文献
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采用碱性蛋白酶酶解提取草菇子实体多肽,透析法对其进行分离纯化得到3-10、1–3及1 kDa以下3种多肽组分,比较3种组分的体外抗氧化活性。用液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)、紫外吸收光谱、傅里叶红外光谱和氨基酸的测定方法表征纯化后多肽结构。结果表明,1–3kDa组分的抗氧化活性最强,其1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率达到99.81%,铁离子自由基还原能力为1.47, 2,2′-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)[2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid), ABTS+]自由基和羟自由基的清除能力分别达到99.15%、99.34%。此分子量的草菇抗氧化肽的总蛋白含量为71.12%,灰分含量为12.75%,水分含量为8.44%,其他为7.69%。经鉴定表明草菇子实体多肽是一种优质蛋白质。 相似文献