介绍一种淀粉酶的简易取材方法

介绍一种淀粉酶的简易取材方法高中《生物》（必修）课本第４５页的演示实验,证明酶是生物催化剂。所用的酶,是选取萌发的小麦种子芽,与石英砂和蒸馏水碾磨后的过滤液。我们做此实验时改用人的唾液方法较简便。首先,准备好过滤装置,如漏斗、脱脂棉、试管等。然后让几...     

经高温处理的淀粉酶仍然具有生物活性吗?

笔者在与学生一起做《生物》选修教材（人民教育出版社,2004年6月第1版）的“实验一——温度对酶活性的影响”的实验时,发现：将2支分别装有2mL质量分数为3％的淀粉溶液和1mL质量分数为2％的新鲜淀粉酶溶液的试管在沸水中放置5min后．将二者混合、摇匀,仍在沸水中维持5min,取出试管,向试管中滴入碘液,结果溶液无色,且反复滴加碘液,溶液的颜色反复由蓝色变为无色。学生质疑：是因为淀粉酶经高温处理仍然具有活性,还是在高温下碘与淀粉形成的复合物不稳定呢？     

GA3对小麦种子α-淀粉酶诱导形成测定方法的改进

GA3对小麦种子α-淀粉酶诱导形成实验通过外加赤霉素溶液与清水（对照）处理小麦种子24h后萌发1d,比较其α-淀粉酶活性,可了解赤霉素在种子萌发过程中有诱导α-淀粉酶形成的作用。但是,在教学中,我们发现按照张志良和瞿伟菁（2003）主编的《植物生理学实验指导》一书中的方法各用一个调零校对对2组样品进行测定会导致实验结果的可比性降低,     

地衣芽孢杆菌胞外耐高温α-淀粉酶的研究

地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)突变株7902培养液离心后的上清液,于75℃至100℃作用．Α-淀粉酶活力基本上随温度提高呈直线上升。酶液在不加Ca2+和无任何保护剂条件下于90℃处理60分钟,95℃处理20分钟,酶活力均能保留90％以上。培养液经硫酸铵分段沉淀、Sephadex G-50疑胶过滤和制备垂直平板电泳纯化,经PAGE鉴定为一条带,纯酶比活提高49.3倍,淀粉酶法区带定位鉴定证明提纯样品是α-淀粉酶。SDS凝胶电泳测定分子量为68000。金属离子Ca242+、Li+、Mg2+等对酶有激活作用,而AI3+、Ag+、Cu2+、Mn2+和Fe2+等有一定的抑制作用。     

陕西七纺器蛛和拉土蛛不同组织酯酶同工酶的比较研究

陕西七纺器蛛(Heptathela shaanxiensis),拉土蛛(Latouchia sp.)均于1987年10月采自陕西泾阳。在同条件下采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行了不同组织的酯酶同工酶比较。实验方法酶液的制备:将饥饿10天的两种蜘蛛按常规解剖,分别取各组织置于研钵内,根据样品重量之差异,分别加入40%蔗糖溶液1—3ml,匀浆过滤,离心(3500rpm×15′)。取上清液作酶源,贮存于4℃冰箱备用,点样时加入适量0.1%澳酚蓝作电泳的指示染料。酯酶同工酶的聚丙烯酰胺疑胶电泳分离和染色、脱色:基本参照邱琼华等(1987)的方法。用日本20M光密度计(波长570nm,狭缝0.4cm)扫描…     

"探索pH对酶活性的影响"教学反思

1教学过程在高二的一节实验课上,笔者在学生完成了酶的专一性和高效性实验后,又补充了一个探索pH对酶活性的影响实验．这个实验设计如下:在实验过程中用碘液来验证淀粉是否被水解。学生在做这个实验的过程中,结果是1号试管显蓝色,2号、3号试管显无色。当时教师和学生都认为:试管2:新鲜的淀粉酶溶液1 mL 5％NaOH溶液1 mL 可溶性淀粉溶液2 mL,保温,用碘液检验无颜色     

黄芩黄酮总苷元提取新方法的研究

研究黄芩黄酮总苷元提取制备新方法。以黄芩苷的酶解率为评价指标,筛选黄芩酶液制备的pH值;以黄芩苷提取率为评价指标,采用正交实验对影响黄芩提取的加水量、煎煮时间和煎煮次数进行优选;确定黄芩黄酮总苷元提取制备方法为:黄芩粗粉以pH3水搅拌提取0.5 h,过滤,得到黄芩酶液;药渣投入12倍量沸水中,调pH6煎煮两次,每次0.5 h,过滤,合并滤液,加入上述黄芩酶液,调pH6,于50℃酶解6 h,过滤,沉淀干燥,即得黄芩黄酮总苷元提取物。该方法简便可行,黄芩素提取率约为80%,提取工艺稳定,为从黄芩中提取黄芩黄酮总苷元提供参考方法。     

嗜热真菌hermomyces lanuginosus A236热稳定葡萄糖淀粉酶的纯化…

嗜热真菌Ｔｈｅｒｍｏｍｙｅｓ ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓＡ２３６在液体培养基中５０℃下静止培养１４天,粗提酶液经硫酸铵分级沉淀、ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ离子交换层析、Ｂｕｔｙｌ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ疏水层析,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ１００凝胶过滤和ＦＰＬＣＭｏｎｏＱ离子交换层析,得到了凝胶电泳均质的葡萄糖淀粉酶。酶促反应产物经ＴＬＣ分析为葡萄糖,证明纯化的酶葡萄糖淀粉酶（ＥＣ３．２．１．３）。ＳＤＳ－Ｐ     

麦冬基因组DNA提取方法研究

为了从富含多糖、多酚的顽拗植物麦冬中分离出高质量基因组DNA,分别建立了改良CTAB法和改良SDS法。通过使用核分离液和CTAB/NaCl溶液、提取液中加入0.35倍体积无水乙醇等最大限度地除去杂质。将两种方法提取的8种麦冬DNA与两种离心柱式试剂盒提取的DNA在纯度、产率等方面进行对比,并进行双酶切和SRAP分析。麦冬类植物SRAP反应体系的建立尚属首次。结果表明,改良CTAB法和改良SDS法均能从8种麦冬叶片中提取到高质量的基因组DNA,改良CTAB法提取纯度更高,提取幼叶DNA纯度可以与离心柱式试剂盒媲美,能够满足多种分子生物学试验要求。在后续试验中,用改良CTAB法从20多种沿阶草族植物中提取到了高纯度DNA。该方法通用性好,提取的DNA纯度高,对其他顽拗类植物基因组DNA的提取具有借鉴意义。     

从琼脂糖凝胶中高效回收DNA技术的探讨

用两只离心管制成的凝胶过滤装置,从电泳后的琼脂糖凝胶中回收DNA片段的简易方法。它依次包括以下步骤：凝胶过滤装置的制作、凝胶切割、凝胶低温冷冻、低温高速离心、ddH20洗胶、DNA纯化和回收效果检测等。用此方法回收的DNA片段产率高、质量纯,可直接用于分子生物学实验的后续操作,如载体连接、PCR模板获得、DNA探针制备、基因测序等。其优点是：DNA片段的回收率高（90％以上）,质量好;操作简便,耗时短;回收装置简单,成本低廉,可进行商品化开发。     

在同一份植物样品中测定α-和β-淀粉酶活力方法的改进

前言本世纪二十年代Kuhn等发现植物淀粉酶有两种类型,根据酶作用于淀粉时旋光度的变化,水解产物为α—型,有负的变旋光作用的称为α—淀粉酶;产物为β—型,有正的变旋光作用的称为β—淀粉酶。由于α—和β—淀粉酶在植物的生理生化过程和某些食品发酵工业中起着重要的作用,因此,同时测定这两种淀粉酶活力的方法,对农业、食品工业和淀粉酶的生化研究都具有实际的应用价值。苏联植物生理学家X.H.波钦诺克所著《植物生物化学分析方     

饵料系列对军曹鱼仔鱼生长、消化酶活力和体成分的影响

饵料是鱼类早期发育最重要的条件之一,并且随着个体发育,饵料类别不断变化。为了评定各种饵料的效果并筛选得到军曹鱼仔鱼早期发育阶段适宜的饵料组合,进行了本实验。军曹鱼仔鱼在750L桶中孵出并暂养2d,然后在水泥池中培育4d（3—6日龄）,并投喂轮虫;在第7日龄,将240尾仔鱼随机平均分配至12个70L桶中,共分4组,每组3桶;7—15日龄,4组仔鱼分别投喂轮虫、卤虫无节幼体、桡足类和桡足类投;16—42日龄,分别投喂轮虫、卤虫无节幼体、桡足类和鱼糜。第42日龄,将全部仔鱼取样、称重并于-80℃保存备用。鱼体匀浆、离心后的上清液作为粗酶液用以测定蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶等消化酶活力,还测定了粗蛋白、粗脂肪等主要体成分,并统计了生长指标。结果表明：（1）组IV的生长表现最佳;（2）组III的成活率最高;（3）饵料对三种酶的活力和体成分都有极显著的影响;（4）组III的蛋白酶活力、组I的淀粉酶活力和脂肪酶活力最高,尤其是组I的淀粉酶活力比其他各组高出6.8—11.9倍;（5）各组鱼体的粗蛋白含量均较相应饵料的低,而粗脂肪含量则比饵料的高。因此,可以认为：仔鱼长期饥饿时,消化酶可能存在补偿性分泌,并优先利用糖类和脂肪作为能源;军曹鱼仔鱼对脂肪的沉积效率较蛋白高。     

培养的大鼠脑微血管内皮细胞生化特性观察

用胶原酶消化、差异离心和尼龙网过滤的方法分离鼠脑微血管内皮细胞,建立其体外长期培养方法。经形态学、免疫组化,酶学鉴定,培养细胞为脑微血管内皮细胞,动态观察培养细胞酶含量变化,发现随着细胞培养时间的延长,血管紧张素转换酶Ⅰ（ACE）呈上升趋势,而γ－谷氨酰胺转化酶（γ-GT）和硷性磷酸酶（ALP）则明显下降,实验结果提示,血脑屏障的主要功能酶γ－GT和ALP可作为体外脑微血管内皮细胞的标志酶,但要维持长时间体外表达则需要某种因子的介导。本实验可为体外研究血脑屏障及相关疾病提供帮助。     

柴胡及体细胞杂种愈伤组织酯酶同工酶技术的优化

为解决柴胡及其体细胞杂种愈伤组织中次生代谢物多,同工酶粗提液粘稠、杂质多且呈混浊态,同工酶电泳谱带不清晰及易拖尾的问题,通过增加离心次数、调整酶粗提液上样体积等方法,得到了理想的酯酶同工酶电泳谱带。该法广泛适用于其它植物的同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。     

黄原胶对α-淀粉酶耐热性及其在热变性过程中构象变化的影响

黄原胶（ＸＧ）对α－淀粉酶（ＢＦ－７６５８）具有较好的热稳定作用,０．２％黄原胶α－淀粉酶液７５℃处理７分钟残余酶活为２５．８％,而对照酶液几乎完全失活。酶分子立体构象的变化与其相应的生物活力有着一定的联系。加胶酶在相同条件的部分热变性过程中,酶活损失较少,其分子构象的变化程序也较弱。     

海栖热袍菌胞外α-淀粉酶在E.coli中的高效表达

为解决密码子偏好性差异造成的表达水平低下问题,采取了3种手段提高海栖热袍菌胞外α-淀粉酶在E．coli中的表达水平。用PCR方法从海栖热袍菌（Thermotoga maritima）基因组DNA中扩增出胞外α-淀粉酶A的完整基因amyA,插入表达载体pET-20（b）中构建成质粒pET—amyA;运用基因工程手段将amyA基因富含稀有密码子的信号肽进行切除,将不含信号肽的amyAⅠ基因插入pET-20（b）中构建成质粒pET—amyAⅠ;用PCR法从大肠杆菌基因组中扩增出argU基因,插入pET—amyAⅠ中构建成质粒pET—amyAⅡ。将重组质粒分别转化到E．coli JM109（DE3）,并将重组质粒pET—amyAⅠ转化E．coli BL21-Codon Plus（DE3）-RIL。通过IPTG诱导测酶活性：在E．coli JM109（DE3）中表达的重组酶（pET—amyA）、（pET—amyAⅠ）、（pET—amyAⅡ）的酶活分别是1658．0U／mL、6721．7U／mL、8904．5U／mL,在E．coil BL21-CodonPlus （DE3）-RIL中表达的重组酶（pET—amyAⅠ）的酶活是13867．7U／mL。表明通过这些手段能大幅提高T.maritima胞外α-淀粉酶在E．coli中的表达水平。     

固定化酶法手性转化右旋磷霉素的初步研究

研究确定沙门柏干酪青霉菌（Penicillium camemberti）2221能够产生手性转化右旋磷霉素的酶,以及以海藻酸钠为载体固定化酶转化的最适条件。以海藻酸钠为载体,分别考察了海藻酸钠浓度、氯化钙浓度、海藻酸钠和酶用量的体积比、固定化时间等条件,以及固定化酶的最适反应pH、最适反应温度和反复利用的稳定性等。结果表明,最优固定化条件是3.0%（质量与体积比）海藻酸钠、3.0%（质量与体积比）氯化钙、酶液（浓缩20倍）和3.0%（质量与体积比）海藻酸钠溶液的体积比为1 2、固定化时间为6 h。固定化酶的最适温度为37℃,最适pH为6.2,转化率为14.3%,连续反应4次后转化率为最初的57.57%。利用海藻酸钠包埋固定化沙门柏干酪青霉菌产生的手性转化右旋磷霉素的酶,能够连续转化生成左旋磷霉素,提高酶的利用效率,延长使用时间,具有进一步研究开发的价值。     

小麦胚乳细胞的分离及其淀粉体的计数

IsolationofEndosPermCellsandCalculationofTheirStarchGrainsinWheatPlants小麦胚乳重量占籽粒重的90／以上．胚乳细胞的分裂数目及其淀粉体的发育状况决定着籽粒的重量和品质卜‘。在胚乳细胞增殖期,如能增加胚乳细胞的分裂速度．就能增加产量k‘．因而分离胚乳细胞,观察胚乳细胞的发育技术与方法受到人们的重视）－’‘’。前人对胚乳细胞的计数大致有以下几种方法：（）根据胚乳体积与胚乳细胞体积之比推算”‘;（2）用纤维素酶分解胚乳．计数单位酶液中的细胞数）‘’;（3）先用纤维素分解胚乳后再用淀粉酶解离细胞中的淀粉．…     

甘蓝型油菜胞质体大量制备技术的研究

用Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心法和吖啶橙（ＡＯ）结合光照处理两种方法,均从甘蓝型油菜下胚轴原生质体制备到胞质体。在２个Ｐｅｒｃｏｌｌ梯度、３００００ｇ（１８０００ｒ／ｍｉｎ）与１２℃离心６０ｍｉｎ的条件下,获得了含胞质体８０％以上的群体;以含８０、１００、１２０ｍｇ／Ｌ ＡＯ的酶液酶解下胚轴原生质体,纯化后分别给以３ｈ、２ｈ、１ｈ光照（光强度：４０００ｌｘ）可使原生质体几乎不能分裂,但保持５ｄ以上的     

淀粉酶高产菌株的筛选、紫外诱变及产酶条件优化

【背景】提高淀粉酶的稳定性进而适应多变的工业生产条件,是淀粉酶开发的重要方向。【目的】淀粉酶在食品加工、布料退浆、酿酒制造、养殖等领域都有广泛的应用,但目前生产用的淀粉酶来源单一,在溶液中的稳定性较差,需要扩大淀粉酶来源,增强酶的稳定性,使其进一步适应复杂多变的工业生产环境。【方法】利用选择培养基在三门峡黄河湿地表层土样中筛选得到20株具有淀粉酶活性的菌株,采用杯碟法检测粗酶液的活性并对其中活性最高的3株菌进行鉴定,对其中酶活性最高的菌株运用紫外照射的方式进行诱变并测定致死率,选择突变后酶活最高的菌株,优化培养条件,并测定突变后淀粉酶的活性和作用条件范围。利用3,5-二硝基水杨酸（3,5-dinitrosalicylic acid,DNS）法测定诱变前后酶活并进行活性对比。【结果】在三门峡黄河湿地表层土壤中筛选得到3株淀粉酶活性较高的菌株并编号S03、S08和S17。根据16S rRNA基因序列比对、革兰氏染色形态观察结合生理生化分析显示,菌株S03、S08和S17分别为Aeromonas、Exiguobacterium和Bacillus,其淀粉酶最适NaCl浓度是10%-12%,最适...