去氧核醣核酸,多醣类,蛋白质的三色染色

甲)材料及固定:哺乳类、两栖组织,包括甲状腺、肾、小肠、胃、睾丸;昆虫的精巢,肌组织;及数种植物组知,固定于 Carnoy 氏液,福尔马林液,Helly 氏液,或 Smith 氏液皆可。乙)试剂试剂 T:天青 A-schiff 液——溶0.5克天青 A(azureA)于100毫升漂白液内(见下)可保持数周,用前加100%偏亚硫酸氢钾(K-me(?)abisulfite)数滴。试剂Ⅱ:漂白液——1N盐酸5毫升;10%偏亚硫酸氢钾或钠5毫升;蒸馏水90毫升;新鲜制备。试剂Ⅲ:高碘酸液(periodic acid solu)——高碘酸0.8克;蒸馏水90毫升;0.2M醋酸钠10毫升;新鲜配制。试剂Ⅳ:硷性复红 schiff 液——根据 Stowell 氏法(1945)配制,溶液置冰箱内可保持数月。     

以龙胆紫染硫酸酯多醣类的组织化学意义

甲、方法:1)固定于任何固定液皆可,但以酒精为最合适。石蜡切片,厚3微来。切片脱蜡,降酒精,至蒸馏水。2)以龙胆紫(gentian violet)水溶液1∶250,000或1∶1,280,000染色24小时(即0.25毫升0.1%龙胆紫贮存液加入100毫升蒸馏水内;或以0.1毫升0.1%龙胆紫液加入128毫升蒸馏水内)。3)滤纸吸干切片,然后在亚尼林二甲苯(anilinc-xylene)1∶1或1∶2液内脱色及脱水约5分钟(或稍长),直至紫色不再从切片上脱下为止。以二甲苯洗2—3次,用树胶封片。若染透明质酸(hyaluronic anid)可以甘油封片。     

在组织切片中肥大细胞的证明及迅速记数的简单方法

肥大细胞的选择性染色法如下:1)薄片新鲜组织(3—5毫米厚)于下液固定18—24小时,但标本置于此液至少一周尚无显明害处。配法:福尔马林液10毫升;95%酒精90毫升;醋酸钙1克。2)组织以95%酒精洗2次,每次1小时。3)以常法制做石蜡切片(8—12微米厚),粘片,脱蜡,经纯酒精至95%酒精。4)在室温于下液内染1小时。配法:甲苯胺蓝(toluidine blue)0.25克;70%酒精100毫升;浓盐酸     

涡虫神经纤维的硫酸铜-硝酸银显示法

整体染色:(1)在10毫升福末林(普通的);45毫升95％乙醇;2毫升冰醋酸組成的混合剂內固定24—48小时。(2)不用洗滌,轉入70％乙醇內3—10天。(3)在蒸餾水內洗滌一小时。(4)在50℃下,在10％硫酸銅(CuSO_4·5H_2O)內浸3小时。(5)不經洗滌,在50℃下,轉入1％硝酸銀內1.0—1.5小时。(6)在蒸餾水內洗3分钟,連續三次,每次一分钟。(7)在40—45℃时水浴內,在下述显影剂內还原,显影剂配法:1％連苯三酚10毫升;56％乙醇(一般为60％)     

草履虫的纤毛染色方法

(一)杀死固定 1.固定液配制酒精95％5毫升,苦味酸(饱和液)15毫升,冰醋酸20毫升,甲醛60毫升,蒸馏水100毫升。将上面四种药物混合后,再加等量的蒸馏水稀释,即成200毫升的固定液。如要少配或多配,可依次按1∶3∶4∶12∶20的比例进行。此固定液可长期保存,效果不变,也适应其他原生动物和动物组织的固定。 2.固定的方法用吸管吸取培养草履虫的烧杯边缘的培养液,可得到高浓度的草履虫,投入离心管中,然后以9∶1的比例加入固定液(即草履虫培养液9份,固定液1     

永久装片的简易制作法

常规的永久装片制作是相当繁琐的。材料要经过固定、洗涤、多级脱水、透明、包埋、切片、封片等多道程序。笔者结合自己的工作,对通常的压片法进行改进,介绍如下。取蝗虫精细管若干条(保存于75％酒精中的材料须经50％、30％的酒精洗脱转入水中),置于石碳酸品红或其它染料中染5-10分钟,盖上盖玻片,按常规进行压片。在显微境下检查。若染色体着色适宜,细胞分散成单层,即可将它小心地放入冰箱的冷冻室中(-18——12℃)过夜。第二天准备好双面刀片,从冷冻     

平滑肌收缩—松弛偶联机制及钙的调节作用

平滑肌细胞的重要功能是收缩,它的细胞胞浆主要被纤维丝所占据。电镜下各种平滑肌纤维丝按其大小、形态及组份可划分为三种类型:(1)含有 AT(肌纤蛋白)和 TM(原肌凝蛋白)的细丝,直径为50～80(?)。(2)含有 Ms(肌凝蛋白)的粗丝。通常直径为120～180(?)。粗丝的形态、大小随固定方法不同而有变异。纯化的平滑肌 Ms 分子构型表明它由两种纤维丝组成:一种是短的双极性纤维丝,一种是较长的“侧极性”横桥纤维丝。粗丝沿平滑肌长轴平卧,并被细丝包绕。平滑肌细胞内数量最多的是细丝,粗丝数量则视细胞中 Ms 数量多少而定。(3)由支架蛋白(skeletin)构成的纤维丝。支架蛋白首次由 Lazarides 从小鸡平滑肌细胞中分离出来,曾命名为联系蛋白(desmin),分子量55,000,直径100(?)。平滑肌支架蛋白与肌细胞的致密体共同构成有别于收缩装置的胞浆支架网。     

念珠藻的制片方法

取材普通念珠藻(Nostoc Commune)生于潮湿的土壤或草地上,在春、夏多雨季节里很容易采到.它形似木耳,俗称“地木耳”或“地皮菜”,可食用.发状念珠藻(Nostoc flagelliforme)形如发丝,俗称发菜,是重要的食用蓝藻,可从商店购得.取其中任何一种材料泡在水中,使其胶质鞘膨胀,用小毛笔刷净泥砂杂物,剪成3毫米左右长的小块(或段).选平整的材料置于载片中央,用另一张载片将材料压薄,用棉线捆紧两张载片. 固定将捆好的两张载片投入FAA固定液中24小时,松开棉线,分开载片.由于材料本身的胶质,它能粘贴在两张或其中的一张载片上(通常两张载片各粘一部分).将此材料染色和脱水. 洗涤与初染将固定好的材料用50％酒精洗涤2—3次,每次10分钟.再经40％→30％→20％→10％酒精洗,每级10分钟.最后经蒸馏水浸洗2次,每次2分钟.媒染用4％铁明矾1小时,蒸馏水洗2次后用海氏苏木精染色1小时.蒸馏水洗去浮色,1％铁明矾分色.边分色边显微镜检,至细胞内含物呈黑色,其它部分浅灰色或无色时为止.立即倒掉分色液,蒸馏水洗2—3次后,将材料浸泡于自来水中,使其变蓝     

制作眼球切片标本方法的改进

我们经过几年的实践,对制作眼球切片标本的方法作了一些改进,其制备过程如下: 取材固定取下狗、猫或兔的眼球并立即置于复方甲醛固定液中。配方是: 丙酮:50毫升,冰醋酸:2毫升,甲醛液:4毫升,蒸馏水:3毫升。固定一周后,将原液倒出一半,再加等量丙酮固定5天,再直接放入95％酒精中。     

胞间连丝玻片的制备

将柿子或黑枣的种子浸于温水中24小时,剥去种皮,将胚乳切成薄切片并于I—KI溶液(I 1克,KI 1.25克,蒸馏水100毫升)中固定3—5分钟,移入5％H_2SO_4溶液中3—5分钟。将切片置载片中央滴一滴结晶紫染色,3分钟后用50％酒精洗1—2     

生物实验教学拾零

1.青霉素瓶在生物实验中用处多废弃的青霉素瓶在生物实验中有许多用途。(1)装清水,供生物实验之用。(2)装染色剂,如装稀释的红墨水、碘酒等。(3)装消毒剂,如装0.01％高锰酸钾溶液对牙签进行消毒。(4)装营养液,如装O.65％和0.9％生理盐水来观察两栖动物、哺乳动物的细胞、组织。(5)装反应剂,如装澄清的石灰水、碘酒溶液等。(6)装分离剂,如装10％盐酸用于解离根尖。(7)装固定液和保存液,如装醋酸酒精溶液对根尖进行固定,然后再放在70 ％酒精中保存。(8)装培养液,如装     

植物完整胚囊制片方法的改进——组织浸渍法分离、孚尔根法染色

本文乃介绍苏联等的方法。(见苏联植物学杂志,1978,6)。用野生禾本科植物如极地早熟禾(Poa arctica)、高山看麦娘(Alopecurus alpinus)等为材料,用FAA——市售福尔马林5ml、50％酒精90ml、冰醋酸5ml作固定液固定。固定后将材料洗净存放在70％酒精中。由于胚囊不太大(0.8mm),用手直接从野生禾本科植物的胚珠中取它们显然是不可能的,所以需用细胞溶解酶的组织浸渍方法才能把它们取出。这种细胞溶解酶是通过解剖萄葡藤上的蜗牛,切开胃从其液汁中收集、过滤得到的,并要在冰箱中冰冻状态贮存。     

哺乳动物脑和脊髓灰白质标本制作法

取哺乳动物的新鲜羊脑组织和牛颈部脊髓,先用逐渐增加浓度(75％、85％、96％)的酒精溶液将材料固定,在每一种酒精溶液中要固定3—4天。从酒精溶液中将脑组织和牛脊髓取出,用锋利的刀片切成薄片和小段,再转入1％硫酸铜溶液中浸泡,经半小时后,     

白鲟消化道形态学与组织学的初步观察

白鲟消化道具有肉食性鱼类的典型特征,其口咽腔结构既适合捕食又适合吞食与滤食水生动物。咽后消化道可分为食道、胃后行支、胃前行支、小肠、瓣肠、直肠与肛门。幽门盲囊似一致密器官,小肠与瓣肠连接处有一特殊淋巴器官,肛门两侧有腹孔。白鲟口咽腔被覆层扁平上皮,上皮内有味蕾分布。咽后消化道组织分层为粘膜(无粘膜肌层)、粘膜下层(小肠及瓣肠前部无)、肌层与外膜。粘膜上皮为单层柱状上皮,由纤毛柱状细胞、一般柱状细胞和杯状细胞组成,其间还散在有颗粒细胞和游走细胞。食道后部与胃的一般柱状细胞为分泌粘液的细胞,肠内的一般柱状细胞为吸收细胞。胃后行支及部分前行支固有膜内有消化腺,其余各部的固有膜为致密层。小肠前中部粘膜形成蜂窝状粘膜窦,无肠腺。除食道前部肌层中有横纹肌外,其余部的肌层均为平滑肌。外膜内结缔组织有的致密有的疏松,外膜表面细胞柱状或立方形或扁平。     

实验12 cDNA文库的简易构建法

一、合成cDNA单链 1.按照实验3的操作程序,从哺乳类细胞中抽提poly(A)~+mRNA。 2.建立合成cDNA单链的反应系统:50mM Tris·HCI pH8.3(42℃时测定pH值);10mM MgCl_2;10mM DTT;4mM焦磷酸钠;1.25mM dGTP;1.25mM dATP;1.25mM TTP;0.5mM dCTP;15—20μCi α-~32P-dCTP(3000 Ci/mmol);100微克/毫升oligo(dT_12-18);150微克/毫升 Poly(A)~+mRNA;3000单位/毫升反转录酶,用水调节至最终体积为20或40微升。43℃保温30分钟。     

大黄素对豚鼠结肠带细胞内腺嘌呤核苷酸的影响

大黄素 (Ｅｍｏｄｉｎ)是中药大黄 (Ｒｈｕｂａｒｂ)有效成分蒽醌类衍生物之一。我们已报道 ,大黄素通过促进豚鼠结肠带平滑肌细胞膜电位去极化 ,增强细胞的电兴奋性和收缩活动 ;大黄素作用受ＫＡＴＰ通道特异激动剂ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ的抑制 ,提示其作用与抑制ＫＡＴＰ通道活性相关。本文进一步研究了大黄素对豚鼠结肠带细胞内ＡＴＰ、ＡＤＰ和ＡＭＰ的影响。1　材料与方法(1)标本制作和实验条件　健康豚鼠 (310± 2 5 )ｇ雌雄不限。制备分离的豚鼠结肠带标本 ,长 10ｍｍ ,固定于浴槽中 ,自由收缩的一端与肌张力传感器相连。用改良的Ｋｒ…     

胎盘部位中间型滋养细胞良性病变及其临床病理分析

目的 探讨胎盘部位结节(PSN)和胎盘部位过度反应(EPS)的临床病理特征.方法 结合临床表现、形态学特征、发病机制和免疫表型,对3例PSN及4例EPS病例进行分析,并对鉴别诊断、治疗和预后的情况进行分析.结果 PSN和EPS临床表现为末次妊娠后阴道不规则流血、产后大出血或妊娠合并子宫不全破裂等.镜下见PSN由圆形到卵圆形的中间型滋养细胞结节组成,并伴致密玻璃样变间质.EPS绒毛附着的蜕膜区及其下浅肌层中见单核的多边形或梭形中间型滋养细胞浸润细胞呈片块状或条索状穿插于子宫肌层平滑肌束间.免疫表型PSN和EPS示广谱CK(AE1/AE3)均强阳性,但PSN中PLAP、P63、a-inhibin也呈强阳性,而EPS中hPL强阳性;两者hCG、CEA均局灶阳性或阴性,SMA、vimentin阴性,Ki-67指数均小于5％.治疗手段以刮宫及全子宫切除术,预后较好.结论 PSN和EPS是罕见的中间型滋养细胞(IT)良性病变,二者具有不同的形态学特征和免疫表型,但临床表现及治疗方式比较相似,且预后较好.     

鱼类染色体的观察

在早春到市场上买性成熟的活雄鲤一条,取其精巢(性腺已发育到第Ⅳ期),做染色体的观察。 1.固定将精巢放入Carnoy固定液(无水酒精3份,冰醋酸1份),固定3小时,再换入70％酒精中。 2.染色用镊子和解剖针仔细取出精巢内的精细小管(细如白发),一小段,放手掌上剔去周围异物之后,放置载玻片上,加醋酸洋红(45％醋酸100毫升加洋红1克煮沸、冷却、过滤即成),染色2-3小时。     

硫化氢前体L-半胱氨酸对结肠动力的影响及机制

本文旨在研究硫化氢(hydrogen sulfide, H_2S)前体L-半胱氨酸对大鼠结肠动力的影响,以阐明其对结肠收缩的调节作用及机制。采用免疫组织化学染色和免疫印迹实验检测内源性H_2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase, CSE)和胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase, CBS)在大鼠近端结肠的表达情况;采用生理记录仪检测结肠平滑肌收缩活动的变化;利用膜片钳实验检测结肠平滑肌细胞离子通道电流。结果显示,CBS和CSE在大鼠近端结肠黏膜层、平滑肌层及肌间神经丛均有表达;L-半胱氨酸以浓度依赖的方式抑制近端结肠纵行平滑肌收缩,H_2S合成酶抑制剂氨基氧乙酸(aminooxyacetateacid,AOAA)和炔丙基甘氨酸(propargylglycine, PAG)孵育纵行平滑肌后,L-半胱氨酸半最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect, EC50)相比对照组显著下降(P 0.05);而L-半胱氨酸对结肠环形肌收缩具有抑制和促进双重调节作用,AOAA和PAG预处理可阻断其对环形肌的兴奋作用;H_2S外源性供体Na HS在低浓度时促进平滑肌细胞L型钙通道开放(P 0.01),而在高浓度时抑制L型钙通道电流(ICa,L)(P 0.05);与Na HS不同,L-半胱氨酸浓度依赖性抑制ICa,L (P 0.01);Na HS抑制大电导钙激活钾电流(IBKCa),而L-半胱氨酸对IBKCa无明显作用。以上结果提示,L-半胱氨酸对大鼠结肠平滑肌收缩具有潜在双重调节作用,其中抑制作用由L型钙通道介导,而促进作用可能是由内源性生成的H_2S介导。     

一种半永久玻片标本的制备方法

这里介绍一种用蔗糖液制备半永久玻片标本的方法。用这种蔗糖液制备半永久玻片标本研究染色体是很方便的和有实际意义的。这种用蔗糖液制备的半永久玻片标本,可以保存较长时间(一年或更长)。蔗糖液的制备方法取40克蔗糖(化学纯)溶解在60毫升水中,并加热至沸,直至溶液总体积减少了1/4时为止。为避免蔗糖液冷却后出现结晶,要向蔗糖液滴入2—3滴香柏油,细心搅匀,然后再加0.2克苯酚结晶,该糖液可保存一个月以上。花药制片方法 1.从经卡诺固定剂(95％酒精:冰醋酸3:1)固定的保存在70％酒精中的花序上取出一些花药,用醋酸地衣红色液(醋酸洋红、醋酸间