苹果果实细胞质中依赖活体组织的ABA高亲和力特异结合蛋白

将苹果（Malus pumila L.cv.Starkrimon)果肉微粒体和细胞可溶组分在含有^3H-ABA的缓冲介质中分别温育,仅在细胞可溶组分中测到微弱的^3H-ABA结合活性。但是,如何将果肉组织圆片在^3H-ABA缓冲介质中直接温育,经制备亚细胞组分后直接测定,在细胞可溶组分中测到很高的^3H-ABA特异结合活性。果肉圆片用沸水预先热处理使细胞可溶组分中的^3H-ABA结合活性完全丧失,说明ABA结合依赖于组织的活体状态。药理实验证明了ABA结合位点的蛋白质性质,同时证明该蛋白的活性中心具有－SH和丝氨酸基因。ABA结合蛋白对ABA的结合具有可饱和性、可逆性和高亲和力。Scatchard作图证明存在2种ABA结合蛋白,一种具有较高的亲和力,其解离常数（Kd)为2.9mmol/L,另一种亲和力相对较低,其Kd值为71.4nmol/L。用ABA结构相似物进行的竞争实验证明了ABA结合蛋白对配体结合的立体特异性。分析了ABA结合蛋白与ABA结合的时间曲线、pH和温度依赖性。本研究检测到的依赖活体组织的ABA结合蛋白可能是果实发育过程中介导ABA信号的受体。     

不同籼稻品种的矮生性与内源ABA水平及其结合蛋白的关系

试验研究了内源脱落酸及其结合蛋白与含有不同矮秆主基因的籼稻矮生性状的关系。结果表明：籼稻的矮生性也受内源ＡＢＡ及其结合蛋白协同调控。矮秆品种幼苗内源ＡＢＡ及其幼芽膜上ＡＢＡ结合蛋白水平显著高于离秆品种,且含有强矮化效应的ｓｄ－ｇ基因的新桂矮、双矮的内源ＡＢＡ及其结合蛋白水平又明显高于含ｓｄ－１半矮秆基因的广场矮。外源ＡＢＡ能显著抑制籼稻幼苗伸长,苗高下降率与ＡＢＡ结合蛋白水平有一定的关系,且矮秆品     

玉米根ABA结合蛋白的亚细胞定位及动力学性质

以玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓＬ．）根或胚芽鞘为材料,经匀浆、分级离心得到胞质部分和膜部分（微粒体）,进一步用６．２％ （Ｗ／Ｗ ） Ｄｅｘｔｒａｎ Ｔ５００ 和ＰＥＧ ３３５０ 两相系统制备质膜,用１％ 和８％ （Ｗ ／Ｗ） Ｄｅｘｔｒａｎ Ｔ７０ 梯度离心制备液泡膜． 电镜鉴定及多种标志酶检测表明,制备获得了高纯度正向型质膜和富含液泡膜的组分,其它内膜的污染很少． 用微量放射配体结合（ＭＲＬＢ）实验证明,玉米根微粒体的ＡＢＡ专一性结合位点主要分布在液泡膜和质膜上,这两种膜组分与ＡＢＡ 的特异结合活性分别为２４８５．４ ｆｍ ｏｌ／ｍ ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ 和１２５７．３ ｆｍ ｏｌ／ｍ ｇ ｐｒｏ－ｔｅｉｎ,玉米根段胞质部分结合活性最低（差一个数量级）．质膜上ＡＢＡ－ＢＰ与ＡＢＡ 的结合平衡解离常数（ＫＤ）为１．５７ ｎｍ ｏｌ／Ｌ．     

玉米根微粒体ABA结合蛋白的性质及逆境胁迫的影响

以玉米根微粒体为材料进行的微量放射配体结合（ＭＲＬＢ）实验表明玉米根微粒体膜上存在着ＡＢＡ结合位点,ＡＢＡ与ＡＢＡ结合蛋白（ＡＢＡ－ＢＰ）结合的最适ｐＨ为６．５,结合反应对温度（０℃和２５℃）不太敏感,ＡＢＡ与ＡＢＡ－ＢＰ的结合反应是一个动态平衡过程,５ｍｉｎ即可达最大结合（Ｂｍａｘ）的５０％,３０ｍｉｎ达到最大结合,１ｈ内基本保持不变。胰蛋白酶处理表明此结合位点为蛋白质,冻融实验则表明此蛋白与Ａ     

葡萄果实中脱落酸结合蛋白的存在及其性质

葡萄果实微粒体上存在高亲和力的脱落酸（ＡＢＡ）结合位点,这些位点与ＡＢＡ的结合具有饱和性,高亲和力及低容量。胰蛋白酶或ＤＴＴ处理可以使该位点的特异结合活性下降约９０％,表明此结合位点是一种蛋白质,故称为ＡＢＡ结合蛋白,它含有维系蛋白质特定构象的二硫键。该蛋白与ＡＢＡ反应的最适ｐＨ为６．０,说明与配基结合部位可能存在带有正电荷的氨基酸残基,结合活性在２５℃高于０℃,结合反应达到动态平衡需要３０ｍｉｎ     

载体蛋白对多糖蛋白结合疫苗中多糖免疫应答的影响研究

多糖蛋白结合疫苗的研发及成功上市是预防细菌性传染病(bacterial infectious diseases)的突破,目前已批准上市的多糖蛋白结合疫苗主要有b型流感嗜血杆菌结合疫苗、肺炎球菌结合疫苗和脑膜炎球菌结合疫苗.载体蛋白的选择是多糖蛋白结合疫苗的免疫原性增强的关键因素,目前获批上市的疫苗主要使用的载体蛋白有破...     

葡萄果实中脱落酸结合蛋白的存在及其性质

葡萄果实微粒体上存在高亲和力的脱落酸（ＡＢＡ）结合位点,这些位点与ＡＢＡ的结合具有饱和性,高亲和力及低容量,胰蛋白酶或ＤＴＴ处理可以使该位点的特异结合活性下降约９０％,表明此结合位点是一种蛋白质,故称为ＡＢＡ结合蛋白,它含有维系蛋白质特定构象的二硫键,该蛋白与ＡＢＡ反应的最适ｐＨ为６．０,说明与配基结合部位可能存在带有正电荷的氨基酸残基,结合活性在２５℃高于０℃,结合反应达到动态平衡需要３０ｍｉｎ,３０ｍｉｎ以后结合活性随时间延长而下降。该蛋白与ＡＢＡ结合反应的平衡解离常数为１７．５ｎｍｏｌ／Ｌ,最大结合容量（Ｂｍａｘ）为９８．４ｆｍｏｌ／ｍｇｐｒｏｔｅｉｎ。     

BSA载体蛋白抗体的去除

为了去除抗血清中BSA载体蛋白产生的抗体,一根对BSA载体蛋白抗体高度特异性的亲和柱被构建。结果表明：所构建的亲和柱对BSA载体蛋白抗体具高度特异性和亲和力,能有效地去除BSA载体蛋白产生的抗体。     

干旱和ABA对同核异质冬小麦叶片蛋白的影响

利用双向凝胶电泳研究了冬小麦核质杂种NC4、NC37和它们的核供体丰抗13的3个品种幼苗在水分胁迫和外施ABA条件下叶片中蛋白质代谢的变化。结果表明水分胁迫可抑制3种小麦叶片中一些蛋白质合成,使蛋白数量减少,而在NC4、NC37两个核质杂种中有1个PI5.8、20kD的新合成蛋白点出现,根部外伤ABA也可诱导该蛋白合成,核供体丰抗13幼苗中,ABA可诱导合成该蛋白,而水分胁迫时该蛋白没有出现,表明该蛋白由核基因编码,而其表达可能由细胞质中与ABA有关的某种机制调控。     

拟南芥ABA不敏感型突变体及其ABA结合特性

拟南芥的脱落醚（ABA）不敏感型突变体abi2,在对ABA的敏感性、气孔开度及种子休眠方面,与野生型有明显差异。通过3H－ABA与野生型对的亚细胞组分的结合分析,表明38000×g组分特异结合活性最高,结合最适温度为20℃,最适保温时间：20℃时为70min;0℃时为90min。由饱和曲线的Scatchard分析表明：abi2存在一种ABA结合位点,野生型有两种ABA结合位点。对3H－ABA结合的38000×g组分的SDS－PAGE电泳分析表明：野生型有3个结合活性峰,而abi2只有1个结合活性峰。     

光亲和标记鉴定玉米根脱落酸结合蛋白

光亲和标记鉴定玉米根脱落酸结合蛋白吴忠义,陈珈,朱美君（北京农业大学生物学院,１０００９４）关键词结合蛋白;光亲和标记;ＡＢＡ;受体;微粒体脱落酸（ＡＢＡ）作为一大类植物激素,在高等植物的生长发育以及对逆境的适应过程中发挥着重要作用。在探讨激素作用的...     

蚕豆叶片下表皮ABA结合蛋白的分离纯化

将ＡＢＡ通过一个１０ 碳原子的臂高效率地（６～８ ｍｍｏｌ／Ｌ凝胶）偶联到琼脂糖凝胶４Ｂ上,制成亲和层析柱,用以纯化蚕豆（Ｖｉｃｉａｆａｂａ Ｌ．） 叶片下表皮ＡＢＡ 结合蛋白（ＡＢＡ＿ＢＰ）。样品上柱后,通过ＮａＣｌ 盐梯度洗脱去掉大部分非特异结合的杂蛋白后,用１ ｍｍｏｌ／ＬＡＢＡ亲和洗脱竞争亲和柱中的ＡＢＡ＿ＢＰ,纯化到一种ＡＢＡ特异结合蛋白,纯化了１１２ 倍。纯化蛋白与ＡＢＡ 最大结合为５８．３３ ｎｍｏｌ／ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ,Ｋｄ 值为２１ ｎｍｏｌ／Ｌ,亚基分子量为４４ ．２ ｋＤ,纯度约为９０ ％ 。纯化的ＡＢＡ结合蛋白具有典型的蛋白质紫外吸收光谱,在２８０ ｎｍ 处有明显吸收峰     

胞红蛋白酵母双杂交载体的构建与表达

胞红蛋白（CGB）是一种新发现的分布于胞浆与胞核的携氧珠蛋白。为探讨CGB在体内的相互作用蛋白,从而促进对其分子调控网络的认识,根据CGB基因的开放阅读框架设计并合成PCR引物,从人胎肝cDNA文库中扩增得到该基因编码区.测序分析正确后将其定向克隆到酵母表达载体pGBKT7中,构建获得CGB的酵母表达载体pGBKT7-CGB,并在酵母菌AH109中表达。提取酵母总蛋白并利用标签蛋白（myc）的抗体进行免疫印迹检测。结果表明所构建的CGB酵母表达载体能够在酵母中高效表达,可用于后续的酵母双杂交文库的筛选工作。     

骨形成蛋白-2表达载体的构建及其转录活性测定

将骨形成蛋白-2(BMP-2)基因克隆入带HA标签的BMP-2表达载体中,得到带HA标签的重组质粒pGBKT7/HA-BMP-2,将该重组质粒转染酵母AH109、Y187细胞,Western印迹检测表明表达了与预期相对分子质量大小一致的BMP-2.BMP-2表达载体的成功构建为深入研究骨形成蛋白-2在促进骨痂生成过程中的分子机制及其生物学功能打下了基础.     

大肠杆菌外源蛋白表达载体稳定性的研究进展

构建高产、稳定、可靠的质粒载体成为基因重组表达技术的研究重点之一。宿主细胞代谢反应和质粒不稳定性相关信息的缺乏,仍然阻碍着质粒载体的优化,成为限制外源蛋白在大肠杆菌中高效表达的瓶颈之一。主要论述了大肠杆菌外源蛋白表达载体的稳定性,分别从质粒和外源基因的本身特性、重组质粒转化对宿主细胞造成的影响及其他因素等方面阐述了对质粒载体稳定性的影响,同时介绍了相关的解决办法,从而为大肠杆菌表达系统高效表达外源蛋白提供参考。     

DNA与蛋白质结合的荧光测定

构建了插入λ阻抑蛋白（Ｒｅｐ）的操纵基因（ＯＲ）和Ｂｇｌ Ⅱ识别位点的ＰＢＲ３２２重组质粒。阻抑蛋白与该质粒的相互作用可用Ｂｇｌ Ⅱ对它的水解作用引起的ＥＢ荧光变化来研究。在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达的Ｒｅｐ表现了与该重组质粒结合的活国和。核苷酸序列具精确二重对称性的ＯＲ（ＯＲｃｏｎｓ）对Ｒｅｐ的亲和力比天然的ＯＲ１小。     

肽基载体蛋白结构功能的研究进展

肽基载体蛋白(peptidyl carrier protein,PCP)是非核糖体肽合成酶(non-ribosomal peptide synthetase,NRPS)的核心结构域。根据NRPS的装配机制,每个模块都至少包含一个PCP,PCP对于非核糖体肽合成中氨基酸残基及多肽在不同催化结构域中的传递起着重要作用,并为氨基酸残基和多肽向模块内其他修饰酶的转移提供一个平台。本文主要对PCP的结构功能、与其他催化结构域的相互作用及重组模块活性降低的问题等方面进行了综述,期望为重组NRPS模块的构建提供理论依据。