HPLC-ELSD法测定不同炮制方法雪莲果中低聚果糖的含量

本文建立了雪莲果低聚果糖的HPLC-ELSD测定方法,分析不同炮制方法雪莲果中低聚果糖的含量。用不同方法处理新鲜雪莲果,然后超声提取雪莲果粉末中低聚果糖,采用HPLC-ELSD测定,色谱柱:华谱XAmide(4.6×250 mm,5μm),流动相:乙腈∶水=75∶25,流速:1 m L/min,柱温:30℃,检测器:ELSD,漂移管温度70℃。方法学考察结果表明,蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖在0.406~2.030 mg/m L、0.420~2.100 mg/m L、0.456~2.280 mg/m L范围内呈良好线性关系,平均回收率分别为101.4%、99.7%、98.6%,RSD分别为1.53%、1.29%、2.81%。该方法稳定、可靠、精密度高、重复性好,不同处理方法所得雪莲果粉末中3种低聚果糖的含量差别较大,其中用清水漂洗0.5 h,然后冷冻干燥所得雪莲果粉末中的低聚果糖含量最高。     

蔗果三糖及低聚果糖对T细胞分泌干扰素γ的调节作用CSCD

目的研究蔗果三糖及低聚果糖(fructooligosaccharides,FOS)对T细胞分泌干扰素(interferon-,IFN-γ^(+))的调节作用。方法从外周血单个核细胞分离培养T细胞。在培养基中添加5mg/mL的蔗果三糖或FOS并检测T细胞的诱导分化。平行设置空白对照。经过3d的原代培养或6d的原代及传代培养,采用流式细胞术检测IFN-γ^(+)T细胞的比例,酶联免疫吸附法测定细胞培养液的IFN-γ^(+)浓度。结果经过3d的原代培养,蔗果三糖组IFN-γ^(+)T细胞比例(47.8100%±4.8800%)显著高于FOS组(36.9600%±4.5800%,P=0.0002)或空白对照组(31.4000%±3.8900%,P=0.0001),蔗果三糖组细胞培养液的IFN-γ^(+)浓度(848.5100 ng/mL±269.0000ng/mL)也显著高于FOS组(357.8700ng/mL±87.3000ng/mL,P=0.0040)或空白对照组(283.5100ng/mL±76.0300ng/mL,P=0.0001);而且,经过6d的原代及传代培养,无论传代之后是否添加蔗果三糖与FOS,蔗果三糖组IFN-γ^(+)T细胞比例(32.0600%±5.2600%;31.7900%±4.8600%)始终显著高于FOS组(22.1300%±4.5400%,P=0.0078;21.8900%±4.4800%,P=0.0086)或空白对照组(18.6500%±2.6900%,P=0.0071;17.8300%±3.1300%,P=0.0074)。结论蔗果三糖有助于T细胞分化并促进T细胞分泌IFN-γ^(+)。     

牛蒡低聚果糖生理活性的研究进展

牛蒡低聚果糖是由本实验室从菊科植物牛蒡中提取并鉴定的低聚果糖.研究表明,牛蒡低聚果糖具有广泛的生理活性.可提高动物的免疫活性,提高若干免疫因子的含量,促进动物生长效应,抗疲劳效果明显.此外,BFO处理可以诱导植物产生系统性抗性,增强植物的抗病性,可用于植物病害防治或果蔬保鲜.     

低聚果糖的生物学效应及其安全性研究进展

作为一种应用最早和最为广泛的功能性低聚糖,低聚果糖具有调节肠道菌群、提高机体免疫功能、降低血脂和促进某些营养物质吸收的功能,且对人体无任何生理毒性.通过对其生物学效应与安全性等方面近年来的最新研究进展进行综述,以期推动低聚果糖的进一步深入研究开发和在食品上的广泛应用.     

内切酶法制取菊苣低聚果糖工艺条件的研究

目的:利用毕赤嗜甲醇酵母表达的重组黑曲霉菊粉内切酶,从菊苣菊粉中制取低聚果糖。方法:用重组黑曲霉菊粉内切酶酶解水提菊粉,用薄层色谱、离子色谱分析酶解产物,研究酶解条件,分析产物组成。结果与结论:菊粉浓度为20～160g/L、酶浓度为12U/g菊粉时,低聚果糖的最大产率逐渐升高然后下降;在接近最大溶解度200g/L时,菊粉寡糖最大产率为62.0%,最大产率与酶的用量无关,但提高酶的浓度可以缩短达到最大产率的时间。pH5.5、50℃、菊粉浓度为40g/L、酶用量为12U/g菊粉时,可达到最大产率64.6%;酶解的产物主要为GF2到GF10的菊粉寡糖。     

不同产地玛咖中酰胺含量分析北大核心CSCD

建立玛咖酰胺测定方法,测定不同产地玛咖切片中玛咖酰胺含量。采用HPLC法,色谱条件为Sepax Sapphire C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）流动相：乙腈（A）-0.05%磷酸水溶液（B）,梯度洗脱：0-15 min,90%-95%A;15-50 min,95%A。检测波长208 nm,体积流量1.0 m L/min,柱温30℃。酰胺1、酰胺2、酰胺3分别在0.88-132μg/m L、0.85-128μg/m L、0.96-144μg/m L线性关系良好。酰胺1、酰胺2平均回收率分别为99.21%（RSD=1.64%）、98.59%（RSD=1.75%）。不同产地玛咖中玛咖酰胺含量差别较大,建立可靠、准确、重复性好的检测方法,有利于评价不同产地玛咖的质量。     

双歧杆菌发酵果蔬汁中低聚果糖的高效液相色谱法分析

目的采用高效液相色谱法（HPLC）对双歧杆菌发酵果蔬汁中的低聚果糖进行分析。方法 HPLC分析条件为：ZORBAX NH2 Analytical色谱柱,乙腈∶水（75∶25）为流动相,柱温35℃,流速为1.0ml/min,示差折光检测器（RID）。结果果蔬汁中的低聚果糖及几种主要糖类均得到有效分离。此分离方法的加标回收率和精密度（RSD）均较高。结论分析结果表明双歧杆菌发酵果蔬汁中含有较丰富的功能性低聚果糖,尤其是蔗果三糖含量很高。     

低聚果糖对溃疡性结肠炎模型小鼠肠黏膜屏障影响的研究

目的 探讨低聚果糖对溃疡性结肠炎（UC）模型小鼠肠黏膜屏障的调节作用及可能机制。方法 小鼠随机分成3组：正常对照（NC）组、模型（MD）组和低聚果糖（FOS）组,采用葡聚糖硫酸钠制作UC小鼠模型。造模7 d同时给予干预治疗,停用造模药物并后续治疗7 d。采用细菌定量测定法检测肠道菌群,放射免疫法检测肠黏膜sIgA,ELISA法检测小鼠肠黏膜IL-10、TNF-α和IL-6水平。结果 模型组小鼠存在肠道菌群失调（t=2.088,2.036,2.203,2.109,P<0.05）,其TNF-α、IL-6水平高于正常对照组（t=1.734,1.801,P<0.05）,肠黏膜sIgA、IL-10低于正常对照组（t=1.820,1.806,P<0.05）;低聚果糖组肠道菌群失调状况较模型组有所改善,其TNF-α、IL-6水平低于正常对照组（t=1.980,1.816,1.936,1.920,1.969,1.893,P<0.05）,肠黏膜sIgA、IL-10高于正常对照组（t=1.801,1.796,P<0.05）。结论 低聚果糖可改善溃疡性结肠炎模型小鼠肠道菌群屏障功能,可以提高肠黏膜sIgA和抗炎细胞因子IL-10的水平并降低致炎细胞因子TNF-α和IL-6的水平,通过调节肠道过度的免疫反应,使免疫屏障功能得到一定恢复。     

牛蒡低聚果糖对小鼠抗疲劳作用的研究

为研究牛蒡低聚果糖(BFOS)对小鼠的抗疲劳作用,将牛蒡低聚果糖用三个不同剂量组100、200、400mg.kg-1.d-1给小鼠灌胃,对照组为生理盐水,连续灌胃42 d,末次饲喂30 min后进行游泳实验,耐缺氧实验,测定运动耐力、血乳酸(LAC)、血尿素氮(BUN)等指标。测试结果表明三个剂量的牛蒡低聚果糖均能显著提高运动耐力和耐缺氧时间;降低运动后LAC和BUN的含量;提高肌、肝糖元含量。说明牛蒡低聚果糖具有良好的抗疲劳作用,200 mg.kg-1.d-1为最佳用量,高剂量无明显优势。     

双歧杆菌低聚果糖制剂对便秘人群肠道菌群的调整作用

目的调查便秘与非便秘人群肠道菌群状况,考察便秘人群服用双歧杆菌低聚果糖合生元后肠道菌群改善的情况。方法采集40岁以上便秘与非便秘人群粪便,各选取10例作厌氧和需氧菌培养、计数与鉴定。结果分离培养出葡萄球菌、肠杆菌、酵母菌、双歧杆菌和乳酸杆菌。比较不同组人群5种肠道菌群的差异,结果显示便秘人群中出现肠道菌群失调,便秘组双歧杆菌、乳杆菌含量明显降低,服用双歧杆菌低聚果糖合生元后肠道菌群状况恢复到正常人群水平。结论服用双歧杆菌低聚果糖合生元可以改善便秘人群肠道菌群失调状况,对便秘人群具有一定治疗作用。     

马克斯克鲁维酵母菌菊粉酶的异源表达及低聚果糖制备工艺优化

【目的】低聚果糖是新型的食品和保健品原料,具有广阔的市场需求。以菊粉酶水解菊粉制备低聚果糖的酶法工艺是先进的绿色制造。本研究旨在获得高产的菊粉酶菌株及以菊粉为原料酶法制备低聚果糖的优化工艺。【方法】采用基因工程手段克隆马克斯克鲁维酵母菌(Kluyveromyces marxianus)的菊粉酶基因,实现其在毕赤酵母中的高效表达;测定菊粉酶在不同p H、温度、金属离子和底物浓度等条件下的酶活变化趋势,获得最佳的反应参数;通过高效液相色谱法检测水解产物,获得不同酶量水解产物各组分分布。【结果】菊粉酶工程菌株在10 L发酵罐中的产菊粉酶活达1 570 U/m L、蛋白质含量为2.75 g/L发酵液;菊粉酶最适反应参数为:在体积为1 L的反应体系中,p H 5.0、反应温度50°C、含0.2 mmol/L Mg2+以及菊粉浓度为8%。在该条件下,酶量为10 U时菊粉被完全水解。水解产物中单糖和二糖含量仅为9.25%,而低聚果糖(C3-C8)含量为90.75%,且C3-C5低聚果糖含量高达72.92%。【结论】克隆了K.marxianus菊粉酶基因并实现了高效表达,获得了水解菊粉制备低聚果糖的最佳工艺条件。为菊粉酶的大量生产及低聚果糖的酶法制备奠定了良好的基础。     

麻黄不同炮制工艺对含量影响

目的:探究麻黄不同炮制方法对麻黄有毒成分含量的影响。方法:分别采用蒸制、清炒、酒炙和醋炙这四种炮制方法对麻黄进行炮制,并测定其不同炮制品的有毒成分生物碱的含量,比较该四种炮制方法对其有毒成为生物碱含量影响。结果:麻黄的各炮制品的生物碱的含量从高到低:清炒醋炙酒制蒸制。结论:蒸制炮制工艺在降低药物的毒性效果优于清炒炮制法、酒炙炮制法及醋炙炮制法,可以作为麻黄的优选炮制方式。     

不同产地川乌炮制前后差异性成分研究北大核心CSCD

为建立川乌及制川乌的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并结合化学计量学方法和主成分含量测定和比较3个不同产地川乌炮制前后的差异成分。该文采用HPLC法,利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)计算相似度,并结合聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)及主成分含量测定结果进行综合分析。结果表明:(1)建立了3个产地15批川乌炮制前后的HPLC指纹图谱,分别标定了25个和14个共有峰,并通过对照品指认出6个共有峰,分别为苯甲酰新乌头原碱(峰16)、苯甲酰乌头原碱(峰17)、苯甲酰次乌头原碱(峰18)、新乌头碱(峰21)、次乌头碱(峰22)、乌头碱(峰23)。(2)化学计量学方法分析显示,川乌炮制前后的30批样品被明显分为2类,15批川乌被分为3类,15批制川乌被分为3类,新乌头碱、次乌头碱等6个成分可能是不同产地川乌炮制前后的潜在差异成分。(3)炮制前后主成分含量测定结果均有不同程度的变化,四川江油所产川乌炮制前后部分成分含量明显高于另外两个产地所产川乌。该研究建立的指纹图谱精密度、重复性、稳定性均较好,结合化学计量学分析方法和主成分含量测定分析,可为不同产地川乌炮制前后质量控制提供参考。     

低聚果糖对慢性应激小鼠抑郁样行为及肠道菌群的影响

目的 探讨低聚果糖（FOS）对慢性应激小鼠的抑郁样行为及肠道菌群的影响。方法 选取8周龄健康雄性ICR小鼠随机分成3组,C组小鼠每天给予正常护理,S组和SF组小鼠每天随机给予1～2种应激源,持续8周,SF组小鼠在应激造模的同时经食物补充FOS。在造模4周和8周后,分别通过强迫游泳、蔗糖偏好试验评估各组小鼠抑郁样行为。造模结束后通过Western blot试验检测小鼠大脑皮层内糖皮质激素受体（GR）的表达,并收集结肠内容物进行16S rDNA扩增子测序分析。结果 应激造模8周后,C、S和SF三组小鼠的肠道菌群组成存在明显差异;与C组相比,S组小鼠强迫游泳的不动时间显著增加（t=3.970,P=0.0009）,蔗糖偏好率显著降低（t=3.890,P=0.0011）,脑内GR的表达显著降低（t=4.311,P=0.0125）;与S组相比,SF组小鼠强迫游泳的不动时间显著缩短（t=3.495,P=0.0026）,蔗糖偏好率和脑内GR表达有增加趋势。结论 益生元FOS可调节肠道菌群,改善慢性应激诱发的精神情绪异常。     

HPLC-ELSD法测定消栓通颗粒中黄芪甲苷的含量

目的:建立测定消栓通颗粒中黄芪甲苷含量的新方法.方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定,色谱柱为kromasilC18柱,以乙腈-水(32:68)为流动相,流速为1.0ml/min,ELSD条件为飘逸管温度为105℃,载气流速为2.5L/min;测定消栓通颗粒中黄芪甲苷的含量.结果:黄芪甲苷在1.08μg-6.48μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为100.2%,RSD为0.93%.结论:方法灵敏、可靠、准确、重复性好,可作为消栓通颗粒的质量控制方法.     

低聚果糖对AOM/DSS诱导的结肠炎相关结直肠癌小鼠辅助性T细胞的调控作用

探讨益生元低聚果糖（FOS）对结肠炎相关结直肠癌（CAC）小鼠肠道辅助性T细胞的调节作用。

将6周龄SPF级雄性C57BL6小鼠（体重18～20 g）随机分为对照组、模型组和干预组,每组10只。通过偶氮甲烷、葡聚糖硫酸钠构建CAC小鼠模型,干预组每日使用2 mg/kg b.w. FOS灌胃,持续10周。造模期间监测各组小鼠体重变化,造模结束后测量结肠长度和肿瘤数目。采用微球免疫分析法检测血清Th1/Th2/Th17相关细胞因子水平,流式细胞术分析肠系膜淋巴结内Th1、Th2、Th17细胞亚群比例。

与模型组相比,干预组小鼠结肠长度显著增加（t=3.106,P=0.006 4）,肿瘤数目显著减少（U=15.000,P=0.011 1）,血清中IL-17A（t=3.504,P=0.008 8）、TNF-α（t=2.381,P=0.030 0）等促炎细胞因子水平降低,肠系膜淋巴结Th17细胞比例显著降低（t=6.031,P=0.002 7）,Th1/Th2显著升高（t=2.419,P=0.038 7）。

FOS可调控CAC模型小鼠结肠内辅助性T细胞的分化,抑制肿瘤的发生。

     

低聚果糖联合锌制剂对小儿迁延性腹泻的治疗效果及对其肠道菌群结构的影响

目的观察低聚果糖联合锌制剂对小儿迁延性腹泻的治疗效果,并探讨其对肠道菌群结构的影响。方法回顾102例小儿迁延性腹泻的临床资料,均接受常规治疗,其中有48例接受锌制剂治疗,标记为A组;余54例接受低聚果糖联合锌制剂治疗,标记为B组。比较排便次数、大便性状、饮食/母乳喂养恢复正常的时间,治疗效果,治疗前后肠道菌群结构及药物安全性。结果 B组排便次数恢复正常、大便性状恢复正常、饮食/母乳喂养恢复正常时间均短于A组(均P0.05);两组疗效等级差异具有统计学意义(P0.05),B组总有效率明显高于A组(P0.01);治疗后两组肠道微生态Chao1指数、Shannon指数均较治疗前升高(均P0.05),治疗后B组肠道微生态Chao1指数、Shannon指数均高于A组(均P0.05);2组治疗后双歧杆菌属、乳杆菌属、肠杆菌属水平相对丰度均增加,且B组均高于A组,2组治疗后梭菌属、漫游球菌属、乳球菌属、链球菌属、拟杆菌属、希瓦菌属、冷杆菌属、葡萄球菌属水平相对丰度均下降,且B组均低于A组,差异均有统计学意义(均P0.05);两组不良反应发生率接近(P0.05)。结论对小儿迁延性腹泻予以低聚果糖联合锌制剂可促进症状消失,增强疗效,还可调节肠道菌群结构,安全可靠。     

UPLC-MS法测定羊耳菊中6种成分的含量北大核心CSCD

建立了UPLC-MS/MS同时测定羊耳菊药材中东莨菪苷、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸6个成分含量的方法。采用Waters BEH C18（2.1 mm×100 mm,1.7μm）色谱柱,用0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液作流动相,梯度洗脱,电喷雾电离源（ESI）,以多反应离子监测（MRM）检测。6种成分分别在0.058~42.000、0.178~129.630、0.087~63.400、0.288~69.930、0.172~125.500、0.184~134.130μg/m L浓度范围线性良好,平均回收率为97.84%~105.67%（RSD〈1%）。稳定性,重复性及精密度良好,本方法能简便、快捷、有效的测定羊耳菊药材中多种成分含量,为羊耳菊药材的全面质量控制提供了新的方法。     

不同叶色紫苏花青素含量与成分研究北大核心CSCD

选取不同叶色紫苏资源,统一田间栽培管理,待紫苏成熟期收获紫苏叶,并对紫苏叶中花青素含量进行分析。紫苏花青素传统的提取方法中含有大量的副产物如糖、有机酸和蛋白质等副产物,这些杂质可能加速花青素的降解。本研究比较不同提取介质的提取能力及选择性,其中乙醇-酸化水(50%,v/v)提取花青素的含量最高(4.7%)。采用不同的吸附剂进行吸附纯化,实验表明XAD-7HP吸附树脂表现出较好的吸附能力和解吸能力,利用LCMS对花青素苷成分进行分析,花青素苷中丙二酸单酰基紫苏宁含量最高。     

HPLC法测定紫苏不同来源不同部位中迷迭香酸的含量

采用 HP LC 法测定14种不同来源紫苏不同部位的迷迭香酸的含量,并进行统计与聚类分析.结果表明：14种来源紫苏间叶、果穗、茎及根中迷迭香酸含量均有显著差异(P ＜0．05),同一来源不同部位间迷迭香酸含量也存在显著差异(P ＜0．05).各种来源紫苏叶中的迷迭香酸含量均最高;大部分来源紫苏果穗中迷迭香酸的含量较紫苏茎高.14份材料经聚类分析可分成4个类群.研究结果表明紫苏果穗可能是潜在的新药源,来源于长江中下游紫苏不同部位的迷迭香酸含量要比西南地区的高.