三色荧光原位杂交技术（Triple—FISH）检测男性不育患者精子染色体的非整倍体性

目的：研究精子非整倍体染色体与男性不育之间的关系。方法：用荧光原位杂交（FISH）技术,对12个不育患精子的染色体进行了研究,其中,10例少,弱,畸精症患为A组,2例正常或接近正常的样品为B组,另有2例正常健康献精为对照组,原位杂交采用染色体XY和18号探针,每个个体记数1000个精子,结果：杂交总有效率为98％,在B组男性不育XY和18号的二体频率为0．30％和0．30％,与对照组相比（0．15％,0％）无显差别,XY和18号失体的精子为0．15％和0％,与对照组（0％,0．15％）也无显差别,而A组的XY和18号染色体二体率为1．13％和0．96％,失体为1．13％和1．6％,与前两组相比,差异有显性,估算总的非整倍体率：A组为42．44％,B组为6．05％,对照组为2．59％,前与后两组相比,差异有显性,结论：不育患精子的染色体具有显的非整倍体性。     

用三色荧光原位杂交(Three-Color FISH)检测小鼠精子中染色体数目异常的研究

用小鼠X、Y和8号染色体特异的DNA探针,与经DTT（dithiotreitol）和LIS（lithium-3,5-diiodosalicylicacid）解聚的小鼠附单精子进行三色荧光原位杂交（fluoresceoceinsituhybridization,FISH）,以检测精子中的染色体数目异常,并与MMⅡ染色体分析比较．结果表明精子三色FISH具有以下优点和特点：（1）方法敏感稳定,且简便快速;（2）在每一个体至少分析10000尾精子的基础上计算非整倍体单,因此结果更为准确;（3）能检测多倍体即减数分裂停止的发生率及停止的时期;（4）不仅能测定发生于试数分裂Ⅰ（MI）的染色体分离异常,还能检测发生于减数分裂Ⅱ（MII）的不分离和丢失．并对探针的选用、分析标准的建立以及三色FISH用于精于染色体分析的必要性等进行了讨论．     

多色荧光原位杂交检测小鼠精子非整倍体

比多色荧光原位杂交技术评价了２－（４－噻唑）苯丙咪唑（ＴＢ）在雄性小鼠生殖形成过程中的非整倍体诱发效应。根据小鼠精子发育周期,以口饲法处理动物１１天,间隔２２天后取小鼠精子涂片,聚合应用８号,Ｘ及Ｙ染色体特异性ＤＮＡ探针进行多色ＦＩＳＨ,检测精子中出现的二倍体、双体、和缺本频率。结果发现：在２００ｍｇ／ｋｇ剂量组,上述３类异常精子频率均显著高于溶剂对照,其他２个剂量组的非整倍体精子频率与对照无显著     

用三色荧光原位杂交（Three—Color FISH）检测小鼠精子中染色体数目 …

用小鼠Ｘ,Ｙ和８号染色体特异的ＤＮＡ探针,与经ＤＴＴ（ｄｉｔｈｉｏｔ６ｒｅｉｔｏ）和ＬＩＳ（ｌｉｔｈｉｕｍ－３,５－ｄｉｉｏｄｏｓａｌｉｃｙｌｉｅ ａｃｉｄ）解 小鼠附睾精子进行三色荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ）以检测精子中的染色体数目异常,并与ＭＭⅡ染色体分析比较。     

染色体荧光原位杂交技术检测平衡易位的临床应用

染色体荧光原位杂交技术检测平衡易位的临床应用崔英霞商学军王咏梅（南京军区南京总医院全军医学检验中心,南京２１０００２）潘淑娟张锡然（南京师范大学生物系,南京２１００９７）ＣｌｉｎｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕＨ...     

棉花细菌人工染色体的荧光原位杂交(BAC-FISH)技术

细菌人工染色体荧光原位杂交(BAC-FISH)技术是植物染色体识别、物理作图等分子细胞遗传学研究的重要工具,但对于某些物种尤其是多倍体植物,由于大量重复序列的存在等问题,使得该技术应用受到很大的限制.通过选择棉花分子遗传图中高重组区的微卫星位点(simple sequence repeats,SSR)标记的策略,筛选到不含或含有少量重复序列的细菌人工染色体(BAC)克隆,同时,在通用FISH技术程序基础上,通过改进发根、变性、洗脱条件等步骤,构建出适合于棉花的BAC-FISH技术,简化了操作流程的同时,获得稳定的杂交结果及较高的检出率;并通过将一随机获得的BAC进行染色体的物理定位,进一步引入双探针、双色及重复杂交技术,显示了该技术的成熟与良好的应用前景和价值.     

应用荧光原位杂交(FISH)技术研究黑叶猴染色体易位

本文应用染色体荧光原位杂交(FISH)技术,利用人9号和14号染色体特异探针,对深低温冻存和长期传代的黑叶猴细胞株染色体畸变进行了分析.确定在长期冻存和传代过程中,一些黑叶猴细胞在No.12和No.17染色体之间发生了易位,一条 No.17染色体发生断裂,断裂点在17q13,断裂片段17q13-17qter易位到一条 No.12染色体长臂末端,形成一条小的中着丝粒的和一条具较长长臂的衍生染色体即 der(17) 和 der(12).结果表明,荧光原位杂交技术用人染色体特异探针不仅能检测出人类染色体畸变,也能有效地检测灵长类动物染色体畸变.     

应用荧光原位杂交(FISH)技术研究 黑叶猴染色体易位

本文应用染色体荧光原位杂交(FISH)技术,利用人9号和14号染色体特异探针,对深低温冻存和长期传代的黑叶猴细胞株染色体畸变进行了分析。确定在长期冻存和传代过程中,一些黑叶猴细胞在No.12和No.17染色体之间发生了易位,一条 No.17染色体发生断裂,断裂点在17q13,断裂片段17q13-17qter易位到一条 No.12染色体长臂末端,形成一条小的中着丝粒的和一条具较长长臂的衍生染色体即 der(17) 和 der(12)。结果表明,荧光原位杂交技术用人染色体特异探针不仅能检测出人类染色体畸变,也能有效地检测灵长类动物染色体畸变。 Abstract　In this paper,the chromosome aberration of long-term cryopreserved and subcultured Francois' monkey (Semnopithecus francoisi) cell line(KCB 92008) was analyzed by fluoresence in situ hybridizaton (FISH) using human 9 and 14 chromosome DNA probes. After compared the hybridization pattern with the G-banding pattern on the same metaphase,a translocation between Nos.12 and 17 chromosomes was identified. In some Francois'monkey cells,one of chromosome No.17 was broken into two at the breakpoint 17q13,the segment(17q13-17qter) without centromere transfered to the long arm terminal of one chromosome No.12. Thus,two derivant chromosomes der(12) and der(17) were formed,the long arm of der(12) was longer than the normal partner,while the long arm of der(17) was shorter than the normal one. The result indicated that the technique of FISH using human whole chromosome probes was not only a powerful tool to detect human chromosome rearrangements,but also a usefulmethod to study the primate chromosome aberration.     

引物原位标记技术快速检测人类染色体非整倍性

染色体数目异常是人类染色体疾病的重要类型, 经常导致胚胎丢失、胎儿流产、婴儿死亡、先天畸形和神经发育异常等出生缺陷。文章应用引物原位标记(Primed in situ labeling, PRINS)技术快速检测人类染色体非整倍性, 率先采用更新的非ddNTP阻断的多色PRINS技术, 对人类外周血淋巴细胞和精子等多种样本进行标记; 然后对不同靶标序列的标记效率及不同荧光色素的发光特点通过实验进行评估, 获得关于PRINS技术的多项反应原理参数, 并筛选标记顺序以获得均一稳定的标记效果, 最后进行临床FISH探针与PRINS的标记比较实验。通过实验比较PRINS技术与传统FISH技术之间的标记特点与差别, 评估PRINS的实际应用效果。在2.5 h内标记了同一精子核内的多条染色体, 单色以上标记达到99％。同时在人类外周血淋巴细胞中也得到较好的标记效果。与FISH技术相比, PRINS的这些优点使得它成为诊断染色体非整倍性变异的首选技术。     

X三体性患者的染色体观察

1959年Jacobs等人^[2]最早发现性染色体的 核型有3个X的患者,以后陆续有所报道。据 估计,人群中发生率约为女性的0.8%^[1],迄今 国内报道甚少。1981年我们发现一例,并对该 例及其婴儿作了染色体观察,现报道如下。     

X三体性患者的染色体观察

1959年Jacobs等人最早发现性染色体的核型有3个X的患者,以后陆续有所报道。据估计,人群中发生率约为女性的0.8‰,迄今国内报道甚少。1981年我们发现一例,并对该例及其婴儿作了染色体观察,现报道如下。     

荧光原位杂交(FISH)技术检测水体中大肠菌群研究

大肠菌群广泛用作饮用水的细菌学检测指标。传统的检测方法有多管发酵法和滤膜法。这些方法存在一些缺点 ,如检测时间长、专一性差、干扰因素多。因此 ,迫切需要一些快速、灵敏的检测方法。FISH(fluorescentinsituhybridization)技术利用寡核苷酸探针检测特定细胞内的互补核苷酸序列。针对于Enterobacteriaceae的 1 6SrRNA分子区域专门设计的探针可以用于饮用水样品的微生物检测。FISH技术可以用于饮用水中大肠菌群的检测 ,并且在较短的时间内 ( 6～ 8h)给出定量分析结果 ,但该技术用于日常检测尚需更深入的研究。     

苜蓿种质间染色体多态性的荧光原位杂交检测

利用染色体荧光原位杂交技术(FISH),将3种重复序列5S rDNA、45S rDNA和C0t-1 DNA用不同荧光物进行标记,对我国10个不同地理来源的苜蓿种质(Medicago sativa L.;2n=4X=32)进行了染色体多态性检测。结果表明,利用以上重复序列可以较好地将苜蓿32条染色体区分为16对特征不同的染色体,10份不同种质材料FISH带纹特征表现高度相似,比较不同种质间同源染色体重复序列杂交特征,揭示出种质群体内和群体间多态性染色体的存在,其中不同的同源染色体多态性表现不尽一致,1号染色体(随体染色体)多态性最高,10份材料中检出7个多态型,3、4、15号染色体保守性较强,在不同种质间表现为单态,其他染色体多态性居中。对在地理分布上自西向东的10个材料进行染色体多态性比较,结果显示分布于西藏、新疆以及分布在辽宁的材料部分染色体多态型显著区别于其他材料。     

多色荧光原位杂交检测苯系物接触工人精子1,18号染色体畸变率

为研究苯系物暴露对工人精子染色体的损伤 ,用 4条DNA探针与间期精子核染色体进行多色荧光原位杂交 ,同时检测精子 1号、18号染色体数目畸变和 1号染色体结构畸变 (末端缺失与重复 )。作业车间空气中苯的时间加权浓度 (TWA)为 4 2 2 9mg m3,高于国家卫生标准 (6mg m3)。暴露组工人尿粘糠酸 (ttMA)高于对照组。共计数15例暴露组工人 14 4 2 82条精子 ,14例对照组工人 135 937条精子 ,杂交效率为 99 85 %。非整倍体测定结果 :暴露组精子 1号、18号染色体双体率 (分别为 0 0 88%± 0 0 4 1% ,0 0 87%± 0 0 4 9% )显著高于对照组 1号、18号双体率(0 0 4 5 %± 0 0 2 4 % ,0 0 5 3%± 0 0 2 8% ) ;暴露组 1号、18号染色体缺体率分别为 (0 11%± 0 0 5 9% ,0 0 75 %±0 0 35 % )显著高于对照组相应数值 (0 0 4 8%± 0 0 18% ,0 0 4 5 %± 0 0 2 4 % ) ;而二倍体精子率 ,两组差别无显著性。结构畸变测定结果 :暴露组 1号染色体的末端重复率、末端缺失率 (分别为 0 16 %± 0 0 37% ,0 14 %± 0 0 5 3% )显著高于对照组数值 (分别为 0 0 82 %± 0 0 2 3% ,0 0 6 9%± 0 0 2 8% ) ;暴露组 1号染色体着丝粒重复率及着丝粒缺失率(0 10 %± 0 0 35 % ,0 10 %± 0 0 4 1% )显著性高于对     

荧光原位杂交技术检测骨髓增生异常综合征染色体异常的临床意义

目的:探讨荧光原位杂交(FISH)技术检测骨髓增生异常综合征(MDS)染色体异常的敏感性,特异性及临床意义。方法:采用细胞遗传学分析(CCA)和组合探针CSF1R/D5S23,D5S721(5q33),EGR1/D5S23,D5S721(5q31),D7S486/CSP7(7q31),D7S522/CSP7(7q31),D20S108/CSP8(20q12/CSP8)检测45例MDS患者骨髓细胞的染色体异常,并比较检测结果。结果:两种方法共检出染色体异常26例(58%),染色体数目异常9例,占34.6%;染色体结构异常13例,占50%;复杂核型4例。CCA检出+8和20q-各3例,7q-2例;FISH检出7号染色体异常8例占17.8%(8/45),两组间比较差异有统计学意义(P=0.0441713)。FISH检出+8和20q-各5例,5q-异常4例。7号染色体异常和复杂核型组与核型正常组比较转白率高。结论:组合探针检出MDS中5q-,-7/7q-,+8,20q-核型异常高于CCA,CCA结合FISH技术能提高MDS染色体异常的检出率,对于疾病诊断,判断预后具有重要价值。     

双色荧光原位杂交检测苯系物暴露工人精子9、18号染色体数目畸变

为研究苯系物暴露工人精子常染色体数目畸变.用地高辛标记的9号染色体探针(D9Zl)和生物素标记的18号染色体探针(D18Z1)进行双色荧光原位杂交,测定精子9、18号染色体非整倍体率.车间空气苯时间加权平均浓度(TWA)为86.49mg/m3,高于国家卫生标准1倍,苯暴露工人尿粘糠酸(ttMA)显著高于对照组.共计数14名暴露工人136401条精子,16名对照工人156955条精子.暴露组9、18染色体双体精子率(分别为0.168%±0.063%、0.055%±0.031%)和二倍体精子率(0.073%±0.045%)均高于对照组相应数值(分别为0.050%±0.030%、0.033%±0.025%和0.040%±0.036%);暴露组9、18号染色体缺体率(分别为0.206%±0.047%,0.068%±0.044%)高于对照组值(0.067%±0.037%、0.048%±0.034%).总数目畸变率(0.570%±0.144%)亦高于对照组值(0.218%±0.071%).实验表明接触较高浓度苯可引起长期暴露者精子常染色体非整倍体率增高.     

三色荧光技术在SNP检测中的应用

利用三色荧光标记的A、C、T双脱氧核苷酸单碱基延伸的方法结合编码寡核苷酸芯片技术检测单核苷酸多态性 (SNP)的基因型。以beta地中海贫血样本基因 (HBB基因 )突变作为模型的研究结果显示该方法能同时对多位点的SNP进行检测。     

荧光原位杂交技术分析栽培种甘薯(Ipomoea batatas cv.XushuNo.18)染色体

为了解栽培种甘薯(徐薯18,Ipomoea batatas cv.XushuNo.18)的染色体结构,文章利用45SrDNA荧光原位杂交、自身基因组荧光原位杂交和银染技术对栽培种甘薯进行分子细胞遗传学研究。银染结果显示,徐薯18间期核有6对、8对和9对银染点;45SrDNA荧光原位杂交结果显示,徐薯18染色体上有8对或9对强弱不一的45SrDNA信号;自身基因组荧光原位杂交结果表明,所有染色体的全长分布强烈而密集的杂交信号,着丝粒区、近着丝粒区和端粒区有增强的信号带。     

应用荧光原位杂交技术检测人β^E珠蛋白基因小鼠染色体上的整合状态

为将荧光原位杂交技术应用于基因定位研究中,探讨一种能有效地检测转基因动物染色体上外源基因整合状态的实验方法,对小鼠腹腔注射秋水仙素后,取转基因小鼠骨髓制备中期染色体,将传统的FISH方法加以改进,检测外源基因在转基因小鼠染色体上的整合状态。检测结果表明,外源人β^E珠蛋白基因已稳定地整合于小鼠染色体上,FISH能直观地反映外源基因在转基因动物染色体上的整合状态,该方法可对转基因动物及基因转移研究中的外源基因整合反进行染色体定位检测。     

生物大分子相互作用检测技术新进展———三色荧光级联荧光共振能量转移技术

荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET),是指能量从一种受激发的荧光基团(fluorophore)以非辐射的方式转移到另一种荧光基团的物理现象.FRET的能量转移效率是两个荧光基团间距离的函数,并对此距离十分敏感,它的有效响应距离一般在1～10nm之间,因而可被用于测定原子间及分子间的距离.这一特点使FRET技术在大分子构象变化、大分子之间相互作用、细胞信号通路等研究中发挥重要作用,成为生物医学研究中的重要方法.但细胞内的生物学过程常常涉及多于两个的大分子间相互作用,二色荧光基团的FRET技术不能满足这种生物学研究的需求.最近,两个研究小组在这方面取得突破,建立了分别基于共聚焦显微镜和流式细胞仪的三色荧光级联FRET技术.这一技术的出现将会极大地促进生物学及相关研究领域的发展.