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相似文献
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1.
深黄被孢霉Δ6—脂肪酸脱氢酶基因导入大豆   总被引:4,自引:0,他引:4  
采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功地将深黄被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因导入大豆。从发芽5—7d的大豆菌苗切取子叶节外植体,经农杆菌浸染和共培养后,在含50mg/L卡那霉素的选择培养基上培养2-4w后,从子叶节处诱导出抗性不定芽,将不定芽转移到伸长培养基上,4-6w后长至2-3cm高的再生苗,再将再生苗切下转入生根培养基,2-6w生根,生根后的再生植株经逐渐锻炼移入花盆中,部分移栽成活的T0植株能正常开花结荚。从T0植株上收获T1种子,按株系种植。T0和T1代经PCR检测和DNA分子杂交分析,证明外源基因已导入并整合到大豆的基因组内并能遗传给后代。  相似文献   

2.
甘蓝型油菜抗虫转基因植株及其抗性分析   总被引:32,自引:0,他引:32  
李学宝  毛慧珠 《遗传学报》1999,26(3):262-268
通过油菜子叶外植体-农杆菌共培养法将苏云金杆菌杀虫蛋白基因导入甘蓝型油菜,获得抗虫的转基因植株。带有1 ̄2mm子叶柄的油菜子叶经农杆菌感染后,共培养2 ̄3天,然后转移到附加15mg/L卡那霉素的MS选择培养基上筛选转化愈伤组织及不定芽。卡那霉素抗性苗相继在含20 ̄50mg/L卡那霉素的选择培养基上继代培养,再转移到含25mg/L卡那霉素的生根培养基上诱导生根。以苏云金杆菌杀虫蛋白基因为探针,进行1  相似文献   

3.
黄瓜子叶节高频再生体系建立及再生植株倍性观察   总被引:5,自引:1,他引:5  
以‘农城3号’黄瓜子叶节为试材,研究不同苗龄、不同激素对黄瓜离体植株再生频率及再生不定芽的影响,并对再生植株进行了根尖染色体计数和叶片气孔保卫细胞叶绿体数目的鉴定。结果表明,(1)6-BA对黄瓜不定芽诱导起关键作用,IBA不利于黄瓜不定芽的诱导。(2)MS 2.0mg/L6-BA培养基是‘农城3号’黄瓜通过子叶节进行不定芽诱导再生植株的最佳培养基。(3)正常发育的无菌苗4~5d左右子叶不定芽再生频率较高,苗龄超过5d,不定芽再生频率明显下降。黄瓜子叶再生植株与实生苗的根尖染色体数目均为2n=14,再生植株与实生苗的气孔保卫细胞叶绿体数均分布在6~10的范围内,说明再生植株的倍性没有发生改变。  相似文献   

4.
以空心菜(Ipomoea aquatica Forsk.)品种‘白骨柳叶’为材料,通过筛选植物外植体和调整培养基激素配比等方法,首次建立了茎秆第一节间为外植体的空心菜离体再生体系。结果表明,在MS基本培养上添加0.05%的植物组织培养抗菌剂PPM可获得大量空心菜无菌苗;植株子叶和下胚轴的切段均未诱导出不定芽,而茎秆第一节间为外植体能成功诱导出不定芽,诱导成功率为20%,最佳培养基配方为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA;不定芽诱导生根的最佳培养基配方为1/2 MS+0.1 mg/L NAA,生根率为100%。诱导成功后,将完整的再生苗移栽至基质土中,成活率可达100%。  相似文献   

5.
高山被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因转化大豆的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功地将高山被孢霉△^6-脂肪酸脱氢酶基因导入栽培大豆吉林43和黑龙37品种中。经农杆菌浸染和共培养后,在含50mg/L卡那霉素的选择培养基上连续筛选,获得一批转基因植株。经PCR检测和Southern杂交分析,证明外源基因已导入并整合到大豆的基因中组中。通过GC-MS对大豆种子进行脂肪酸色谱分析,结果表明,产生了γ-亚麻酸,其含量最高可达18.23%。  相似文献   

6.
大豆(Glycine max(L.)Merrill)遗传转化目前常用的两种方法为农杆菌介导的子叶节转化系统和基因枪介导的体细胞胚转化,但这两种转化系统都存在转化频率低、难于重复及依赖于特定的基因型等问题.为了提高农杆菌介导的大豆子叶节的转化频率,采用了一种基于bar基因作为筛选标记基因的固体-液体筛选系统,与农杆菌共培养3d的大豆子叶节在MS添加2 mg/L 6-BA和5 mg/L的glufosinate的筛选培养基培养2周后,再转到含有0.01 mg/L TDZ和2mg/L glufosinate的液体培养基中筛选,并每周更换一次培养液.得到的再生芽首先经GUS分析为阳性后再转入生根培养基得到完整转化植株,然后通过Southern杂交分析证实外源基因整合到大豆基因组,转化植物含有1~2个基因拷贝数.该转化系统具有转化频率高、转化周期短以及不依赖于大豆基因型等优点,对影响该转化系统的一些因子进行了讨论.  相似文献   

7.
以空心菜(Ipomoea aquatica Forsk.)品种‘白骨柳叶’为材料,通过筛选植物外植体和调整培养基激素配比等方法,首次建立了茎秆第一节间为外植体的空心菜离体再生体系。结果表明,在MS基本培养上添加0.05% 的植物组织培养抗菌剂PPM可获得大量空心菜无菌苗;植株子叶和下胚轴的切段均未诱导出不定芽,而茎秆第一节间为外植体能成功诱导出不定芽,诱导成功率为20%,最佳培养基配方为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA;不定芽诱导生根的最佳培养基配方为1/2 MS+0.1 mg/L NAA,生根率为100%。诱导成功后,将完整的再生苗移栽至基质土中,成活率可达100%。  相似文献   

8.
银河I号杨叶外植体再生体系建立   总被引:4,自引:0,他引:4  
以银河 号杨 (Populus alba× P.hopeiensis)无菌试管苗叶片为外植体 ,建立了叶片外植体快速繁殖的培养程序。实验结果表明 ,MS附加 6 - BA∶ IAA(5∶ 1 )、每天 1 4h光照 ,可诱导离体叶片产生大量不定芽 ,且生根试管苗叶片的不定芽分化率明显高于无根试管苗。不定芽长至 1 cm以上时切下后转至 1 /2 MS附加 IBA 0 .2 mg/L的培养基上 ,可生根而形成完整的再生植株  相似文献   

9.
农杆菌介导的大豆高频遗传转化   总被引:10,自引:0,他引:10  
大豆(Glycinemax(L.)Merrill)遗传转化目前常用的两种方法为农杆菌介导的子叶节转化系统和基因枪介导的体细胞胚转化,但这两种转化系统都存在转化频率低、难于重复及依赖于特定的基因型等问题。为了提高农杆菌介导的大豆子叶节的转化频率,采用了一种基于bar基因作为筛选标记基因的固体-液体筛选系统,与农杆菌共培养3d的大豆子叶节在MS添加2mg/L6-BA和5mg/L的glufosinate的筛选培养基培养2周后,再转到含有0.01mg/LTDZ和2mg/Lglufosinate的液体培养基中筛选,并每周更换一次培养液。得到的再生芽首先经GUS分析为阳性后再转入生根培养基得到完整转化植株,然后通过Southern杂交分析证实外源基因整合到大豆基因组,转化植物含有1~2个基因拷贝数。该转化系统具有转化频率高、转化周期短以及不依赖于大豆基因型等优点,对影响该转化系统的一些因子进行了讨论。  相似文献   

10.
用携带基因1,2的根癌农杆菌AG(84)转化毛白杨外植体,在无激素的MS0培养基上获得转化根。分离单根或切成根段在分化培养基上能分化芽而再生完整植株。由T-DNA上带有基因4的根癌农杆菌C58C1(PBZ6111)转化毛白杨外植体,在MS0培养基上能直接分化不定芽而再生植株.在转化中使用叶柄作外植体比使用叶片的转化率提高一倍以上。基因1,2引入毛白杨后,植株根系发达,生根率达100%。基因4引入毛白杨则使植株节间变短,植株矮化.纸电泳分析表明,带有基因1,2的转化植株能表达特异的农杆碱,带有基因4的转化植株能表达特异的胭脂碱。  相似文献   

11.
为获得豇豆(Vigna unguiculata)遗传转化体系,以‘成豇七号’带1 片子叶的子叶节作为外植体,对其高效再生体系和农杆菌介导抗病基因Pti4 的遗传转化进行了研究。结果表明,豇豆无菌苗、不定芽诱导和不定芽伸长培养的最适培养基分别为MSB5 + 6-BA 3.0 mg L-1、MSB5 + 6-BA 1.0 mg L-1 + KT 0.06 mg L-1 和MSB5 + 6-BA 0.5 mg L-1 + IBA 0.2 mg L-1。不定芽在MS 培养基上能迅速诱导生根,获得完整植株。以豇豆子叶节为受体,通过农杆菌介导成功将 Pti4 整合到‘成豇七号’抗性芽基因组中。因此,豇豆高效再生体系的建立为遗传育种研究奠定了基础。  相似文献   

12.
简单快捷建立高频黄瓜子叶离体再生体系   总被引:11,自引:0,他引:11  
赵泓  刘凡  姚磊 《生物技术》2000,10(2):9-11
以10种我国市场上常见的黄瓜品种为材料,建立了一个简单高效的黄瓜子叶离体再生系统。从种子萌发到获得再生植株仅需6周。子叶外植体在MS=0.5mg/L BA培养基上不经愈伤组织诱导阶段而直接走器官发生途径。4~5天的子叶外 植体的不定芽发生能力最强。供试10种基因型中,“碧春”和“甜翠绿”的再生率高达100%。待不定芽长度超过1.0mc时,直接将不定芽转移到MS培养基生根成苗,幼苗移栽温室后正常结实  相似文献   

13.
根癌农杆菌介导转化诸葛菜获得转基因植株   总被引:8,自引:0,他引:8  
以诸葛菜下胚轴和子叶为材料,在附加BA和NAA的MS培养基上诱导芽再生,在1/2MS培养基上诱导生根,获得完整再生植株,建立了诸葛菜组织培养高频再生体系,再用很癌农杆菌介导转化诸葛菜下胚轴和子叶,在附加一定量的氨苄青霉素、头孢霉素和卡那霉素的相应培养基上进行筛选,并培养再生成苗,获得完整抗性再生植株,移植到盛有土壤的花盆中均可存活,生长正常。将再生植株叶片,进行GUS、NPTⅡ酶活性测定和Southernblot分子杂交,证实外源基因已稳定整合到植物基因组中,并高效表达。  相似文献   

14.
提高西瓜离体培养植株再生效率的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
本文以“京欣1号”母本和“伊选”西瓜4天苗龄子叶为外植体,研究离体培养植株高频率再生体系。结果表明:“伊选”子叶远轴端外植体的再生频率仅为10%,子叶近轴端外植体在5mg/LBA 0.1mg/L IAA的激素组合下植株再生频率为100%,平均每个外植体的丛生芽数在所有组合中最多,为10.3个;“京欣1号”母本子叶近轴端外植体在2mg/LBA 0.5mg/L IAA激素组合下植株再生频率为100%,平均每个外植体的丛生芽数在所有组合中最多,达6.9个。本试验条件下,子叶近轴端外植体接种4天即分化出不定芽,至再生苗的移栽仅需40天,在MS 0.1mg/L NAA的生根培养基上的生根率为97.3%,移栽成活率达98.5%。  相似文献   

15.
荞麦组织培养及高频植株再生体系的建立   总被引:5,自引:0,他引:5  
通过对荞麦(Fagopyrum esculentum Moench)不同外植体、不同激素配比的比较研究,建立了荞麦离体培养高效植株再生体系。荞麦子叶切段在含2.0 mg/L 2,4-D和1.0 mg/L 6-BA的MS培养基上愈伤组织诱导率为89.6%,而下胚轴切段在含2.0 mg/L 2,4-D和1.0-2.0 mg/L 6-BA MS培养基上愈伤组织诱导率高达100%。在2.0 mg/L 6-BA、0.1 mg,L IAA和1 mg/L KT的MS培养基上通过愈伤组织间接分化或外植体直接分化形成不定芽。来自子叶和下胚轴的愈伤组织的分化率分别为42.5%和73.6%,下胚轴的分化率明显高于子叶。将生长状态良好的不定芽转至含1.0 mg/L IBA和0.5mg/L NAA的1/2 MS培养基上生根,生根率达到100%。再生植株移栽到盆土中,成活率达91.6%,并且生长状态和特征均表现正常。  相似文献   

16.
根癌土壤杆菌介导转化诸葛菜子叶获得转基因植株   总被引:12,自引:0,他引:12  
采用诸葛菜子叶为材料。在MS+BA 3mg/l,+NAA O.2mg/L培养基上诱导芽的再生,1/2 MS+IBA 0.03mg/L.上诱导生根,获得完整再生植株,建立了诸葛莱组织培养高频再生系统,其再生率可达100%。采用土壤杆菌介导转化诸葛菜子叶.在附加一定量的氨苄青霉索、头孢霉素和卡那霉素的相应培养基上进行筛选,进而培养出再生成苗。获得完整植株,经GUS和NPTI酶活测定,以及Southern blot分析.证实为转基因植株。转化子叶的芽再生率为51%.获得完整转基因植株的转化率为5.53%。在国内外首次建立了以根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)为载体,诸葛菜子叶为受体的遗传操作系统。  相似文献   

17.
银河Ⅰ号杨叶外植体再生体系建立   总被引:3,自引:0,他引:3  
以银河Ⅰ号杨(Populus alba × P.hopeiensis)无菌试管苗叶片为外植体,建立了叶片外植体快速繁殖的培养程序.实验结果表明,MS附加6-BA∶IAA(5∶1 )、每天14 h光照,可诱导离体叶片产生大量不定芽,且生根试管苗叶片的不定芽分化率明显高于无根试管苗.不定芽长至1 cm以上时切下后转至1/2 MS附加IBA 0.2 mg/L的培养基上 ,可生根而形成完整的再生植株.  相似文献   

18.
目的:以草麻黄的子叶为材料,建立草麻黄植株再生体系.方法:采用组织培养的方法进行了愈伤组织诱导、愈伤组织分化和不定芽生根研究.结果:MS+2,4-D 2.0mg/1+6-BA 1.0mg/l为诱导子叶形成具有分化能力愈伤组织的理想培养基;MS+2,4-D 1.5mg/l+6-BA 1.5mg/l是愈伤组织的最佳继代培养基;MS+IAA 0.2mg/l+TDZ 2.0mg/l是愈伤组织不定芽分化的最佳培养基,分化率为75%;试管苗生根培养基为MS+2,4-D 1.0mg/l.结论:建立了草麻黄子叶再生系统,为开发和保护麻黄野生资源提供一定的材料来源和技术方法.  相似文献   

19.
以中国传统菊花品种‘小林静’叶片为外植体,建立了‘小林静’较好的再生体系及遗传转化体系.结果表明,‘小林静’叶盘最适不定芽分化培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L NAA,不定芽分化率为92.76%,平均再生不定芽数为2.3767个;试管苗最佳生根培养基为1/2MS,生根率达100%.移栽采用灭菌的蛭石,再生苗移栽成活率达90%以上.采用根癌农杆菌C58C1介导的叶盘转化法进行‘小林静’的遗传转化试验,农杆菌OD600=0.5-0.6,侵染10 min后,将叶片外植体接种到MS+2.0 mg/L 6-BA+1.5mg/L NAA的培养基中黑暗共培养2d,之后转接到附加10 mg/L硫酸卡那霉素和400 mg/L羧苄青霉素的分化筛选培养基中进行转化细胞的筛选,待长出抗性芽后转接至生根培养基中进行培养,最终建立了菊花品种‘小林静’的遗传转化体系.  相似文献   

20.
以获得的梨转GUS基因植株的试管苗为试材,转基因植株的叶片在含卡那霉素的再生培养基上可成功再生不定梢,这些不定梢在含卡那霉素的生根培养基上可诱导生根。再生不定梢经组织化学检测仍表现出GUS基因的表达。而非转基因植株的叶片在含卡那霉素的再生培养基上不能产生不定梢,显示外源基因在转基因植株中的表达在无性繁殖后代中是稳定遗传的。  相似文献   

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