分心木乙醇提取物对人结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡和迁移的影响

为研究分心木对人结肠癌细胞HCT116增殖、凋亡和迁移的影响,该研究以75%乙醇作为溶剂提取分心木中的活性成分,利用MTT法检测分心木乙醇提取物对HCT116细胞增殖的影响;流式细胞术、AO/EB双染、TUNEL法和Western blot检测细胞凋亡;划痕愈合实验检测细胞迁移;体外建立肿瘤3D细胞模型(3D培养)检测分心木乙醇提取物对HCT116 3D肿瘤细胞球增殖的影响。结果显示,分心木乙醇提取物以剂量依赖的方式抑制HCT116细胞活性,促进细胞凋亡,同时促进凋亡因子Bax的表达,降低抗凋亡因子Bcl2的表达,并促进凋亡的关键执行蛋白PARP的裂解;划痕愈合实验和3D肿瘤细胞培养表明,分心木乙醇提取物抑制细胞迁移和3D肿瘤细胞的增殖。该研究表明,分心木乙醇提取物抑制肿瘤细胞的增殖和迁移,并通过促进cleaved PARP、Bax蛋白表达和抑制Bcl2蛋白的表达诱导肿瘤细胞凋亡。此外,分心木乙醇提取物抑制肿瘤3D细胞球的增殖,这提示结肠癌对分心木乙醇提取物的药物敏感性在体内体外没有显著差异。     

荞麦中光毒物质的转化及荞麦光敏素对人结肠癌细胞HCT-116的抑制活性

荞麦光敏素（fagopyrins）具有光毒性和酪氨酸激酶抑制活性,可作为光动力治疗中的光敏剂,用于癌症的治疗。本研究采用电喷雾质谱法和荧光光度法,探究了荞麦中光毒物存在的型式,并分析了光敏素前体(protofagopyrin)转化为荞麦光敏素的条件。通过MTT细胞实验,研究荞麦光敏素提取物对人结直肠癌细胞和人结肠上皮细胞生长增殖的影响。结果表明,荞麦中光毒物以光敏素前体为主,并且有微量的荞麦光敏素,前者质谱的离子强度是后者的400倍。光敏素前体的转化发生在光照提取过程中,而且提取液在光照放置过程中,光敏素前体继续转化,尤其是前0.5 h对于转化的影响显著超过了提取过程。荞麦光敏素提取物与细胞作用,避光培养时,对HCT-116癌细胞有轻度的抑制作用;而对FHC正常细胞不仅未见抑制还有促进作用。光照结合避光培养时,荞麦光敏素对癌细胞的抑制随着提取物浓度的增加而增强,当提取物浓度达到200 μg/mL时,抑制率达到50%;而对正常细胞提取物,浓度低于200 μg/mL时未见抑制,500 ～ 1 000 μg/mL时抑制率达到50%。光敏素提取物与金丝桃素抑制细胞的能力相比,光照结合避光培养时,金丝桃素对正常细胞的抑制作用强于对癌细胞,而荞麦光敏素的提取物正好相反。提示荞麦光敏素比金丝桃素对癌细胞的抑制更具特异性。上述结果为从荞麦叶中开发出有利于肿瘤治疗的药物提供了实验依据。     

温热抑制人胃癌SGC7901细胞增殖、迁移

目的探讨温热对人胃癌SGC790l细胞增殖、迁移的影响。方法对照组常温(37℃)下培养人胃癌SGC790l细胞,实验组43℃水浴加热0.5h、1h、2h、3h后培养24h,采用倒置显微镜观察胃癌细胞的形态结构变化;Hoechst-33258荧光染色观察细胞核的变化;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖抑制;细胞划痕愈合实验观察温热对胃癌细胞的运动迁移能力的影响;体外细胞侵袭实验(Transwell实验)观察温热对胃癌细胞侵袭能力的影响。结果温热后细胞明显皱缩、变圆及细胞漂浮,3h大部分细胞漂浮;荧光染色显示温热后部分细胞核内出现浓染致密的颗粒块状荧光,胞核固缩、染色质高度凝聚和碎裂;MTT实验提示温热可明显抑制SGC790l细胞生长;细胞划痕实验发现SGC790l细胞温热1h、2 h后细胞迁移距离均明显小于对照组,温热3h后细胞基本未发生迁移;Transwell实验提示SGC790l细胞温热后细胞侵袭能力明显下降。结论温热对胃癌SGC790l细胞具有明显的杀伤作用,温热可明显抑制胃癌SGC790l细胞增殖和侵袭迁移能力。     

塞来昔布诱导HCT-116结肠癌细胞G2/M阻滞

目的:研究选择性COX-2抑制剂塞来昔布诱导结肠癌细胞株HCT-116细胞周期阻滞的作用及其可能的机制。方法:应用流式细胞仪检测塞来昔布对HCT-116细胞周期的影响,定量PCR检测细胞周期素cyclinB1及COX-2 mRNA表达水平,Western-Blot检测细胞周期素cyclinB1的蛋白水平。结果:塞来昔布诱导HCT-116细胞G2/M阻滞的作用呈剂量依赖性,塞来昔布在mRNA及蛋白水平下调HCT-116细胞的cyclinB1。结论:塞来昔布能在体外抑制HCT-116细胞的增殖,诱导G2/M的阻滞,其作用与下调细胞周期素cyclinB1有关。     

新疆家蚕抗菌肽体外抑制人胃癌细胞AGS的增殖

新疆家蚕抗菌肽(Cecropin XJ)具有抑制肿瘤细胞生长的能力。为研究不同浓度Cecropin XJ体外对人胃癌细胞AGS生长的影响,分别采用MTT比色法、软琼脂集落形成实验、流式细胞术、划痕愈合和Transwell实验进行检测。结果表明,20~100μg/mL的Cecropin XJ能够显著抑制AGS细胞的增殖,并具有剂量和时间依赖性。同时,20,50,100μg/mL的Cecropin XJ处理后集落形成率分别降低了(35.81±13.10)%、(48.12±5.68)%和(81.46±6.21)%。AGS细胞经不同浓度Cecropin XJ处理24 h后,凋亡率逐渐上升并且细胞周期阻滞于S期。20μg/mL Cecropin XJ能够显著抑制AGS细胞的迁移和侵袭,100μg/mL Cecropin XJ几乎完全抑制AGS细胞的迁移和侵袭。以上结果说明,Cecropin XJ能够抑制AGS细胞生长、增殖,有可能成为人胃癌治疗的辅助药物。     

水飞蓟宾抑制肝癌细胞HepG2增殖和迁移能力

目的探讨水飞蓟宾对肝癌细胞生长、增殖和迁移能力的影响。方法用含不同浓度水飞蓟宾的培养基孵育HepG2细胞后,采用倒置显微镜观察细胞形态,应用MTT法、Ed U掺入实验和细胞克隆形成实验法检测细胞增殖能力,应用细胞划痕试验分析水飞蓟宾对HepG2迁移能力的影响。结果用不同浓度水飞蓟宾刺激HepG2细胞后,倒置显微镜镜检显示:水飞蓟宾刺激使细胞数目减少,胞体皱缩变小,高浓度刺激时出现较多的死亡细胞。MTT分析、Ed U增殖实验和克隆形成实验显示:水飞蓟宾刺激使细胞增殖能力显著降低,细胞的克隆形成数显著减少。细胞划痕试验结果显示:水飞蓟宾对HepG2细胞的迁移爬行能力也产生明显抑制作用。结论水飞蓟宾能抑制HepG2细胞的增殖和迁移能力,这可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

双氢青蒿素联合奥沙利铂对人结肠癌HCT116细胞的增殖及凋亡的影响

研究双氢青蒿素(DHA)与奥沙利铂(L-OHP)联合对人结肠癌HCT116细胞的增殖及凋亡的影响,初步探讨凋亡的作用机制。运用MTT法检测不同浓度DHA、L-OHP及DHA与L-OHP联合对HCT116细胞的抑制作用,计算DHA与L-OHP是否发挥协同作用。实验结果显示DHA与L-OHP均对HCT116细胞增殖有抑制作用,二者联合在一定浓度下发挥协同作用。应用Annexin V-FITC/PI双染检测药物联用后细胞凋亡情况,结果显示联合组比DHA组和L-OHP组凋亡率提高(P 0. 01)。通过检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax含量及casepase-3、casepase-8活性发现,与单药组比较DHA、L-OHP联合组Bcl-2/Bax降低,casepase-3、casepase-8活性提高(P 0. 01)。研究结果表明DHA与奥沙利铂联合能够显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖,在一定浓度下发挥协同作用,且能诱导细胞凋亡,其机制可能与加重DNA损伤,下调Bcl-2/Bax,激活casepase-3、casepase-8有关。     

疏毛吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量的动态变化

目的:测定不同采收期疏毛吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量,为合理采收提供科学依据。方法:用RP-HPLC法,色谱柱:Kromasil C18(250 mm×4.6 mm);流动相:乙腈∶水(体积比49∶51);流速:1 mL/min;柱温:常温;检测波长:225 nm。结果:疏毛吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量在8月底即果实呈黄绿色未开裂前最高。结论:疏毛吴茱萸的最佳采收期为果实呈黄绿色未开裂前。     

HPLC法测定吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量

目的:建立比较简单可靠的高效液相色谱(HPLC)方法以测定吴茱萸药材中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量。方法:采用乙酸乙酯超声提取方法制备样品。以乙腈-水-乙酸(51:48:0.1)为流动相,在波长225 nm处检测。结果:吴茱萸碱和吴茱萸次碱得到最优化的分离效果,其平均回收率分别为98.5%和96.0%,实际样品的检测结果令人满意。结论:本法简单、快速、准确、可靠,适用于吴茱萸药材的质量控制,     

利用TNF-α诱导建立结肠癌细胞HCT116体外侵袭模型

该研究利用TNF-α诱导建立肿瘤细胞体外侵袭模型,为进一步的研究提供基础。利用20 ng/mL TNF-α刺激结肠癌细胞HCT116 7 d后,使用流式细胞术检测HCT116细胞的CCR7和CXCR4受体表达量的变化,并利用Transwell小室检测TNF-α刺激对CCL21、SDF-1介导的细胞迁移与侵袭能力的影响。实验结果显示,20 ng/mL TNF-α刺激7 d后的HCT116细胞的CCR7和CXCR4表达量均显著增加,侵袭能力也增强,且使CCL21、SDF-1介导的细胞迁移与侵袭能力显著增强。结果说明了本实验利用TNF-α诱导HCT116细胞,成功建立了HCT116的体外侵袭模型,为接下来的研究提供了细胞模型基础,也为进一步的药物筛选提供了基础。     

硫化砷对人结肠癌细胞株HCT116生长及迁移能力的影响

目的:研究硫化砷对人结肠癌细胞株HCT116迁移能力的影响及其作用机制.方法:以HCT116细胞为研究对象,通过MTT法观察硫化砷对肿瘤细胞活性及增殖能力的影响,通过划痕实验观察硫化砷处理后细胞的迁移能力.Western B1ot、Real-time PCR检测硫化砷处理前后细胞内E-钙粘素、P53、Notch1蛋白的表达及相应mRNA水平的变化.结果:硫化砷对HCT116细胞有抑制增殖的作用,此作用随着剂量的增加而增强.选取无毒剂量的硫化砷(1 μM)处理HCT116细胞24h后,细胞的迁移能力降低了52.00％±7.55％.Western Blot及Real-time PCR结果显示,硫化砷处理后,HCT116细胞内的E-钙粘素蛋白水平及mRNA水平均明显升高,P53蛋白水平增高,但对Notch1蛋白及mRNA水平无明显影响.结论:一定剂量范围的硫化砷能抑制HCT116细胞增殖,并能降低其迁移能力.硫化砷降低HCT116细胞的迁移能力,其机制可能是通过上调P53蛋白的水平,从而增高E-钙粘素的表达实现的.     

miR-29家族通过AKT/mTOR信号通路抑制结肠癌MC38细胞的增殖、迁移和侵袭

结肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,死亡人数仅次于肺癌。有研究发现miR-29家族成员(miR-29a、miR-29b和miR-29c)在结肠癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织,但其对结肠癌的影响不明。为探讨miR-29家族对结肠癌的影响及作用机制,该研究在结肠癌细胞系MC38中分别转染miR-29a/b/c-3p mimics,利用qRT-PCR、CCK-8、EdU染色等实验确定miR-29家族成员可以显著降低MC38细胞的增殖能力(P<0.05);通过划痕实验和Transwell侵袭实验,明确miR-29家族成员可显著抑制MC38细胞的迁移和侵袭(P<0.05);最后利用信号通路活性分析、双荧光素酶报告分析等确定miR-29家族成员能够抑制AKT/mTOR信号通路的活性,并且与束蛋白结合蛋白1(Fascin actin-bundling protein 1,FSCN1)存在相互作用。上述结果表明,miR-29家族成员能够抑制AKT/mTOR信号通路活性,进而降低结肠癌细胞MC38增殖、迁移和侵袭的能力。     

敲除Wdr1抑制小鼠原代血管平滑肌细胞的迁移和增殖

细胞骨架肌动蛋白在细胞增殖、迁移等生物学过程中发挥重要作用,然而WDR1作为肌动蛋白解聚的主要辅助因子,其在平滑肌细胞中的作用尚无报道。构建Wdr1条件性诱导敲除小鼠模型,进而分离小鼠原代主动脉平滑肌细胞,诱导敲除Wdr1,检测平滑肌细胞的形态、增殖和迁移情况。PCR结果显示,Wdr1f/f;ERT2Cre小鼠模型构建成功。免疫荧光结果表明:在前人基础上改进的分离方法能够高效分离原代平滑肌细胞。细胞形态观察结果显示:Wdr1敲除后对细胞的形态有显著性影响。同时,划痕实验以及CCK8检测结果也表明:Wdr1的条件性诱导性敲除可明显抑制平滑肌细胞的迁移和增殖。Wdr1敲除后平滑肌细胞的形态以及细胞生物学过程的改变提示其与血管疾病的发生和发展有紧密联系,这对揭示血管病理生理过程有重要意义。     

沉默EVL表达抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖和迁移能力

Ena/VASP 样蛋白（Ena/VASP like protein,EVL）是Ena/VASP家族成员之一,它参与肌动蛋白细胞骨架重组,以及细胞迁移、收缩环形成和细胞间附着.EVL在肝癌SMMC-7721细胞中高表达. 抑制EVL蛋白表达后,SMMC-7721细胞的增殖与迁移能力降低.为研究EVL在肝癌细胞的功能,构建了靶向shRNA干扰表达载体,稳定转染肝癌SMMC-7721细胞. MTT实验和细胞集落形成实验显示,与转染对照比较,沉默EVL蛋白表达可明显抑制SMMC-7721肝癌细胞的增殖、集落形成能力. Transwell实验证明,沉默EVL表达导致SMMC-7721细胞迁移能力降低. 进而,流式细胞术揭示,沉默EVL表达的SMMC-7721细胞G0/G1期细胞比例增多.研究结果提示,EVL蛋白可促进肝癌细胞的增殖与迁移;该结果可解释EVL在肝癌细胞中高表达的意义.     

miRNA-132抑制人骨肉瘤细胞的增殖和侵袭能力

目的 观察miRNA-132在不同骨肉瘤细胞系中的表达及对骨肉瘤细胞生物学行为的影响,探讨miRNA-132在人骨肉瘤发生发展中的作用.方法 通过荧光定量PCR技术检测不同骨肉瘤细胞系U2OS、MG63、143B中miRNA-132的表达情况,使用pRFP-miRNA-132-down质粒转染U2OS细胞、pRFP-m...     

槐定碱抑制人胃癌MKN45细胞的增殖并促进其凋亡

本研究旨在探讨槐定碱对人胃癌MKN45细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。将人胃癌MKN45细胞分为对照组和槐定碱组(设立6个浓度亚组)。用MTT法检测MKN45细胞增殖情况,用免疫细胞化学染色法和Western blot观察细胞高迁移率组蛋白3(high mobility group-box 3,HMGB3)的蛋白表达,用Hoechst 33342染色法观察细胞形态变化,用流式细胞术检测细胞凋亡。结果显示,槐定碱作用48 h能显著抑制MKN45细胞的增殖,作用呈剂量依赖性。与对照组相比,槐定碱作用48 h后MKN45细胞的HMGB3蛋白表达显著减少(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05)。以上结果提示,槐定碱作用48 h可抑制人胃癌MKN45细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与HMGB3表达下调有关。     

黑水虻抗菌肽HI-3对人结肠癌HCT-8细胞 谷氨酰胺和谷氨酸代谢通路的影响

【目的】研究黑水虻Hermetia illucens抗菌肽HI-3对人结肠癌HCT-8细胞氨基酸代谢的影响,以丰富对其抑癌机理的认识。【方法】采用CCK-8法测定不同浓度(80, 160和320 μg/mL)抗菌肽HI-3对HCT-8细胞的抑制率;利用GC-MS进行HCT-8细胞代谢物测定,通过基于R软件的通路分析找出氨基酸含量差异最显著的氨基酸代谢通路并筛选出该通路靶标酶。320 μg/mL HI-3处理HCT-8细胞后,利用酶活性检测试剂盒测定靶标酶谷氨酰胺酶(GLS)活性;利用RT-qPCR和Western blot技术分别对HCT-8细胞的GLS基因进行mRNA及蛋白表达水平的测定;利用生化试剂盒和ELISA试剂盒检测HCT-8细胞内谷氨酰胺和谷氨酸代谢通路涉及的重要代谢物谷氨酰胺(Gln)、谷氨酸(Glu)、谷胱甘肽(GSH)、α-酮戊二酸(α-KG)和ATP含量的变化。【结果】浓度为80, 160和20 μg/mLHI-3对HCT-8细胞的抑制率分别为33.85%±3.50%, 46.26%±0.90%和55.53%±1.70%,且抑制率随HI 3浓度升高而增大。320 μg/mL HI-3处理对谷氨酰胺和谷氨酸代谢通路的影响最大,其中氨基酸代谢物含量与阴性对照组(0 μg/mL HI-3)相比差异最为显著;这一通路中的靶标酶GLS活性及其GLS的mRNA和蛋白表达水平均极显著低于阴性对照组;另外与此通路相关的重要代谢物Gln, Glu, GSH, α-KG和ATP含量与阴性对照组相比亦显著减少。【结论】浓度为320 μg/mL黑水虻抗菌肽HI-3对HCT-8细胞谷氨酰胺和谷氨酸代谢通路影响最为显著,并能通过阻碍该通路来显著抑制HCT-8细胞的增殖。     

人胰腺癌细胞再增殖体外模型的建立

目的:细胞再增殖是导致胰腺癌放化疗失败的主要原因之一,但缺乏合适的用于研究胰腺癌再增殖的细胞模型。本研究拟建立简便、实用的胰腺癌细胞再增殖体外模型。方法:表达绿色荧光蛋白-荧光素酶(GFP-Luc)的慢病毒感染人胰腺癌细胞,经嘌呤霉素筛选,用荧光显微镜和流式细胞仪观察双标记细胞GFP表达情况,用生物成像检测双标记细胞Luc活性及分析细胞数量与Luc活性之间的关系。以X-线照射胰腺癌细胞制备饲养细胞,以相应的双标记肿瘤细胞为报告细胞进行共培养。对共培养细胞进行荧光显微镜观察和生物成像,以判断饲养细胞对报告细胞的生长促进作用。结果:通过表达GFP-Luc的慢病毒感染获得双标记人胰腺癌细胞,经荧光显微术、流式细胞术和生物成像术证实这些双标记的人胰腺癌细胞能有效地表达GFP和Luc活性,可作为报告细胞用于建立人胰腺癌再增殖细胞模型。将经X-线照射的饲养细胞和相应的报告细胞共培养,经荧光显微镜观察和生物成像分析,结果显示X-线照射过的饲养细胞对报告细胞的生长具有显著的促进作用。结论:成功建立了简便、实用的人胰腺癌再增殖体外模型,该模型能很好地模拟人体内胰腺癌细胞再增殖过程,为进一步研究胰腺癌细胞再增殖的分子机制提供了新的技术手段。     

MUC1对人结肠癌细胞HCT116生物学行为的影响

目的:观察MUC1对人结肠癌细胞HCT116增殖、侵袭及化疗敏感性的影响。方法:采用MUC1表达阴性的结肠癌细胞株HCT116,通过慢病毒转染、嘌呤霉素筛选、半定量RT-PCR和Western blot鉴定构建稳定表达MUC1的HCT116细胞株;实验分空病毒组和MUC1病毒组;CCK实验和软琼脂克隆形成实验检测两组细胞的增殖能力,Transwell侵袭实验检测两组细胞的侵袭能力;MTT法和流式细胞仪检测两组细胞对奥沙利铂的敏感性,酶底物法检测Caspase-3活性。结果:获得稳定表达MUC1的HCT116细胞株;两组细胞贴壁生长无差异;与空病毒组相比,MUC1病毒组细胞软克隆形成数增加,穿过小室的细胞数增加(P0.05);MUC1病毒组细胞对奥沙利铂的敏感性降低,MUC1病毒组Caspase-3活性水平低于空病毒组(P0.05)。结论:MUC1与结肠癌的非锚定依赖生长、侵袭和化疗敏感性有关。