金樱子提取物中多糖的体外抗肿瘤活性研究

多糖是药用植物金樱子所含有的数种主要生物活性物质之一,其具有多种生物活性,厘清该成分的作用效应具有重要意义。本文通过将黔产金樱子制备为金樱子粉末、分离纯化得到活性成分金樱子多糖;采用磺酰罗丹明染色法测定其对人肝癌细胞BEL-7402以及人正常肝细胞HL-7702增殖的影响并比较。发现金樱子提取物中所存在的多糖类化合物对体外培养的人肝癌细胞BEL-7402的增殖具有一定抑制作用,其半数抑制浓度为(12.43±1.95)μmol/L;且对体外培养的人正常肝细胞HL-7702的毒性较低,其半数抑制浓度为(31.04±3.68)μmol/L。初步证明金樱子提取物中含有的多糖类化合物具有一定的体外抗肿瘤活性,作为低毒性的天然提取物,具有广阔的抗肿瘤前景。     

白藜芦醇对缺氧诱导的肝癌细胞株BEL-7402增殖及凋亡的影响

目的:探讨不同浓度白藜芦醇在常氧环境及缺氧环境下对肝癌细胞株BEL-7402增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT法分析不同浓度(0、12.5、25、50、100、200μmol/L)白藜芦醇在常氧环境及缺氧环境下对肝癌细胞株BEL-7402增殖的影响,应用流式细胞仪检测其对BEL-7402细胞凋亡的影响。结果:不同浓度的白藜芦醇在常氧及缺氧环境中对肝癌细胞株BEL-7402均有明显抑制增殖及诱导凋亡作用,呈剂量-效应相关,其中50、100、200μmol/L白藜芦醇两种环境中对肝癌细胞的抑制率及凋亡率与对照组比较差异均具有统计学意义(P0.05)。50、100、200μmol/L白藜芦醇,常氧环境中对肝癌细胞的抑制率分别为18.70±2.15%、22.13±2.18%、31.47±2.26%,凋亡率分别为11.82±2.28%、19.80±2.64%、38.00±2.57%;缺氧环境中对肝癌细胞的抑制率分别为17.87±1.76%、23.52±2.29%、29.87±1.51%,凋亡率分别为12.36±3.15%、19.71±2.78%、37.87±4.83%。结论:白藜芦醇在缺氧环境下能抑制肝癌细胞株BEL-7402的增殖并诱导其凋亡,且其作用与常氧环境相似。     

磁珠固定化凝血酶的制备及其在槐米活性化合物筛选中的应用

槐米是药食两用植物,有清肝明目和凉血止血之功效;其主要化学成分为黄酮类物质,具有抗氧化、抗凝血、降血压等多种生物活性。本文将凝血酶(THR)固定于氨基修饰的磁珠表面,以其为亲和固相萃取吸附剂,开发出一种快速筛选中药中凝血酶抑制剂的方法。首先合成了表面修饰氨基的磁珠,然后以戊二醛作为交联剂将凝血酶共价固定于磁珠表面得到磁珠固定化的凝血酶(MNP@THR)。利用TEM,VSM,FT-IR等对合成的固定化酶进行了表征,同时获得了优化的合成条件为:THR浓度200μg/mg,pH值7. 0,时间60 min,温度37℃为最佳合成条件,此时酶的固定化量为65μg/mg。利用MNP@THR从槐米提取物中特异性地吸附得到两个活性化合物,并通过磁分离进行前处理后,由HPLC-ESI-MS鉴定其分别为槲皮素和芦丁。通过体外酶活抑制实验测出,槲皮素具有较好的抑制活性,其半数抑制浓度IC_(50)为16. 6±0. 68μM;芦丁的凝血酶抑制活性较弱,IC_(50)值为1. 5±0. 14 m M。     

槲皮素-3-O-乙酸酯、槲皮素-3-O-丙酸酯的制备及抗血小板聚集活性北大核心CSCD

为改善槲皮素的水溶性而不降低其抗血小板聚集活性,本文以芦丁为原料,经"3'、4'、7位羟基苄基化-酸水解苷键-3位羟基酰化-加氢脱苄基"四步反应,合成出槲皮素-3-O-乙酸酯和槲皮素-3-O-丙酸酯。两种衍生物在水中的溶解度分别为243.27μg/m L和8.13μg/m L,均高于槲皮素的溶解度。两种衍生物均对二磷酸腺苷诱导的兔体外和大鼠体内血小板聚集有显著的抑制活性,体外IC50分别为94.1μmol/L和204.9μmol/L,均低于槲皮素值,体内抑聚率均高于槲皮素。实验结果表明,通过选择性酰化槲皮素的3位羟基,引入含2个或3个碳的短脂肪烃基链,能显著改善水溶性,提高抗血小板聚集活性。     

槲皮素-3-O-乙酸酯、槲皮素-3-O-丙酸酯的制备及抗血小板聚集活性

为改善槲皮素的水溶性而不降低其抗血小板聚集活性,本文以芦丁为原料,经"3'、4'、7位羟基苄基化-酸水解苷键-3位羟基酰化-加氢脱苄基"四步反应,合成出槲皮素-3-O-乙酸酯和槲皮素-3-O-丙酸酯。两种衍生物在水中的溶解度分别为243.27μg/m L和8.13μg/m L,均高于槲皮素的溶解度。两种衍生物均对二磷酸腺苷诱导的兔体外和大鼠体内血小板聚集有显著的抑制活性,体外IC50分别为94.1μmol/L和204.9μmol/L,均低于槲皮素值,体内抑聚率均高于槲皮素。实验结果表明,通过选择性酰化槲皮素的3位羟基,引入含2个或3个碳的短脂肪烃基链,能显著改善水溶性,提高抗血小板聚集活性。     

黄酮类化合物清除羟自由基(HO·)功能及其构效关系研究

本文采用体外实验的方法,系统地研究了八种黄酮类植物化学物槲皮素、异槲皮素、芦丁、橙皮素、橙皮苷、柚皮素、柚皮苷和淫羊藿苷对羟自由基(HO.)的清除作用及构效关系。结果表明,八种黄酮类化合物中,只有槲皮素、芦丁和异槲皮素对HO·有明显的清除作用,在浓度为260μM时其对HO·清除率分别为30.69%±0.06、13.70%±0.04和10.23%±0.03。构效比较结果表明:黄酮类化合物C环C3位羟基和B环3’-4’邻位二羟基是其清除HO.的重要功能基团。本研究为选择有效的能清除HO·的膳食黄酮类化合物用于预防和治疗相关疾病提供了一定实验基础和理论依据。     

熊果酸通过调节miR-148a-3p/孕烷X受体轴抑制肝细胞肝癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的 探讨熊果酸(ursolic acid,UA)对肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖、迁移与侵袭的作用及其机制.方法 采用0～80μmol/L UA处理HCC细胞系(BEL-7404、Huh7、SMMC-7721和HepG2)和正常肝细胞系(HL-7702和HHL-5),用...     

蓝藻Anabaena sp.PCC7120 羧体碳酸酐酶的鉴定

在丝状蓝藻Anabaena sp.PCC7120细胞粗提液的碳酸酐酶(CA)分析中,发现了两种形式的CA活性.高CO_2下生长的细胞,在35μmol/L EZ(Ethoxyzolamide,碳酸酐酶的抑制剂)存在的情况下,CA总活性的85％左右被抑制,其半抑制浓度I_(50)为7.4μmol/L;随着EZ浓度的继续增加,CA活性在EZ浓度达到约150μmol/L处出现了第二个抑制峰,在250μmol/L处抑制程度达到最大,使CA总活性的15％被抑制,其半抑制浓度I_(50)为190μmol/L。在空气条件下生长的细胞中也出现了CA的两个抑制峰:低I_(50)为6μmol/L,高I_(50)为120μmol/L,对羧体的分离及体外测试表明,在羧体制备物中的CA活性只有一个EZ的抑制峰,而且在EZ浓度达到35μmol/L,正如所期望的那样,该CA活性全部被抑制。其半抑制浓度I_(50)为5.2μmol/L左右。这个值跟空气或高CO_2条件下生长的细胞粗提物中的低I_(50)(6μmol/L或7.4μmol/L)十分相似。说明低浓度的EZ可以特异性地抑制定位于羧体的CA活性。另外一种形式的CA,具有高I_50(120—190μmol/L),约占CA总活性的15—20％,则有可能定位于细胞质膜。     

银杏酸单体对黄嘌呤氧化酶的体外抑制活性研究

本研究首次系统评价了银杏酸单体化合物对黄嘌呤氧化酶的体外抑制活性。银杏外种皮的无水乙醇提取物通过开放硅胶柱色谱和半制备型反相高效液相色谱分离,得到五个银杏酸单体化合物。以别嘌呤醇为阳性药物,采用微孔板法评价它们对黄嘌呤氧化酶的抑制作用。每个浓度设4个复孔,使用酶标仪在295 nm波长下测定每孔吸光度,计算平均抑制率;实验重复3次,采用Graphpad prism 5.0软件计算IC_(50)值。结果表明,银杏酸C13∶0和银杏酸C15∶1对黄嘌呤氧化酶的IC_(50)值分别为31.81±1.87μmol/L和25.48±0.66μmol/L(n=3),显示了一定程度的黄嘌呤氧化酶抑制活性。     

桦褐孔菌发酵液提取物对不同细胞株的药理作用

本文采用桦褐孔菌发酵液提取物(IOFE)对人肝癌细胞株HepG_2、人胃癌细胞株SGC7901、正常组织来源的人肝细胞HL-7702,进行体外细胞试验,结果表明,IOFE在低浓度处理条件下对HepG_2和SGC7901均有抑制作用,且对SGC7901抑制效果最好;在高浓度条件下对HepG_2和SGC7901的生长具有一定的促进作用;IOFE对氟尿嘧啶损伤后的HL-7702具有非常高的修复作用,随浓度的升高,修复作用逐渐增强,在高浓度3 000μg/ml处理条件下,修复率为303.01%。因此,IOFE对肿瘤细胞的作用表现可知提取物含有复杂的成分,这些成分具有抑制或促进细胞增殖的作用,随着浓度的升高促进作用的成分占优势,但对正常细胞,甚至化疗药物损伤后的细胞却有更好的促进作用。     

甘遂根提取物对人上皮样肝癌BEL-7402的体外实验研究

通过体外培养人上皮样肝癌BEL-7402细胞,分别以加入PBS液为对照组,加人5-FU(10ug/mL)为阳性对照,加入甘遂根提取物(浓度分别为0.1、1.0、10.0、50.0、100.0ug/mL)为实验组,采用台盼蓝染色法、MTT比色法、克隆形成法以及流式细胞仪进行检测分析,以明确甘遂根提取物对BEL一7402细胞的抑制作用.结果显示,几种方法测定的结果一致,甘遂根提取物对BEL-7402细胞的生长抑制率随处理浓度的增高呈上升趋势,其中台盼蓝染色法测定的抑制率分别为71.9%、81.3%、84.4%、86.8%、100%;MTT比色法测定的抑制率分别为50.8%、52.4%、55.6%、57.1%、74.6%;克隆形成实验对克隆形成抑制率分别为44.9%、53.9%、58.1%、79.6%、86.8%.流式细胞仪测定的凋亡率分别为0、24.3%、26.5%、32.9%、100%.实验表明,甘遂根提取物对人上皮样肝癌BEL-7402细胞生长具有显著的抑制作用,而且抑制效果随提取物浓度的增加而递增.     

色胺酮卤代衍生物的合成、抗肿瘤活性及其与G-四链体DNA相互作用研究

色胺酮(Tryptanthrin,Try)是重要的天然吲哚喹唑啉类生物碱,本文首次合成了2,8-二溴色胺酮(BrTry)及8-碘色胺酮(I-Try),并研究其抗肿瘤活性;以G-四链体DNA为靶点研究其作用机制。化合物与BEL-7404、Hep G2、NCI-H460、T-24等四种肿瘤细胞株的体外抗肿瘤活性和HL-7702正常肝细胞株的毒性实验表明,Br-Try和I-Try表现出比Try的抗肿瘤活性有不同程度的增强,而对正常细胞毒性减弱的结果。Br-Try对BEL-7404、NCI-H460和T-24肿瘤细胞株表现出比Try和顺铂更强的抗肿瘤活性,IC50值在7.08~9.68μM,而I-Try只对Hep G2细胞株表现了比Try和顺铂增强的抑制活性,IC50值为15.78±0.33μM。初步的作用机制分析表明,三种化合物与G-四链体DNA有较强作用,以Br-Try最强。     

芹菜根中一种具有抗癌活性的双氨基甲酸酯

研究芹菜根(Apium graveolens L.)乙醇提取物的化学成分及其体外抗肿瘤活性。利用多种色谱方法进行分离纯化,现代波谱技术对分离得到的化合物进行结构鉴定;采用MTT法对分离出的单体化合物进行抗肿瘤实验。从芹菜根的乙醇提取物中分离得到3个单体化合物,它们的结构分别为双氨基甲酸酯AG-01 (1)佛手柑内酯(2)芹菜素(3)。化合物1为一新化合物,MTT细胞毒活性显示其对人体胃癌细胞SGC-7901和肝癌细胞BEL-7402的IC50分别为29. 6μM和32. 4μM。     

酸提高绿茶提取物对脂肪酸合酶的抑制活性

脂肪酸合酶和肥胖、癌症等人类重大疾病相关.获取高活性脂肪酸合酶抑制剂有重要应用价值.50％乙醇的绿茶提取物具有抑制脂肪酸合酶和经口服降低大、小鼠体重的功能.该提取物在酸的作用下可明显地提高其抑制脂肪酸合酶的能力.采用1 mol/L硫酸或盐酸在100℃下处理绿茶提取物,发现该提取物对脂肪酸合酶的抑制活性随时间逐步提高.在25℃至120℃温度下,提高处理温度使抑制活性提高的速度加快和程度加大. 用1 mol/L盐酸120℃处理35 min或3 mol/L盐酸100℃处理30 min可使绿茶提取物抑制脂肪酸合酶的半抑制浓度下降20倍左右,达到1 μg/ml以下.用pKa值4.76至1.27的1 mol/L浓度的4种有机酸在100℃作用150 min使绿茶提取物抑制活性分别提高到1.48至5.84倍.提高酸的浓度也使被作用的提取物的抑制活性提高的更多.表现抑制活性提高的速度及程度和氢离子浓度正相关.判断绿茶提取物在酸作用下抑制活性的提高来源于其中所含儿茶素在氢离子作用下发生了化学变化.初步实验表明其变化过程比较复杂,确定其分子机制还需进一步的研究工作.     

骆驼蓬籽蛋白提取物体外抑癌活性的研究

目的:探讨骆驼蓬籽蛋白提取物的体外抑癌活性.方法:采用MTT法检测硫酸铵沉淀的骆驼蓬籽蛋白提取物体外抗肿瘤活性,应用流式细胞术和Annexin V/PI双荧光染色法检测其对细胞凋亡的影响.结果:80%硫酸铵饱和度下的蛋白提取物对宫颈癌HeLa、食道癌Ecal09和肝癌BEL-7404细胞的IC50分别为72.11±3.88μg/mL、257.58±1.16μg/mL和174.07±1.32μg/mL.对HeLa细胞的抑制率与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.01),呈现较好的量效关系,且有促进细胞凋亡的作用.结论:骆驼蓬籽蛋白中对HeLa细胞增殖具有较好的抑制活性,可能是通过诱导细胞凋亡来发挥其抗肿瘤作用.     

新型二氢嘧啶类化合物的合成及其抗乙型肝炎病毒活性研究

以芳香氰基化合物为起始原料,经胺解、乙酰化、催化氢化、关环等步骤得到新型二氢嘧啶类化合物14个,结构通过核磁共振氢谱、质谱、元素分析确证,并利用HepG2.2.15细胞进行了体外抗HBV活性评价.结果表明部分化合物具有明显的抗HBVDNA复制作用,其中化合物5c和5n抑制HBVDNA复制的半数有效浓度分别为0.87μmol/L和0.67μmol/L.初步探讨了活性化合物的构效关系,同时运用分子排阻色谱法考察了活性化合物与病毒衣壳蛋白的相互作用.     

菜籽饼提取物抑制黑色素生成作用

为了研究菜籽饼提取物对黑色素合成的抑制作用,为菜籽饼提取物作为美白化妆品的天然添加剂提供实验依据。采用ABTS法、DPPH法检测菜籽饼提取物清除自由基的能力,测定A-375黑色素细胞中酪氨酸酶活性和黑色素含量,并利用各自的试剂盒检测A-375细胞中抗氧化相关因子(MDA, SOD, GSH)。研究结果表明:菜籽饼提取物具有清除DPPH和ABTS的能力,对DPPH和ABTS的半数抑制率分别为304μg/mL和305.8μg/mL。菜籽饼提取物具有显著的抑制A-375黑色素的作用,药物作用48 h后,其IC50为113.3μg/m L,同时能够显著的降低黑色素的含量和酪氨酸酶的活性。与空白对照组(17.66 mol/ng)相比,菜籽饼提取物能显著降低A-375细胞内MDA含量,其抑制率为9.21 mol/ng,且能够显著提高SOD的含量,当浓度为125μg/m L时,SOD的含量较空白对照组提高了36.54 U/mL,与此同时,菜籽饼提取物亦能增加GSH的含量,当浓度为62.5μg/mL时,细胞中GSH的含量为6.43 mol/ng,其含量显著高于空白对照组。因此,菜籽饼提取物在降低黑色素含量、抑制酪氨酸酶活性的同时,也能够通过显著的抗氧化能力和清除自由基的能力,抑制A-375细胞中黑色素的生成。     

吴茱萸碱抑制人结肠癌HCT-116细胞体外增殖和迁移

吴茱萸碱(Evodiamine,Evo)对人结肠癌HCT-116细胞体外增殖和转移的影响及其可能机制初探。体外培养人结肠癌HCT-116细胞株,加入Evo1.5μmol/L、3μmol/L、6μmol/L、12μmol/L、24μmol/L、48μmol/L、96μmol/L继续培养48 h,CCK-8法检测Evo对HCT-116细胞生存活性的影响;Transwell法和划痕法检测STF-118804、Evo对HCT-116细胞体外迁移的影响;RT-PCR和Western blotting检测不同浓度的Evo(0μmol/L,1.5μmol/L,3μmol/L,6μmol/L)和STF-118804(10μg/L)诱导HCT-116细胞48 h后,细胞中SIRT1、NF-кB、MMP-9蛋白的表达情况。不同浓度的Evo(1.5μmol/L,3μmol/L,6μmol/L,12μmol/L,24μmol/L,48μmol/L,96μmol/L)作用于HCT-116细胞48 h后,细胞的增殖均受到明显抑制(p0.05),且在一定范围内呈浓度依赖性;且Evo能抑制HCT-116细胞的迁移。Evo可明显下调HCT-116细胞内SIRT1、MMP-9 m RNA和蛋白的表达,上调NF-кB m RNA和蛋白的表达。体外实验表明,Evo对结肠癌细胞增殖和迁移的抑制作用是通过抑制SIRT1的表达,激活NF-кB信号通路,进而抑制MMP-9来实现的。     

细脚拟青霉代谢产物清除自由基和抑制单胺氧化酶活性的研究

用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)-TLC法和酶标仪法对一株细脚拟青霉RCEF0394发酵液甲醇提取物的清除自由基活性进行了定性和定量测定,发现该提取物具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0mg/mL,于37℃下保温10min时,它对0.4mg/mL的DPPH自由基的清除率可达75.4%。以大鼠肝脏线粒体单胺氧化酶为靶标的体外实验发现供试细脚拟青霉发酵液有较强的抑制单胺氧化酶活性,且其活性和浓度呈量效关系。该发酵液冻干品对单胺氧化酶的半数抑制浓度IC50为118.1μg/mL。其三氯甲烷提取物对单胺氧化酶的抑制活性明显强于发酵液冻干品,表明该抑制剂可能为极性较低的化合物。进一步的分型试验表明该三氯甲烷提取物对A型单胺氧化酶呈混合抑制,对B型呈竞争性抑制,其Km值分别为0.44mg/L,0.34mg/L。     

槲皮素对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的保护作用及对海马CA1锥体神经元钾通道的影响(英文)

槲皮素广泛存在于许多药用植物中,属黄酮类化合物,在临床上常用于心血管疾病的治疗。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)及DAPI染色,研究槲皮素(0.5、1、5、10μmol/L)对谷氨酸(10mmol/L)诱导的PC12细胞损伤作用的影响;并进一步研究槲皮素(0.3、3、30μmol/L)对急性分离的海马CA1锥体神经元离子通道的作用。MTT实验结果显示,槲皮素可提高谷氨酸处理组PC12细胞的存活率,并呈现为浓度和时间依赖性(P0.05);而槲皮素(5μmol/L)与谷氨酸(10mmol/L)共孵育PC12细胞后,DAPI染色结果表明槲皮素可减弱谷氨酸对PC12细胞的损伤。对电生理结果显示,槲皮素对瞬时外向钾电流(IA)和延迟整流钾电流(IK)有显著的抑制作用(P0.05),表现为浓度依赖性。以上结果提示,槲皮素可能通过抑制海马锥体神经元的外向钾电流进而对谷氨酸诱导的神经损伤起保护作用,这也说明了槲皮素对缺血样损伤的神经具有保护作用。