PC-1基因在前列腺癌细胞系LNCaP和C4-2不同细胞周期的表达

目的:检测PC-1基因在前列腺癌细胞周期中各时间点的表达变化。方法:用200 ng/mL诺可唑(nocoda-zole)处理前列腺癌细胞系LNCaP和C4-2,16 h后使细胞处于G2/M期,在不同时间点收获细胞,分别进行流式分析和Western印迹,检测PC-1基因的表达。结果:流式分析和Western印迹结果显示,在G2/M期,LNCaP和C4-2前列腺癌细胞系中PC-1基因高表达。结论:PC-1基因的表达与前列腺癌细胞的细胞周期有关,提示PC-1可能在细胞周期调控中发挥作用。     

敲低前列腺癌相关基因PC-1的表达抑制前列腺癌细胞C4-2雄激素非依赖性生长

目的:研究敲低癌基因D52家族成员PC-1的表达对前列腺癌细胞雄激素非依赖性生长的影响。方法:利用RNA干扰技术构建PC-1稳定低表达的C4-2细胞株;利用四唑盐(MTT)比色实验检测敲低PC-1基因表达对C4-2细胞雄激素非依赖生长的影响。结果:敲低PC-1表达抑制前列腺癌C4-2细胞的生长,并降低了C4-2细胞雄激素非依赖性生长的能力。结论:PC-1基因参与了前列腺癌向雄激素非依赖阶段发展和维持的过程,为进一步研究PC-1在促进前列腺癌细胞发生发展过程中的作用奠定了基础。     

PC-1在前列腺癌细胞中促进c-myc基因的表达

前列腺癌相关基因PC-1(Prostate and colon gene1)是属于癌基因D52家族成员,具有促进前列腺癌细胞雄激素非依赖性生长的功能。为了研究PC-1发挥这种生物功能的分子机制,文章在PC-1高表达的LNCaP-pc-1及对照LNCaP-zero细胞中,利用RT-PCR和Western blotting等方法检测c-myc基因表达;提取两细胞胞质和胞核蛋白,利用Western blotting分析c-myc上游调节蛋白β-catenin变化;利用c-Myc蛋白抑制剂10058-F4作用前列腺癌细胞C4-2,Western blotting检测PC-1蛋白表达变化。发现PC-1促进c-myc基因表达,并促进β-catenin入核;c-Myc蛋白抑制剂10058-F4可抑制PC-1的表达。结果表明:PC-1在前列腺癌中促进c-myc基因的表达,并且这种促进作用可能是通过Wnt/β-catenin信号通路实现的。同时,PC-1与c-Myc蛋白间可相互促进,进一步促进前列腺癌细胞雄激素非依赖性生长。     

PC-１基因表达增强C4-2B前列腺癌细胞生存

建立稳定表达外源PC-１基因的人前列腺癌骨转移C4-2B细胞模型,初步探讨PC- １基因表达对前列腺癌发展的影响.通过脂质体介导的方法,将融合PC-１基因的真核表达载体pcDNA3.1PC-１稳定转染C4-2B细胞,Western 印迹和RT-PCR技术,分别从蛋白水平和RNA水平确定外源PC-１基因表达. MTT和软琼脂集落形成能力等一系列方法,研究PC-１基因的功能,RT-PCR和实时定量PCR检测前列腺癌发生发展相关基因表达的变化. 结果表明,PC-１基因的高表达能够诱导雄激素受体（AR）调控基因和一系列重要的信号通路成员基因PSA、PSMA、NKX31、Jagged1、EphA3、SGEF和 NOTCH3等表达发生变化. 实验结果初步证明,PC-１基因表达在晚期前列腺癌中,以及在雄激素非依赖的转变中可以发挥作用,PC-１基因表达可调控一些重要信号通路.对PC-１基因功能深入研究将有可能为发现新的前列腺癌的诊断治疗分子靶标提供线索.     

miR-182在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察前列腺癌组织及不同前列腺癌细胞系中miR-182的表达,并探讨下调其表达对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测30例前列腺癌组织和30例相应的癌旁组织以及前列腺正常上皮RWPE-1细胞、前列腺癌PC-3、LNCa P和DU145细胞中miR-182的表达,进一步采用Lipfectamine 2000脂质体转染miRNA-182 inhibitor和阴性对照miRNA于PC-3细胞后,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹(Western blot)法检测转录因子FOXO1、血管内皮生长因子(VEGF)和抑癌基因p53蛋白的表达。结果:miR-182在前列腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P0.05);miR-182在前列腺癌细胞系PC-3、LNCa P和DU145中的表达均高于前列腺正常上皮细胞RWPE-1(P0.05),其中PC-3细胞中miR-182表达水平最高。转染miRNA-182 inhibitor至PC-3细胞成功下调miR-182表达后,细胞的增殖能力明显受到抑制,细胞凋亡能力明显增强,FOXO1表达水平显著升高,VEGF和p53的表达明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:miR-182在前列腺癌组织及细胞中呈高表达,下调miR-182的表达可能通过增加FOXO1的表达并减少VEGF和p53的表达,抑制前列腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

癌基因D52家族新基因PC-1在前列腺癌细胞系LNCaP和C4-2B的G2／M期高表达

目的：检测癌基因D52家族新基因船一,在细胞周期各时相的表达变化。方法：用1mmol／L羟基脲处理前列腺癌细胞系LNCaP和C4-2B 40h,使细胞同步化于G1／S期,在药物撤除后0-16h不同时间点收获细胞,分别进行流式分析和Westernblot检测。结果：流式分析和Westernblot检测在LNCaP和C4-2B细胞系中得到了趋势一致的结果,印PC-1基因在GVM期高表达。结论：PC-1基因的表达与前列腺癌细胞的细胞周期有关,表明PC-1蛋白可能在G2／M期发挥作用。     

同源异型框基因与动物早期发育

同源异型框基因广泛存在于真核生物中,编码一类转录调节蛋白。同源异型框基因在动物早期发育的基因调控中起着非常重要的作用。在动物胚胎发育过程中,同源异型框基因的表达具有复杂的时空模式和调控系统。Antp族基因对于早期胚胎发育中的模式建成,器官分化等具有重要意义。     

一种嵌合型调控元件在肿瘤靶向基因治疗中的应用

肿瘤靶向基因治疗成功的关键是调控治疗基因在肿瘤细胞中特异、高效地表达。首次构建一种嵌合型表达调控元件,旨在转录水平、转录后水平和翻译水平上实现联合调控目的基因在肿瘤细胞中特异性表达。体外实验表明,在前列腺癌细胞系LNCa P中,该调控元件可将报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和荧光素酶(luciferase)的肿瘤表达特异性分别提高420%和480%。体外细胞存活实验表明,运用该元件调控单纯疱疹病毒-1胸腺激酶(HSV-1 TK)的表达能特异性杀伤LNCa P细胞,验证了该元件可成功用于治疗基因的肿瘤靶向表达。     

p53负调控前列腺癌细胞中PC-1基因的表达

在前列腺癌进展中发生的PC-1基因表达失调和p53基因突变,提示这两个事件之间可能存在的联系.用依托泊苷处理前列腺癌LNCaP细胞后,PC-1蛋白的表达受抑制;瞬时转染分析表明野生型p53负调控PC-1启动子的转录活性;缺失突变分析将PC-1基因启动子上受p53负调控的区域定位在翻译起始位点上游757 bp～323 bp之间.缺失PC-1启动子上的雄激素受体反应元件并没有消除p53对其转录活性的抑制作用;无论p53是否存在,组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理LNCaP细胞后可以导致PC-1启动子转录活性升高.因此,p53和去乙酰化酶可以独立抑制PC-1启动子活性.这些研究结果表明,野生型p53负调控PC-1基因启动子的转录活性,而前列腺癌进展过程中p53突变可能和PC-1基因的表达失调有关.     

GRP78在食管癌细胞ECA-109增殖过程中的功能研究

食管癌在中国是高发性肿瘤,并具有较高的致死率。肿瘤细胞的持续增殖与细胞增殖失调密切相关。肿瘤细胞在增殖过程中需要合成大量蛋白质,葡萄糖调节蛋白78(glucose regulatedprotein,GRP78)作为分子伴侣,在蛋白质的折叠、组装、修饰和错误折叠蛋白的降解过程中发挥着重要作用。该研究通过构建pGRP78-EGFP-N1重组质粒,瞬时转染ECA-109细胞,研究GRP78过表达对细胞增殖能力的影响;采用RNA干扰技术,瞬时转染靶向GRP78的siRNA,研究敲低GRP78对细胞增殖能力的影响。该研究发现GRP78过表达后,更多的细胞从G1期进入S期和G2/M期,细胞增殖速率加快,细胞克隆形成率亦明显提高;敲低GRP78后,细胞更多地被阻滞在G1期而无法进入S期和G2/M期,细胞增殖速率减慢,细胞克隆形成率降低。GRP78可能通过调节细胞周期而促进ECA-109细胞的增殖。     

UHRF1对前列腺癌PC-3细胞生物学特性的影响及相关机制

为了探讨泛素样含植物同源结构域和环指结构域1蛋白(ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1, UHRF1)对前列腺癌PC-3细胞生物学功能的影响及相关机制,我们用含有UHRF1和shRNA-UHRF1的慢病毒颗粒分别感染PC-3细胞,构建UHRF1沉默或过表达的稳转细胞株模型。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)和细胞免疫荧光实验验证感染后UHRF1表达水平和检测UHRF1对DNMT1、p16^INK4A的mRNA及蛋白表达水平的影响。CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验和流式细胞术实验研究UHRF1对PC-3细胞增殖、侵袭迁移和周期凋亡的影响。结果显示,过表达UHRF1能够显著促进前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并抑制细胞凋亡,调控细胞处于G2/M期,并且上调DNMT1表达水平,下调p16^INK4A表达水平,而沉默UHRF1的表达则作用相反。总之,UHRF1可能通过抑制p16^INK4A的表达促进前列腺癌...     

miR-221对于前列腺癌细胞的增殖及侵袭能力作用的研究

目的:研究miR-221不同时期前列腺癌细胞系中表达差异,探讨miR-221在雄激素非依赖前列腺癌的生长及侵袭能力中发挥的作用.方法:Northern检测雄激素依赖性与雄激素非依赖性前列腺癌细胞系中差异表达的miRNA.在不同前列腺癌细胞系中,通过CCK-8及流式细胞学检测基因转染前后miR-221对于前列腺癌细胞系的生长影响,以及通过侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果:①Northern显示LNCaP-AI细胞中miR-221水平明显高于LNCaP细胞;②miR-221促进LNCaP及LNCaP-AI细胞的增殖能力③下调miR-221会减弱LNCaP-AI细胞的侵袭能力.结论:miR-221促进不同时期前列腺癌细胞系的增殖,并增强LNCaP-AI的侵袭能力.     

miR-126 调控前列腺癌机制研究

miR-126通过靶向作用于表皮生长因子域7(EGFL7)、同源框A9(HOXA9)、胰岛素受体底物-1(IlLS-1)、p85-B基因等,在转录后水平调控靶基因表达,在肿瘤形成中起重要作用。前列腺癌细胞中高表达miR-126,能明显下调VEGF-A、EGLF7、HOXA9、VCAM-l等与肿瘤生长、转移密切相关的蛋白分子。miR-126作为抑癌因子,在多种肿瘤中均下调。其抑癌作用及机制在肺癌、白血病、乳腺癌、宫颈癌等中均已得到证实。本课题拟对miR-126调控前列腺癌机制做一综述。     

1α,25(OH)_2D_3抑制前列腺癌机制研究进展

1α,25(OH)_2D_3是一种类固醇激素,在抑制前列腺癌发生和发展中具重要作用。1α,25(OH)_2D_3抑制前列腺癌涉及多方面的分子过程,包括G1/S细胞周期阻滞、促癌细胞凋亡、抗血管生成和阻止癌细胞迁移等。本文将从维生素D_3合成代谢羟化酶表达调控、VDR基因多态性、雄激素及受体调控、抗炎因子表达调控、胰岛素样生长因子及相关结合蛋白表达调控等方面阐述了近年来1α,25(OH)_2D_3抑制前列腺癌分子机制的研究进展,为维生素D_3预防和治疗前列腺癌的应用提供了参考。     

一个新的前列腺癌细胞系分泌蛋白磷酸甘油酸酯激酶的鉴定与分析

目的：建立前列腺癌细胞系C4-2B分泌蛋白双向电泳图谱,并对感兴趣的蛋白进行质谱鉴定,对其表达调控进行初步分析。方法：收集前列腺癌细胞系C4-2B的分泌蛋白,利用双向电泳结合质谱的方法对感兴趣的蛋白进行鉴定,而后利用Western blot等方法对结果进行验证和分析。结果：得到较为稳定的前列腺癌细胞系分泌蛋白C4-2B双向电泳图谱,鉴定了一个新的前列腺癌细胞系分泌蛋白磷酸甘油酸酯激酶,并发现1nmol/L人工合成雄激素R1881可上调其表达。结论：建立了简便的前列腺癌细胞系分泌蛋白双向电泳及质谱分析的研究方法,初步证明磷酸甘油酸酯激酶是前列腺癌细胞系C4-2B新的分泌蛋白,且人工合成雄激素R1881可诱导其表达上调。     

多囊蛋白-1氨基段融合蛋白对大鼠肾小球系膜细胞周期及其调控基因表达的影响

研究多囊蛋白-1氨基段(PC-1NF)融合蛋白对大鼠肾小球系膜细胞(MC)周期及其调控基因表达的影响。应用Brdu-ELISA法检测PC-1NF融合蛋白对MC增殖的作用,流式细胞术观察PC-1NF融合蛋白对MC周期的影响,实时荧光定量RT-PCR方法检测PC-1NF融合蛋白对MC周期调控基因cyclinD1、p21WAF1表达的作用。结果表明PC-1NF融合蛋白能抑制MC增殖,呈现良好的时效与量效关系;PC-1NF融合蛋白能影响MC周期,使G0/G1期细胞增加,S期细胞减少;4μg/mlPC-1NF融合蛋白作用后,cyclinD1mRNA水平比对照组明显下调(P<0.05);而p21WAF1mRNA水平比对照组显著上调(P<0.01)。PC-1NF融合蛋白能抑制MC增殖及周期的进展,其机制可能是通过下调cyclinD1、上调p21WAF1的表达,抑制细胞通过G1-S调控点而介导的。     

miRNA-191对前列腺癌的增殖、迁移侵袭能力的影响及其机制*

目的:观察miRNA-191对前列腺癌的增殖、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其机制。方法:分别检测4种人前列癌细胞系(PC-3、DU-145、LNCa P、22RU1)及人正常前列腺细胞RWPE-2中miRNA-191的表达水平,并选择前列腺癌细胞系PC-3作为实验对象。将PC-3细胞分为3组:空白对照组(不转染)、miRNA-191 NC组(Inhibitor NC转染PC-3细胞)、miRNA-191 Inhibitor组(miRNA-191 Inhibitor转染PC-3细胞),每组设置3个复孔。采用RT-qPCR法检测PC-3细胞miRNA-191和PLCD1的mRNA表达水平;采用CCK8法检测PC-3细胞增殖水平;采用划痕实验和侵袭实验分别检测PC-3细胞迁移能力和侵袭能力;通过Targetscan靶基因预测网站,筛选PLCD1作为miRNA-191的靶向蛋白,并用双荧光素酶靶标实验验证;采用Western blot法检测PC-3细胞PLCD1的蛋白表达。结果:与RWPE-2细胞相比,人前列癌细胞中miNRA-191的表达水平显著升高(P＜0.05),且miRNA-191的表达水平在PC-3中较其他3种细胞系显著上调(P＜0.05)。抑制miRNA-191的表达水平后,PLCD1表达水平显著升高,PC-3细胞增殖能力受到抑制,迁移和侵袭能力较空白对照组和miRNA-191 NC组显著降低(P＜0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,PLCD1基因是miRNA-191的靶基因。结论:miRNA-191通过靶向PLCD1促进前列腺癌PC-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

EphA3受体截短突变体variant b在前列腺癌细胞中的分泌表达

目的:验证EphA3受体截短突变体variant b是否是一种分泌蛋白,并探索其内源分泌的特点,在细胞水平看其是否有作为前列腺癌血清标志物的潜质。方法:构建EphA3 variant b真核表达载体,应用标签抗体、特异性抗体和Western印迹检测前列腺癌细胞培养液中EphA3 variant b的表达,用RT-PCR方法分析EphA3 variant b在8种细胞系中的表达谱和对雄激素刺激的应答。结果:验证了EphA3 variant b是一种分泌蛋白,在雄激素受体阳性的前列腺癌细胞系中特异性表达,雄激素以剂量依赖方式诱导EphA3 variant b表达。结论:EphA3 variant b是一种分泌蛋白,其表达与雄激素受体信号通路相关,有作为前列腺癌血清标志物的潜质。     

适配体介导脂质体靶向递送siRNA的研究

为探讨适配体介导的脂质体靶向递送siRNA的可行性,采用前列腺癌细胞膜表面抗原(PSMA)的适配体A10-3.2与脂质体结合,构建适配体-脂质体靶向递送体系(Apt-LP),并利用Apt-LP递送p EGFP-N1质粒和Bcl2 siRNA到前列腺癌细胞LNCa P(PSMA+)和PC-3(PSMA-),转染48h后,用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白的表达,q PCR检测Bcl2 mRNA表达,蛋白印记法检测Bcl2蛋白表达,Hoechst 33258核染法分析体外抗肿瘤活性。结果显示:与脂质体递送体系相比,Apt-LP显著提高递送p EGFP-N1质粒和Bcl2 siRNA到靶细胞LNCa P(PSMA+)的效率;显著提高Bcl2 siRNA诱导的靶细胞LNCa P(PSMA+)Bcl2基因沉默效应,更有效的诱导靶细胞LNCa P(PSMA+)凋亡。结果表明:Apt-LP是一种有效的siRNA靶向递送体系,具有潜在的临床应用价值。     

炎症上调NPC1加重高脂负荷下HMCs胆固醇积聚致细胞损伤机制

该研究观察炎症因子IL1-β对高脂负荷下人肾脏系膜细胞(human glomerular mesangial cells, HMCs)C型尼曼匹克蛋白1(Niemann-pick protein c1, NPC1)表达水平的影响,并初步探讨NPC1介导的胆固醇积聚致细胞损伤的作用机制。体外培养HMCs分为正常对照组、高脂组、高脂+炎症组。Western blot测NPC1蛋白含量;酶法测细胞及内质网胆固醇水平; CCK8法测细胞增殖;流式细胞术测细胞周期;荧光定量PCR测NPC1、GRP78、PERK、ATF6、FN、Col IV mRNA;免疫荧光技术测GRP78、FN的表达水平。予U-18666A干预NPC1的功能,观察内质网胆固醇水平、细胞增殖能力、GRP78、FN、Col IV mRNA水平的变化。结果显示,高脂促进NPC1蛋白及mRNA的表达水平,同时细胞总胆固醇及内质网胆固醇浓度增加,增殖加快、S期比例增加、内质网应激相关分子—GRP78、PERK、ATF6 mRNA及系膜基质成分—FN、Col IV mRNA水平均增加, GRP78、FN的荧光强度也增加;炎症进一步上调高脂负荷下上述各指标水平。U-18666A干预后可减轻高脂和炎症导致的内质网胆固醇积聚及细胞损伤。综上,炎症可通过上调NPC1的表达水平,加重高脂负荷下肾系膜细胞及内质网胆固醇积聚,诱发细胞损伤。