右美托咪定对脓毒症大鼠血线粒体能量代谢相关基因表达的影响

目的基于PCR Assay芯片技术,分析右美托咪定对脓毒症大鼠血线粒体能量代谢相关基因表达变化并推论其可能的作用机制。方法将健康雄性Wistar大鼠30只,按随机数字表法分成3组,即对照组、脓毒症组、右美托咪定预干预组,每组10只。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症大鼠模型,假手术组仅开腹、关腹,不行CLP。其中右美托咪定预干预组则在造模前及造模后2h于腹腔注射右美托咪定40μg/kg,脓毒症组及假手术组肌注平衡液5ml/kg,3组均于术后24h留取血标本,并分离线粒体后提取RNA行PCR Assay基因芯片检测。结果脓毒症组大鼠血液线粒体能量代谢相关基因如Ndufa1、Ndufab1、Ndufb2、Ndufs8、Sdha、Uqcrb、Cox8a、Atp5a1、Atp5i的Fold值下调明显,右美托咪定干预后大鼠血液线粒体能量代谢相关基因如Ndufa1、Ndufab1、Ndufb2、Ndufs8、Sdha、Uqcrb、Cox8a、Atp5a1、Atp5i的Fold值有升高趋势。结论右美托咪定可能通过调节线粒体能量代谢相关基因的表达,从而起到对脓毒症大鼠的保护作用。     

亚硒酸钠对HepG2细胞脂质和葡萄糖代谢相关基因表达的影响

硒是人和动物必需的微量元素,不同浓度的硒可以调节猪、羔羊、小鼠、人和酵母中与脂质和葡萄糖代谢相关基因的表达水平,但是目前尚不清楚低剂量硒对HepG2细胞脂质和葡萄糖代谢相关基因的影响.因此,我们通过实时荧光定量PCR和基因组学分析,研究了亚硒酸钠对HepG2细胞中脂质和葡萄糖代谢相关基因表达水平的影响.结果表明,脂质代谢相关基因FAR1,DGKD和HILPDA在24h和36 h时表达增加,葡萄糖代谢相关基因UGDH,IRS-2和PEPCK在24 h和36 h时表达增加.与对照组相比,0.1 μmol/L亚硒酸钠处理HepG2细胞24 h可以增加TRAP1,HILPDA 和 PEPCK的表达水平,它们在肿瘤发生发展中起着重要的作用.此外,转录组学分析表明,亚硒酸钠可以改变代谢调控网络,包括萜类骨架的生物合成、胰岛素抵抗、磷酸肌醇代谢和细胞周期途径等.以上结果表明,0.1 μmol/L亚硒酸钠可能会影响HepG2细胞的脂质和葡萄糖代谢,影响肿瘤的发生发展.     

线粒体DNA单体型M8a对转线粒体细胞线粒体能量代谢的影响

为了观察线粒体DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)单体型M8a对细胞线粒体能量代谢的影响,该研究利用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)介导血小板–细胞融合技术,构建mt DNA单体型M8a和G2a转线粒体细胞(transmitochondrial cytoplasmic hybrid cell,cybrid)模型。后续运用Real-time PCR检测细胞mt DNA拷贝数和RNA转录水平,多功能酶标仪检测细胞活性氧类(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),线粒体呼吸测定仪检测细胞内源性氧呼吸(oxygen consumption,OC)情况。结果表明,与G2a细胞相比,M8a细胞mt DNA拷贝数和线粒体轻链(L链)转录水平明显降低(P0.01),细胞基础耗氧量、ATP合成耗氧量、最大氧呼吸能力和MMP显著下降(P0.05),细胞ROS水平显著上升(P0.05)。mt DNA单体型M8a细胞的线粒体呼吸功能受损,可能增加了该单体型人群罹患2型糖尿病的风险。     

TAK1siRNA对C2C12细胞内TAK1基因表达的影响

目的:高效下调TAK1基因表达的小干扰RNA(siRNA)分子的获得.方法:采用脂质体转染方法,将3对(siRNA ID#94455、siRNA ID # 94549、siRNA ID # 189006)人工合成的TAK1基因特异的小干扰RNA(siRNA)分子分别导入小鼠成肌细胞C2C12中,采用实时荧光定量PCR方法分析细胞内TAK1基因的相对表达.结果:和对照组相比,siRNA ID # 94455、siRNA ID # 94549和siRNA ID # 189006分别下调了细胞内TAK1基因的mRNA表达水平33.34%、46.73%和79.97%.结论:实验获得了能够高效下调TAK1基因表达的siRNA.     

低温处理对异育银鲫腹部脂肪组织能量代谢相关基因表达的影响

本文以异育银鲫为研究对象,将其在4 ℃水温条件下暂养12 h,研究其脂肪组织在低温环境下的基因表达变化。HE染色切片和透射电镜拍照结果显示,并未观察到由低温处理导致的组织学显著变化,如明显的线粒体结构增多现象。利用Western blot分析手段,检测了常温和低温处理异育银鲫腹部脂肪组织中的线粒体蛋白分子COX IV的表达水平,发现经过低温处理,异育银鲫脂肪组织中的线粒体蛋白COXIV略有增加。荧光定量PCR的结果显示,在低温环境下,异育银鲫腹部脂肪组织中的Cell Death Inducing DFFA Like Effector A（cidea）, Peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1 alpha（pgc1）, Peroxisome Proliferator Activated Receptor Gamma（pparg）, Peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-beta（ppargca1）, uncoupling protein 1（ucp1）, uncoupling protein 2（ucp2）和uncoupling protein 3（ucp3）等基因的转录表达均出现了显著上调。这是首次证实鱼类腹部脂肪组织中的UCP分子均可以被低温诱导上调表达。     

蛋白激酶C对CNE-2Z细胞p53基因表达的影响

用抗人ｐ５３蛋白单抗,进行免疫细胞化学染色,研究了蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）对ＣＮＥ－２Ｚ细胞ｐ５３基因表达的影响。结果发现：对照组Ｐ５３蛋白阳性细胞百分比为６７．６９±２．９７。ＰＫＣ催化区抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）和调节区抑制剂Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ）终浓度分别为２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ和４×１０－５ｍｏｌ／Ｌ诱导细胞２４ｈ后,Ｐ５３阳性细胞百分比分别为３０．４４±４．２５和２９．１９±２．３９,较对照组均明显降低,Ｐ＜０．０１。用终浓度为２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ的ＴＰＡ和终浓度为４ｕｇ／ｍｌ的ＯＡＧ分别作用２４ｈ后,Ｐ５３阳性细胞百分比分别为３３．７５±４．３４和６８．１８±４．４２,前者较对照组明显降低,Ｐ＜０．０１,后者变化不明显。阳性细胞中对照组和ＯＡＧ组以胞核和胞浆均着色为主,而ＳＳ、ＳＴ和ＴＰＡ组以胞核着色为主。以上结果表明：突变型ｐ５３基因在ＣＮＥ－２Ｚ细胞中有较高表达;通过抑制细胞ＰＫＣ活性和耗竭ＰＫＣ含量后,均可降低ｐ５３基因的表达;ＰＫＣ激活剂ＯＡＧ对该细胞ｐ５３基因的表达无明显影响。     

miRNA对C3H10T1/2细胞成软骨分化相关基因表达的影响

目的探讨miR-30c-5p介导的C3H10T1/2细胞成软骨分化相关基因表达的影响。方法取C3H10T1/2细胞系并转染miR-30c-5p后,RT-qPCR验证miR-30c-5p相关的成软骨基因。结果转染miR-30c-5p诱导第7、14、21天时,RT-qPCR检测软骨标志物acan、sox9、col2a1mRNA的基因表达均显著高于对照组和过表达组。结论抑制表达阳性组的miR-30c-5p促进了C3H10T1/2细胞的成软骨基因的表达。     

不同功率的激光刺激对小鼠C2C12成肌细胞耗氧率水平的影响及机制

目的：探讨不同功率的低强度650 nm激光刺激对C₂C₁₂成肌细胞耗氧率水平和相关蛋白的影响及其机制。方法：以体外培养的C₂C₁₂小鼠成肌细胞作为实验对象,以4×10⁵个/孔接种于牵张6孔板中,采用输出功率5 mW,波长650 nm的二极管激光进行单次刺激,激光照射剂量分别0 J/cm²（0 min）、0.4 J/cm²（12.8 min）、0.8 J/cm²（25.6 min）。实验结束后,采用耗氧率试剂盒（Luxcel Biosciences）检测细胞耗氧率;提取细胞总蛋白,采用Western blot技术检测成肌调节因子（MyoD）、过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子1α（PGC-1α）、雷帕霉素靶蛋白和磷酸化蛋白（p-mTOR/mTOR）表达。结果：与对照组相比,低剂量组细胞氧化耗氧率结果、MyoD、PGC-1α蛋白表达显著增加（P<0.05）,高剂量组MyoD、PGC-1α蛋白表达显著增加（P<0.05）,p-mTOR/mTOR蛋白显著降低（P<0.05）。结论：较低剂量（0.4 J/cm²）的650 nm低强度激光增强了细胞氧化功能水平,并对细胞分化相关蛋白有一定影响。其机制可能与适宜的激光刺激影响PGC-1α蛋白的表达,进而影响线粒体氧化呼吸有关。     

有氧运动对衰老大鼠骨骼肌线粒体能量代谢的影响

目的：探讨有氧运动对衰老大鼠骨骼肌线粒体能量代谢的影响。方法：将20只12月龄的雌性Wistar大鼠随机分为老年安静组（AC,n=10）及老年运动组（AE,n=10）,另取10只2月龄的雌性Wistar大鼠为青年安静组（YC,n=10）;安静组大鼠进行正常饲养,运动组大鼠进行坡度为5°,速度为15.2 m/min,第1天运动15 min、第2天运动30 min、从第3天开始每天运动45 min,每周6 d,共12周。12周后所有大鼠断头处死,取腓肠肌样本,差速离心法提取线粒体,测定SOD和GSH-Px活性、MDA含量、三羧酸循环限速酶（CS、ICD和α-KGDHC）活性及呼吸链酶复合体（RCCⅠ~Ⅳ）活性。结果：①与YC组相比,AC组骨骼肌线粒体SOD活性和MDA含量显著增加（P<0.05）,CS和α-KGDHC活性均显著降低（P<0.05）,RCCⅠ、RCCⅡ和RCCⅣ活性均显著下降（P<0.05）,RCCⅢ活性显著升高（P<0.05）;AE组骨骼肌线粒体SOD、GSH-Px活性和MDA含量均显著增加（P<0.01）,CS、ICD和α-KGDHC活性均显著升高（P<0.01）,RCCⅠ~Ⅳ活性均显著升高（P<0.01）。②与AC组相比,AE组骨骼肌线粒体SOD、GSH-Px活性均显著升高（P<0.05）,MDA含量显著下降（P<0.05）,CS、ICD、α-KGDHC和RCCⅠ~Ⅳ活性均显著升高（P<0.01）。结论：有氧运动可以提高老年大鼠骨骼肌线粒体抗氧化能力,降低脂质过氧化水平,提高三羧酸循环及呼吸链功能,促进线粒体能量代谢,延缓衰老过程中线粒体的退行性变化。     

白花蛇舌草对人胃癌细胞MNK-45线粒体膜电位及凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨白花蛇舌草(注射液)对人胃癌细胞MNK-45线粒体膜电位及凋亡相关基因表达的影响。方法:将人胃癌细胞MNK-45分成4组,每组设置3个复孔,对照组为未加入白花蛇舌草的MNK-45细胞,3组实验组分别加入终浓度为20、30、40μg/ml白花蛇舌草的MNK-45细胞,各组在5%的CO₂培养箱中孵育48 h后,利用激光共聚焦显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测线粒体膜电位,qRT-PCR检测Cytochrome C (Cyt c)、caspase3和caspase9基因的表达变化,Western blot检测Cytochrome C (Cyt c)、caspase3和caspase9蛋白的表达变化。结果:与对照组相比,终浓度为20、30、40μg/ml的各白花蛇舌草处理组,其MNK-45细胞的线粒体膜电位均明显降低(P<0.01),Cyt c、caspase3和caspase9的基因表达均明显上调(P<0.01)、蛋白表达也均显著升高(P<0.05或P<0.01),40μg/ml的白花蛇舌草处理组的表现最佳。结论:在终浓度为20～...     

绿豆子叶线粒体发育过程中腺苷酸的变化及其对细胞能量代谢的影响

本文研究了绿豆子叶线粒体发育过程中腺苷酸能荷(AEC)的变化及其和细胞能量状态的关系。观察到吸胀2小时的绿豆子叶线粒体发育不完全,吸胀12小时线粒体内膜出现明显的内嵴。随着线粒体完整性的增加,H~ -ATPase 的活性明显增大,细胞的 ATP 水平也明显提高,AMP 水平下降,AEC 值剧增,但此时线粒体本身的腺苷酸水平及 AEC 值变化不大。经1×10~(-4)mol/1和5×10~(-4)mol/1 DNP 处理的子叶,细胞中 ATP 含量大大降低,AMP 增多,AEC 随之下降,而线粒体的腺苷酸及 AEC 仍然保持衡定,腺苷酸激酶(AK)的活性不但不受 DNP 的抑制,反比对照增加约50%。线粒体能量状态的维持可能受 AK 的调节。     

低氧抑制C2C12细胞的体外分化

目的:研究低氧环境对C2C12细胞分化的影响,为探讨肌肉的发生和骨骼肌的损伤修复机理提供理论依据.方法:培养C2C12细胞,分别在常氧和低氧(3%O2)条件下诱导分化.免疫细胞化学方法检测成肌细胞终末分化的标志蛋白MI-IC(肌球蛋白重链)的表达;Western blot检测MHC以及MRFs(成肌调控因子)的表达.结果:在常氧条件下诱导分化的C2C12细胞融合形成肌管并表达MHC蛋白,而在低氧条件下培养的C2C12细胞几乎很少融合形成肌管并表达MHC蛋白;同时低氧下调了C2C12细胞中MRFs的表达.结论:低氧抑制了C2C12细胞的体外分化.     

C2C12 细胞胰岛素增敏的机制

目的:观察口服葡萄糖负荷对小鼠小肠组织网膜素基因表达的影响及网膜素对C2C12肌管细胞胰岛素敏感性的影响,并进一步探讨其机制。方法:半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测小鼠小肠组织网膜素mRNA的表达;葡萄糖转运实验观察网膜素对C2C12肌管细胞胰岛素敏感性的影响;Western blot检测Akt(Ser473)的磷酸化水平。结果:口服葡萄糖负荷30min后小鼠小肠组织网膜素基因表达显著减低(P<0.05),而60min后恢复至负荷前水平;葡萄糖转运实验发现:网膜素作用10min对C2C12肌管细胞基础葡萄糖转运无影响,但显著增加了胰岛素刺激的葡萄糖转运(P<0.05);Western Blot发现:网膜素和AICAR均显著增加了C2C12肌管细胞Ak(tSer473)的磷酸化水平(P<0.05)。结论:网膜素作为一种胃肠激素还受到葡萄糖负荷的调节,在C2C12肌管细胞,网膜素可通过增加Akt的磷酸化发挥胰岛素增敏作用。     

磷和葡萄糖及细胞分裂素对拟南芥SEN1基因表达的影响

拟南芥SEN1基因受衰老诱导.将该基因启动子融合报告基因萄聚糖酶(glucuronidase,GUS)基因转入拟南芥,通过染色并测定GUS活性发现,缺氮、缺磷、缺钾诱导叶中SEN1表达,而只有缺磷能导根中SEN1表达.缺磷对根叶中SEN1的诱导被3%葡萄糖和细胞分裂素抑制.3%葡萄糖胺在根和叶中均诱导SEN1表达,外源细胞分裂素不能抑制这种效应.结果表明:SEN1基因可受缺磷信号特异调控,并受糖信号和细胞分裂素负调控;葡萄糖胺能大大促进根和叶中SEN1表达,且不受细胞分裂素的负调控.     

不同HCV基因型C蛋白在HepG2细胞引起基因表达改变的初步研究

目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)不同基因型C蛋白在HepG2细胞中的基因表达。方法:分别构建能在HepG2细胞表达HCV-1b、HCV-2a和HCV-4d等3种基因型C蛋白的重组体,将Affymetrix公司人基因芯片HG-U133A和HG-U133B用于本研究。结果:3种C蛋白均可引起不同基因上调和下调改变。3种C蛋白表达如两两相比,有若干相同基因表达改变;如三者相比,有PPM1A、TNNI2、ZNF236、FSCN1基因表达出现相同改变。结论:HCV不同基因型C蛋白所引起的基因表达谱各有特征,主要涉及分子转运、信号转导、致病或癌基因等,这对从基因表达层面认识HCVC蛋白的功能及HCV致病机制均有重大帮助。     

温肾咳喘片主要成分对HepG2细胞中CYP相关基因表达的影响

观察温肾咳喘片组方中5种主要单体成分甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚、蛇床子素和 欧前胡素对细胞色素P450(cytochrome P450, CYP) 1A2,2D6,2E1和3A4基因表达的影 响. 采用实时荧光定量PCR技术检测HepG2细胞中药物处理后各CYP mRNA的表达.厚朴酚 、和厚朴酚、蛇床子素和欧前胡素在不同浓度均能明显的诱导CYP2E1和CYP3A4,同时欧 前胡素也能诱导CYP1A2的表达,而甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚、蛇床子素和欧前胡素在 不同浓度对CYP2D6的表达均具有较弱的抑制作用.甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚、蛇床子 素和欧前胡素能明显影响CYP1A2、2D6、2E1或3A4的表达.此研究为中西药物代谢性相互 作用及毒理学的研究提供实验依据.