十二烷基硫酸钠协同微波-酶法提取布渣叶总黄酮

采用十二烷基硫酸钠(SDS)协同微波-酶法提取布渣叶总黄酮,选取微波辐射时间(X1)、SDS质量分数(X2)、液固比(X3)、恒温水浴提取时间(X4)、酶解时间(X5)进行U15(54×3)混合水平均匀试验设计,利用偏最小二乘法(PLS)处理试验数据,建立数学模型,确定提取的最优条件并进行验证;另外,将优化后的提取结果与其他提取方法进行比较.研究结果表明:优化的提取条件为X1=1min、X2=0.16％、X3=30.75 mL/g、X4=50 min、X5=30 min.与其他提取方法相比,该法提取效率高,环保无污染,具有一定的应用价值.     

降胆固醇益生菌发酵剂的制备

以前期筛选出来的降胆固醇益生菌嗜酸乳杆菌S-59为出发菌株，对冻干发酵剂的制备工艺进行研究和优化。结果表明：菌悬液的离心收集条件为5 000 r/min、20 min；通过单因素试验和响应面优化试验，确定冻干保护剂为脱脂乳8.95%、海藻糖5.24%、甘油4.54%，细胞存活率可达90.1%。冻干发酵剂的保藏条件为在真空条件下-4℃保藏。     

正交设计优化电转染CHO细胞的方法

目的:探讨细胞电穿孔转染的优化方法。方法:按照L9(34)正交表安排各因素水平的细胞电敏感性实验,以台盼蓝染色计数确定细胞存活率,最接近50%存活率为最优方案,根据最优方案将CHO-dhfr-细胞与DNA混匀电穿孔转染以验证正交设计结果。结果:CHO-dhfr-细胞电转染的优化参数为低离子强度Tris-Cl缓冲液、750 V/cm、50μF、电击2次、间隔1 min,各因素对转染的影响大小依次为缓冲液、电场强度、脉冲次数、电容。结论:确定了电穿孔法转染CHO-dhfr-细胞的方法,为进一步应用该细胞株表达重组蛋白打下了基础。     

密度梯度离心法同时分离新生大鼠原代心肌细胞与成纤维细胞

本文旨在探讨一种改良的同时分离新生大鼠原代心肌细胞和成纤维细胞的方法,以建立良好的原代心肌细胞及成纤维细胞研究模型。无菌状态下取Wistar乳鼠(出生不超过2天)心室,用II型胶原酶消化,控制消化时间及次数、搅拌速度、离心次数和速度等,结合Percoll密度梯度离心法分离心肌细胞及成纤维细胞,进行体外培养,观察细胞形态,继而用0.2%台盼蓝染色检测细胞存活率,免疫荧光染色法检测心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,c Tn I)、波形蛋白(Vimentin)及α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达,分别用于鉴定心肌细胞和成纤维细胞纯度。结果显示,本方法5次分离的心肌细胞平均存活率达92%,纯度达95%以上,细胞生长状态良好,可见贴壁自发搏动;成纤维细胞平均存活率达96%,纯度达94%。本方法能同时获得新生大鼠原代心肌细胞和成纤维细胞,具有很高的产量、存活率及纯度,且操作简便,耗时短,重复性好,是一种较为理想的原代细胞分离、培养方法,可满足各种后续实验要求。     

响应面法优化桑葚多糖的超声波辅助提取工艺条件

本研究利用响应面法优化桑葚多糖的超声波辅助提取工艺条件;选定提取温度、时间及水料比作为影响因素,以桑葚多糖提取率为评价指标,在单因素实验的基础上,通过3因素3水平Box-Behnken中心组合试验建立多糖提取率的二次多项式回归方程,研究超声提取时间、温度、水料比对桑葚多糖提取率的影响;结果显示最佳提取工艺条件为提取温度72℃、超声时间23.5 min、水料比27∶1(v∶m,mL/g),在该条件下多糖提取率预测值为17.80%,验证值为17.78±0.85%(n=3);此方法与传统水提取法相比具有省时、高效的优点,为桑葚多糖的后续研发提供实验基础。     

出芽短梗霉膨大细胞分选及产糖分析

本研究运用Percoll密度梯度离心的方法对出芽短梗霉Aureobasidium pullulans的两种细胞形态进行分选,并对两种形态的细胞进行多糖产量的分析。通过对转速、分选时间、Percoll分离液浓度的优化,确定了两种细胞形态分选效果最佳的条件是Percoll分离液浓度为60%、转速为5 000r/min、离心时间为30min。经过光学显微镜和透射电子显微镜观察发现上层为酵母状细胞（YL）、下层为膨大细胞（SC）,并发现膨大细胞外有明显的薄膜包被,且产大量多糖。也为今后在相应状态下研究出芽短梗霉膨大细胞的其他代谢机理提供了可行的方法,满足后续研究的需要。     

海洋野生鱼酶解提取鱼油的工艺分析

海洋野生鱼与养殖鱼比较, 其鱼油中含更多的二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳六烯酸（DHA）、脂溶性维生素等活性成分。为提高海洋野生鱼的利用价值, 以野生小带鱼为原料进行酶法提油工艺研究。分析了不同的温度, 时间, pH值等影响因素下的提取、萃取以及离心效果, 以响应面法确定了最佳的酶解工艺条件: 液固比为6、pH7.3、酶量1000 u/g原料、搅拌速度200 r/min、45oC酶解90 min; 最优萃取条件: 萃取剂100 mL(每20 g鱼糜原料)、pH4.0、40oC萃取25 min; 离心条件: 离心速度3000 r/min (1865 g)、离心时间10 min。上述工艺条件下提油率为79.90%。改进了传统的鱼油提取工艺, 在活性成分保护上有较大改善。     

海洋野生鱼酶解提取鱼油的工艺分析

海洋野生鱼与养殖鱼比较, 其鱼油中含更多的二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳六烯酸（DHA）、脂溶性维生素等活性成分。为提高海洋野生鱼的利用价值, 以野生小带鱼为原料进行酶法提油工艺研究。分析了不同的温度, 时间, pH值等影响因素下的提取、萃取以及离心效果, 以响应面法确定了最佳的酶解工艺条件: 液固比为6、pH7.3、酶量1000 u/g原料、搅拌速度200 r/min、45oC酶解90 min; 最优萃取条件: 萃取剂100 mL(每20 g鱼糜原料)、pH4.0、40oC萃取25 min; 离心条件: 离心速度3000 r/min (1865 g)、离心时间10 min。上述工艺条件下提油率为79.90%。改进了传统的鱼油提取工艺, 在活性成分保护上有较大改善。     

苦参配方的醇提工艺优化及抑菌活性研究

利用响应面法设计实验优化苦参抑菌配方的回流提取工艺,以配方对金黄色葡萄球菌抑菌率作为响应值,通过考察提取工艺的单因素:浸泡时间、回流时间、水浴温度、液料比、乙醇体积分数等,选取具有显著影响的参数作为响应面实验设计变量。经过数学模型预测与验证实验确定最优提取工艺为:乙醇体积分数80. 5%、回流时间1. 6h、水浴温度95℃。在0. 003 g/m L生药给药条件下,最优工艺的醇提物的抑菌率达到94. 29%。验证结果稳定且与预测值偏差低于2%,该工艺合理可行。优化后的工艺下,所提浸膏对枯草芽孢杆菌有良好的抑制作用,对大肠杆菌抑制作用较弱。     

响应曲面优化醇法提取桑叶黄酮工艺研究

以含水乙醇为溶剂,在单因素试验基础上,采用响应曲面法优化提取桑叶黄酮工艺条件。结果表明,醇法提取桑叶黄酮的最优工艺条件为:乙醇体积分数71.75%、提取温度67.1℃、料液比23.2:1(醇溶液:桑叶粉,mL:g)、提取时间150 min、提取次数2,桑叶黄酮得率为2.37%。验证试验表明,该优化工艺稳定,与模型预测值相符。     

南极磷虾蛋白质提取条件优化

南极磷虾是地球上多细胞生物中生物量最大的单种生物资源之一。南极磷虾因其巨大的生物资源量及潜在的应用价值而受到广泛关注。本文以冷冻南极磷虾为原料,优化了南极磷虾蛋白质的提取条件。在单因素实验的基础上,通过响应面优化实验研究了离心时间、料液比、匀浆时间等对南极磷虾蛋白质得率的影响。结果表明,南极磷虾蛋白质较佳的提取条件为:碱溶阶段p H 11.5,酸沉阶段p H 5.5,离心温度4℃,离心转速10000 rpm,离心时间10 min,料液比1∶3(w/v),匀浆时间3.0 min;在以上提取条件下的南极磷虾蛋白质得率为10.81%。     

响应面法优化海洋微生物发酵产生纤溶化合物的培养条件

采用响应面法对海洋微生物长孢葡萄穗霉菌FG216发酵产生纤溶化合物FGFC1 (Fungi fibrinolyticcompound 1)培养条件进行优化.在单因素试验结果的基础上通过Design-Expert软件对培养时间、诱导物添加量、培养温度进行3因素响应面试验设计,以FGFC1产出量为响应值优化菌株FG216的培养条件,并验证响应面预测值与实测值的一致性.结果表明,在培养时间为9d、诱导物添加量为0.5％、培养温度为28℃的最优培养条件下FGFC1产量可达1 978.33 mg/L,实测值与响应面预测值拟合良好,说明通过响应面试验设计对FG216培养条件的优化是有效的.     

花烛胚性悬浮细胞玻璃化超低温保存条件研究

为建立适宜的花烛(Anthurium andraeanum Lind. )胚性悬浮细胞玻璃化超低温保存技术,采用单因素实验方法对影响玻璃化超低温保存后细胞相对存活率的主要因素进行了研究.结果表明,经玻璃化超低温保存后花烛悬浮细胞的相对存活率与悬浮细胞的继代培养时间、渗透调节剂的种类和浓度及预培养时间、装载液种类和预处理时间、PVS2脱水时间以及超低温保存后的化冻温度均有一定的关系.继代培养3和5 d,细胞的相对存活率较高(约20%);分别以0.3、0.5、0.7 mol·L-1山梨醇和60、80、100、120 g·L-1蔗糖为渗透调节剂预培养0～4 d,以0.5 mol·L-1山梨醇预培养2 d的效果最好,细胞的相对存活率为26.2%;用体积分数25%PVS2预处理15 min,细胞的相对存活率最高(29.0%);分别用体积分数100%PVS2脱水0、5、10、15、20、25和30 min,其中脱水10 min的悬浮细胞相对存活率最高(32.1%);分别在10 ℃、20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃和60 ℃水浴条件下进行化冻处理,其中用40 ℃水浴化冻的悬浮细胞相对存活率最高(32.1%).花烛胚性悬浮细胞玻璃化超低温保存和化冻的适宜流程为:将继代培养3～5 d的胚性悬浮细胞团(直径2 mm)在含0.5 mol·L-1山梨醇的1/2MS液体培养基中预培养2 d后,于4 ℃条件下处理24 h,然后先用体积分数25%PVS2室温预处理15 min,再用体积分数100%PVS2 在0 ℃条件下脱水10 min,最后迅速投入液氮中冷冻保存;将经过冷冻保存的细胞置于40 ℃水浴中化冻3 min,用含1.2 mol·L-1蔗糖的1/2MS液体培养基洗涤3次(每次10 min),之后即可进行恢复培养.     

海金沙草总黄酮提取工艺的响应面优化

为了提高海金沙草总黄酮提取效率,运用了Plackett-Burman试验设计、爬陡坡试验和Box-Behnken设计对提取工艺进行了响应面优化试验。利用Plackett-Burman对影响总黄酮提取的诸多相关因素进行了评价并成功筛选出主效应因子,即提取时间、提取温度和乙醇浓度。在Plackett-Burman设计基础上,根据主效应因子作用大小与方向进行了爬陡坡试验。最后用Box-Behnken响应面技术优化了总黄酮提取工艺并建立了关键影响产量的二次多项式数学模型,解模型逆矩阵得最优解(优化方案),即提取温度X1=45.45℃,乙醇体积分数X2=47.1%、提取时间X3=84.8 min。模型预测结果为0.433 mg.L-1,验证试验结果为0.428±0.004 mg.L-1(n=3)。     

响应面法优化纤维堆囊菌So ce90原生质体的制备条件

采用响应面法优化纤维堆囊菌So ce90的原生质体制备条件。选择溶菌酶浓度,酶解时间和酶解温度作为考察因子,在单因素试验的基础上,采用Box—Benhnken中心组合设计方法进行三因素三水平试验设计。以原生质体生成率作为响应值,进行多元二次响应回归分析,得出纤维堆囊菌So ce90原生质体制备的最佳条件为：溶菌酶浓度1．40mg／mL,酶解时间为160min,酶解温度为30℃,响应模型预测的原生质体最高生成率为87．78％,在最优的条件下进行验证试验,得到原生质体生成率为86．23％,与预测值间的相对误差为1．76％,表明采用响应面法优化纤维堆囊茵So ce90原生质体的制备条件是可行的。     

基于响应面法从连翘叶中提取连翘酯苷A和连翘苷的工艺优化

采用响应面分析法优化连翘叶中连翘酯苷A和连翘苷的最佳提取工艺条件,在单因素实验基础上,采用Box-Behnken中心组合设计原理研究液料比、乙醇浓度、浸提时间、浸提温度4个因素对连翘酯苷A得率和连翘苷得率的影响.利用Design Expert 8.0.5 b分析确定最佳提取工艺,根据实际条件,得到连翘酯苷A和连翘苷的最佳提取工艺为:乙醇浓度53％、提取温度74℃、浸提时间为53 min、液料比30 mL/g.回归模型预测最优条件下连翘酯苷A得率为7.53％,连翘苷得率为3.03％,验证值分别为7.56％,3.09％,与预测值的相对误差分别为0.4％,2.0％.     

假臭草总黄酮超声波辅助提取工艺优化及抑菌活性

假臭草(Praxelis clematidea)黄酮类化合物是一类重要的生物活性物质,其提取工艺的优化对其黄酮类物质的生产和研究具有重要的意义。本文以假臭草地上部分为材料,在乙醇浓度、料液比、超声功率、提取温度和提取时间5个单因素实验的基础上,采用响应面分析法对超声波辅助提取法进行优化,并研究提取的总黄酮在工艺前后对金黄葡萄球菌的抑菌活性变化。结果表明假臭草中总黄酮类物质的最佳提取条件为:提取温度60℃,提取时间8 min,乙醇浓度54%,液料比26 m L/g,超声功率165 W。在最佳提取条件下总黄酮的实际得率为2.385%,与预测值2.407%的相对误差为0.022%,优化结果可靠。本实验结果比前人采用溶剂提取法所得假臭草总黄酮的提取率高1.025%,提取时间缩短了2 h 22 min。同时,抑菌活性实验结果显示100μL同浓度(1.7275 mg/m L)总黄酮的抑菌圈直径大小分别为优化前13.898±0.44 mm,优化后13.946±0.28 mm,P=0.8050.05,差异不显著。优化结果为假臭草的资源化利用提供了新的实验数据。     

均匀设计在候选内参基因RT—qPCR实验条件优化中的应用

目的探讨均匀设计在候选内参基因RT—qPCR实验条件优化中的应用,有助于后期实验筛选不同状态下THP～1细胞的稳定内参基因。方法以THP-1细胞cDNA为模板,eDNA模板量、引物浓度和退火温度3个因素为影响因素,应用均匀设计3因素8水平,探索影响候选内参基因RT-qPCR的扩增条件,检测不同实验条件下的扩增效果,在最优扩增条件下建立候选内参基因定量扩增的相对标准曲线,并检测扩增效率。结果通过均匀设计,完成对eDNA模板量、引物浓度和退火温度3因素8水平的实验条件优化,建立候选内参基因RT—qPCR检测的最佳组合为eDNA模板量0．5big、引物浓度200μmol／L、退火温度55℃。结论本实验选用均匀设计优化RT—qPCR实验条件,筛选出THP-1细胞候选内参基因RT—qPCR的最优实验条件。均匀设计适合于本实验研究多因素多水平试验条件的配比。     

Optiprep连续密度梯度离心方法的建立

目的:试验不同条件,优化Optiprep密度梯度离心方法,建立最佳的Optiprep连续密度梯度,为纯化病毒提供良好的参数。方法:试验不同的旋转角度、重复次数、离心时间,以及用不同浓度的Optiprep制备连续密度梯度等条件,摸索制备连续密度梯度的最佳方案,将此最佳方案应用于纯化丙肝病毒(HCV),并通过q RT-PCR验证纯化效果。结果:通过各种条件的摸索,确立了制备连续密度梯度的最佳方案,即制备10%~40%Optiprep连续密度梯度,在旋转角度为85°时,1号程序设置为30 r/min离心5 s,2号程序设置为0 r/min 15 s,重复1~2程序10次。将此程序用于纯化HCV,得到了较好的纯化效果。结论:建立了制备Optiprep连续密度梯度离心的方法,为进一步提高病毒的纯化效果提供了参数。     

地衣芽孢杆菌D-1产碱性蛋白酶培养条件的优化

为了对产碱性蛋白酶的地衣芽孢杆菌D-1的培养条件进行优化,利用10 L发酵罐,采用正交设计19(34)试验,对培养温度、pH值、搅拌转速、通气量4条件进行优化,得到地衣芽孢杆菌D-1发酵产碱性蛋白酶的最优培养条件为:培养温度37.0℃,pH值7.5,通气量4L/min,搅拌转速300r/min.利用最优条件组合进行验证...