玉米细胞质分子伴侣Hsp70的ATPase活性

玉米胚乳细胞中纯化的细胞质Ｈｓｐ７０蛋白有低水平的ＡＴＰａｓｅ活性,它在５０℃、ＰＨ５．８、２０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＫＣｌ条件下活性最高,Ｃａ＾２＋和Ｍｇ＾２＋抑制其活性。大肠杆菌ＤｎａＪ蛋白能将玉米细胞质Ｈｓｐ７０的ＡＴＰａｓｅ活性提高６倍,而ＧｒｐＥ蛋白对其影响很小。８种不同的人工合成多肽均能刺激该蛋白折ＡＴＰａｓｅ活性,增加幅度从２．５倍到１０倍痫水性不同的氨基酸对Ｈｓｐ７０的ＡＴＰａｓｅ活性影响     

分子伴侣研究概况

分子伴侣主要是在进化上高度保守的热休克蛋白的几个家族。从细菌到哺乳动物,分子伴侣对体内蛋白质的折叠、运输和组装都起到非常重要的作用。本文简要地概述了分子伴侣的组成、它们在蛋白质折叠中的作用以及它们在生物工程下游处理过程中的应用情况。     

玉米细胞质分子伴侣Hsp70的ATPase活性

玉米胚乳细胞中纯化的细胞质Ｈｓｐ７０蛋白有低水平的ＡＴＰａｓｅ 活性,它在５０ ℃、ｐＨ５ ．８ 、２０ ｍｍｏｌ／Ｌ的ＫＣｌ 条件下活性最高,Ｃａ２＋和Ｍｇ２＋ 抑制其活性。大肠杆菌ＤｎａＪ蛋白能将玉米细胞质Ｈｓｐ７０ 的ＡＴＰａｓｅ 活性提高６倍,而ＧｒｐＥ 蛋白对其影响很小。８ 种不同的人工合成多肽均能刺激该蛋白的ＡＴＰａｓｅ 活性,增加幅度从２ ．５ 倍到１０ 倍不等。亲水性不同的氨基酸对Ｈｓｐ７０ 的ＡＴＰａｓｅ 活性影响不同。玉米细胞质Ｈｓｐ７０ 是一个三磷酸核苷酸酶,除ＡＴＰ 外,它还能催化ＵＴＰ、ＧＴＰ、ＣＴＰ和ＩＴＰ的水解     

共表达HAC1和分子伴侣基因对甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响

为了提高甘露聚糖酶ManA在毕赤酵母中分泌表达的酶活,选择毕赤酵母内质网未折叠蛋白反应(Unfolded protein response,UPR)激活调控因子HAC1与5种毕赤酵母蛋白折叠相关的分子伴侣ERO1、PDI、PDI1、CPR5、BiP,通过构建pPICZA-HAC1等6种胞内表达重组质粒,分别电转化至分泌表达ManA的毕赤酵母重组菌中胞内共表达,并分析其重组菌摇瓶发酵时ManA表达的影响。结果发现在摇瓶发酵水平,胞内共表达HAC1、ERO1、PDI的重组菌发酵上清液中的ManA酶活力分别提高了26%、15%、20%,其重组菌发酵上清液的酶活力分别达到1 014 U/mL、925 U/mL、965 U/mL。通过对各重组菌上清液酶活力、胞内滞留酶活力、上清液蛋白浓度数据进行分析,进一步选择将HAC1、ERO1、PDI进行两基因或三基因组合,并分别在分泌表达ManA的重组菌胞内共表达,但各共表达重组菌发酵上清液的酶活力都没有进一步的提升。单独共表达HAC1或者分子伴侣ERO1、PDI可以辅助ManA的正确折叠,提高其蛋白表达。     

分子伴侣结构与功能的研究进展

分子伴侣是细胞内一类能够协助其他多肽进行正常折叠、组装、转运、降解的蛋白,并在 DNA的复制、转录,细胞骨架功能,细胞内的信号转导等广泛的领域,都发挥着重要的生理作用,其结构与功能异常会导致多种相关的疾病。简要综述了分子伴侣结构与功能方面的研究进展。     

分子伴侣的功能和应用

本文综述了分子伴侣的分类、功能、作用机理、研究现状及应用前景。分子伴侣是在生物大分子的折叠、组装、转运及降解等过程中起协助作用,参与协助抗原的呈递和遗传物质的复制、转录及构象的确立,但自身并不发生任何变化的一大类广泛存在于生物体内的蛋白质分子。随着对分子伴侣的进一步研究和相关知识的不断深入,分子伴侣在生物产品开发、物种改良、抗衰老,疾病预防、诊断和治疗以及环境监测方面具有广阔的前景。     

分子伴侣的多重功能

分子伴侣(molecular chaperone)在原核生物和真核生物的细胞中广泛存在.分子伴侣可稳定未折叠或部分折叠的多肽,并防止不适当的多肽链内或链间相互作用;有些分子伴侣也可与天然构象的蛋白质相互作用以促使寡聚态蛋白质发生结构重排.基于分子伴侣能识别并调节细胞内多肽的折叠,因此它们还具有介导线粒体蛋白跨膜转运,调控信息传导通路和转录、复制,以及参与微管形成与修复等功能.     

分子伴侣 SecB 基因和人淋巴毒素基因在大肠杆菌中的共表达

分子伴侣ＳｅｃＢ基因和人淋巴毒素基因在大肠杆菌中的共表达周颖张青殷长传宋大新陈永青（复旦大学微生物学系和遗传研究所上海２００４３３）分子伴侣（Ｃｈａｐｅｒｏｎｅ）是细胞内催化及维持其他蛋白质正确构象的一类蛋白质分子［１,２］。研究表明,分子伴...     

具有分子伴侣功能的抗体

蛋白质的折叠问题一直是生物学研究的前沿之一,蛋白质稳态平衡的破坏与衰老及很多神经退行性疾病的发病机理密切相关,而蛋白质的正确折叠与蛋白质稳态在很大程度上取决于分子伴侣参与构建的复杂网络。许多研究表明,抗体可以作为分子伴侣促进蛋白质的正确折叠,并阻止蛋白质的异常聚集,抗体所具有的严格底物特异性使其具备了治疗特定蛋白质折叠病、帮助包涵体复性等应用潜力。本文简要介绍了分子伴侣的研究进展,详细阐述了具有分子伴侣功能的抗体及单链抗体的研究进展,最后重点讨论了可抑制蛋白质聚集的抗体的研究近况。     

蛋白质折叠和分子伴侣

一个有活性的蛋白质分子不但有特定的氨基酸序列,还处于特定的由氨基酸序列决定的三维空间结构。三维结构的完整性受到干扰,生物活性也会发生变化：有时即使只是轻微的破坏,都可能导致其生物活性全部丧失。所以蛋白质的生物功能是与其三维空间结构密切联系在一起的。     

一个编码1，3，4—三磷酸肌醇5／6激酶类似物的拟南芥基因的克隆及其在胁迫条件下的表达分析

以对照和盐处理的拟南芥幼苗为材料,利用mRNA差异显示技术筛选得到一个受盐诱导的3′端cDNA部分序列。其相应的基因AtITL1编码1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶类似物。Northem blot分析表明,该基因除受盐诱导外,还受低温诱导,但几乎不受干旱和ABA诱导,分析AtITL1基因的5′区发现存在对渗透及低温胁迫起反应而对ABA不起反应的DRE/CRT顺式作用元件。这些研究表明,编码1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶类似物的拟南芥基因可能参与了ABA不依赖的胁迫信号传递途径。     

Conversion of the Extracellular Dextransucrase Isoenzymes from Leuconostoc mesenteroides NRRL B-1299

Effect of oxygen tension on l-lysine, l-threonine and l-isoleucine accumulation was investigated. Sufficient supply of oxygen to satisfy the cell’s oxygen demand was essential for the maximum production in each fermentation. The dissolved oxygen level must be controlled at greater than 0.01 atm in every fermentation, and the optimum redox potentials of culture media were above ?170 mV in l-lysine and l-threonine and above ?180 mV in l-isoleucine fermentations. The maximum concentrations of the products were 45.5 mg/ml for l-lysine, 10.3 mg/ml for l-threonine and 15.1 mg/ml for l-isoleucine. The degree of the inhibition due to oxygen limitation was slight in the fermentative production of l-lysine, l-threonine and l-isoleucine, whose biosynthesis is initiated with l-aspartic acid, in contrast to the accumulation of l-proline, l-glutamine and l-arginine, which is biosynthesized by way of l-glutamic acid.     

一个编码1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶类似物的拟南芥基因的克隆及其在胁迫条件下的表达分析

以对照和盐处理的拟南芥幼苗为材料,利用mRNA差异显示技术筛选得到一个受盐诱导的的3′端cDNA部分序列,其相应的基因AtITL1编码1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶类似物.Northern blot分析表明,该基因除受盐诱导外,还受低温诱导,但几乎不受干旱和ABA诱导.分析AtITL1基因的5′区发现存在对渗透及低温胁迫起反应而对ABA不起反应的DRE/CRT顺式作用元件.这些研究表明,编码1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶类似物的拟南芥基因可能参与了ABA不依赖的胁迫信号传递途径.