电泳后琼脂糖凝胶中DNA的洗脱

序言 基因组的结构和功能的研究,很大程度上依赖于特定的DNA片段的分离和分析。凝胶电泳是一种以DNA片段大小为依据的,简单而且分辨力很强的一种分离特殊DNA片段的方法浓度为2.5％—0.1％的琼脂糖凝胶电泳可分辨出从150到880000硷基对的DNA片段,而在20％—3％的丙烯酰胺凝胶上,对20—2000硷基对的DNA片段分辨效果更好。     

λ拟操纵基因的克隆

以HindtTI和艮o Rl双重酶解p1)G3|质粒DNA制备了29个硷基对DNA片段。该DNA片段含有l‘个硷基对A拟操纵基因(pseud~perator),其一端为HindLTI接头,另一端为EcoRI接头。29个玲基对片段与pBR325质粒连接、转化、筛选获得克隆pQHl00(Ap‘Tc‘。M’)。FQHl00DNA分别以Hznd[1l,EcoRl单独酶解或双重酶解,经凝胶电泳分析,其结果表明,pQH1~)0DNA含有两个A拟操纵基因,这两个DNA片段在HtnI川位点上,以头对头的方式相连。     

一种有效回收小分子DNA片段的方法

介绍了一种有效回收小于200bp DNA片段的方法。用改进的冻融-离心回收法对155bp的DNA片段进行回收,并且与常规冻融-离心回收、TaKaRa回收试剂盒的结果做对比,用琼脂糖凝胶电泳检测回收结果,紫外吸收法定量分析。结果证明:改进的方法是一种经济、方便、可靠的回收小分子DNA片段的方法。     

琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测小麦基因组DNA RAPD扩增产物的方法学比较

通过20%(wv)的琼脂糖凝胶和5%(wv)的聚丙烯酰胺凝胶电泳对小麦白粉病抗、感特性品种基因组DNA的RAPD检测结果表明:5%聚丙烯酰胺凝胶对线性DNA分子(01～20kb)和长度相差100bp以下的DNA分子的分离较20%的琼脂糖凝胶电泳效果好。因此,我们研究出了一项利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测小麦白粉病抗、感特性的新技术,在工作中建立了一种适合于检测小麦基因组DNA结构差异的电泳方法。该方法主要包括:(1)丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺的新配比;(2)分离DNA片段的最佳凝胶浓度;(3)电泳条件;(4)脱色、漂洗、银染、显色过程。实验发现,该技术对于小麦白粉病抗、感特性检测中的小片段和长度相差100bp以下的线性DNAPCR扩增结果的分辨效果较好。应用该技术在抗感品种间已经发现了DNA水平上的差异。     

琼脂糖凝胶电泳技术

九、碱性琼脂糖凝胶 科学家们认为,琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段的一种极好的方法。这种技术操作简单,快速,并且还能解决在密度梯度离心中所存在的DNA片段不能充分分离的难题。此外,还能直接确定凝胶中DNA的位置:其方法是先用低浓度的能发荧光的具有插入本领的染料(溴乙锭),对胶中DNA条带进行染色;然后,把电泳胶置于紫外光下进行直接检测,其灵敏度可达1毫微克(ng)。     

枯草芽孢杆菌基因片段的琼脂糖凝胶电泳分离I．色氨酸C基因片段的分离

限制性核酸内切酶EcoRl酶切枯草芽孢杆菌(Bactllus subtlis) SR 22的 DNA,用琼脂糖凝胶电泳分离了色氨酸C基因(trpC)的片段,位于凝肢柱的10—11厘米处。冷冻挤压回收该段的DNA,荧电光分光光度计直接测定回收液中DNA的含量。电泳后比电泳前trpC 转化活性提高了37.7倍。这一段DNA的平均分子量为5.1×106,trpC片段的纯度为9.3％。     

一种新的小分子DNA纯化方法——石英棉纯化法

建立了小分子DNA的高效分离纯化方法,适合于分离几十到300个核苷酸组成的基因,在此基础上,建立更大的DNA片段的分离纯化方法。对不同大小的DNA片段经琼脂糖凝胶电泳后,采用石英棉分离纯化法纯化DNA。结果显示,石英棉的分离效果最好,对于200个碱基以下的DNA的回收率约高达90%以上,对于300个碱基的DNA回收率为约85~90,该项技术纯化的DNA的酶切、酶连效率与试剂盒法纯化的DNA的酶切、酶连效率相同。该分离纯化DNA技术明显优于试剂盒方法。     

一种简单快速回收DNA片段的方法——DE-81滤纸

琼脂糖凝胶电泳对于快速分离不同分子量的DNA片段是极为有效的,但把DNA片段从凝胶中回收回来有时要碰到一些困难,如回收的DNA易受凝胶中硫酸多糖的污染(该成分是许多酶的抑制剂,如内切酶、连接酶、激酶、聚合酶等);大片段DNA回收     

扣囊拟内孢霉α-淀粉酶基因的克隆和在酿酒酵母中表达

以穿梭质粒pCN60为载体,大肠杆菌C600为受体构建了扣囊拟内孢霉(Endomycopsis fibuligera)G45 Sau 3A基因文库。从基因文库中提取重组质粒DNA并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BJ1991,选出四个具有o-淀粉酶活性的转化子,琼脂糖凝胶电泳结果证实插入的DNA片段为9.0kb。对插入DNA片段亚克隆,确定。-淀粉酶基因位于PstI-Sall 3.9kb片段上,启动子位于PstI-EcoRI 的1.3kb片段上。用亚克隆PGK11.9kb片段置换。-淀粉酶启动子区,其转化子的e-淀粉酶活性有明显提高。     

厌氧颗粒污泥微生物总DNA的提取

目的:为了从分子水平上了解厌氧颗粒污泥中微生物的种类和数量,研究一种高效提取环境微生物DNA的方法。方法:厌氧颗粒污泥样品经液氮速冻、沸水浴融化、溶菌酶处理和SDS裂解后,琼脂糖凝胶电泳检测所提取的DNA,以提取的总DNA为模板,进行细菌核糖体小亚基16S rDNA基因V8、V9区的PCR扩增。结果:经检测,其DNA片段约为20 kb,样品D260nm/D280nm值为1.88,扩增结果理想,与OMEGA公司提供的试剂盒提取效果基本一致。结论:为薯类酒糟厌氧发酵污泥中微生物群落的分子生态学研究提供了一种简便、可靠的DNA提取方法。     

亲和层析纯化猪脑尾状核乙酰胆硷酯酶

将乙酰胆硷酯酶的可逆抑制剂(间-羧苯二甲基碘乙基季铵盐)共价连接到Sepharose 4B上,用0.5%胆酸钠抽提的猪脑尾核乙酰胆硷酯酶经上述凝胶亲和层析,比活提高1024倍,得率为32%。纯化制剂的琼脂免疫双扩散呈单一的沉淀线,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离出四条酶活力区带,对硫代乙酰胆硷的米氏常数为:8.9×10~(-5)M。     

亲和层析纯化猪脑尾状核乙酰胆硷酯酶

将乙酰胆硷酯酶的可逆抑制剂(间-羧苯二甲基碘乙基季铵盐)共价连接到Sepharose 4B上,用0.5%胆酸钠抽提的猪脑尾核乙酰胆硷酯酶经上述凝胶亲和层析,比活提高1024倍,得率为32%。纯化制剂的琼脂免疫双扩散呈单一的沉淀线,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离出四条酶活力区带,对硫代乙酰胆硷的米氏常数为:8.9×10~(-5)M。     

农业其它

852421一个编码核酮糖一1,5一二磷酸狡化酶小亚基的豌豆核基因组织特异性和光调节表达〔英〕/Coruzzi,G.…了EMBOJ一1984,3(8)一1671一1679〔译自DBA,1984,3(20),84一09731〕 研究了在豌豆不同组织中编码核酮糖-1,5一二磷酸梭化酶小亚基(rbcs)的多基因族的一个成员表达。豌豆(品种Progressg号)基因组DNA用Bglll消化并连接到IO59DNA上。用““P标记cDNA克隆P5515的插人筛选了重组噬菌体,分离出6个编码的rbcs。将克隆的汇PS一3D的一个EcoRI片段继续克隆到pPR::6上,称为pPS一4.0;把这个含有rb。S基因的E。oRI一Clal片段再克隆…     

扣囊拟内孢霉α-淀粉酶基因的克隆和在酿酒酵母中表达

以穿梭质粒pCN60为载体,大肠杆菌C600为受体构建了扣囊拟内孢霉(Endomycopsis fibuligera)G45 Sau 3A基因文库。从基因文库中提取重组质粒DNA并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BJ1991,选出四个具有o-淀粉酶活性的转化子,琼脂糖凝胶电泳结果证实插入的DNA片段为9.0kb。对插入DNA片段亚克隆,确定。-淀粉酶基因位于PstI-Sall 3.9kb片段上,启动子位于PstI-EcoRI 的1.3kb片段上。用亚克隆PGK11.9kb片段置换。-淀粉酶启动子区,其转化子的e-淀粉酶活性有明显提高。     

侵染稀硷的中国番茄黄化曲叶病毒及其卫星DNA全基因组结构特征

从云南红河稀硷上分离到病毒分离物Y64,全序列测定表明,Y64 DNA_A全长2730个核苷酸。基因组比较发现,Y64 DNA_A与中国番茄黄化曲叶病毒Y38分离物（TYLCCNV_［Y38］）同源性最高（99％）,与中国番茄黄化曲叶病毒广西分离物（TYLCCNV）的同源性次之（96％）,而与亚洲地区的其它双生病毒的同源性均在83％以下, 表明稀硷上的分离物Y64是TYLCCNV的1个分离物。利用DNAβ的特异性引物beta01和beta02,在病毒分离物Y64中扩增到卫星DNA分子（Y64β）。序列分析表明,Y64β全长1340个核苷酸,至少在其互补链上编码1个有功能的ORF（C1）。Y64β的全序列与TYLCCNV的各个分离物的卫星分子（Y38β、Y36β和Y8β）的同源性最高,分别为99.5％、99.5％和99.3％;与其它已报道的卫星DNAβ的同源性均低于66.4％。系统关系树研究表明,卫星DNAβ分子与其辅助病毒是共同进化的。     

微量DNA的聚丙烯酰胺凝胶薄板电泳分析

聚丙烯酰胺凝胶薄板电泳,是进行微量DNA分析的一种有效方法。它能快速鉴定DNA的迁移位置,并将分子量大小不同的DNA片段进行分离。通常DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳均采用2—3毫米厚的平板胶,由于板胶厚度大,因     

土拨鼠肝炎病毒表面抗原基因的位置,核苷酸序列及其与人的乙型肝炎病毒表面抗原基因的比较

结果部分(摘登) 开始DNA序列分析的时候,首先要用几种最有效的限制性内切酶消化Eco WHV DHA~+,并用2％琼脂糖凝胶电泳把这些DNA片段分开。如图Ⅰ(从略见原文)所示:HaeⅢ和HinfⅠ消化的Eco WHV DNA。给出了一系列体积大小不同盼DNA片段,其中各有一个片段大于1000个碱基。用HaeⅢ和HinfⅠ混合消化时,这些大片段消失了。这     

亚胺培南对铜绿假单胞菌敏感和耐药菌株DNA释放的影响

目的：观察亚胺培南对铜绿假单胞菌标准菌株和耐药菌株体外培养释放DNA的影响。方法：选择铜绿假单胞菌的标准菌株和临床分离耐药菌株作为实验菌株,检测其亚胺培南的最低抑菌浓度（MIC）,琼脂糖凝胶电泳法观察不同浓度亚胺培南作用下铜绿假单胞菌的DNA释放情况,并用Quantity One软件分析所释放DNA片段的分子量和含量。结果：亚胺培南作用下铜绿假单胞菌从1／2MIC开始释放小片段DNA,大于1／2MIC仅释放l条大片段DNA,且含量少,等于1／2MIC可释放3条DNA,但无小片段DNA,小于1／2MIC可释放4．5条DNA,且含量多。1／16MIC时,标准菌株释放的第1、5条DNA片段含量偏少,3、4条DNA片段含量偏多,而耐药菌株相反。耐药菌株与标准菌株相比释放的DNA片段有所不同,耐药菌株比标准菌株多释放一条DNA片段（第2条）,分子量为2784bp,耐药菌株的第1、3、4、5条DNA片段分子量均比标准菌株小。耐药菌株释放的第3、4、5条DNA含量明显高于标准菌株,P〈0．01,其统计有显著学意义。结论：不同亚胺培南浓度作用下,铜绿假单胞菌会释放不同片段大小和含量的DNA分子,耐药菌株与标准菌株释放的DNA片段数量和含量有明显差异,其与耐药机制的关系值得进一步研究。     

用透析膜从琼脂糖胶中回收DNA片段

分离与回收DNA片段是基因操作的重要环节之一。本文介绍了一个用透析膜从琼脂糖胶中回收 DNA 片段的改进方法。利用本法回收DNA片段洗脱容易、节约时间、回收率在80％ 左右。回收的 DNA片段可用于酶切反应、连接反应和用缺口位移反应制备32p标记DNA探针。     

在枯草杆菌中有启动子功能的噬菌体T5 DNA片段的克隆

用启动子探针质粒pTG 402为载体,用鸟枪射击法克隆了噬菌体T5 DNA的片段。克隆中的2％含有具启动子功能的插入片段,其中pTG 402-20含有启动功能最强的插入片段。DNA-DNA分子杂交实验结果表明,pTG 402-20的插入片段能与T5 DNA Hind Ⅲ酶切的G和B片段杂交。这个插入片段的大小约为0.84kb。