非洲菊花瓣总RNA提取方法的改进

利用异硫氰酸胍一步法和植物总RNA提取试剂盒（RNeasy Plant Mini Kit）提取非洲菊（Gerbera hybrida）花瓣中总RNA时存在多糖的干扰。实验中利用异硫氰酸胍一步法提取总RNA,在RNA沉淀后,再次加入适量变性液,冻融2次,再加热至45 ℃使RNA完全溶解;试剂盒提取时,适当延长各提取步骤的离心时间,并增加DEPC H2O溶解RNA的时间。通过以上操作方法的改进可排除多糖的干扰,得到高质量的总RNA。为进一步利用Northern杂交技术研究非洲菊中花色素苷基因的表达,进行花色改良提供了方便、有效的实验手段。     

三七总RNA提取方法的对比研究

比较利用改进的异硫氰酸胍一步法、异硫氰酸胍高盐法、CTAB法和Thomas’RNA提取法等4种方法提取三七根茎2个部位总RNA的可行性。结果表明,改进的异硫氰酸胍一步法和异硫氰酸胍高盐法能有效地抑制酚类物质、多糖及皂苷等次级代谢产物对总RNA的影响,可从三七根茎中获得质量高、完整性好的总RNA。RT—PCR分析显示提取的总RNA具有反转录活性。这2种方法具有快速、简单、有效的特点。     

一种丹参高质量总RNA的提取方法

高质量RNA的获得是开展丹参分子生物学研究的基础。采用异硫氰酸胍(Guanidine Thiocyanate,GT)法、尿素法、CTAB法、苯酚法和热硼酸改良法等五种方法．以丹参组织培养的幼苗为材料,进行丹参RNA的分离试验,发现所采用的几种方法获得的RNA都有不同程度的降解。分析可能是由于丹参中含有大量的多糖以及各种次生代谢成分造成的。在分析现有结果的基础上对GT法进行了改良,在第二次沉淀前附加低浓度乙醇(10％～20％)沉淀20min对于高质量总RNA的获得效果较好。琼脂糖凝胶电泳检测改良后的GT法无论对于组织培养中幼嫩的根、茎、叶还是大田两年生的丹参根、茎、叶和种子均具有很好的RNA分离效果。mRNA电泳检测发现所得mRNA集中分布在500b～3kb之间且质量较高,完全可以满足丹参各种RNA相关的分子生物学实验要求,为丹参RT—PCR、Northern杂交等分子生物学实验提供了良好的基础。     

改良异硫氰酸胍一步法提取红豆杉细胞RNA

将Chomczynski建立的RNA一步分离法加以适当改进,用以提取红豆杉细胞株E2、TC、H21的总RNA,所获RNA样品的A260/A280比值分别是1.82±0.03、1.85±0.04、1.74±0.03;A260/A230比值分别为2.02±0.03、2.15±0.03、2.03±0.05;得率分别为51.36±0.05μg/g、52.40±0.04μg/g、51.08±0.06μg/g新鲜细胞.变性琼指糖凝胶电泳图谱显示每一样品均具有完好的28S和18S两条亮带.     

家蝇总RNA的提了方法及其改进

本文采取异硫氰酸胍：氯仿一步法,成功地从富含RNase的家蝇腹部提取出完整的总RNA,并针对家蝇腹部富含蛋白酶的特点,对一步法的某些细节做了适当的改进,检测结果表明,用这种方法提取的RNA质量高,可以用于地进一步的分子生物学实验。     

一种小量提取植物总RNA的有效方法

以水稻、玉米、辣椒为材料 ,摸索出了一套改良的异硫氰酸胍提取植物总RNA的方法 ,该方法简单、快速、纯度高、完整性强 ,方便有效 ,值得推广。     

脂肪组织RNA提取方法的改进

本试验以猪脂肪组织为材料,应用TRIzol、V-gene、H.Q＆.Q三种总RNA提取试剂盒分别提取脂肪组织RNA,发现直接按照试剂盒说明书操作提取的RNA效果不理想.通过反复试验,分别改进了提取过程中的部分操作步骤,结果表明：三种试剂盒操作方法改进后与改进前相比,提取RNA的纯度和得率表现为差异极显著（P＜0.01）;三种试剂盒操作方法改进后提取RNA的纯度差异不显著（P＞0.05）,但在得率方面,Trizol比其它两种高,表现为差异极显著（P＜0.01）.三种试剂盒操作方法改进后提取的RNA经RT-PCR扩增猪β-actin基因,电泳结果显示,扩增条带清晰、特异,说明提取的RNA完全符合后续的分子生物学实验要求.     

改良异硫氰酸胍法提取玛咖(Maca)叶片中总RNA研究

为了获得质量较高的玛咖总RNA,对其总RNA的提取进行了研究。以玛咖无菌苗叶片为材料,通过改良的异硫氰酸胍法提取其总RNA。结果:所提取的总RNA纯度高、完整性好,电泳条带清晰,OD260/OD280值达到1.90±0.03,总RNA的得率达到252.57±1.12μg/g。表明改良的异硫氰酸胍法适合于玛咖叶片中RNA的提取,所提取的总RNA纯度高、完整性好,为进一步的玛咖分子生物学研究打下良好基础。     

百合花瓣总RNA提取方法的研究

以亚洲百合品种Pollyanna和东方百合品种Sorbonne为试材,在比较异硫氰酸胍法、SDS/酚法与CTAB-L i Cl法提取总RNA效果的基础上,针对百合组织中富含多糖的特点,在Sorbonne提取RNA中加入特殊除多糖步骤,改进了CTAB- L i Cl法.结果表明,改进CTAB- L i Cl法能有效去除多糖,提取到的RNA2 8S r RNA亮度约为18S r RNA的2倍,A2 6 0 / 2 80介于1.8～2 .0之间,A2 6 0 / 2 30为2 .0 ,Pollyanna RNA产率为36 .3μL·g- 1 ,Sor-bonne RNA产率为10 .2 μL·g- 1 ,经RT- PCR获得了特异性条带,说明用改进CTAB- L i Cl法从百合花瓣中提取到的RNA质量好、产率高、完整性强,完全适合于进一步的分子生物学研究.     

干种子高质量总RNA的快速提取方法

高效快速提取高质量的种子RNA是种子分子生物学研究的基础。现有的提取方法难以高效快速地从种子中得到高质量的总RNA。本试验有机地将改进SDS法和异硫氰酸胍法相结合,采用改进的酸性SDS提取液、不溶性PVPP(聚乙烯聚吡咯烷酮)阻止酚类氧化、KAc去除多糖、异丙醇沉淀RNA,可以高效地从0.01～0.1g水稻、大豆、蚕豆、芸豆、花生等干种子中提取到高质量总RNA。此法提取的总RNA,能够满足分子生物学研究的要求,可以进行反转录和RT-PCR反应,用于基因表达研究,并为从具相似成分的其他物种干种子提取总RNA提供参考方法。     

四种副溶血弧菌总RNA提取方法的比较

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种革兰氏阴性嗜盐菌.提取高质量的RNA是研究副溶血弧毒力基因表达与其致病性和环境适应性的基础.本研究分别用SDS法、Trizol法,PureLinkTM RNA Mini Kit和Uniq-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒提取六株副溶血弧菌的总RNA,用普通琼脂糖凝胶电泳和核酸测定仪检测RNA的质量,并用RT-PCR法对四种提取方法进行比较.研究结果表明,Trizol法和PureLinkTM RNA Mini Kit简单快捷,提取的总RNA完整性好,纯度高,可用于后续实验的分子生物学研究;而Trizol法更适用于普通实验室细菌RNA的提取.     

非洲菊耐羟脯氨酸变异系离体筛选体系的建立

以金黄色非洲菊品种深圳5号(S5)为材料,探讨了利用羟脯氨酸(Hyp)筛选耐热变异系的方法,初步建立了非洲菊耐Hyp变异系的离体筛选体系.结果表明,非洲菊新鲜花托和芽适宜的Hyp初始筛选剂量为0.4mg·mL-1,而预培养25d花托的初始筛选浓度宜增加到0.6mg·mL-1;获得的存活芽恢复培养后进行后续筛选时可以选择0.5~0.6mg·mL-1Hyp;通过对花托和芽进行5次间隔筛选后获得耐Hyp变异系SHP5,得率为0.7%.与对照(S5)相比,SHP5在室内高温胁迫条件下具有较高的游离脯氨酸含量,在自然高温条件下长势好,花序梗长度和花色素苷含量均显著增加,表现出较强的耐热性.     

农杆菌介导的Pr基因对非洲菊遗传转化的研究

采用农杆菌介导法将Pr基因转入非洲菊(Gerbera hybrida),建立适合于农杆菌介导的基因遗传转化受体系统,获得再生植株。经PCR和GUS染色检测,Pr基因成功转入非洲菊幼苗。     

非洲菊亲环素家族基因GCyP的克隆与生物信息学分析

亲环素(Cyclophilins,CyPs)具有肽脯氨酰顺反异构酶活性,催化蛋白质折叠过程,并且起着分子伴侣的作用,同时参与mRNA加工和信号转导等生物学过程.本研究在抑制性消减杂交获得表达序列标签(EST)的基础上,通过生物信息学方法获得了非洲菊亲环素家族基因GCyP的cDNA.进而设计特异引物,以非洲菊舌状花为材料,通过RT-PCR扩增并经T-A克隆后测序,获得一条长度为732 bp的序列.该序列经生物信息学分析确认其为GCyP,编码的GCyP含172个氨基酸残基,属于单结构域胞质型亲环素.GCyP序列提交GenBank后接收,登录号为EU1269167.     

非洲菊耐热变异离体筛选体系的研究

以非洲菊(Gerbera hybrida)6个品种为材料,通过未生根组培苗的耐高温实验,结合细胞膜相对电解质渗透率测定与增殖率统计,确定了45℃20h、35℃10~25d处理是各品种合适的热胁迫条件。高温处理后的组培苗细胞膜相对电解质渗透率与存活率之间存在良好的相关性,不同品种间的耐热能力有差异,同一品种在35℃与45℃下的耐热性表现不同。     

Application of centrifugal force to the extraction and separation of parasorboside and gerberin from Gerbera hybrida

A method for the separation of parasorboside and gerberin from the ornamental plant Gerbera hybrida (Asteraceae) has been developed. The two closely related glucosides were extracted using an Extrachrom instrument, a prototype multi-functional separation tool equipped with an extraction chamber. The rotation planar extraction procedure was compared with that of a medium pressure solid-liquid extraction system. The resulting extracts were pre-purified using rotation planar chromatography and the results compared with those obtained using medium pressure liquid chromatography with silica gel as the stationary phase and a mobile phase of methanol:ethyl acetate:tetrahydrofuran at selectivity point Ps = 111 with 1% formic acid as modifier. The title compounds were isolated from the purified extracts by TLC and their structures confirmed by 1H- and 13C-NMR spectroscopy.     

提取山羊免疫组织总RNA两种方法的比较研究

采用山羊不同免疫组织作为原料,以氯化钠-柠檬酸钠法与苯酚-稀盐法进行RNA提取的比较;分别确定两种方法对于不同免疫组织(肝脏、脾脏和淋巴)最大提取率分别为0.156%、0.150%、0.182%和0.142%、0.127%、0.164%。采用华特生公司蛋白质浓度检验试剂盒BCA法测定蛋白含量。定磷法测DNA含量,地衣酚显色法测RNA含量,样品用紫外分光光度计进行扫描,苯酚-稀盐法提取淋巴组织,RNA紫外吸收OD260:OD280=2.042077;氯化钠-柠檬酸钠法提取淋巴组织RNA紫外吸收OD260:OD280=2.1098。     

延迟荧光分析和激光共聚焦技术在检测非洲菊发育过程中表皮细胞叶绿素变化中的应用

以非洲菊Gerberahybrida为研究对象,对其生长发育过程（P1．P6期）中外轮舌状花进行延迟荧光（delayedfluorescence,DF）分析,并利用激光共聚焦成像系统对其各期表皮细胞中叶绿素的分布和相对含量进行检测,以研究非洲菊外轮舌状花发育过程中延迟荧光改变与其叶绿素变化的关系。结果发现在非洲菊外轮舌状花从P1到P6期颜色由嫩绿色变为绿色再逐渐变为金黄色的过程中,其荧光强度变化是先升高后降低。激光共聚焦成像结果表明,其花瓣表皮细胞中叶绿素的相对含量从P1到P4期先是逐渐增多,而后从P4到P6期逐渐减少。到后期只是在保卫细胞中还能观察到叶绿素的存在。实验结果表明应用DF技术,可以有效、无损伤地快速检测非洲菊花瓣中叶绿素的相对含量,结合荧光光谱分析以及激光共聚焦扫描显微成像技术,研究花瓣在发育过程中的叶绿素降解情况。     

非洲菊盘状花雄蕊发育与舌状花生长着色的对应关系

非洲菊(Gerbern hybrida)头状花序由外轮舌状花和内轮盘状花构成。通过观察内轮盘状花雄蕊花粉囊和花粉粒的形态结构与发育顺序,和测定外轮舌状花花瓣的长度、宽度、花色素苷含量等,对它们之间的对应关系进行了研究。花序外轮舌状花花瓣开始着色时为P3期,此时第1轮盘状花出现成熟花粉粒。研究明确了内轮盘状花花粉粒发育与外轮舌状花生长时期和花色素苷积累的对应关系。