回转模拟失重对心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原代谢的影响

为探讨模拟失重对心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原代谢的影响 ,本研究采用回转器模拟失重效应 ,通过免疫细胞化学和反转录聚合酶链式反应 (RT PCR)研究了回转模拟失重对原代培养的新生大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白及mRNA表达 ,以及胶原降解抑制物———金属蛋白酶组织抑制因子 (Tissueinhibitorofmetallopro teinase ,TIMP)mRNA表达的影响。免疫细胞化学染色显示回转组Ⅰ型胶原蛋白沉积增加 ;RT PCR分析显示Ⅰ型胶原α1链 (TypeⅠcollagenα1chain ,ColⅠA1)mRNA表达没有明显变化 ,TIMP 1、TIMP 2及TIMP 3的mRNA表达均增强。提示在回转模拟失重条件下 ,心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白沉积增加 ,作为胶原降解抑制物的TIMP可能是造成胶原沉积的原因     

胶原蛋白质（Ⅰ～ⅩⅧ型）

胶原蛋白质（Ⅰ～ⅩⅧ型）景沛（中国科学院上海生物化学研究所，上海，２０００３１）关键词胶原（Ⅰ～ⅩⅧ型）细胞外基质（ＥＣＭ）胶原是哺乳动物体内含量最多的蛋白质，占蛋白质总量的２５％～３０％，相当于体重的６％。胶原的英文名Ｃｏｌｌａｇｅｎ，源自希腊文，...     

胶原聚集体及其聚集行为研究进展

胶原是生物体重要的结构蛋白,具有良好的生物相容性、可降解性、低免疫原性、止血性和促细胞生长等生物特性,被广泛地应用到生物医学材料、食品、化妆品和药品等领域。胶原的聚集行为是影响胶原产品质量的重要因素,是胶原生产过程中急需解决的科学技术问题。总结了近年来胶原聚集行为的研究进展,着重介绍了胶原聚集行为和胶原聚集体、胶原聚集体结构对其生物学功能的影响、胶原聚集行为的影响因素、胶原聚集行为检测技术以及胶原聚集体的应用,以期为胶原产品的开发提供新思路。     

大鼠髓核细胞原代培养及表型鉴定

目的:探讨Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶消化分离培养髓核细胞及免疫细胞化学表型鉴定的可行性。方法:无菌条件下分离SD大鼠凝胶状髓核,采用Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶消化分离髓核细胞并连续培养,倒置相差显微镜下观察,随后进行免疫细胞化学染色检测不同代次髓核细胞HIF-1、Ⅰ、Ⅱ型胶原、MMP2及蛋白聚糖的表达情况,并给予MTT法测定髓核细胞生长曲线。结果:Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶分离培养原代髓核细胞需要12 d左右贴壁,达95%融合需要34 d,而传代髓核细胞贴壁速率明显增快至10 h,且其倍增时间约为2.5 d;免疫细胞化学显示髓核细胞均表达HIF-1、Ⅰ、Ⅱ型胶原、MMP2和蛋白聚糖,且随着髓核细胞传代其HIF-1α、HIF-1β、Ⅰ型胶原及MMP2表达均增加,但Ⅱ型胶原表达降低,而蛋白聚糖表达无明显差异;MTT法显示随着髓核细胞传代其增殖有所减缓。结论:Ⅱ型胶原酶联合透明质酸酶可成功分离髓核细胞,提高培养效率,且HIF-1α、HIF-1β、Ⅰ、Ⅱ型胶原及MMP2可作为髓核细胞表型分子用于髓核细胞的鉴定。     

胶原样分子与肿瘤关系研究进展

细胞外基质不仅维持着体内细胞微环境的稳定,还在细胞的正常生长、增殖以及细胞之间的信号传导中起着重要作用。肿瘤发生时,基质中的分子组分发生了改变,这些改变朝着有利于肿瘤细胞生长侵袭的方向发展。在这个过程中,细胞外基质的主要成分在合成和分解上发生巨大变化,胶原分子便是其中之一,胶原分子作为细胞外基质中的主要成分,对细胞的黏附、运动、迁移等活动起着重要作用。随着研究的深入,发现越来越多的胶原分子参与了肿瘤的发生发展。基质中还存在着一些分子,它们在结构上和胶原蛋白一样含有三螺旋胶原结构域,在肿瘤的发生发展过程中同样发挥着重要作用。本文就包括胶原分子在内的含有胶原结构的分子在肿瘤中的作用做一综述。     

MMP-2与Ⅰ型胶原关系的研究进展

MMP-2与I型胶原分别为基质金属蛋白酶家族的重要成员和细胞外基质的主要成分,近年来研究发现,MMP-2与Ⅰ型胶原的表达与调控在多种与胶原代谢有关的疾病中起着重要作用。通过增强或抑制MMP-2来调控I型胶原,进而防止疾病的发生发展已成为很多疾病的研究热点。对MMP-2与Ⅰ型胶原关系更新的认识也引起了越来越多的关注,必然带动对MMP-2与Ⅰ型胶原更深层次的研究,本文就近年来有关MMP-2与Ⅰ型胶原的研究进展做一综述,为多种胶原代谢疾病发病机理与防治的探究提供新的思路和理论依据。     

PCR标记前胶原基因探针及其检测肝星状细胞前胶原基因表达

目的：建立一种新的前胶原基因探针制备方法,并用克勤克俭 检测HSC的前胶原mRNA表达。方法：从NCBIGeneBank查询Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型前胶原基因的序列,根据基因序列用OLIGO软件设计其引物：RT-PCR扩增基因,并用不对称PCR方法和DIG-dUTP标记前胶原基因探针,用其原位杂交检测HSC前胶原基因表达。结果：用所设计的引物和RT-PCR扩增得到目的基因,制备了DIG标记的前胶原基因探针,并用其检到HSC的前胶左面的基因表达。结论：建立了一种新的、较简易的前胶原基因探针标记方法,并对其它基因探针的标记有借鉴意义。     

牛Ⅲ型前胶原的提取及抗血清的制备

 在中性pH和蛋白酶抑制剂的存在下,从新生小牛皮肤中提取Ⅲ型前胶原。利用反复盐析法将Ⅰ型胶原和前胶原与Ⅲ型胶原和前胶原分开,再经DEAE纤维素层析分离出Ⅲ型前胶原。 用提取的Ⅲ型前胶原免疫家兔,获得抗血清,用酶联免疫法测定效价达1:10O,000。经与国外标准品鉴定该提取物为Ⅲ型前胶原。     

恒牙牙根不同发育阶段牙髓中基质金属蛋白酶-8和I型胶原的表达

目的探讨Ⅰ型胶原及MMP-8在牙齿发育不同阶段的表达及作用。方法将人牙根不同发育阶段的牙髓分成三组,即牙根开始发育组、发育中组、根尖孔闭合组。采用SABC法对标本石蜡切片进行Ⅰ型胶原及MMP-8的免疫组化染色。结果Ⅰ型胶原与MMP-8均存在于牙髓中的成牙本质细胞、成纤维细胞、血管壁及细胞外基质中。牙根刚开始发育时染色最强,根尖孔闭合时染色最弱。Ⅰ型胶原与MMP-8的表达呈正相关关系。结论①牙本质和前期牙本质中Ⅰ型胶原主要是由成牙本质细胞分泌的,且随着牙齿发育,分泌胶原能力减弱;②MMP-8参与牙齿成熟过程;③MMP-8参与牙齿发育中Ⅰ型胶原的降解,有维持牙髓中胶原稳定的作用。     

硅肺大鼠和汉防己甲素治疗的硅肺大鼠肺中酸溶性胶原的变化

本文比较了正常大鼠、实验性硅肺大鼠和汉防己甲素治疗大鼠肺中酸溶性胶原在含量,羧甲基纤维素柱层析和氨基酸组成等方而的差异。硅肺组在鼠肺中总胶原和酸溶性胶原含量都增高。在酸溶性胶原中出现了氨基酸组成与α1(I)不同的α1(I)~b 峰,它随着纤维化的程度而增多。汉甲组的酸溶性胶原中含有大量被释放的胶原片段,其中还包括α1(I)链的前体。对上述结果作了初步讨论,并试图解释汉甲抑制硅肺纤维化发生的原因。     

Clq分子生物学

Ｃｌｑ分子量４６０ｋＤ，为补体成分最大的一种，化学组成为胶原样蛋白。人、小鼠ＣｌｑＡ、Ｂ、Ｃ链基因已获得定位、克隆和部分表达。在蛋白质水平上，研究了Ｃｌｑ及Ｃｌｑ结合分子相互作用拉点，这些对了解Ｃｌｑ功能及在疾病中的作用具有重要意义。     

硅肺大鼠和汉防己甲素治疗的硅肺大鼠肺中酸溶性胶原的变化

本文比较了正常大鼠、实验性硅肺大鼠和汉防己甲素治疗大鼠肺中酸溶性胶原在含量,羧甲基纤维素柱层析和氨基酸组成等方面的差异。硅肺组大鼠肺中总胶原和酸溶性胶原含量都增高。在酸溶性胶原中出现了氨基酸组成与α1(I)不同的α_1(I)~b峰,它随着纤维化的程度而增多。汉甲组的酸溶性胶原中含有大量被释放的胶原片段,其中还包括α1(I)链的前体。对上述结果作了初步讨论,并试图解释汉甲抑制硅肺纤维化发生的原因。     

胶原蛋白在组织工程及临床中的应用

1.前言 胶原蛋白(以下简称为胶原)呈纤维状,是哺乳动物中含量最为丰富的动物蛋白。胶原能与各种细胞结合以构成性能各异的组织,如:软骨、皮肤、骨骼和肌腱。由于胶原是构成哺乳动物和人类众多组织的成份之一,所以近年来成为一种在组织工程上应用十分广泛的生物材料。尽管其研究的面涉及范围较广,但其主要有三个方面:①分子结     

硬脑膜细胞体外培养模型的建立

目的：建立兔硬脑膜缺损的体外培养模型,观察不同细胞外基质对其愈合过程的影响,研究硬脑膜修复的机制,为以后检测硬脑膜移植物提供理论基础。方法：兔硬脑膜体外培养,再用免疫细胞化学方法和扫描电镜进行观察。结果：预先铺过胶原的培养板中培养8～10d后有细胞从硬脑膜缺损的边缘逸出、增殖,13～15d硬脑膜缺损愈合;而以多聚赖氨酸及层粘连蛋白铺底的培养板中没有看到细胞逸出的现象。硬脑膜细胞对波形蛋白抗体呈强阳性反应,对第Ⅶ因子抗体则为阴性反应;在电镜下可以看到新生胶原的生成。结论：成功建立一种硬脑膜缺损的体外培养模型;成纤维细胞从硬脑膜创缘的逸出、增殖是硬脑膜缺损愈合的重要机制。     

羟基化修饰对大鼠胶原热稳定性的影响研究

采用差示扫描量热仪(DSC)研究羟脯氨酸(Hyp)含量对胶原热稳定性的影响。以不同周龄BN大鼠皮肤为原料制备了胶原,分析制备胶原中Hyp的含量;采用DSC测定不同Hyp含量胶原的临界变性温度及焓变;采用圆二色光谱(CD)检测提取胶原的二级结构。结果表明,提取胶原在41.3℃发生三螺旋解聚,CD光谱分析结果表明,当样品经临界变性温度处理后,部分三螺旋结构转化为无规则线圈结构。胶原变性过程中所需热量与羟脯氨酸含量呈正相关,实验建立了胶原热变性过程中焓变与Hyp含量的关系。该研究表明胶原中脯氨酸羟基化修饰是影响胶原热稳定性的关键因素。     

NaCl盐析提取酶解液中Ⅱ型胶原的工艺

采用响应面分析法对酶解液中Ⅱ型胶原的盐析条件进行优化,并通过SDS-PAGE电泳及圆二色谱对其纯度和结构进行鉴定。结果表明:酶解液中Ⅱ型胶原的最佳盐析条件为NaCl浓度3.5mol/L、22.3℃、31.08h,在此条件下Ⅱ型胶原回收率为90.88%;采用盐析法从酶解液中制备的Ⅱ型胶原,具有较高纯度并保持着完整的3股螺旋结构。     

大鼠软骨Ⅱ型胶原体外胶原原纤维的形成

建立了Ⅱ型胶原的提取和纯化方法,观察大鼠软骨Ⅱ型胶原体外胶原原纤维形成的动力学、胶原原纤维的稳定性和超微结构。结果表明,Ⅱ型胶原静止期、增长期分别为15、120min,增长期凝胶化速率0.0060,凝胶可复性13.58％,胶原原纤维呈典型的具有64nm周期横纹的自然纤维结构,但纤维直径较体内增长。这些对研究体内胶原原纤维的形成过程及调节机制具有重要意义。     

胶原及其促创面修复作用的研究

本文介绍了牛胶原和猪真皮胶原制备方法、生物学特点以及动物移植的初步效果。结果表明胶原制备简便易行 ,氨基酸含量丰富 ,动物移植胶原材料效果肯定。提示胶原是创伤修复材料的理想天然生物资源     

CTHRC1与肿瘤关系的研究进展

胶原三股螺旋重复蛋白1基因是从大鼠正常动脉和受损动脉中筛选出的差异表达基因,其通过TGF-β和Wnt/PCP通路发挥作用,使胶原生成减少,促进细胞迁移。在多种肿瘤中发现CTHRC1异常表达,并与肿瘤转移相关。该文就CTHRC1与肿瘤的关系作一综述。     

肌肽对高糖环境下心肌成纤维细胞胶原表达的影响

目的:探讨肌肽对高糖环境下心肌成纤维细胞中胶原生成的影响及作用机制。方法:原代培养心肌成纤维细胞,将细胞分为正常糖组(NG,5.5mmol/L glucose)、高糖组(HG,25mmol/L glucose)、高糖+10mmol/L肌肽组、高糖+20mmol/L肌肽组、高糖+40mmol/L肌肽组、高糖+SB组(HG+10μmol/L SB203580)、高糖+PD组(HG+10μmol/L PD98059)。ELISA检测胶原Ⅰ、Ⅲ的含量,Western blot检测TGF-β1、p-p38 MAPK和p-ERK(1/2)等蛋白的表达。结果:与正常糖组相比,高糖组中胶原Ⅰ和胶原Ⅲ含量增加(P<0.01);TGF-β1、p-p38和p-ERK等表达增加(P<0.01);与高糖组相比,高糖+肌肽组中胶原Ⅰ、Ⅲ、TGF-β1、p-p38、和p-ERK等均降低(P<0.05);高糖+SB组和高糖+PD组中胶原Ⅰ、Ⅲ表达减少(P<0.05)。结论:肌肽对心肌成纤维细胞中胶原生成具有抑制作用,且通过MAPK通路实现。