多肽激素与靶细胞相互作用的形态学研究

用形态学方法,主要是电子显微镜放射自显影和铁蛋白标记的方法研究多肽激素与靶细胞的相互作用,发现当靶细胞暴露于激素时,激素首先与细胞表面结合。标记激素在细胞表面的分布不均匀,常选择性地结合于微绒毛和质膜的特化区域。配体与受体结合后,可在细胞膜平面内重新分布,并集中于覆衣凹陷,经胞饮作用进入细胞,在溶酶体内被分解。     

人鼻咽癌细胞纤维肌动蛋白的共聚焦激光扫描显微镜观察

为探讨高分化和低分化鼻咽癌细胞纤维肌动蛋白（F-actin)的空间结构,采用共聚焦激光扫描显微镜光学切片技术结合异硫酸氢荧光素－鬼笔环肽（FITC－phalloidin)标记F-actin、碘化吡啶（PI）标记核酸的荧光探针双重标记技术,对鼻咽癌细胞F－actin进行光学切片、三维重组及形态学观察。实验结果可见高分化鼻咽癌细胞F－actin呈芒刺状分布于细胞表面,而在细胞突起末端细胞间连接处呈束状,放射状密集分布;代分化鼻咽癌细胞F－actin明显少于高分化鼻咽癌细胞,仅沿细胞膜表面呈弯曲细小绒毛状分布。结果表明F－actin在细胞内的空间分布与鼻咽癌的分化类型有关,肿瘤或恶性转化细胞的F－actin在形态和结构方面有异常改变;共聚焦激光扫描显微镜光学切片结合荧光双重标记技术是研究细菌骨架结构的理想方法。     

肝细胞表面去唾液酸糖蛋白受体的流式细胞分析

建立肝细胞表面去唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）的流式细胞分析方法（FCM）,对正常及损伤鼠肝细胞、肝癌细胞（BEL-7402）表面的ASGPR作同步比较分析.以异硫氰酸荧光素标记的新半乳糖白蛋白（FITC-NGA）为ASGPR的特异性配体,以培养的正常肝细胞（L-02）为靶细胞,建立肝细胞表面ASGPR的FCM.测定并计算正常及损伤鼠肝细胞,BEL-7402细胞与同一浓度的FITC-NGA同步反应后的平均荧光强度（MIF）值.FITC-NGA与L-02细胞表面ASGPR趋近饱和结合的浓度为0.4 mg/L,该浓度下正常及损伤鼠肝细胞,BEL-7402细胞的MIF值分别为228.7、5.81、1.13.该结合可以被至少50倍于FITC-NGA的NGA或10 mmol/L的EDTA完全抑制.FCM能够良好地揭示FITC-NGA同ASGPR之间的受配体结合特性.该方法证实BEL-7402细胞表面几乎没有ASGPR,损伤鼠肝细胞表面ASGPR的数量较正常鼠肝细胞显著减少.     

不同靶器官的糖皮质激素细胞受体的功能相同吗?

近年来发现,大鼠的胸腺、肾、白脂肪及肝等不同靶组织的皮质激素受体具有相同的生物学功能:1)不同靶组织结合的活性相同2)与其它甾体激素如孕酮、睾丸酮、雌二醇、地塞米松的竞争抑制物的亲和性以及与这些甾体激素的结合情况也彼此相同。然而,不同的靶细胞对同一种皮质激素却表现出不同效应,例如地塞米松能刺激肾细胞合成磷酸烯醇丙酮酸羰激酶,但激素对脂肪细胞中的该酶的合成有抑制作用,这可能反映了激素对不同靶细胞的作用除通过与受体的结合外,还有其它的作用途径     

甾体激素作用于靶细胞的分子机制

有关甾体激素作用于靶细胞分子机制的研究,近十几年来,由于方法技术的提高和建立,有了很大的发展。Jonsen 等(1962)用高比度的~3H-雌二醇,对其在子宫、阴道等靶器官中的积聚、滞留进行了比较,证实激素能专一性地与其靶细胞结合,这在研究激素对细胞的作用方面作出了主要贡献。嗣后,有了关于雌素受体的发现。Jansen 等(1967)见到,大鼠、小牛子宫细胞质内有一种与雌素亲和性很强的蛋白,这种蛋白称为雌素受体。迄今,有关甾体激     

荧光素标记检测乙型肝炎病毒表面抗原特异性杀伤性T淋巴细胞方法的探讨

用绿色荧光前体化合物Calcein AM标记靶细胞,经过与杀伤性T淋巴细胞(CTL)效应细胞数小时的孵育,通过分析培养上清中的荧光强度检测CTL效应。通过对一系列标记条件的研究：不同浓度Calcein AM标记靶细胞、不同洗涤缓冲液、不同标记细胞浓度、不同洗涤次数、不同裂解液配方,确定Calcein AM荧光素标记法的最佳条件。用该方法检测乙型肝炎病毒表面抗原的DNA疫苗免疫Balb／c小鼠对P815S细胞的CTL效应,E／T比为10时,杀伤效率接近饱和,达到65％。通过荧光显微镜直接观察杀伤后的P815S细胞,细胞破裂程度与计算出的杀伤效率有一定相关性。     

病毒特异性CD8+T细胞抗病毒免疫的研究进展

病毒利用宿主细胞核酸和蛋白质装置进行增殖,并与宿主细胞表面的受体结合,感染众多靶细胞c一旦建立感染,抗原呈递细胞通过内源性抗原呈递途径加工、呈递病毒抗原,激活机体免疫应答。病毒特异性免疫主要机制是细胞毒性T淋巴细胞作用,清除病原体和感染的靶细胞．同时CD8^ T细胞分化为记忆T细胞,介导再次免疫应答。     

甾体激素的受体和作用机理

在正常体温条件下,甾体激素很容易进入所有细胞。在对激素敏感的细胞中,这些激素通过与胞浆内的一些可溶性大分子相结合而被保留(图1)。这些可溶性结合分子称为胞浆受体(Rc),但在体内它们确切的本质并不知道,似乎是一些由2个或更多的亚单位组成的大的蛋白质分子。一种甾体激素开始的作用包括:激素进入靶细胞,在那里它被识别,并与一种对某一个激素特异的胞浆受体结     

荧光素标记检测乙型肝炎病毒表面抗原特异性T淋巴细胞方法的探讨

用绿色荧光前体化合物Calcein AM标记靶细胞,经过与杀伤性T淋巴细胞(CTL)效应细胞数小时的孵育,通过分析培养上清中的荧光强度检测CTL效应.通过对一系列标记条件的研究:不同浓度Calcein AM标记靶细胞、不同洗涤缓冲液、不同标记细胞浓度、不同洗涤次数、不同裂解液配方,确定CalceinAM荧光素标记法的最佳条件.用该方法检测乙型肝炎病毒表面抗原的DNA疫苗免疫Balb/c小鼠对P815S细胞的CTL效应,E/T比为10时,杀伤效率接近饱和,达到65%.通过荧光显微镜直接观察杀伤后的P815S细胞,细胞破裂程度与计算出的杀伤效率有一定相关性.     

猫外侧膝状体神经元HRP示踪结合生长抑素的免疫组织化学研究

本文采用HRP逆行示踪的方法,在猫视皮质的17区多点微量注射30％HRP,逆行标记外侧膝状体核（LGN）至视皮质的中继神经元,继用免疫金银法作生长抑素（SS）免疫组织化学,试图双标记LGN的中断神经元。结果显示：光镜下HRP标记细胞与SS是性细胞清晰可辨,HRP标记细胞内为较粗的棕色颗粒,分布于胞浆和树突基部;而SS免疫阳性细胞内的颗粒为银染黑色颗粒;HRP和SS双标记神经元内,上述两种颗粒共存,警备LGN的A、A1和C板层均有SS免疫阳性凶的分布;HRP标记细胞分布于A和A1板层;双标记神经元位于A和A1板层;C板层未见。本文结合以前的研究认为,SS在LGN至视皮质传导通路中的作用,可能与视觉信息的传递和调制有关。     

转基因益生菌：预防肠道感染的新型微生态制剂

引起主要肠道疾病的许多致病菌能够特异性地利用宿主肠道细胞表面的各式寡糖, 将其作为自身黏附或者分泌毒素的受体。因此, 阻断致病菌及其分泌毒素与宿主靶细胞表面受体结合是一种可行的治疗方法。一类宿主肠道细胞表面受体基因重组益生菌在消化道内能够高效结合致病菌和所分泌的毒素, 具有良好的预防肠道疾病的应用前景。本文主要以类志贺毒素受体重组益生菌为例, 阐述转基因益生素的原理、技术及其疗效和潜在的问题与对策。     

生长因子与癌

生长因子是通过与细胞膜上专一性受体结合从而刺激细胞增殖的多肽分子。与众所周知的胰岛素和促肾上腺皮质激素等多肽激素不同,不仅在所产生的反应,而且从分泌细胞到靶细胞的信息传递方式上都有差别。生长因子通常不以内分泌方式起作用,可能是仅通过细胞间隙的短程扩散在局部区域内发生作用。     

树突状细胞和抗原负载树突状细胞在肿瘤模型鼠体内的分布和形态学观察

目的:研究体外培养的小鼠树突状细胞(dentritic cells,DCs)和抗原负载树突状细胞在肿瘤模型鼠体内的分布和形态,为肿瘤的生物学治疗提供形态学基础.方法:分离和培养DC,制备B16黑色素瘤细胞抗原,进行共培养,即为抗原负载的DC,Brdu标记DC和抗原负载的DC,建立B16黑色素瘤小鼠模型,于瘤周围皮下注射Brdu标记的DC和抗原负载的DC.应用光镜、免疫组化方法和透射电镜观察DC和抗原负载DC在肿瘤模型鼠体内的分布和形态.结果:免疫组化染色显示Brdu标记的抗原负载DC与DC比较,体积较大.实验组Brdu标记的DC和抗原负载DC分布的数密度和面密度,分别与对照组比较,有显著差异(P＜0.01).电镜下抗原负载DC细胞与DC比较体积较大,核有切迹,细胞表面的突起较粗大弯曲,形态较成熟.结论:抗原负载DC比DC更易集聚于肿瘤组织周围,推测抗原负载DC比Dc可能诱导抗肿瘤效应更强.     

白芷培养细胞外钙调素结合蛋白的胶体金电镜定位研究

利用胶体金标记技术制备了具有生物活性的植物CaM-BSA-gold探针,并用此探针建立了白芷愈伤组织培养细胞胞外钙调素结合蛋白(CaMBPs)的透射电镜标记方法。标记结果显示,在1mmol/L Ca~(2 )存在下,用EGTA洗涤过的白芷愈伤组织培养细胞壁表面有金颗粒分布,而分别在含有EGTA、TFP、过量未标记的CaM、CaM抗体存在的情况下,用金标CaM探针进行标记.以及用金标羊抗兔抗体替代金标CaM探针进行标记的各对照组,细胞壁表面金颗粒则消失,说明白芷愈伤组织培养细胞壁表面存在着CaM结合位点或CaMBPs。     

~(125)Ⅰ标记单抗LC-I与肺腺癌细胞体内外结合特性的研究

本文用~(125)Ⅰ标记LC-1进行了一些体内外实验。实验结果表明:LC-1单抗的结合常数为4.8×10~8M~(-1),LC-1针对的SPC-A_1细胞表面抗原的位点数为7.2×10~4/细胞;LC-1与LAC-122两单抗针对的抗原决定簇没有交叉;用蛋白酶和过碘酸钠处理SPC-A_1细胞,前者对LC-1的结合抑制39%,后者抑制66%;LC- 1不但有较强的体外结合靶细胞的能力,从LC-1在荷瘤裸鼠中的组织器官分布来看,LC-1与肿瘤有较高的体内亲和性,并且是特异性的结合。     

自然杀伤T细胞抗胞内菌感染的研究进展

自然杀伤T细胞(NKT细胞)是免疫细胞中一类具有特定标记的T细胞亚群,能特异性识别南抗原呈递细胞表面CD1d分子所呈递的糖脂类抗原.活化后的NKT细胞能分泌多种细胞因子,参与机体的天然免疫和获得性免疫反应,还能直接杀伤靶细胞,具有效应细胞的功能.研究发现,NKT细胞在抗胞内菌感染中发挥着重要作用.     

扫描电镜的细胞表面分子标记术

近年来扫描电镜的细胞表面分子标记术有较大进展,使用的标记物已达十几种,这些标记物具有易识别、稳定性好等特点。使用的配体则有植物凝集素、抗体和药物三类。通常标记物与配体的连接采用两种方法,即采用交联剂的共价键法及非共价键吸附法。标记物-配体复合物可采用层析、离心等方法分离纯化,然后通过各种方法与细胞表面的特异分子结合,从而在扫描电镜下观察、分析这些表面分子的数量和分布。本文对该技术所涉及的实验方法及注意事项作了较详尽的讨论。     

问题解答

问神经激素与神经递质有什么不同? 答神经激素和神经递质都是细胞之间的化学信息分子。神经激素是神经分泌细胞的核周体产生的活性物质,沿着轴突输送至球状末梢,然后释放到血液中再作用于其靶细胞。神经递质是由神经细胞轴突末梢释放的化学物质,在二个神经元隔开的小间隙(突触)中扩散,或在神经元与效应器细胞间扩散。二者比较如下。     

天花粉蛋白对滋养层细胞专一损伤机制的研究

在体外培养条件下,天花粉蛋白胶体金以受体介导的内吞方式进入滋养层细胞和绒癌细胞,最终进入胞质溶胶附着在核糖体上。经相同处理的肝癌细胞,绿猴肾细胞和正常鼠胚肝细胞,金颗粒既不与这些细胞表面结合,也没有被专一内吞的现象。分别用BSA,转铁蛋白活化的胶体金处理滋养层细胞和绒癌细胞的比较观察,也证明滋养层细胞和绒癌细胞对天花粉蛋白的专一亲和性。更有趣的是:天花粉蛋白肝癌单抗胶体金结合物进入绒癌细胞的方式与天花粉蛋白的结果相同;先以旰癌单抗处理也不影响天花粉蛋白肝癌单抗结合物进入绒癌细胞。然而,对于旰癌细胞,天花粉蛋白肝癌单抗胶体金颗粒则专一地结合在细胞的微绒毛表面,这种结合因先以肝癌单抗处理而明显地被竞争抑制。这些实验结果相互印证地提供天花粉蛋白对滋养层细胞和绒癌细胞高度专一的亲和性,并证明天花粉蛋白对靶细胞的原初损伤部位是核糖体。进一步探讨天花粉蛋白在靶细胞表面结合位点的化学性质以及这种蛋白在靶细胞内的转运机制将是重要的问题。     

大鼠海马触液神经元的分布特征及其纤维联系

本文应用ＨＲＰ追踪与电镜结合的方法研究了大白鼠海马接触脑脊液神经元的分布特征和皮质内联系。光镜观察在海马的多形细胞层和锥体细胞层等处可见散在的神经元被标记,而在室管膜层标记的细胞较多,它们分布于交织成网的阳性纤维中。透射电镜可见海马室管膜层的ＨＲＰ反应阳性的神经细胞、树突末稍及神经胶质细胞。在海马室管膜上也见到了被标记的神经纤维。同时在海马室管膜层内还发现未标记的阴性轴突与被ＨＲＰ标记的阳性树突构成的轴－树突触。上述结果提示海马为接触脑脊液神经元存在的部位之一,其接触脑脊液神经元并受到其它神经元的突触调控