利用氩离子激光微束照射研究微核仁的形成

为探讨微核仁的形成机理,对组织培养的雄性长鼻鼷(Potorous tridacylis)肾脏上皮细胞株(PTK_2)间期细胞的核仁及早前期细胞的核仁进行了氩离子激光微束照射。结果表明,激光微束照射有丝分裂前30小时的间期细胞的核仁以及早前期细胞的核仁之届,细胞都能正常地进行有丝分裂。但子细胞不能形成正常核仁,却形成了数个微核仁,而且二者所形成的微核仁数目及大小基本上是一致的。初步证明存在核仁组织区以外的“候补”核仁组织区,形成微核仁的RNA可能是“候补”核仁组织区基因转录的产物。     

核仁是怎样行使其生理功能的

真核细胞间期核中最显著的细胞结构是核仁。在光学显微镜下,核仁通常呈均质而致密的球体;在电子显微镜下,核仁主要分为三个区,即.1)颗粒区,含有核糖体前体颗粒;2)致密的丝状区即纤维区,包含有正在转录的RNA分子;3)浅染色区,或称为核仁内染色质,该区包含有从染色体核仁组织者区来的DNA,其中含有rRNA基因。因而,从成份上说,核仁是由DNA、RNA和蛋白质组成的,它的主要功能是转录rRNA和装配核糖体亚单位。     

梨实生树不同发育区的叶片细胞学研究

采用显微分光光度计和显微图像分析仪比较研究了8年生梨实生树(Pyrus pyrifliaNakai)童区和成年区叶片细胞核 DNA含量、RNA含量和细胞、细胞核面积大小的差异。梨实生树从童区向成年区转变后,叶片内细胞核DNA含量上升,细胞内RNA合成加强,细胞和细胞核面积增大;同时,叶肉组织结构分化程度提高,叶面积增大,叶片加厚。     

湛江隐藻(Cryptomonas zhanjiangis Hu et Li)核形体的细胞化学研究

隐藻类的核形体,是存在于其质体周腔内的一个特殊细胞器。除DNA和RNA外,核形体是否含有碱性蛋白,有无核仁或核仁结构成份,以及其功能如何,国内外迄今未见报道。我们用4-6-diamidino-2-phenylindole(DAPI)荧光染色法、Uranyl acetate-EDTA-Lead染色法、碳酸氨银染色法(AS)和特异性显示核仁纤维区酸性蛋白的Ag-NOR银染法,分别在光镜和电镜下对湛江隐藻(Cryptomonas zhanjianagis Hu et Li)进行了核形体细胞化学的研究。除证实核形体中DNA、RNA和极少量碱性蛋白存在外,还首次证实了核形体中类似于核仁纤维区的酸性蛋白的存在。我们认为,隐藻的核形体,作为一个恒定的细胞结构和退化的细胞核残迹,在漫长的演化过程中可能较多地保留了核仁部分而较少地保留了其核质部分。其功能可能与隐藻色素复合体中某些蛋白质的合成有关。     

小麦细胞核仁中rRNA基因转录的超微定位

真核细胞核仁中rRNA基因转录位点是长期以来未能解决的问题。以小麦细胞为研究材料,应用常规电子显微镜技术,观察了小麦细胞核仁纤维中心(Fibrillar centers,FC)内染色质的超微结构;并通过DNA抗体阐明了核仁中DNA位于纤维中心、致密纤维组分(Dense fibrillar component,DFC)以及两者的过渡区域;应用RNA聚合酶I相关转录因子UBF(Upstream binding factor)抗体所做的分析显示,小麦细胞核仁中UBF位于FC与DFC的过渡区域以及DFC中,在FC中没有UBF的存在;进一步借助于RNA/DNA杂合体抗体选择性地直接标记核仁中rRNA基因的转录位点,结果表明了小麦细胞核仁rRNA基因的转录位点是在FC与DFC的过渡区域及DFC中。     

小麦细胞核仁中rRNA基因转录的超微定位（简报）

真核细胞核仁中rRNA基因转录位点是长期以来未能解决的问题。以小麦细胞为研究材料,应用常规电子显微镜技术,观察了小麦细胞核仁纤维中心（Fibrillar centers,FC)内染色质的超微结构;并通过DNA抗体阐明了核仁中DNA位于纤维中心、致密纤维组分（Dense fibrillar component,DFC）以及两者的过度区域;应用RNA聚合酶I相关转录因子UBF（Upstream binding factor) 抗体所做的分析显示,小麦细胞核仁中UBF位于FC与DFC的过渡区域以及DFC中,在FC中没有UBF的存在;进一步借助于RNA／DNA杂合体抗体选择性地直接标记核仁中rRNA基因的转录位点,结果表明了小麦细胞核仁rRNA基因的转录位点是在FC与DDFC的过渡区域及DFC中。     

鼠肝细胞核仁结构与rRNA基因转录位点研究

通过常规电子显微镜观察了鼠肝细胞核仁的超微结构,并采用NAMA-Ur细胞化学DNA特异染色方法分析了核仁中DNA的分布及其原位位置,直观的显示了鼠肝细胞核仁DNA来源于核仁伴随染色质,并在核仁DFC区域连续伸展,排布于FC的边缘部位及DFC区域中,进一步借助于RNA/DNA杂合体抗体选择性直接标记核仁中rRNA基因转录位点,结果表明了鼠肝细胞核仁rRNA基因的转录位点是在FC的边缘及DFC区域.     

HpD加激光显微照射Hela单细胞的超微结构研究

本文叙述了一种能用于HpD加激光微束照射单细胞的电子显微镜技术。在光学显微镜下,预选择的单细胞受激光照射后,单层细胞经过固定、包埋、切片等一系列过程,仍然能在电镜下重新找到所选择的单细胞。Y-HpD加激光照射后的Hela单细胞电镜研究表明:光剂量为1.88毫焦/微米~2照射核仁时,不仅受照射部位出现透亮区,而且未受照射的胞质内的线粒体等也发生异常病变。当光剂量增加到4.5毫焦/微米~2照射胞质时,其损伤不仅在受照射部位明显可见,并且,另一部分未受照射的细胞质也发生裂解,而细胞核无显著变化。研究结果表明,胞质与核相比,胞质更易受到损伤,而细胞质内的线粒体对HpD加激光有较大的敏感性。     

激光捕获显微切割技术在肿瘤研究中的进展

激光捕获显微切割技术(LCM,Laser Capture Microdissection)是目前最先进的组织纯化技术,LCM结合各种基于细胞、DNA、RNA、及蛋白质的分子生物学技术成功运用于肿瘤学研究的各个方面,通过对切割后细胞的基因组,转录组,蛋白组等分析研究后得到了大量有用的结论.本文就其在肿瘤学研究中的应用进行综述.     

对DNA与RNA区分染色实验的改进

核酸是主要的遗传物质 ,核酸的主要成分在细胞核中是 DNA,在细胞质与核仁中的是 RNA。由于 DNA与RNA在化学组成与分子结构上存在一定差别 ,因而对不同染料有不同的染色反应 ,可以根据这一原理来定性鉴定细胞中 DNA与 RNA的存在与分布。实验所采用染料为甲基绿 -焦宁 (Netyl- Green-Pyronin)染液 ,其中染液中的甲基绿能使细胞核中的DNA呈现绿色 ,而焦宁则能把细胞质与核仁中的 RNA染成红色。因此可以根据细胞中不同部位呈现颜色的不同来进行定性鉴定。1　材料与方法为了使实验方法快速简易而效果清晰准确 ,我们从染液的配方、材料…     

核仁和核仁蛋白

核仁是位于细胞核内的非膜结构。电子显微镜下的核仁从形态上可以分为三层结构包括纤维中心区(FC)、高密度纤维区(DFC)和颗粒区(GC)。核仁内的蛋白有核糖体蛋白和非核糖体蛋白两种。利用蛋白质组学方法已经鉴定了350多种核仁蛋白,其中包括80多种核糖体蛋白。核仁是核糖体合成的场所,核仁中的非核糖体蛋白对核糖体的生物合成起关键调控作用。核仁不仅是细胞内通讯和核糖体：RNA加工的中心,而且在细胞周期、细胞增殖和衰老中起重要调控作用;核仁也是tRNA、mRNA和其它类型小分子RNA加工的场所。因此核仁是一个多功能的细胞生命活动中心。     

正常人体细胞染色体银染核仁形成区的研究

原位分子杂交证明,各种哺乳动物的119 s- 28 S核搪体RNA基因（rDNA）位于特定的染色体的核仁形成区（NOR),最近,Gootlpasture 等应用银胺法特异地染色核仁形成区,证实银染的位置是染色体＿L核塘体RNA基因的位置。 此后,进一步证明银染物质不是rDNA,亦不是 rRNA,可能是核仁形成区特异的蛋白质,即和 r1:NA转录相联系的酸性蛋白。人类核糖体 RNA基因位于5对近端着丝点染色体短臂的 次猛痕处,即人类的核仁形成区。在正常人中, 常不是所有核仁形成区皆彼银染,其范围大约 4-10。应用银染法可以觉察正常人体核塘体 RNA基因的活动。     

激光显微切割分离细胞的微量RNA质量鉴定体系的 建立

摘要: 探索一套激光显微切割(Laser capture microdissection, LCM)分离细胞后获得的微量RNA质量鉴定标准操作流程。选取3个低温保存的胃癌旁组织样本, 冰冻切片进行甲酚紫染色和病理学检查, 利用激光显微切割技术分离非癌上皮细胞, 提取RNA并以Agilent 2100生物分析仪鉴定RNA的纯度和完整性。同时, 选择高、中、低3种不同表达丰度的6个基因(EF1A, ACTB, GAPHD, B2M, MED1, CK20), 在每个基因的5′和3′端设计引物, RT-PCR扩增。以3个培养细胞制备的高质量RNA和3个有降解的胃癌旁组织样本RNA作对照, RT-PCR扩增结果与Agilent 2100生物分析仪的结果高度一致。结果显示冻存组织进行冰冻切片结合病理学检查后, LCM获取细胞提取微量RNA采用RT-PCR进行质量鉴定是一种操作简单的稳定方法, 可以作为肿瘤基因组研究的有效和常规方法。     

洋葱细胞核仁内DNA的结构变化及排布过程(英文)

以洋葱 (AlliumcepaL .)细胞为研究材料 ,应用DNA细胞化学特异染色方法 (NAMA_Ur)及常规电子显微镜技术 ,观察了洋葱细胞核仁FC(纤维中心 )内DNA的超微结构 ,发现FC内DNA存在着一个介于集缩到解集缩之间的变化过程 ,并揭示了DNA在核仁内的连续排布过程 ,即核仁外DNA经过核仁通道进入到FC后 ,继续沿FC的边缘或DFC(致密纤维成分 )与FC的交界处环绕FC而排布 ,再经FC之间的核仁通道 ,延伸到另外的FC区域     

应用激光微束照射对细胞核仁结构和功能的研究

放线菌素b在低浓度下能特异性地抑制核仁rRNA的合成并使核仁内的纤维部分和颗粒部分发生分离,这种变化是可逆的。用放线菌素b处理中国仓鼠细胞,当细胞核仁的纤维部分和颗粒部分发生分离时,用氩离子激光微束分别照射核仁的纤维部分和颗粒部分,出现两种     

细叶黄芪叶肉原生质体发育早期细胞核的变化

采用常规超薄切片,放射性同位素标记以及图像处理等技术,对细叶黄芪叶肉原生质体发育早期细胞核内的核仁结构、RNA合成和DNA合成等活动进行了研究。结果表明,离体培养后4h,核仁体积开始增大,培养3—5天时,其体积增长了4—5倍。同时,颗粒区(G)与纤维区(DFC)的比值明显上升,培养5天时,G/DFC比值增长近8倍。此时,核仁的纤维中心也增多。用放射性同位素标记的研究结果表明,培养后4h,~3H-尿苷开始掺入,培养24h,其掺入值达最高峰,是刚游离原生质体的近10倍。~3H-胸苷的掺入是在培养48h后才开始的,培养96h达到最高峰。另外,在培养24h内的切片样品中看到,部分原生质体细胞核内存在着由一些纤维组分构成的束状结构,即核内包含物(IN)。猜测它们可能与核骨架中纤维组分有关。最后,本文着重对细叶黄芪叶肉原生质体发育早期细胞内发生的各种结构与组分变化及时间进程进行了系统分析,将叶肉原生质体早期发育过程分为三个有序阶段,并对叶肉原生质体脱分化过程中的细胞壁再生和脱分化机制等问题进行了讨论。     

基于图像信息处理的蒜核仁内DNA原位排布及其结构模型的研究

真核细胞核仁内的DNA超微结构对于阐述rRNA转录位点有着重要的意义.虽然已经有许多研究者对此提出了不同的观点,但是都是基于直接实验观察的.应用电子显微镜技术和改进的NAMA-Ur DNA特异染色方法,获得蒜核仁超微结构的图像,提出一种新技术定量分析核仁中DNA原位位置.为此,建立多尺度形态梯度算子方法,编制HEREN.CELL自动分析软件,从而抽取出核仁超微结构的精细轮廓,显示出核仁DNA的原位位置.同时,提出了DNA纤丝以“花瓣包迹”模式向中心外方向放射的结构模型.对电镜图像处理技术和核仁超微结构研究具有重大意义.     

Q开关激光爆破技术对豚鼠皮肤色素的影响

目的研究Q开关激光爆破术对豚鼠黑素细胞的影响及照射周边组织的变化,为临床治疗皮肤色素病变提供实验依据。方法用Q开关-YAG激光分别照射豚鼠黑色毛区及棕色毛区(波长分别用1064nm和530nm,光斑直径2mm),实验动物20只,随机分四组,分别于照射后间隔7d、10d、14d取材,照射前取材作对照,10%甲醛固定,冰冻切片,分别用HE和DOPA反应显示黑素细胞。结果照射后皮肤黑色素颗粒逐渐减少至消失,照射后30d黑毛区与棕毛区肉眼见照射区皮肤变白,毛也变白,HE染色皮肤、毛囊及毛未见黑色素颗粒,DOPA反应表皮黑色素细胞、毛囊和毛均呈阴性反应,部分豚鼠棕毛区毛及毛囊见黄色色素颗粒。结论波长1064nm和532nm Q-YAG激光对豚鼠皮肤黑色素细胞和黑色素颗粒的破坏效果显著;但对棕色色素清除效果较差。波长1064nm Q-YAG激光对豚鼠皮肤黑色素消减与照射次数有关,与照射间隔时间长短无关。     

正常人和21三体征家庭的银染核仁形成区的研究

DNA-RNA原位杂交术证明了人类18S—28S核糖体RNA基因位于5对近端着丝点染色体短臂的次缢痕处,即人类的核仁形成区(NOR)。1975年,Goodpasture和Howell等应用银氨法特异地染色核仁形成区,证实银染的位置是染色体上核糖体基因(rDNA)的位置。此后进一步证明银染物质不是rDNA,也不是rRNA,而可能是核仁     

激光捕获显微切割技术在膀胱移行细胞癌相关基因研究中的应用

背景与目的:激光捕获显微切割技术 (LCM)是获取均一目的细胞的有效方法。利用LCM技术从膀胱粘膜中分离膀胱移行上皮细胞从肿瘤间质细胞中分离膀胱癌细胞,进行RNA提取、纯化、浓缩以备进一步研究。方法:采用LCM技术分别从正常膀胱粘膜及膀胱癌组织冰冻切片中获取膀胱移行上皮细胞及膀胱癌细胞,提取RNA,并对微量RNA进行纯化、浓缩。然后用RT PCR验证TotalRNA中β actin基因表达水平。结果:对照实验Ⅰ证实经LCM后RNA完整性较好;经对照实验Ⅱ初步确定设定条件下LCMshooting次数与可获得RNA量间对应关系。从膀胱粘膜中捕获膀胱移行上皮细胞 2 5万shootings;从膀胱癌组织中获取癌细胞 2 0万shootings。经RT PCR验证β actin基因表达表达完整。结论:使用LCM技术能成功地获取较为均一的研究目的细胞,RNA完整性较好,能用于进一步研究中。