肺纤维化初期肺动脉高压大鼠肺动脉反应性的变化

目的：观察肺纤维化初期肺动脉高压大鼠肺动脉血管反应性的变化。方法：66只雄性SD大鼠,随机分为博莱霉素（BLM）组和手术对照（Sham）组。BLM组为气管内一次性滴注BLM（5 mg/kg）;Sham组为气管内滴注等容量的生理盐水（NS）。应用离体血管张力检测技术测定大鼠肺动脉血管反应性变化;用HE显示肺动脉壁病理形态学变化;Masson染色检测肺纤维化程度;右心漂浮导管技术测定大鼠平均肺动脉压。结果：①BLM组大鼠的肺动脉血管（保留内皮和去内皮）对苯肾上腺素（PE）的收缩反应均弱于Sham组（P均〈0.05）。②BLM组大鼠肺动脉血管（保留内皮）对氯化乙酰胆碱（Ach）的舒张反应明显弱于Sham组（P〈0.01）。③Sham组有内皮的肺动脉血管对L-NAME和PE联合作用的收缩反应明显强于PE单独作用（P〈0.01）,而BLM组有内皮肺动脉血管对L-NAME和PE联合作用的收缩反应与对PE单独作用比,其差异无统计学意义（P〉0.05）。④BLM组肺动脉内皮细胞脱落。⑤BLM组大鼠肺组织呈现纤维增生初期的病理特征,且大鼠的平均肺动脉压明显高于Sham组（P〈0.05）。结论：肺纤维化形成初期肺动脉高压大鼠肺动脉血管反应性出现异常。     

一氧化碳对大鼠离体肺动脉的舒张作用

本研究观察了一氧化碳 (CO)对离体大鼠肺动脉的舒张作用。制备Wistar大鼠肺动脉环 ,作出ACh浓度效应曲线之后 ,肺动脉环用一氧化氮合成酶抑制剂L NAME 3 0 μmol/L (n =10 )或血红素氧化酶抑制剂ZnPPIX 10μmol/L +L NAME 3 0 μmol/L (n =10 )孵育 3 0min ,再制备一个ACh的浓度效应曲线 ,观察ZnPPIX对ACh的浓度效应曲线的影响。另取一组肺动脉环 ,分为内皮完整组和去内皮组 ,观察外源性CO对肺动脉环张力的影响。结果表明 ,用L NAME孵育后 ,ACh的血管舒张反应受抑 ,最大抑制率为 5 0 4± 9 2 % ;用ZnPPIX +L NAME孵育后 ,ACh的血管舒张反应进一步受抑 ,最大抑制率为 84 4± 11 2 %。外源性CO无论对内皮完整组还是去内皮组肺动脉都有舒张作用。本研究提示 ,ZnPPIX可抑制ACh的内皮依赖性肺动脉舒张反应 ,CO是一个内皮源性的血管舒张因子 ,外源性CO可舒张肺动脉     

心房钠尿肽对内毒素血症大鼠肺动脉和主动脉舒缩的影响

目的:探讨心房钠尿肽(ANP)对内毒素血症大鼠(ETR)肺动脉和主动脉内皮和平滑肌细胞的调节作用.方法:24只雄性SD大鼠随机分为对照组,模型组(LPS组),治疗组(ANP组).各组分别静脉注射生理盐水、2 mg/kg的LPS和2 mg/kg LPS与2μg/kg的ANP,4 h后处死动物分离肺动脉、主动脉,进行离体血管务体外灌注实验.结果:LPS组、ANP治疗组主动脉环和LPS组肺动脉环对去甲肾上腺素(NE)引起的收缩作用在NE低浓度时较对照组减弱(P＜0.01),在较高浓度时较对照组均明显增强(P＜0.01);主动脉环ANP治疗组与LPS组无显著差异(P＞0.05);肺动脉环ANP治疗组与对照组相比无显著差异(P＞0.05).ANP可明显改善ETR离体主动脉和肺动脉对乙酰胆碱(ACh)的舒张反应(P＜0.01),ANP可提高ETR离体主动脉和主动脉环对硝普钠(SNP)引起的舒张反应的敏感性(P＜0.01).结论:ANP对ETR肺动脉和主动脉内皮和平滑肌细胞可能存在调节作用.     

双环醇减轻超氧阴离子诱导的大鼠胸主动脉舒张功能损伤

目的：探讨双环醇（bicyclol）对超氧阴离子（O2）诱导的血管舒张功能损伤的影响。方法：采用离体器官灌流技术,观察bicyclol对离体大鼠胸主动脉环张力的影响。采用焦酚（O2的供体）建立O2损伤模型,观察bicyclol预孵育对氧化应激损伤后血管内皮依赖性舒张功能的改善作用。结果：bicyclol（10-8~10-5mol/L）对由苯肾上腺素预收缩的内皮完整主动脉环产生舒张作用,该作用可被NO合酶抑制剂L-NAME和环氧化酶抑制剂吲哚美辛阻断。500μmol/L焦酚可引起乙酰胆碱诱导的主动脉环内皮依赖性舒张反应减弱,bicyclol（10-5mol/L）预孵育45 min可减轻焦酚的损伤作用。对于吲哚美辛处理的主动脉环,bicyclol（10-5mol/L）可抑制焦酚所致的血管舒张反应降低,但这一效应未见于L-NAME处理的主动脉环。结论：bicyclol具有内皮依赖性舒血管作用,并能对抗O2引起的血管舒张功能损伤,该作用通过NO途径介导。     

NO在CCK—8减轻肿瘤坏死因子诱导兔肺动脉反应性变化中的作用

为探讨八肽胆囊收缩素（CCK－8）缓解内毒素休克时肺动脉高压的作用机制,应用离体血管环张力测定技术及一氧化氮合酶（NOS）检测方法,观察了一氧化氮（NO）在CCK－8减轻肿瘤坏死因子－α（tumor necrosis factor-al-pha,TNF-α）的抑制肺动脉内皮依赖性舒张反应中的作用。结果显示：TNF－α（4000U／ml）孵育2h时,肺动脉对10^-6mol/L苯肾上腺素(phenylephrine,PE）和10^-6mol/L乙酰胆碱（ACh）的收缩反应及内皮依赖性舒张反应均无明显变化。TNF－α孵育7或14h时,肺动脉对10^-6mol/L ACh介导的内皮依赖性舒张反应降低,CCK－8（0.5μg/ml）可逆转TNF－α的上述作用,CCK－8本身对正常肺动脉反应性无明显影响。TNF－α、CCK－8对PE引起的收缩反应无显著影响。L－精氨酸（L－Arg）可使TNF－α7h内皮依赖性舒张作用恢复。氨基胍（AG）不影响各组肺动脉对10^-6mol/L ACh的内皮依赖性舒张反应,而使TNF－α组肺动脉环对10^-6mol/L PE的收缩反应显著增加。L－硝基精氨酸（L－NNA）使各组肺动脉环对10^-6mol/L ACh反应由舒张变为收缩,对10^-6mol/L PE的收缩反应显著增强。检测7h各组NOS活性,TNF－α组、TNF－α＋CCK－8组均较对照组显著增加,CCK－8组与对照组比较无显著差异。上述结果提示,CCK－8可逆转TNF－α对内皮依赖性舒张反应的抑制作用,此作用可能与NO有关。     

蛋白激酶C对大鼠离体肺动脉环张力及其反应性的调节作用

目的 :观察蛋白激酶C(PKC)对大鼠离体肺动脉环张力及反应性的调节作用。方法 :取Wistar大鼠肺动脉 ,观察在离体情况下PKC激活剂PMA及PKC抑制剂RO3 182 2 0对肺动脉环张力的直接作用 ;对氯化钾 (KCl)、5 羟色胺 (5 HT)和缺氧引起的收缩反应的影响 ;以及PMA对乙酰胆碱 (ACh)介导的内皮依赖性舒张 (EDR)和硝普钠(SNP)介导的内皮非依赖性舒张 (EIDR)反应的影响。结果 :①PMA(5 0 0nmol/L)使肺动脉环产生缓慢增强、持久的收缩 ,随PMA浓度增加而增强 ,RO3 182 2 0 (5 μmol/L)可完全阻断PMA的上述作用 ;②PMA可增强肺动脉对KCl、5 HT的收缩反应 ,该作用随PMA浓度增加而增强 ;③RO3 182 2 0 (5 μmol/L)几乎可以完全阻断离体肺动脉环对缺氧的第二相收缩反应 ;④PMA(10nmol/L)在 10min内完全逆转ACh(10 μmol/L)介导的EDR ,PMA(10nmol/L)还可使ACh的浓度一反应显著减弱 ,达到最大舒张反应的一半时对应的ACh浓度 (EC50 )显著增加 ,最大舒张反应明显减小 ;而PMA对SNP介导的EIDR无显著影响。结论 :PKC在与肺动脉张力及反应性的调节有关的细胞内生物信号传递过程中具有重要作用。     

过氧亚硝基阴离子诱导离体兔肺动脉舒张反应的特性

实验用离体血管环张力测定技术,观察过氧亚硝基阴离子（ONOO）对离体预收缩的兔肺动脉的舒张反应、肺动脉内皮细胞对舒张反应的影响,并初步探讨其病理意义。结果显示,ONOO可剂量依赖性引起预收缩兔肺动脉舒张。分解的ONOO也有舒张作用,但其效应明显低于ONOO的作用,比较观察表明,ONOO的舒张效应显著低于硝普钠（SNP）和乙酰胆碱（ACh)。与内皮完整2的肺动脉比较,ONOO对去内皮肺动脉的舒张作用明显增加,剂量依赖性舒张反应曲线明显左移。肺动脉对ONOO重复作用时的舒张反应有递减趋势。在本实验条件下,ONOO舒张前后的肺动脉,对ACh的舒张反应无明差异。结果表明,ONOO对肺动脉的舒张作用较弱,此作用受到内皮细胞的抑制性调节并有快速去敏性。     

格列苯脲调节大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩时ERK1/2信号的作用

目的：探究ATP敏感性钾离子通道在低氧高二氧化碳性肺血管收缩（HHPV）中的作用及与细胞外信号调节激酶1/2（ERl（1/2）信号通路的关系。方法：制备正常SD大鼠离体三级肺动脉环,建立大鼠离体肺动脉环灌流的模型,用格列本脲（Cly）、ely＋U0126（ERK1/2抑制剂）联合孵育三级肺动脉环,按照低氧高二氧化碳反应性测定方法测定所有血管环的张力值。结果：①常氧状态下,三级肺动脉环的张力值无明显变化;②急性低氧高二氧化碳条件下,三级肺动脉环呈现双向性的收缩（与常氧状态下值相比,P〈0．05,P〈0．01）;③经Gly孵育的三级肺动脉环,其Ⅱ期收缩幅度增强（与低氧高二氧化碳状态下值相比,P〈0．05,P〈0．01）;④急性低氧高二氧化碳条件下,U0126能使Gly所致的三级肺动脉环Ⅱ期持续收缩幅度显著降低（与低氧高二氧化碳状态下值相比,P〈0．05,P〈0．01）,I期收缩和I期舒张均没有明显变化（P均〉0．05）。结论：ATP敏感性钾离子通道（KAlP）阻断剂-Gly可能通过活化ERK1/2信号通路介导了大鼠HHPV的发生。     

八肽胆囊收缩素减轻肿瘤坏死因子诱导的离体兔肺动脉反应性变化及内皮细胞损伤

为探讨八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ－８）缓解内毒素休克时肺动脉高压的作用机制,应用离体血管环张力测定技术及扫描电镜方法,观察了ＣＣＫ－８对肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）引起的肺动脉反应性及肺动脉内皮细胞超微结构变化的影响。结果显示：离体脑动脉经ＴＮＦ－α（４０００Ｕ／ｍｌ）孵育２ｈ对苯肾上腺素（ＰＥ）的收缩反应、对乙酰胆碱（ＡＣｈ）及硝普钠（ＳＮＰ）的内皮依赖性及非内皮依赖性舒张反应均无明显影响。ＴＮＦ－     

尼氟灭酸在大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩中的作用

目的：探讨氯离子通道阻断剂一尼氟灭酸（NFA）在大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩（HHPV）中的作用。方法：采用大鼠HHPV模型,二、三级动脉环分别随机分4组（n=8）：常氧组（N组）、低氧高二氧化碳组（H组）、DMSO组（HD组）、尼氟灭酸组（NFA组）。在急性低氧高二氧化碳介质中,采用NFA分别孵育肺二、三级肺动脉环,按照低氧高二氧化碳反应性测定的方法测定其二、三级肺动脉血管环张力的变化,并观察NFA对HHPV的影响。结果：①H组二、三级肺动脉均呈现双向性收缩变化（I期快速收缩、快速舒张;II期持续性收缩）与N组相比有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）;②NFA组二、三级肺动脉环的低氧高二氧化碳性血管收缩作用明显减弱,尤其是Ⅱ期的持续收缩,与HD组相比有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）。结论：氯离子通道阻断剂一尼氟灭酸可减轻大鼠二、三级肺动脉环的张力变化率（尤其是Ⅱ期的持续性收缩）,从而发挥拮抗HHPV的作用。     

外源性apelin对大鼠慢性低氧性肺动脉高压的防治作用

目的:探讨外源性给予小分子活性肽apelin对大鼠慢性低氧性肺动脉高压和肺血管重构的作用及其机制。方法:采用常压低氧法建立SD大鼠低氧性肺动脉高压模型。实验分4组(n=10)对照组(NC)、低氧组(HH)、低氧+apelin低剂量组(5nmol/(kg.d)(LA)和低氧+apelin高剂量组(10nmol/(kg.d)(HA),HA组和LA组通过皮下埋植微量渗透泵持续给药。低氧4周后,测定平均肺动脉压(mPAP)、右心室与左心室加室间隔的重量比[RV/(LV+S)]、肺细小动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)、管腔面积/管总面积(CA/TA)、中膜厚度(PAMT)以及肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量。结果:①mPAP和RV/(LV+S):HH组较NC组高,HA组较HH组低;LA组mPAP较HH低,而RV/(LV+S)两组间无显著性差异。②WA/TA和PAMT:HH组较NC组高,HA组、LA组均较HH低。③CA/TA:HH组较NC组低,HA组、LA组均较HH高。④肺组织SOD含量:HH组较NC低,HA组、LA组均较HH高。⑤MDA含量:HH组较NC高,HA组、LA组均较HH低。结论:Apelin对低氧性肺动脉高压和肺血管重构的形成具有防治作用,这种作用可能与直接舒张肺血管作用及改善氧化应激有关。     

埃他卡林对低氧暴露大鼠脑和肺微动脉选择性扩张作用

目的:研究低氧暴露对大鼠脑和肺微动脉内皮功能的影响以及埃他卡林(Ipt)对以上微动脉的扩张作用特征。方法:将雄性SD大鼠随机分为2组,常压常氧组(control)和低氧暴露组(hypoxic),后者置于常压低氧暴露舱内(O27.8%)8 h。分离大鼠管径为(204±5)μm的脑基底动脉、肺微动脉组织,利用DMT微血管张力测定仪在6nmol/L内皮素-1(ET-1)致血管预收缩条件下,利用乙酰胆碱(ACh)考察微动脉内皮功能及观察不同浓度Ipt对脑和肺微动脉张力变化的影响。结果:与常压常氧组对比,10-5 mol/L乙酰胆碱(ACh)对低氧暴露脑肺微动脉扩张率显著降低(P0.05);新型ATP敏感性钾通道开放剂Ipt在(10-11~10-3)mol/L对低氧暴露肺微动脉呈剂量依赖性扩张作用,明显强于对常压常氧组(P0.01),在(10-11~10-3)mol/L对低氧暴露脑微动脉呈剂量依赖性扩张作用,但与常压常氧组相比无显著差异。结论:低氧暴露可导致脑基底动脉和肺微动脉内皮功能受损,Ipt具有选择性增强扩张低氧暴露肺微动脉的作用,但不影响以上条件低氧暴露后脑基底动脉的扩张作用,提示该药可应用于改善低氧暴露所致的肺微血管收缩,为Ipt发展为新型治疗肺动脉高压的药物提供理论基础。     

知母宁对慢性低氧高二氧化碳大鼠肺小动脉胶原代谢的影响

目的:研究知母宁对慢性低O2高CO2大鼠肺小动脉Ⅰ、Ⅲ型胶原代谢的影响,并探讨其可能机制。方法:将SD大鼠36只随机分为正常对照组,4周低O2高CO2组,4周低O2高CO2+知母宁组。采用图像分析、氯胺T法、免疫组化、组织原位杂交技术等方法,监测各组大鼠肺动脉平均压(mPAP)、颈动脉平均压(mCAP)、肺细小动脉显微和超微结构、血CO浓度,血清及肺组织血红素氧合酶-1(HO-1)活性,肺组织羟脯氨酸含量,肺小动脉Ⅰ、Ⅲ型胶原及其基因表达的变化。结果:低O2高CO2组mPAP升高,肺细小动脉管壁增厚,管腔变小,中膜平滑肌细胞和外膜胶原纤维增生,肺血管重建形成,肺匀浆羟脯氨酸含量升高,肺小动脉Ⅰ型胶原及其mRNA表达增加;知母宁组上述变化均明显减轻(P均0.01)。此外,低O2高CO2组全血CO含量、血浆及肺组织匀浆HO-1活性升高,知母宁组上述指标较低O2高CO2组进一步升高(P均0.01)。三组间mCAP,Ⅲ型胶原及其mRNA表达无显著差异(P0.05)。结论:知母宁降低慢性低O2高CO2性肺动脉高压,减轻肺血管结构重建与其抑制肺动脉Ⅰ型胶原增殖有关,上调内源性CO/HO体系的表达为其可能重要机制。     

Hypoxic pulmonary vasoconstriction is enhanced by inhibition of the synthesis of an endothelium derived relaxing factor

Inhibition of the synthesis of endothelium derived relaxing factor by NG-monomethyl-L-arginine, a competitive inhibitor of the synthesis of nitric oxide from L-arginine, enhances hypoxic pulmonary vasoconstriction in pulmonary artery rings and isolated, Krebs albumin perfused rat lungs. L-arginine rapidly reduces hypoxic vasoconstriction, particularly in lungs treated with NG-monomethyl-L-arginine. Following administration of NG-monomethyl-L-arginine, bradykinin-induced vasodilatation is inhibited (p less than 0.01) and a bradykinin-induced vasoconstriction develops (p less than 0.001). NG-monomethyl-L-arginine does not significantly diminish acetylcholine-induced vasodilatation in the isolated lung. NG-monomethyl-L-arginine causes an endothelium-dependent vasoconstriction in pulmonary artery rings.     

15-KETE对慢性缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞钾离子通道的作用

目的观察15-酮基二十碳四烯酸（15-ketoeicosatetraenoic acid,15-KETE）对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth cells,PASMCs）膜电压门控钾离子通道的活性的影响。方法将12只雄性SD大鼠随机分成对照组和缺氧组,每组6只。采用急性酶分离法（胶原酶Ⅰ型和弹性酶）获得SD大鼠单个PASMCs,应用全细胞膜片钳记录方法,研究15-KETE对两组大鼠膜电位（Em）、膜电容（Cm）、电压门控钾电流（IKv）的影响。结果 （1）慢性缺氧使大鼠PASMCs的Em显著去极化（P〈0.05,n=6）,明显地抑制了大鼠PASMCs的IKv（P〈0.01,n=6）,对大鼠PASMCs的Cm无影响;（2）较高浓度的15-KETE（1×10^-7 mol/L、1×10^-6 mol/L）可使慢性缺氧大鼠PASMCs去极化;（3）15-KETE（1×10^-8 mol/L～1×10^-6 mol/L）可浓度依赖性地抑制慢性缺氧大鼠PASMCs的IKv;（4）较高浓度15-KETE（1×10^-7 mol/L、1×10^-6 mol/L）对缺氧PASMCs IKV的平均阻抑率显著高于常氧PASMCs。结论缺氧未改变15-KETE引大鼠PASMCs去极化及浓度依赖抑止IKv的特性,且缺氧可能改变了PASMCs对15-KETE的敏感性。     

肾上腺髓质素2的降压作用及其机制

目的:研究肾上腺髓质素2(ADM2)拮抗血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)发挥舒张血管的作用及机制。方法:将18只180~200 g雄性SD大鼠随机分为3组(n=6):对照组、AngⅡ(150 ng/(kg·min))组和AngⅡ(150 ng/(kg·min))+ADM2(500 ng/(kg·h))组,采用皮下埋植微量渗透泵的方法给药。2周后颈动脉插管法测量大鼠血压,测定血浆一氧化氮(NO)含量和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性。DHE染色法检测大鼠动脉壁活性氧产生。制备大鼠离体血管环,观察ADM2的舒血管作用。培养人脐静脉内皮细胞系EA.hy 926,用DCFH-DA荧光探针检测AngⅡ和ADM2对血管内皮细胞活性氧释放的影响。结果:与AngⅡ组相比,ADM2显著降低了大鼠血压,血浆中eNOS活性提高、NO含量增加,血管壁活性氧产生减少。ADM2呈浓度依赖性和内皮依赖性舒张血管环,并明显抑制了AngⅡ引起的血管内皮细胞活性氧产生。结论:ADM2可能通过拮抗AngⅡ诱导的血管内皮氧化应激效应,改善内皮功能,发挥舒张血管、降低血压的作用。     

5-HD对慢性低氧肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌PKC-α表达的作用

目的：研究线粒体ATP敏感钾通道（mitoKATP）抑制剂5-羟基癸酸盐（5-HD）对慢性低氧肺动脉高压大鼠的影响及其潜在机制。方法：雄性sD大鼠48只,随机分成4组（n=12）：①正常对照组;②慢性低氧组;③慢性低氧＋5-HD组;④慢性低氧＋Diazoxide（mitoKATP开放剂）组;除正常对照组外,其余3组置于氧舱内（氧浓度10％±0．3％）,每天低氧8h,并接受不同的干预,共4周。干预结束后右心导管法测各大鼠肺动脉压,RT-PCR和Western blot检测各组大鼠肺动脉PKC—α蛋白和mRNA的表达。结果：①慢性低氧组肺动脉压显著高于正常组（P〈0．01）,同时慢性低氧＋Diazoxide组与慢性低氧＋5．HD组肺动脉压较慢性低氧组显著减低（P〈0．01）。②慢性低氧组PKC—α蛋白及mRNA的相对表达显著高于正常组（P〈0．05）。结论：5-HD对慢性低氧肺动脉高压起保护作用,其机制可能是抑制线粒体ATP敏感钾通道。     

肺血管EDNO及其合酶在大鼠低氧性肺动脉高压形成中的作用

本研究观察了低氧对大鼠肺组织和血管内皮一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性及内皮衍生一氧化氮（ＥＤＮＯ）依赖性舒张反应的影响,以及ＮＯＳ抑制剂（Ｌ－ＮＡＭＥ）对常氧和低氧大鼠肺组织和血管内皮ＮＯＳ活性及颈、肺动脉血压（ＣＡＰｓ、ｍＰＡＰ）的作用。结果表明常氧大鼠肺泡内无肌性血管内皮未见ＮＯＳ活性,其肺血管床对ＥＤＮＯ依赖性舒血管物质ＢＫ没有反应,注射Ｌ－ＮＡＭＥ后大鼠ｍＰＡＰ略有降低,ＣＡＰｓ有所升高。低氧大鼠肺泡内无肌性血管内皮显示ＮＯＳ活性,对ＢＫ的ＥＤＮＯ依赖性舒张反应呈剂量依赖性增大,注射Ｌ－ＮＡＭＥ使低氧大鼠ｍＰＡＰ显著降低（Ｐ＜０．０１）,ＣＡＰｓ显著升高（Ｐ＜０．０５）。提示肺血管ＥＤＮＯ及其合酶在维持正常成年大鼠肺循环低压低阻中的生理作用值得进一步探讨;低氧引起肺血管内皮ｅｃＮＯＳ活性增加和ＥＤＮＯ生成增多可能起到限制肺动脉压过度升高的调制作用,也可能对肺血管内皮产生毒性作用,反而促进肺动脉高压的发生和发展。