里氏木霉306菌株筛选及其产酶特性的研究

里氏木霉(Trichoderma reesei)306是染色体上整合有组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)cDNA的基因工程菌株。本论文利用筛选平板筛选出产t-PA活力高和产蛋白酶活力高的两种基因工程里氏木霉306菌株,然后对它们发酵过程中的产酶特性进行研究。结果表明:菌株产蛋白酶活力的大小与生物合成t-PA活力大小之间有一定的关系,产蛋白酶活力相对高的菌株产t-PA的活力相对低,而产蛋白酶活力相对低的菌株,产t-PA活力相对就高。     

食品上的应用

951875通过孢子无性繁殖系间的杂交提高酿酒酵母耐冻性和发酵活性[英]/Nakag8wa,S.…,APPl.EnVi—roH..Micfobi01.一1994,60(10).一3499～3502["译自DBA,1994,13(24),94—14228] 从耐冻酿酒酵母TYR得到2333个孢子无性繁殖系。为了改善这种亲株在不加糖面团中的发酵能力,筛选了555个高麦芽糖发酵的孢子无性繁殖系。     

抗生素和干扰素

950112 由产黄,I『一生产青霉素的生物化学和分子遗传学[会,英2/Martin,J.F.I Ann.N.Y.Acad.s01.-1991,646.-132~201[译自DBA,1992,儿(13),92-07338_'] 将产黄青霉AS-P-78酰基辅酶A;6一氨基青霉烷酸一酰基转移酶纯化至均质并鉴定之。用含粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)PY r4基因和产贝菏霉pyrG基因的质粒载体作选择标记,可获得产黄青霉的高频转化。克隆、表达并测序了产黄青霉AS-P-78的异青霉素-N-合酶基因,还克隆及测序了该菌的酰基辅酶A t 6一氨基青霉烷酸一酰基转移酶和ACV-合成酶基因。产黄青霉DNA的噬菌体EMBL3基因文库…     

产黄青霉的杂交育种

选育高产菌株是工业微生物提高产量最有 效的方法。我们于1974-1977年,对产黄青霉 (Penicillium clirysogenusn)采用杂交育种和诱变 育种相结合的方法,选得了一株高产菌株杂 3-25-103,从1977年开始用于生产。该菌株在 20吨和58吨罐试验共229批,与同期对照菌 利“相比,青霉素发酵单位平均提高8%。青霉素 滤液产量比1976年同期提高6.45%。     

农业上的应用

生物防r治951D11 ’苏云尊孢杆曹G7的抑■活性[俄]/Konstsnti—noYa,G.E.…/Biotekhnologiya..1994,(1).一15～18[译自DBA,1994,13(16).94—09248] 苏云金芽孢杆菌G7菌株及其培养液(cf 1)具有抗苏云金芽孢杆菌苏云金HD2、苏云金芽孢杆菌tolworthy 12、枯草杆菌366、蜡状芽孢杆菌569、胃八叠球菌和黄色八叠球菌的活性。菌株HD2只对蜡状芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌tolworthy有活性。热处理可消除G7 cf l对除八叠球菌外其它所有细菌的活性并可去除IPID2的全部活性.链霉蛋白酶可去除HD2的全部活性,但只阻断G7对八叠球菌的活性。有数据…     

真菌降解β-胡萝卜素的产香研究

从采自云南红河的31份烟草样品中分离筛选到5株可降解β-胡萝卜素的真菌,结合菌株形态及ITS序列分析对菌株进行分类鉴定。初步鉴定菌株YNCA9801为产黄青霉(Penicillium chrysogenum),YNCA9802为黄柄曲霉(Aspergillus flavipes),YNCA9803为枝孢霉(Cladosporium lignicola),YNCA9804为米曲霉(Aspergillus oryzae),YNCA9807为橘青霉(Penicillium citrinum)。菌株YNCA9804降解β-胡萝卜素可获得具果香味的发酵产物,样品通过GC-MS分析,发酵产物含有2-庚醇、2-壬酮和二氢猕猴桃内酯的致香物质。     

絮凝活性产紫青霉EL-02的分离鉴定及其絮凝活性初探

【目的】分离鉴定有絮凝活性真菌,同时对其絮凝活性进行初步研究。【方法】采用梯度稀释、平板划线、18SrDNA检测等方法分离鉴定絮凝活性菌株。通过高速离心、超声破碎、乙醇沉淀、定性试验等方法确定絮凝活性物质性质。【结果】从渤海湾海岸土壤样品中分离筛选出一株有较高絮凝活性的真菌,经鉴定为产紫青霉(Penicillium purpurogenum),命名为产紫青霉EL-02(P.purpurogenum EL-02)。超声破碎试验证实其絮凝活性主要存在于发酵上清液。根据絮凝活性曲线,确定4d为积累絮凝活性产物的最佳发酵时间。乙醇沉淀法获得该菌株絮凝活性物质。经鉴定该菌株所产絮凝活性物质为糖类,且其活性在pH2-11,温度-70℃-100℃范围内保持稳定。【结论】分离筛选到一株有絮凝活性的产紫青霉EL-02,经鉴定其产生糖类絮凝活性物质。     

抗金葡菌深海真菌的分离鉴定及抑菌谱研究

[目的]从深海淤泥样品中分离筛选具有抗金葡菌特性的真菌菌株,对其进行鉴定,并研究其抑菌谱。[方法]采用稀释涂布平板法分离真菌菌株,对峙培养法初筛,琼脂扩散法复筛,将抑菌效果最好的菌株进行形态鉴定、镜检、26S r DNA鉴定,并研究其对产黄青霉、尖孢镰刀菌、黄瓜菌核、木霉、盘单毛孢、平头刺盘孢霉6种真菌和大肠埃希氏菌、单增李斯特菌、副溶血性弧菌、鼠伤寒沙门氏菌4种细菌的抑制作用。[结果]得到1株抑制金葡菌效果最佳的菌株,编号1B12,其抑菌圈直径为35.31 mm,鉴定结果为外瓶霉属(Exophiala),其对上述6种真菌和4种细菌都有一定的抑制作用。[结论]1B12是一株具有广谱抗菌性的海洋真菌。     

结合缺陷型菌株显色法采用离子束诱变筛选高产L-精氨酸突变株

为快速高效筛选L-精氨酸高产突变株,建立一种缺陷菌株平板显色法并采用低能N+离子束对L-精氨酸生产用菌株钝齿棒杆菌SYPA5-5进行诱变处理,通过上述平板显色法筛选获得高产突变株.对突变株进行摇瓶发酵实验,最终选育出一株L-精氨酸产量较高且产酸性能比较稳定的突变菌株钝齿棒杆菌SYPA5-5-36.该菌株摇瓶发酵L-精氨酸产量可达35.85 g/L,比出发菌株提高了19.5％.因此,缺陷型菌株平板显色法可以用于快速、高效筛选高产L-精氨酸突变株.     

产漆酶菌株分离及发酵条件优化

[目的]筛选高产漆酶菌株。[方法]利用愈创木酚-PDA平板筛选高产漆酶菌株,单因素实验确定最佳产酶条件。[结果]筛选到一株高产漆酶菌株,编号QMJZ-5。结合形态观察和5.8S rDNA-ITS序列分析,确定该菌株是血红密孔菌(Pycnoporus coccineus),优化发酵培养基:甘油20 g/L,豆粕6.0 g/L,香兰素0.15 g/L,阿魏酸0.15 g/L,KH_2PO_41.0 g/L,Na_2HPO_4·12H_2O 0.2 g/L,CuSO_4·5H_2O 1.5 mmol/L,初始pH 5.0,30℃,发酵8 d,产酶55 U/m L。[结论]筛选到1株高产漆酶菌株。     

抗生素和干扰素

941049胶原水解物作为产黄青霉合成青霉紊的复合氮源〔英]/Leonhartsberger,5.…了J.Bioteeh-nol一1993,30(8)一299一313〔译自DBA-1993,12(22),93一12663〕 利用胶原水解物(Gelita一Bio一Tec)作为氮源测定了通过产黄青霉PS生产苯氧基甲基青霉素和生物量形成的最适条件。利用一计划的实验方案 (命名为Graeco一Latin平方技术)在振荡瓶培养物中进行。初步研究结果表明,达30%的普通复合氮源如棉籽粉能被胶原水解物替代,且青霉素产量未降低(0 .015/小时)。在中试规模试验中,利用30升振荡式发酵罐,相对空气饱和度50%、瓶压0.3巴及4个Interm…     

绿色木霉原生质体诱变筛选纤维素酶高产菌株

以绿色木霉F264为出发菌株制备其原生质体,对其进行紫外线诱变处理,筛选出一株纤维素酶高产突变株绿色木霉F-UV264,其滤纸酶活由出发菌株的5.2IU/g干料提高到15.78IU/g干料,产酶能力提高了3倍。经过10代PDA斜面继代培养及发酵试验,表明该菌株是比原菌株更优秀的稳定高产株。     

代谢工程改造野生耐酸酵母生产L-乳酸

以选育低pH条件下高产L-乳酸的酵母菌为目的,从自然样品中筛选分离得到一株能在pH 2.5 (乳酸调节) 的培养基中生长且不利用乳酸的酵母 (初步鉴定为木兰假丝酵母Candida magnolia);进一步将来源于米根霉As3.819的乳酸脱氢酶编码基因 (ldhA) 插入含有G418抗性基因的酵母穿梭载体,构建了重组质粒pYX212-kanMX-ldhA,电转化入野生型C. magnolia中,筛选获得了一株具有产L-乳酸能力的重组菌株C. magnolia-2;通过发酵实验表明,该重组菌产L-乳酸的最     

医药上的应用

抗生素和干扰素950954利用原生质体融合筛选红霉素产生菌[俄]/Kiric—heako.N.V.…∥Anltiblot.Khimioter。.一1993.38(6).一3～8[译自DBA,1994,13(:t6),94—091073 ’ 研究了接合和原生质体融合,以获得大量产红蟊素的重组菌8accharopolyspor口erythraea。用亚硝基脏处理制备菌株3和5突变株,该菌株稳定,其抗生素生产水平近于亲株。在接合和原生质体融合后比较了重组频率。表明后一种方法可获得较高的频率。用PEG一4000诱导原生质体融合,井_暴露在UV辐射(80%致死剂量)下刺激重组产生.可以轻微增加再生比率,提高抗生素生产水平。未处理…     

纤溶酶产生菌中华根霉12~#的诱变选育

以产纤溶酶菌中华根霉12~#为出发菌株,以SDS为抗性因子,紫外线为诱变剂,通过液体发酵的方式筛选高产菌株。共得到48株SDS抗性突变株,命名为LH-系列。经过筛选,得到了1株遗传稳定、酶活力提高了120%左右的高产菌株LH-45,以及2株具有潜在高产能力的突变株LH-15和LH-28。     

樟绒枝霉(Malbranchea cinnamomea)固体发酵产木聚糖酶的发酵条件优化

[目的] 研究樟绒枝霉(Malbranchea cinnamomea) CAU521利用农业废弃物固体发酵产木聚糖酶的发酵条件.[方法]采用单因素试验法优化影响菌株产酶的各个条件,包括碳源种类、氮源种类、初始pH、初始水分含量、培养温度及发酵时间共6个因素.[结果]获得的最佳产酶条件为:稻草为发酵碳源、2％(W/W)的酵母提取物为氮源、初始pH 7.0、初始水分含量80％和发酵温度45℃.在此条件下发酵6d后木聚糖酶的酶活力达到13 120 U/g干基碳源.[结论]樟绒枝霉固体发酵产木聚糖酶的产酶水平高,生产成本低,具有潜在的工业化应用前景.     

一种产黄青霉突变体库的简单快速构建方法

产黄青霉(Pennicillium chrysogenum)是重要的工业丝状真菌,为更好地提高青霉素产量,了解青霉素合成的调控途径及相关基因的功能,突变体库的构建是一种有效途径。本研究以PCR扩增得到的T-DNA片段为外源DNA,通过PEG介导转化至产黄青霉原生质体中,成功地将含有外源博来霉素抗性基因(ble)和绿色荧光蛋白基因(gfp)的T-DNA插入到产黄青霉基因组中,构建了产黄青霉突变体库,并实现了ble基因和gfp基因在产黄青霉中的表达。该方法不依赖于农杆菌介导,无需构建二元表达载体,只需一步PCR即可实现外源基因的制备,简单快速,也为研究其它真菌基因功能和突变体库构建提供参考。     

高产纤维素酶的拟康宁木霉菌株8985固态发酵条件优化

木霉是重要的产纤维素酶真菌,在其可利用性评价筛选过程中,获得了一株在实验室条件下高产纤维素酶的拟康宁木霉菌株8985.采用响应面法对8985产纤维素酶的固态发酵条件进行了研究,以滤纸酶活为响应值,通过Plackett-Burman设计对11个因素进行了筛选,包括温度、湿度、发酵时间、K2HPO4、(NH4)2SO4、T...     

纳豆激酶生产菌的筛选及发酵纳豆特性研究

为开发具有特定生理活性的新型纳豆保健品,从发酵豆制品中分离筛选得到一株纳豆激酶高产菌株。利用该菌株以及市售的3种纳豆中的纳豆菌进行纳豆发酵,比较了4株纳豆菌发酵纳豆的特性,并对纳豆激酶活性进行分析。结果表明5号菌株发酵生产纳豆周期短,颜色金黄,具有酱香味,拉丝长度最佳。同时,对产纳豆激酶的最佳发酵时间进行研究,结果表明发酵至17 h纳豆激酶活性达到最大值。     

医药其它

盒中。温度实验在恒温箱内进行,scytopiycim生 产的最适温度为25~C,连续光照强度至少为25/~moI 光子/m。/sec,则产量最大。菌株生长代谢物生产 的最适pH值为8.0～8.5。 (陶冶) 941911 在发酵罐中培养固定化麦角菌细胞[英]/Lohme- ye r,M.…∥J.Ferment.Bioeng.-1993, 76(5).-376~381[译自DBA,1994,13(4), 94—01999]941909 在发酵过程中研究了产生麦角肽类生物碱的固微生物的立体选择还原作用[英]/Patel,R.N. 定化麦角菌1029/N5,并与悬浮细胞进行了比较。…∥Appl.Microbr01.Biotechn01.一1993, 在固定床反应器中,经吸附作用将细胞…